Спосіб діагностики захворювань передміхурової залози у псів

Реферат: Спосіб діагностики захворювань передміхурової залози у псів включає проведення цитологічних досліджень. Як біоматеріал для досліджень використовують змиви секрету передміхурової залози, які отримують від тварин під наркозом, шляхом введення катетера в сечовий міхур, промивання залишків сечі фізіологічним розчином із повною аспірацією рідини, виведення катетера назовні та введення іншого стерильного катетера, пальпаторно контролюючи дану маніпуляцію трансректально, внесення 10 мл фізіологічного розчину через катетер, піддаючи масажу передміхурову залозу, та аспірацію всього вмісту, з якого виготовляють мазки, які фарбують гематоксилін-еозином та за морфологічними характеристиками клітин визначають відхилення цитологічних показників від норми. UA 122367 U (54) СПОСІБ ДІАГНОСТИКИ ЗАХВОРЮВАНЬ ПЕРЕДМІХУРОВОЇ ЗАЛОЗИ У ПСІВ UA 122367 U UA 122367 U 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 Корисна модель належить до галузі ветеринарної медицини, зокрема до клінічної діагностики, терапії та відтворення тварин, а саме до способів діагностики захворювань передміхурової залози, і може бути застосована спеціалістами ветеринарної медицини в державних та приватних установах ветеринарної медицини для об'єктивної оцінки функціонального стану та диференціальної діагностики патологій передміхурової залози, проведення відповідних лікувальних та профілактичних заходів. У ветеринарній практиці часто діагностуються порушення функції відтворення у псів, зокрема, захворювання передміхурової залози. Характерні клінічні ознаки, властиві для патології простати за локалізацією больової реакції, можна помилково прийняти за дисфункцію кишечнику (коліт) або патологію хребта. В окремих випадках патологічний процес у тканинах передміхурової залози може тривалий час протікати безсимптомно, що в подальшому призводить до ускладнень та значного збільшення органу (простатомегалії). Захворювання простати часто діагностується на пізніх стадіях, що ускладнює лікування і погіршує прогноз. Щоб виключити помилки, пов'язані з надзвичайно різноманітними і нестандартними проявами захворювань простати, необхідно мати надійний спосіб діагностики, а саме диференціальної діагностики різних патологічних станів передміхурової залози, який здатний підвищити ефективність профілактичних та лікувальних ветеринарних заходів. Зокрема, до таких способів відносять проведення лабораторних досліджень при патологічних станах передміхурової залози, що дозволяють уточнити діагноз та вибрати вірну лікувальну тактику. Відомі способи діагностики захворювань передміхурової залози (Способ дифференциальной диагностики рака предстательной железы, патент RU 2147418; Способ диагностики онкологических заболеваний предстательной железы, патент RU 2348042; Способ диагностики рака предстательной железы, патент RU2368319, Способ диагностики онкологических заболеваний предстательной железы на основе ацилкарнитина и арахидоноил амина, патент RU 2445000,) передбачають проведення ультразвукових досліджень із вираховування індексів (компресивності та васкуляризації), визначення у крові та сечі речовинмаркерів та генів, за результатами яких проводиться диференціальна діагностика деяких патологічних станів простати. Проте, область застосування вищенаведених способів є доволі обмеженою, оскільки вони призначені тільки для діагностики неопластичних процесів передміхурової залози, до того ж, на відміну від морфологічних методів не дають "стовідсоткової гарантії" точності поставленого діагнозу. Інші відомі способи (Способ диагностики латентного простатита, патент RU 2445623; Спосіб оцінки місцевого імунітету передміхурової залози у хворих на хронічний рецидивуючий простатит, патент України № 38984) включають визначення у секреті простати лейкоцитів та імуноглобулінів. Недоліками відомих способів є те, що вони обмежуються діагностикою запальних процесів передміхурової залози. Відомі способи (Способ дифференциальной диагностики гиперплазии, дисплазии и рака предстательной