Спосіб діагностики мікотичного ураження тканин

Изобретение относится к медицине, а именно к патоморфологии и микологии и предназначено для диагностики микозов. Известен способ диагностики микозов по Гомори-Грокотту [1] включающий погружение депарафинированных срезов в хромовую кислоту с последующей промывкой в воде, водном растворе бисульфата соды, погружением в раствор уротропина-нитрата серебра и дальнейшей обработкой раствором хлорного золота, водным раствором тиосульфата соды и, на конечном этапе, обезвоживанием, просветлением и погружением в бальзам. Недостатками этого способа являются: - длительность процедуры (4 ч 25 мин); - использование большого набора реактивов; - дороговизна и дефицитность основного препарата - хлорного золота; - невозможность определения отношения клеток гриба к тканевым структурам из-за слабого окрашивания последних; - многоэтапность процедуры окрашивания. Наиболее близким по технической сущности к заявляемому способу является способ диагностики микозов по Гомори-Грокотту в модификации Лесового B.C. [2], включающий погружение депарафинированных срезов в раствор трехокиси хрома с последующей обработкой их растворов бисульфата натрия, импрегнацией в растворе уротропина-серебра, отбеливанием в хлорамине, докрашиванием пикриновой кислотой, промывкой в проточной воде и заключением в бальзам. Но данный способ имеет следующие недостатки: - сложность исследования (дополнительное приготовление сложного реактива и необходимость микроскопического контроля степени окрашивания), - многоэтапность (14 этапов); - использование большого количества реактивов, в том числе дефицитных; - длительность обработки препаратов (3 ч 4 мин); - недостаточная четкость окраски, не позволяющая определить тканевые взаимоотношения гриба и окружающих структур. В основу изобретения поставлена задача усовершенствования способа диагностики микотического поражения тканей путем нанесения на гистологический срез свежей сыворотки крови донора с последующей окраской соединением серебра, чем обеспечивается дифференцированное окрашивание элементов гриба и окружающих тканей и за счет этого упрощается способ диагностики и сокращается время исследования. Поставленная задача решается тем, что в способе диагностики микотического поражения тканей путем подготовки из них депара-финированного среза с последующим микроскопическим выявлением на нем элементов гриба с помощью соединений серебра, согласно изобретению, на гистологический срез наносят свежую сыворотку донора, предварительно разведенную дистиллированной водой в соотношении 1:1, после чего инкубируют в течение 1 часа при температуре 37°С и окрашивают 1 % раствором азотнокислого серебра на ярком свете и при выявлении черной окраски элементов гриба на фоне коричневой окраски тканевых структур диагностируют микотическое поражение тканей. Опытным путем установлено, что при уменьшении разведения сыворотки, увеличении температуры и времени ее воздействия на препарат, наблюдается перекрашивание элементов гриба и тканевых структур, что приводит к затруднению дифференциальной диагностики патологии. При увеличении разведения сыворотки, уменьшении температуры и сокращении времени воздействия сыворотки на препарат - отмечается недоокрашивание элементов гриба и структур тканей, что не позволяет адекватно оценивать полученные результаты исследования. Пример конкретного выполнения способа. У больного А., история болезни № 908, во время операции взяты для гистологического исследования ткани легкого, из которых изготавливают гистологические срезы. На их поверхность, после депарафинирования, помещают на 1 час сыворотку крови донора, разведенную дистиллированой водой 1:1. После этого, срез ополаскивают дистиллированой водой и на ярком свету окрашивают 1 % раствором азотнокислого серебра. В результате окраски элементы гриба Aspergillus четко избирательно окрашивались в черный цвет. При этом отчетливо определялся септированный мицелий, а клетки и волокна ткани легкого окрашивались в коричневый цвет. Таким образом, заявляемый способ позволяет сократить время окрашивания до 2 ч, упрощает диагностику за счет уменьшения числа этапов окраски и количества применяемых красителей, исключает применение дорогостоящих и дефицитных реактивов. Данный способ диагностики может широко использоваться в клиникодиагностических лабораториях, противотуберкулезных диспансерах, лабораториях патоморфологии и микотоксикологии.