Спосіб диференційної діагностики пухлин яєчників

Корисна модель відноситься до медицини, а саме до морфологічної оцінки можливості малігнізації пухлин яєчників шляхом визначення рівня ушкодження пухлинних клітин методом апоптозу. Відомим є спосіб діагностики раку, при якому в крові визначають онкологічний маркер СА-125. [Жорданиа К.И. Некоторые аспекты диагностики и лечения рака яичников//Русский мед. журнал.-2003.-№2]. Як показали дослідження, у здорових жінок рівень маркера СА-125 у середньому складає 25,9МЕ/мол. У пацієнток із серозною цистаденокарциномою величини цього маркера коливаються в широких межах, причому підвищені значення його виявлені в 88,8% хворих. У хворих раком яєчників І стадії показники СА-125 практично не відрізняються від норми, що свідчить про сумнівну ефективність тесту при ранній діагностиці захворювання. Спосіб не дає можливості від диференціювати доброякісні пухлини та високодиференційовані раки або пограничні папілярні цистоаденоми у тих випадках, коли не значно виражений поліморфізм клітин, та невеликі їх розміри. Найбільш близьким та обраним за найближчий аналог є спосіб діагностики пухлин яєчників [Шиллер-Волкова Н.Н., Никитина Н.Н., Агамова К.А., Брин М.Л., Цитологическая диагностика злокачественных новообразований. М.: Медицина -1963 -263с]. Суть способу полягає у діагностиці раку або доброякісних пухлин яєчників шляхом цитологічного дослідження мазків відбитків пухлин з урахуванням величини клітини, ядра, ядерноцитоплазматичному відношенні, величині ядерця, неправильній формі ядерець, багатоядерності клітин, поліморфізму. Недоліки способу полягають в тім, що під час дослідження ураховують тільки атипові та злоякісні клітини, а клітини, які знаходяться в стадії апоптозу не враховують, адже їхня кількість є безпосереднім чинником прогресії захворювання. В основу корисної моделі поставлена задача удосконалення способу диференційної діагностики пухлин яєчників, в якому за рахунок додаткового показника, визначають кількість клітин, які знаходяться у стані апоптозу, за рахунок чого визначають перебіг хвороби. Поставлена задача вирішується в способі диференційної діагностики пухлин яєчників шляхом вивчення мазків, виготовлених з пунктату пухлин яєчників чи з осаду асцитичної рідини, згідно з корисною моделлю, проводять морфологічне дослідження додатково виявляють клітини у стані апоптозу та підраховують апоптозний індекс, при величині апоптозного індексу 0,20-0,30% діагностують доброякісну пухлину при величині апоптозного індексу 0,97% та вище діагностують злоякісну пухлин у. Проведені дослідження визначення апоптозного індексу показали, що його величина при раці в 4 рази вища за його рівень, який спостерігається при цистоаденомі яєчника, тобто при доброякісних пухлинах. Апоптозний індекс свідчить про кількість клітин, які вже уражені хворобою. Чим більший цей показник, тим швидше відбувається малігнізація та прогресія захворювання. Спосіб, що заявляється, здійснюють при дослідженні мазків, виготовлених із пунктату як самої пухлини, так і її метастазів, а також з осаду клітин серозної рідини. Для виявлення клітин, які знаходяться у стані апоптозу, матеріал, який одержано при біопсії, чи при пункції рівномірно наносять на предметне скло. Мазки промивають фосфатна-сольовим буфером при рН 7,0, після чого фіксують 4% параформальдегідом з наступним забарвленням фарбником Hoechst 33342 в концентрації 5мг/мл на протязі 20 хвилин при кімнатній температурі, після чого при використанні флуоресцентного мікроскопу підраховують кількість клітин з ознаками апоптозу - конденсація ядерного хроматину, деградацією ДНК, фрагментацією ядра та цитоплазми із зберіганням мембранного оточення фрагментів клітин. Результат визначають у відсотках клітин, які знаходяться у стані апоптозу. Для цього підраховують апоптозний індекс (АІ). Апоптозний індекс відповідає кількості клітин у стані апоптозу на 100 обстежених клітин. Приклад 1 У хворої 56 років при пункції пухлини яєчників виявили епітеліальні невеликого розміру клітини, які розташовуються у мазку окремо та залозоподібними групами. В групах клітини були розташовані досить щільно, але ядра у клітин були декілька великуваті, що до розмірів клітин та гіперхромні, що викликало необхідність диференційної діагностики з раком яєчників. При використанні методики для визначення апоптозного індексу встановлено, що його величина дорівнювала 0,21%. Це дало підставу віднести цю пухлин у до доброякісної, що і було підтверджено наступним гістологічним дослідженням операційного матеріалу. Приклад 2 Хвора 67 років поступила в стаціонар зі скаргами на збільшення об'єму живота, важкість у животі, слабкість та швидку втомлюваність. При парацентезі одержано 3,5 літри жовтуватої прозорої рідини, з осаду якої зроблено мазки для цитологічного дослідження. При мікроскопії мазків, забарвлених за Паненгеймом, виявлено різку проліферацію мезотелію та незначну кількість залозоподібних груп із середнім розміром кубічних клітин з незначним виразним поліморфізмом та дискаріозом, що не дало можливості трактувати їх як ракові клітини. В мазках, що були оброблені для підрахування у флуоресцентному мікроскопі апоптозного індексу, визначено його величину, що дорівнювала 1,19%. Ця величина апоптозного індексу характерна для високодиференційованого раку яєчників, що і було підтверджено наступним гістологічним дослідженням операційного матеріалу. Таким чином, запропонований спосіб дає можливість збільшити інформативність комплексного обстеження хворих та вірно і достовірно верифікувати діагноз, встановити злоякісність чи доброякісність пухлин яєчників.