железы, патент RU 2156977; Спосіб діагностики раку передміхурової залози, патент України № 30300; Спосіб диференційної діагностики доброякісної гіперплазії простати та раку передміхурової залози за допомогою лазерної поляриметрії, патент України № 15760) включають біопсію тканин передміхурової залоз з подальшим їх дослідженням із використанням гістологічних методів. До недоліків відомих способів належить необхідність проведення біопсії - процедура, яка пов'язана із пошкодженням цілісності тканин залози, кровотечею, і може призвести до метастазування. Найближчим аналогом до способу, що заявляється, є спосіб, який включає дослідження клітинних відбитків передміхурової залози (Способ цитометрической диагностики опухолевых заболеваний предстательной железы, патент RU2322676), які фіксують спиртом та фарбують 50 % розчином AgNCh, проводять їх цитоморфометрію і за параметрами ядерно-ядерцевого апарата діагностують гіпер- та неоплазію, а також рак передміхурової залози. Заявлений спосіб і прототип мають спільні суттєві ознаки, а саме: включає проведення цитологічних досліджень передміхурової залози. Недоліками прототипу є те, що він вимагає виконання біопсії для отримання відбитків, при цьому цитологічні дослідження спрямовані переважно на виявлення процесів новоутворення у тканинах передміхурової залози. Запропонований спосіб усуває недоліки прототипу та дозволяє встановлювати фізіологічний та різноманітні патологічні стани передміхурової залози собаки, проводити диференційну діагностику захворювань, що підвищує ефективність лікувально-профілактичних заходів. 1 UA 122367 U 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 В основу корисної моделі поставлена задача розробити новий, ефективний та надійний спосіб діагностики захворювань передміхурової залози у псів, який передбачає проведення цитологічних досліджень секрету та дає можливість за морфологічними критеріями точно встановлювати стан залози, зручний у використанні. Технічний результат досягається тим, що як біоматеріал для досліджень використовують змиви секрету передміхурової залози, які отримують від тварин під наркозом шляхом введення катетера в сечовий міхур, промивання залишків сечі фізіологічним розчином із повною аспірацією рідини, виведення катетера назовні та введення іншого стерильного катетера, пальпаторно контролюючи дану маніпуляцію трансректально, внесення 10 мл фізіологічного розчину через катетер, піддаючи масажу передміхурову залозу, та аспірацію всього вмісту, з якого виготовляють мазки, які фарбують гематоксилін-еозином та за морфологічними характеристиками клітин визначають відхилення цитологічних показників від норми. Технічний результат способу зумовлений як проведенням цитологічних досліджень секрету передміхурової залози, так і способом отримання змивів секрету. Передміхурова залоза (gl. Prostata) - має типову трубчасто-альвеолярну будову. Секрет передміхурової залози слаболужної реакції, забезпечує рухливість і виживання сперміїв в статевих шляхах самки. Залоза розташована в тазовій порожнині над шийкою сечового міхура і складається з двох бічних симетричних часток (lobus dexter et sinister). Частки гіростати оточують сечостатевий канал і лише з дорсальної і вентральної сторін мають неглибоку поздовжню борозну. Множинні протоки передміхурової залози відкриваються з боків від поздовжньої складки слизової сечостатевого каналу - статевого горбка (colliculus seminalis), який забезпечує рівномірне перемішування сперміїв з її секретом, в результаті чого утворюється сперма. Хвороби передміхурової залози, зокрема гіперплазія, в тому числі, ускладнена порушеннями сечовипускання і копростазом, полікістоз та парапростатична кіста, простатит, аденома, абсцеси, рак - займають значне місце серед захворювань урогенітального тракту у псів. Проте, у ветеринарній практиці найчастіше реєструються простатит та аденома. Труднощі діагностики та низька ефективність терапевтичного та хірургічного лікування дозволяють віднести ці патології до категорії особливо тяжких хвороб. У переважній більшості