Спосіб моделювання асептичного запалення слизової оболонки піхви

Спосіб моделювання асептичного запалення слизової оболонки піхви шляхом обробки піхви дослідних тварин розчином азотнокислого срібла, 3 тварин та значно впливає на біохімічні показники крові. Відоме моделювання асептичного запалення (виразки) слизової оболонки піхви щурів, що передбачає обробку піхви тварин протягом З хвилин 7 % розчином азотнокислого срібла [2]. Оцінювання ефективності проводять за показниками візуальних та гістологічних досліджень. Для цього тканину піхви фіксують у 10 % формаліні з наступною заливкою у парафін. Зрізи забарвлюють гематоксилін-еозином. Результати оцінюють за такою системою: «+++» - тотальний опік (запалення) усієї поверхні, чи значна площа глибоких уражень з некрозом та інфільтратом, що займає більш ніж 80 % поверхні; «++» - ураження середньої тяжкості без інфільтратів та некрозів, що займає близько 50 % поверхні слизової оболонки піхви; «+» - легка ступінь запальної реакції на площі, що займає менш 50 % поверхні слизової оболонки піхви; "0" - нормальна слизова оболонка піхви інтактних тварин. Недоліком найближчого аналога можна вважати недостатню вираженість патологічного процесу при моделювання внаслідок замалої концентрації азотнокислого срібла та часу його експозиції, які є недостатніми для розвитку патології. Крім того, з метою проведення оцінки впливу досліджуваних засобів на стан слизової оболонки піхви необхідно проводити гістологічні дослідження з фіксацією зразків та їх наступному забарвленні. Завданням корисної моделі є створення способу моделювання асептичного запалення слизової оболонки піхви, який внаслідок оптимального вибору подразника та часу експозиції дозволяє одержати виразну модель патологічного процесу, а вплив досліджуваних засобів на патологію оцінювати кількісно без використання гістологічних досліджень, що обумовлює точність та простоту отримання результатів. Поставлене завдання вирішується таким чином, що згідно з корисною моделлю асептичне запалення слизової оболонки піхви здійснюють при введенні тампону з 10 % розчином азотнокислого срібла та його експозицією 5 хвилин, а оцінку впливу досліджуваних засобів на перебіг патологічного процесу здійснюють за загальною площею ураження та сумою балів за ознаками стану слизової оболонки піхви: набряк, гіперемія, крововиливи - у відповідності до схеми: 0 балів - ознака відсутня; 1 бал - ознака виражена незначно; 62115 4 2 бали - ознака виражена помірно; 3 бали - ознака різко виражена. Всі параметри заявленого способу визначені експериментальним шляхом, їх сукупність є новою, не відомою з джерел інформації. Заявлений спосіб здійснюється наступним чином. Патологію відтворюють шляхом введення у піхву дослідних тварин тампону із 10 % розчином азотнокислого срібла та його експозицією 5 хвилин. Для оцінки стану слизової оболонки піхви після завершення експеримента тварин виводять з досліду відповідно до етичних принципів експериментів на тваринах, ухвалених І Національним конгресом з біоетики (Київ, 2000), що узгоджується з положеннями Європейської конвенції про захист хребетних тварин, які використовуються для експериментальних та інших наукових цілей. Визначення площі ураженої поверхні слизової оболонки піхви (мм) проводять з використанням прозорого трафарету та міліметрового паперу, що дає змогу чітко встановити розміри площі ураження будь-якої форми та враховувати навіть крапкові ураження. Для цього накладають прозорий трафарет, обводять площу ураження та переносять на міліметровий папір, проводять розрахунки. Отримані результати виражають у відсотках. З метою проведення оцінювання інтенсивності патологічного процесу та впливу досліджуваних засобів на стан слизової оболонки піхви проводять напівкількісну оцінку основних ознак запалення в балах за трьома параметрами: набряк, гіперемія, крововиливи. Бали присвоюють в залежності від виразності ознак: 0 балів - ознака відсутня; 1 бал - ознака виражена незначно; 2 бали - ознака виражена помірно; 3 бали - ознака різко виражена. Корисна модель ілюструється прикладами. Приклад 1. Асептичне запалення слизової оболонки піхви, відповідно до заявленого способу, моделювали у 10 білих безпородних щурах-самицях масою 200205 г. До експерименту відбирали тварин в одній фазі естрального циклу. Патологію відтворювали шляхом введення у піхву тампону з 10 % розчином азотнокислого срібла та його експозицією 5 хвилин. Оцінювання ураження слизової оболонки піхви, тобто виразності модельної патології, проводили на шостий день досліду за аналізом морфологічних змін: визначали загальну площу піхви, загальну площу ураження піхви та робили напівкількісну оцінку ознак запалення у балах за параметрами: набряк, гіперемія, геморагії. Результати досліджень наведені у таблиці 1. 5 62115 6 Таблиця 1 Показники відтворюваності модельної патології, отриманої за заявленим способом (n=10) № п/п 1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. 9. 10. Середнє значення Загальна Загальна Загальна Набряк сли- Гіперемія сли- Інтенсивність гемоплоща піхви, площа ураже- площа ураже- зової оболон- зової оболон- рагії слизової обо2 2 мм ної піхви, мм ної піхви, % ки піхви, бали ки піхви, бали лонки піхви, бали 265 231 87,17 3 3 2 253 237 93,67 2 2 3 249 213 85,54 3 3 2 268 246 91,78 3 2 2 255 232 90,98 3 3 2 256 230 89,84 2 2 3 272 244 89,71 3 2 2 248 228 91,93 3 3 3 281 239 85,05 3 3 3 256 225 87,89 3 3 2 260,3±3,41 232,5±3,06 89,35±0,91 2,8±0,13 2,6±0,16 2,4±0,16 Сума балів 7,8 Як свідчать дані, що наведені таблиці 1, середня площа ураженої ділянки слизової оболонки 2 піхви склала 232,5 мм тобто 89,35 % від загальної площі піхви, що склала 260,3 мм. Виразність набряку, гіперемії та чисельність геморагій в групі контрольної патології були оцінені у 2,8,2,6 та 2,4 бали, що за сумою балів склало 7,8 за дев'ятибальною шкалою. Таким чином, заявлений спосіб дозволяє достовірно моделювати виражену патологію у дослідних щурів-самиць. Приклад 2. Вивчення лікувальної дії "Супозиторіїв з обліпиховою олією" на модельній патології (асептичне запалення слизової оболонки піхви), що отримана за заявленим способом, проводили наступним чином. Досліди проводили на 10 білих безпородних щурах-самицях масою 200-205 г. До експерименту відбирали тварин у одній фазі естрального циклу. З метою відтворювання патології за заявленим способом тваринам з експозицією 5 хвилин вводили у піхву тампон з 10 % розчином азотнокислого срібла. З наступного дня після моделювання патології тварин поділяли на дві групи та починали лікування. Тваринам першої групи (дослідна група) вводили досліджувані "Супозиторії з обліпиховою олією" в дозі 60 мг/кг, що була перерахована з терапевтичної дози для людини за Ю.Р. Риболовлевим [3]; тваринам другої групи (контрольна патологія) - вводили супозиторії, що містили лише основу (плацебо). Оцінку ефективності досліджуваного препарату проводили на шостий день за аналізом морфологічних змін, визначаючи загальну площу піхви, загальну площу ураження піхви та роблячи напівкількісну оцінку ознак запалення у балах за параметрами: набряк, гіперемія, геморагії. Як інтегральний показник стану слизової оболонки піхви використовували суму балів за трьома зазначеними параметрами (табл. 2). Таблиця 2 Вплив досліджуваного засобу на стан слизової оболонки піхви щурів на тлі патологічного процесу на 6 добу (n=10) № п/п Показник Контрольна патологія 1. 2. 3. 4. 5. Загальна площа піхви, мм 2 Загальна площа ураженої піхви, мм Загальна площа ураженої піхви, % Набряк слизової оболонки піхви, бали Гіперемія слизової оболонки піхви, бали Інтенсивність геморагій слизової оболонки піхви, бали Сума балів 267,38±8,15 234,42±9,61 87,67±6,05 2,60±0,16 2,80±0,17 «Супозиторії з обліпиховою олією» 246,25±9,34 62,73±5,23* 25,74±3,21* 1,20±0,13* 0,80±0,20* 2,20±0,10 0,30±0,12* 7,6 2,3* 6. 7. * - відхилення показника достовірно відносно контрольної патології, р