Препарат бiоспорин для профiлактики та лiкування шлунково-кишкових захворювань людини

союз com тских СОЦИЛЛИСТИЧГСКИХ Рі-.СПУБПИК l (5i)S A 6? К 39/02 35/74 ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ ПО ИЗОБРЕЛ ЇГМИЯМ И ОТКРЫТИЯМ ПРИ ГКНТ СССР К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ 1 (21)4641513/13 (22)06.02.39 (45)30.03.92. Бюл. N* 12 (71) Институт микробиологии и пипусопогии им. Д.К.Заболотного (72) 3.В.Смирнов, С.Р.Резник, И.Б.Сорокуловз, В.А.Вьюницкая, А.Т.Слабоспицкач, Э.А.Берилле, И.Г.Скориковэ, В.Я.Чаплинский и А.В.Тофан (53)610.37(088.8) (56) Руководство по вакцинному и сыворточному делу. /Под ред. П.Н Бургасоїза. М.: Медицина, 1978, с. 90. (54) ПРЕПАРАТ БИОСПОРИН ДЛЯ ПРОФИЛАКТИКИ И ЛЕЧЕНИЯ ЖЕЛУДОЧНО-КИШЕЧНЫХ ЗАБОЛЕВАНИЙ ЧЕЛОВЕКА (57) Использование: медицина дисбактериозы, профилактика и лечение желудочно-кишєчм ых заболеваний, вызванных патогенными и условно-патогенными микроорганиямами. Сущность изобретения; живые штамму Bacillus Subtllis ВКПМ М1 В2335 и Bacillus lichenlformis ВКПМ ^В-2336 с типичными свойствами смешивают в количестве соотиетственно4'109-1б-1С'^ и 2-108-3^ *109 кл/мл по 47 об.% каждого, доводит наполнителзм до 100%. Препарат проверяют на безвредность и антагонистическую активность, определят фагоцитарную активность лейкоцитов и индукцию интерферона. Препарат испытан на людях 7 Изобретение относится к биотехнологии, а именно к препаратам для профилактики и лечения дисбактериозов и других желудочно-кишечных заболеваний человека, вызванных патогенными и условно патогенными микроорганизмами. Целью изобретения является повышение эффективности профилактики \ч лечения дисбактериозов и других желудочно-кишечных заболеваний человека. Препарат биоспорпн содержит п качестве'живых микробных культур Bacillus subtllis З (ВКПМ № В-2335) и BacillusMchenlformls 31 (ВКПМ № Б-2336) и наполнитель. В качестве наполните™ препарат содержит прсдпсчгитеп',но сахарозу - ^ке/піиновую смесь. Входящие о согтав препарата живыо микробные культуры Х4рактеризуюісл следующими свойствами. B.subtllls 3 (ВКПМ Г* В 2335) - грамположительные аэробные спорообрззующие палочки, продуцирующие каталазу. На сусло-агаре, среде Громыко, стрептомицетном агоре растут обильно, образуя матовые склздчагые колонии телесного цвета с изрезанными краями, легко снимаются петлей. Вмазках из колоний, выросши/ йаМПА, через 18 ч обнаруживаются прямые па^счкоаидчые клетки размером 2,7x0,0 мкм, расПОЛОКЄНІЙ іе одиночно или в виде цепочек. Клетки подвижны, оор'зуют аэробно споры овальной формы, которие рзспопагаются в клетке центрально. При спорообразовании клеті'и не раздуваются. Посге роста и а г по козном а гари и ппотоплчзме не обнаруживаются включения поли-/^-оксим2слячом кислоты. Нз МП Б культура образует пленку Не растет D aviaopofSHbsx условиям, не суідроflHjyoT моизоину, не образует газ из нитратов в анаэробных условиях, не продуцирует 1722502 аргининдигидролазу. Дает положительную реакцию Фогес-Проскауэра, pscier в присутствии 7% Масі, Гидролйзует крахмал іл казеин, разжижает желатину, Ферментирует глюкозу, арабинозу, ксилозу, манниг с 5 образованием кислоты без газа. Редуцирует нитраты, обеспечивает метиленовую синь. Не обпадает коагулаэной и лвцитинаяпой активностью. B.llchenlformis 31 (ВКПМ № 8-2336) ~ 10 грамположительные клетки, палочковидные, размером 2,5x0,6 мкм. Клетки подвижны, перитрихи, располагаются, о основном, D аиде цепочек. Споры овальной формы, располагаются а клетке центрально. Клетки 15 при спорообразовании не раздуваются. После роста на глюкоэном агаре в протоплазме не обнаруживаются включения поли/3-оксимзсляной кислоты. На МПА колонии с тусклой грубой по- 20 оерхностыо, непрозоачные, плотно прикреплены к агару; нередко на поверхности обнаруживается слизь. На МПБ образуется морщинистая пленка, иногда с кремовым оттенком. 