зустрічаються ускладнені форми захворювань. Простатит (запалення передміхурової залози). На відміну від людини, у собак не існує чіткої вікової схильності до запалення передміхурової залози: воно може виникнути у псів навіть у віці 6-8 місяців. При цьому може протікати в гострій і хронічній формах. Виникненню захворювання сприяють гиперпластичні зміни в органі. Найбільш імовірною і поширеною первинною причиною простатиту у псів на сьогоднішній день прийнято вважати порушення балансу статевих гормонів. При цьому передміхурова залоза збільшується, погіршується її кровообіг, і створюються сприятливі умови для розмноження в ній мікробів. В етіології запалення провідне місце займають кишкова паличка, золотистий стафілокок, рідше - інші мікроорганізми (синьогнійна паличка, стрептококи, мікоплазми, хламідії, клебсієла, протей, ентеробактерії, пастерели, гемофілюс). В секреті запаленої передміхурової залози вкрай рідко виявляють анаеробну флору. Збудником специфічного простатиту зазвичай є Br. canis. Клінічні ознаки гострого простатиту: гіпертермія, депресія, часті позиви до сечовипускання або дефекації, обережна хода. Один з найбільш поширених симптомів - мимовільні виділення крові з сечівника (краплями, незалежно від сечовипускання). При пальпації через пряму кишку зазвичай відзначають анормальні контури або текстуру органу, болючість. Іноді спостерігають набряк мошонки, препуція і навіть задніх кінцівок. У старих собак зміни передміхурової залози можуть бути кістозного або онкологічного (аденома, рак) походження. При процесах абсцедування передміхурової залози можливий розвиток перитоніту, сепсису і шоку з летальним кінцем. Хронічний простатит зазвичай протікає в субклінічній формі. Доброякісна гіперплазія передміхурової залози або нодозна гіперплазія, аденома передміхурової залози, аденоматозна гіпертрофія, залозиста та стромальна гіперплазія, фіброзалозиста гіперплазія пухлиноподібні захворювання, основним симптомом якого є симетрична чи асиметрична простатомегалія внаслідок гіперплазії її залізистих структур. Зустрічається дуже часто. До 6-річного віку, гіперплазія простати розвивається у 60 % самців, до 9-річного віку - у 95 %. У розвитку хвороби провідна роль належить тестикулярним і оваріальним гормонам. Розрізняють залозисту і складну форми гіперплазії передміхурової залози. Залозиста форма зустрічається переважно у собак у віці молодше 5 років, характеризується розростанням секреторних компонентів залози, її симетричним збільшенням в розмірі. Складна форма гіперплазії зазвичай розвивається у тварин старше 5 років і характеризується асиметричним збільшенням передміхурової залози за рахунок осередкової 2 UA 122367 U 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 гіперплазії і атрофії її залозистих структур. У більшості випадків захворювання протікає безсимптомно, лише у деяких самців супроводжується розладом сечовипускання (дизурія, неповне випорожнення сечового міхура, наявність крові в сечі і еякуляті) або дефекації (тенезми, рідше копростаз і запори). Порушення дефекації спостерігають значно частіше. Часті помилкові позиви можуть привести до утворення грижі промежини. Розлад сечовипускання зазвичай виникає на тлі запальних процесів в сечовій системі. Діагностика простатиту, гіперплазії та новоутворень складна. По клінічній картині можна поставити тільки попередній діагноз. Щоб його підтвердити, використовують дані мікроскопічного і бактеріологічного досліджень секрету простати. Зокрема, дослідження секрету простати є основним методом діагностики і контролю ефективності лікування такої патології як хронічний простатит. Інтерпретація результатів досліджень та встановлення діагнозу проводиться за характеристикою клітин, виявлених у препараті. При цьому для вірної інтерпретації цитологічних досліджень має значення спосіб отримання секрету передміхурової залози. Останній зазвичай отримують методом мастурбації, рідше ректальним масажем простати. Проте, такі методи мають свої недоліки, оскільки до секрету простати також попадає сеча, спермії, клітини сечового