Спосіб імуномодуляції при імунодефіцитному стані організму тварин

Реферат: Винахід належить до ветеринарії та імунології, зокрема до способів стимулювання проліферативних процесів в органах імуногенезу при імунодефіцитному стані організму тварин. Спосіб імуномодуляції включає пероральне введення тваринам 0,7-0,9 % розчину ліпосомальної форми БАД із розрахунку 0,6-0,8 мл на 1 кг маси тіла 2 рази на добу щоденно впродовж 30 діб. UA 104971 C2 (12) UA 104971 C2 UA 104971 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 Винахід належить до ветеринарії та імунології, зокрема до способів стимулювання проліферативних процесів в органах імуногенезу при імунодефіцитному стані організму тварин. Відомий спосіб (Верткин А. Л. Применение эссенциальных фосфолипидов в современной клинике: метод. рекоменд. / Верткин А.Л. - М, 2000. - 89 с; Кунц Э. "Эссенциальные" фосфолиниды в гепатологии (экспериментальный и клинический опыт) / Э. Кунц, К.-Й. Гундерманн, Э. Шнайдер // Терапевтический архив. - 1994. - Т. 66, № 2. - С. 66-72), який полягає у пероральному (допускається внутрішньовенне) введенні препарату есенціале-форте у дозі від 900 до 1800 мг/добу (по 2 капсули тричі на добу) впродовж одного місяця. Недоліком способу є необхідність у тривалому застосуванні пацієнтам препарату есенціалефорте. Помітний ефект відмічається після 3-місячного курсу лікування, але його необхідно підтримувати роками, що неможливо у тваринництві, де тварин часто переводять у різні технологічні групи. Це створює практичні складності при їх ветеринарному обслуговуванні, а також економічно не рентабельно. Відомий спосіб (патент № 86516, МПК А61К 35/20, А23К 1/00. Ветеринарна біологічно активна добавка ліпосомальної форми та спосіб репаративної терапії в гепатології / Мельничук Д. О., Грищенко В. Α., Литвиненко О. М.; опубл. 27.04.2009, бюл. № 8), що передбачає застосування ліпосомальної форми БАД FLP-MD в якості препарату гепатопротекторної та гепаторегенеруючої дій у гепатології для профілактики та лікування гепатитів і гепатозів різної етіології у тварин, що передбачає пероральне введення ліпосомальної форми 0,7 0,9 % розчину БАД (фосфоліпідовмісної суміші з маслянки, суміші ненасичених жирних кислот та вітамінів А і Е) випоюють один раз на добу в дозі 0,9-1,4 мл на 1 кг маси тіла при мінімальному терміні застосування від 3 тижнів до 3 місяців. Недоліком способу є те, що мінімальний термін застосування БАД для отримання терапевтичного ефекту становить від 3 тижнів до 3 місяців. Насамперед, це пов'язано з недостатньою кратністю введення БАД упродовж доби. Однократне застосування тваринам БАД протягом доби не дозволяє підтримувати належну концентрацію її діючих речовин у крові, що знижує клінічний ефект і пролонгує терміни застосування. Крім того, недоліком є обмеженість у показаннях щодо застосування способу (гепатологія) та відсутність даних, які б свідчили про імуномодулюючі властивості ліпосомальної форми БАД FLP-MD і можливість її застосування для усунення імунодефіцитного стану організму як окремої нозологічної форми, в тому числі при первинних імунологічних розладах в організмі тварин. В основу винаходу поставлене завдання одержати високий лікувально-профілактичний ефект за зміни способу імуномодуляції при імунодефіцитному стані організму тварин шляхом застосування ліпосомальної форми БАД FLP-MD тваринам з імунодефіцитним станом організму, яка здатна стимулювати перебіг репаративних процесів у пошкоджених клітинах імунокомпетентних органів, підвищувати резистентність організму шляхом ефективного відновлення структурно-функціонального стану патологічно змінених мембранних систем і тісно взаємопов'язаних з ними імунних процесів. Поставлена винаходом задача досягається тим, що спосіб імуномодуляції при імунодефіцитному стані організму тварин, який включає пероральне застосування ліпосомальної форми 0,7-0,9 % розчину БАД (фосфоліпідовмісної суміші з маслянки, суміші ненасичених жирних кислот та вітамінів А і Е), згідно винаходу тваринам вводять БАД із розрахунку 0,6-0,8 мл на 1 кг маси тіла, 2 рази на добу, щоденно, впродовж 30 діб. Спосіб імуномодуляції при імунодефіцитному стані організму тварин характеризується тим, що застосування тваринам з експериментальним імунодефіцитом ліпосомальної форми БАД у дозі 0,6-0,8 мл на 1 кг маси тіла двічі на добу впродовж 30 діб сприяє більш швидкому відновленню маси тимуса і тимусного індексу та збереженню маси селезінки на рівні інтактних тварин, пригнічує рівень апоптозу спленоцитів, покращує стан Т-ланки імунної системи (за рахунок збереження ендокринної функції тимуса та більш швидкого відновлення кількості Тлімфоцитів), підвищуєрівень природних кілерів (кількість великих гранулярних лімфоцитів) та стимулює відновлення гематологічних показників. Компоненти ліпосомальної форми БАД FLP-MD характеризуються мембранотропними властивостями, що обумовлює їх вплив на структурно-функціональний стан уражених клітин імунокомпетентних органів та інтенсивність і спрямування імуномодулюючих процесів в організмі тварин при розвитку імунодефіцитного стану. Дослідження проводили на лабораторних мишах лінії СВА, одержаних від здорових особин. Використовували 120 здорових особин (самиць) з масою тіла (18-20 г), які досягли статевої зрілості на момент початку дослідів. 