25 Культура образует каталазу, характеризуется способностью расти нэ агаре в анаэробных условиях. Дает положительную реакцию Фогес-Проскаузра, растет при 7% NaCI. Гидролизует крахмал, казеин, не гид- 30 ролизует мочевину. Желатин разжижает медленно. Ферментирует глюкозу, арабимозу, ксилозу, маннит с образованием кислоты без газа. Редуцирует нитраты, в анаэробных условиях из нитратов образует 35 газ. Продуцирует артининдигидролазу. їіе обладает коагулазной и лецитнназиай. активностью. П р и м е р 1. Из штаммов В. subtills 3 и B.llchenlformis 31 с типичными морфологи- 40 ческими, культуральнымн, биохимическими свойствами приготовлены три варианта препарата биоспорин с различным содержанием микробных клеток в составе препарата. 45 Вариант I. Препарат, содержащий следующие компоненты, об.%: Биомасса B.subillls ВКПМ №В-2335 4млрд. живых микробных клеток а 1 мл физиологического 5 раствора 47 Биомасса B.lichenlformis ВКПМ №В-2336 200млн. живых микронных клеток в 1 мл физиологического 10 раствора 47 Наполнитель Остальное до 100 Вариант II. Препарат, содержащий следующие компоненты, об.%: Биомасса G.subtllls ВКПМ Т\Ш~2335 10 млрд. живых микробных клеток в 1 мл физиологического раствора 47 .( Биомасса B.IIchenfform's ВКПМ №В-2336 1,6 млрд. живых микробных клеток о 1 №i физиологического расі вора 47 Наполнитель Остальное до 100 Вариант ЕІІ. Препарат, содержащий следующие компоненты, об.%: Виомассэ B.slbtllls ВКПМ N=B-2335 16 млрд. живых микробных клеток в 1 мл физиологического раствора 47 Биомасса B.licheniformls ВКПМ №В-2336 3 Млрд, ЖИЙЫХ микробных клеток в 1 мл физиологического раствора 47 Наполнитель Остальное до 100 Результаты испытания вариантов препарата биоспорин МП на безвредность и антагонистическую актиамость представлены в таОл. 1. Как видно из представленных в табл. 1 данных, оптимальные количества живых микробных клеток в 1 мл составляют для В.subtills ВКПМ МеВ-2335 4-Ю млрд и для B.llchenlformis ВКПМ NsB-2336200 млн-1.6 млрд при их объемном соси ношении 47% : 47%. Дальнейшее увеличение количества микробных клеток не изменяет существенным образом специфическую активность препарата с отношении тест-культур микроорганизмов. П р и м е р 2. Эффективность препарата биоспорин, содержащее различные соотношения культур B.subtllls 3 и B.Hcheniformls 31 оценена путем воздействия их на Staph. aureus. Результаты опытов представлены в табл. 2. Результаты тз5л. 2 также подтверждают, что наиболее оптимальным сочетанием культур B.subtiUs ВКПМ №В-2335 и B.llchenlformis ВКПМ №В-2336 является соотношение между ними соотаетственно 47% м47^». При гаком соотношении культур регистрируется наиболее быстрое и наиболее полное подавление стафилококка. Сход і /2?502 ные данные получены и при изучении воздействия различных вариантов препарат? Оиоспории на патогенные для человека ашериуии, сальмонеллы, шигеллы и другио болезнетворные микроорганизмы. 5 П р и м е р 3. Культуры, пходшдие а состав препарата бмоспорин, безвредны для лабораторних животных. Воедочие цаже значительных доз препарата не пьешнаег гибели и патологических изменений у 10 животных. Противопокаааний к применению препарата нет. Результаты исследования Сезвредчосіи штаммов U.suinllls 3 и B.Iicnonlformls З і , входящих в состав препарата биоспо- 15 putt, представлены о табл. 3 и А. П р и м е р Л. Антагонистическую активность Сиоспорина определпют методом отс р о ч е н н о г о а н т а г о н и з м а . Для этого содержимое ампулы растпоряют в 1 мл фи- 20 апологического раствора. Полученную взвесь сысепзют штрихом по диаметру чашки Петри с агазированнои средой Гаузе № 2 (или ц цен і ре чашки) петлей диаметром 33 мм. Посевы инкубируют D термостате при 25 37°С в течение 72 ч. Затем к выросшей ассоциации культур подсевают штрихом посевной материал тест-микроорганизмов (500-миллиснныо суспензии суточных культур о физколопт-'оском растворе). Учет ре- 30 зультатов проводят через 18 ч инкубирования при 37°С по величине зон отсутствия роста тост-культур. Контролем роста тест-культур служит их параллельный посев на чашки с агаризованной средой Га- 35 узе ЬЬ 2 без исследуемой ассоциации культур. та, а также'ма протяжении двух месяцев после окончания введения покалывают псе животные ОСТЇЗЮТСЙ активными, полностью иовдают пищевой рацион, физиологические отправления у и\лх не нарушаются, позедепио обычное, изменений со с и р о п ы