міхура, уретри, статевого члена та препуція. У секреті простати здорових псів клітини паренхіми простати відсутні або утворюють невеликі скупчення: епітеліоцити при цьому мають розміщене по центру велике ядро з делікатно розташованим хроматином та зернистої структурицитоплазму. При запаленні простати, в препараті, взятому для дослідження, домінують нейтрофіли. Присутня також велика кількість клітин передміхурової залози, а їх цитоплазма стає інтенсивно забарвленою. Абсцеси простати характеризуються великою кількістю нейтрофілів в полі зору на стадії дегенерації, клітини з розпадом ядер і вакуолізованою цитоплазмою. Гіперплазія проявляється наявністю як поодиноких клітин, так і скупчень клітин епітелію у формі грона, з нечіткими межами між клітинами, зернистою цитоплазмою та великими округлими або овальними ядрами без ядерець. При новоутворах в клітинах спостерігається анізокаріоз або різні за розміром і формою ядра, присутні ядерця, зазвичай малі і поодинокі, але можуть траплятись і великі. Клітинні мембрани в новоутворах невиразні. Таким чином, за даними цитологічних досліджень можливо проводити диференційну діагностику захворювань передміхурової залози у псів. При проведенні патентно-інформаційного пошуку авторами і заявником знайдено технічне рішення (Способ цитометрической диагностики опухолевых заболеваний предстательной железы, патент RU 2322676), що містить найбільшу кількість суттєвих ознак, спільних із заявленим і включає проведення цитологічних досліджень передміхурової залози. Однак, наявність зазначених, спільних з прототипом ознак недостатня для отримання технічного результату, який забезпечує заявлений спосіб. Технічних рішень, які за сукупністю ознак повністю співпадають із заявленим способом, заявником не виявлено. Це дозволяє зробити висновок про відповідність заявленого технічного рішення критерію винаходу (корисної моделі) - "новизна". У патентній і науково-технічній інформації не знайдено технічних рішень, в яких були б описані відомості про ознаки, що відрізняють заявлений від прототипу і забезпечують досягнення технічного результату тим, що в якості біоматеріалу для досліджень використовують змиви секрету передміхурової залози, які отримують від тварин під наркозом, шляхом введення катетеру в сечовий міхур, промивання залишків сечі фізіологічним розчином із повною аспірацією рідини, виведення катетеру на зовні та введення іншого стерильного катетеру, пальпаторно контролюючи дану маніпуляцію трансректально, внесення 10 мл фізіологічного розчину через катетер, піддаючи масажу передміхурову залозу, та аспірацію всього вмісту, з якого виготовляють мазки, які фарбують гематоксилін-еозином та за морфологічними характеристиками клітин визначають відхилення цитологічних показників від норми. Заявлена корисна модель належить до галузі ветеринарної медицини, зокрема до клінічної діагностики, терапії та відтворення тварин, а саме до способів діагностики захворювань передміхурової залози, і може бути застосована спеціалістами ветеринарної медицини в державних та приватних установах ветеринарної медицини для об'єктивної оцінки функціонального стану та диференціальної діагностики патологій передміхурової залози, проведення відповідних лікувальних та 3 UA 122367 U 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 профілактичних заходів, а тому відповідає критерію винаходу (корисної моделі) "промислова придатність". Заявлений спосіб виконують наступним чином: - вводять тварин у стан загального наркозу (наприклад: дають атропіну 0,02 мг/кг, седазину 0,1 мл/кг або інші препарати); - у сечовий міхур з дотриманням асептики вводять стерильний уретральний катетер з метою звільнення його від залишків сечі; - промивають фізіологічним розчином з повною аспірацією вмісту та виведенням катетера назовні; - вводять інший стерильний уретральний катетер до простатичної частини уретри, пальпаторно контролюючи дану маніпуляцію трансректально; - вводять 10 мл фізіологічного розчину через катетер, піддаючи масажу передміхурову залозу, та аспірують весь вміст; - виготовляють мазки, які фарбують гематоксиліном та еозином; - препарат досліджують під мікроскопом при збільшенні: окуляр 10 об'єктив 40. Ефективність заявленого способу та його переваги перед прототипом підтверджені прикладом конкретного використання. Дослідження проводили на базі клініки кафедри акушерства, гінекології та біотехнології відтворення тварин імені Г.