1 UA 104971 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 Досліджували вплив запропонованого нами способу застосування ліпосомальної форми БАД на ендокринну функцію тимуса і показники, що характеризують стан імунної системи та гематологічні показники тварин з експериментальним імунодефіцитом. Для моделювання експериментальної імуносупресії мишам лінії СВА внутрішньочеревинно вводили циклофосфан в дозі 200 мг/кг маси тіла. Для проведення досліджень використовували терапевтичну дозу 0,7-0,9 % розчину ліпосомальної форми БАД, яку вводили тваринам перорально із розрахунку 0,6-0,8 мл на 1 кг маси тіла 2 рази на добу щоденно, впродовж 30 діб. Тварин брали в експеримент на 3-, 8-, 15- та 30-у добу після ін'єкції ЦФ. Мишей зважували, декапітували під етерним наркозом, відбирали кров для дослідження та зважували органи (тимус, селезінку). Визначали абсолютну масу лімфоїдних органів, тимусний та селезінковий індекси: відношення маси органу (мг) до маси тіла (г), підраховували кількість лейкоцитів та виводили лейкограму периферичної крові, визначали абсолютну та відносну кількість лімфоїдних клітин у тимусі та селезінці. Вміст Т-лімфоцитів у периферичній крові тварин визначали методом спонтанного розеткоутворення (Ε-РУК), який заснований на наявності рецепторів на поверхні Т-клітин у мишей до еритроцитів кроля. У мазках, фарбованих за Романовським-Гімзою, визначали кількість великих гранулярних лімфоцитів (ВГЛ), які являють собою морфологічний субстрат NK- і К-клітин. Ендокринну функцію тимуса оцінювали за титром ТСФ. Дослідження рівнів спонтанного апоптозу і проліферації лімфоїдних клітин органів імунної системи проводили за допомогою протоковоцитометричного методу на приладі FACScan ("Becton Dickinson", USA), що обладнаний аргоновим лазером з довжиною хвилі 488 нм, за програмою CellQuest для комп'ютерів Мас. Визначали індекс проліферативної активності (ІПА), шляхом поділу показника відносної кількості клітин проліферативного пулу у випадку спонтанної проліферації на показник відносної кількості клітин, що знаходяться в апоптозі. Для оцінки дольового вмісту клітин в основних фазах мітотичного циклу (G1/0, S, G2+M), гістограми розподілу обробляли за допомогою спеціалізованої математичної програми Mod Fit LT 2.0 ("BDIS", USA) для комп'ютерів Mac. Для проведення досліджень формували 4 групи мишей по 12 мишей-самиць: 1 група інтактні (контрольна група); 2 група - інтактні тварини, які отримували ліпосомальну форму БАД; 3 група - тварини з експериментальним імунодефіцитом; 4 група - тварини з експериментальним імунодефіцитом, які отримували ліпосомальну форму БАД. Результати дослідження щодо впливу ліпосомальної форми БАД на загальний стан органів імунної системи мишей лінії СВА з експериментальним імунодефіцитом подано в табл. 1. Як видно із цих даних, введення ЦФ викликає суттєве зменшення маси тимуса і селезінки у піддослідних мишей. Так, на 3 добу після ін'єкції ЦФ, тимус зменшується в 3,6, а селезінка - у 1,3 разу. У мишей контрольної групи, які отримували тільки ЦФ, відбувається поступове відновлення цих показників і через 30 діб вони вже не відрізняються від таких у інтактних тварин. Зміну маси лімфоїдних органів в цій групі тварин також відображають і їх індекси, особливо тимусний. Ведення ліпосомальної форми БАД інтактним тваринам не змінювало досліджувані показники. У тварин, які отримували БАД і ЦФ, також відбувається зменшення маси тимуса на 3-8 добу спостереження, але вже через 15 діб вона не відрізняється від такої в контрольній групі. На відміну від тимуса, маса селезінки тварин цієї групи не змінюється і залишається сталою впродовж всього експерименту. Аналізуючи дані табл. 2, слід відмітити, що введення в організм тварин ЦФ вплинуло і на кількість клітин у лімфоїдних органах. На початку експерименту (3 доба) спостерігається суттєве зниження відносної та абсолютної кількості як тимоцитів, так і спленоцитів. Знижену кількість лімфоїдних клітин у тимусі виявляли впродовж всього експерименту, тоді як в селезінці їх відновлення відбувається вже на 15 добу спостереження. Введення ліпосомальної форми БАД суттєво не впливає на клітинність тимуса, але збільшує кількість спленоцитів у тварин дослідної групи на 3-8 добу, р