В. Звєрєвої ЛНУВМ та БТ імені С.З. Ґжицького. Для досліду відібрано 10 псів різних порід віком 5-9 років, у яких отримували змиви секрету передміхурової залози. З 10 проаналізованих препаратів було встановлено, що у двох препаратах (фіг. 1, де 1 – епітеліоцит та 2 - розетка базальних клітин) клітини паренхіми простати мають велике ядро округлої і овальної форми з делікатно розташованим хроматином, їх оточує вузький вінчик цитоплазми. Це вказує на те, що змиви секрету відповідають фізіологічній нормі. Результати аналізу 7 змивів секрету простати показали (фіг. 2, де 3 - без′ядерний епітеліоцит; 4 - без'ядерні клітини з пінистою цитоплазмою; 5 - внутрішньоядерні вакуолі 6 фігури амітозу;) вакуолізацію цитоплазми, анізохромію цитоплазми і ядер епітеліальних клітин, збільшення їх розмірів, порушення форми, вакуолізацію та ексцентричність ядер епітеліоцитів, гетерохроматизацію. В окремих клітинах встановлено ознаки атрофії: хроматин з ділянками конденсації, який забарвлювався гіпохромно, визначалися поодинокі або множинні внутрішньоядерні вакуолі, при цьому цитоплазма практично не забарвлювалася. Були виявлені фігури амітозу та без'ядерні клітини з пінистою цитоплазмою. Усі вказані ознаки дають підставу діагностувати у семи тварин гіперплазію простати. Результати цитологічного дослідження у пса віком 9 років виявили (фіг. 3, де 7 - симпласт клітин; 8 - ядерце; 9 - вакуолізація цитоплазми) тримірні структури у вигляді шароподібних елементів з невеликої групи об'єднаних у симпласт клітин, з ексцентрично розташованими ядрами, великої площі вакуолізованої цитоплазми, еозинофілія цитоплазми, слабобазофільні ядра епітеліальних клітин, збільшення розмірів ядра, гетерохроматизація, петлеподібний хроматин, утворення великого (>2 мкм) ядерця (показано стрілкою). Ці зміни клітин вказують на те, що у простаті проходить процес новоутворення. Отже, застосування способу дало можливість встановити морфологічні зміни клітин секрету простати псів, а саме: поодинокі клітини, межі яких погано візуалізуються, фігури амітозу та без′ядерні клітини з пінистою цитоплазмою, ядра великі округлої або овальної форми, без ядерець, що дає підставу діагностувати гіперплазію залози. Встановлено наявність клітин, які вказують на процеси новоутворення - вакуолізацію цитоплазми, великі площі вакуолізованої цитоплазми, еозинофілію цитоплазми, слабобазофільні ядра епітеліальних клітин, збільшення розмірів ядра, гетерохроматизацію, петлеподібний хроматин, утворення ядерця. Таким чином, результати досліджень, одержані у прикладі конкретного виконання способу підтверджують його ефективність. ФОРМУЛА КОРИСНОЇ МОДЕЛІ 55 60 Спосіб діагностики захворювань передміхурової залози у псів, що включає проведення цитологічних досліджень, який відрізняється тим, що як біоматеріал для досліджень використовують змиви секрету передміхурової залози, які отримують від тварин під наркозом, шляхом введення катетера в сечовий міхур, промивання залишків сечі фізіологічним розчином із повною аспірацією рідини, виведення катетера назовні та введення іншого стерильного катетера, пальпаторно контролюючи дану маніпуляцію трансректально, внесення 10 мл 4 UA 122367 U фізіологічного розчину через катетер, піддаючи масажу передміхурову залозу, та аспірацію всього вмісту, з якого виготовляють мазки, які фарбують гематоксилін-еозином та за морфологічними характеристиками клітин визначають відхилення цитологічних показників від норми. 5 UA 122367 U Комп’ютерна верстка А. Крижанівський Міністерство економічного розвитку і торгівлі України, вул. М. Грушевського, 12/2, м. Київ, 01008, Україна ДП “Український інститут інтелектуальної власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601 6