Спосіб визначення міді в гранулоцитах крові

Спосіб відноситься до клінічних лабораторних методів дослідження та стосується способів цитохімічного визначення міді. Відомий спосіб визначення міді в гранулоцитах крові на вологих препаратах [Хей хо у Ф.Г. Дж., Кваглино Д. Гематологическая цитохимия - М.: Медицина, 1983. - С.104], який включає забір крові, підготовку мазків, забарвлення їх при кімнатній температурі 1 краплею суміші, яка містить одну частину концентрованого водного розчину гідроксиду амонію та одну частину насиченого спиртового розчину рубеанової кислоти, дослідження препаратів під світловим мікроскопом. Оцінку інтенсивності цитохімічної реакції проводять за темно-зеленим забарвленням цитоплазми гранулоцитів крові. Недоліками цього способу є неможливість отримання стабільних та порівняльних результатів, наявність артефактів. Ознаками, спільними з рішенням, що заявляється, є: забір крові, підготовка мазків, забарвлення їх сумішшю рубеанової кислоти та гідрооксиду амонію, дослідження препаратів під світловим мікроскопом. Відомий спосіб цитохімічного визначення міді в крові [Бутенко З.А. и др. Цитохимия и электронная микроскопия клеток крови и кроветворных органов. - Киев: Наукова думка, 1974. - С.97], який включає забір крові, підготовку мазків, підсушування їх на повітрі, забарвлення при кімнатній температурі сумішшю, яка містить 1мл насиченого спиртового розчину рубеанової кислоти, 50мл 1%-ного водного розчину ацетату натрію, промивання мазків у дистильованій воді та підсушування їх на повітрі, визначення інтенсивності цитохімічної реакції за допомогою світлового мікроскопа, і виявлення присутності у клітинах міді за темно-зеленим забарвленням гранулоцитів крові. Недоліком цього способу є його низька чутливість. Ознаками, спільними із заявленим рішенням, є: забір крові, підготовка мазків, забарвлення їх сумішшю, яка містить спиртовий розчин рубеанової кислоти та водний розчин ацетату натрію, промивання мазків у дистильованій воді, підсушування на повітрі, визначення за допомогою світлового мікроскопа міді у гранулоцитах крові за темно-зеленим забарвленням цитохімічної реакції. В основу корисної моделі поставлено задачу розробити спосіб визначення міді в гранулоцитах крові, який шляхом попередньої фіксації мазків у парах формаліну, забарвлення їх при підвищеній температурі сумішшю, що містить рубеанову кислоту, ацетат натрію та гідроксид амонію, дозволяє отримати у високому ступені стабільні та порівняльні результати. Суттєвими ознаками способу є: забір крові, підготовка мазків, фіксація їх у парах формаліну, забарвлення протягом 3 год. при температурі 70°С сумішшю, що містить спиртовий розчин рубеанової кислоти і водні розчини ацетату натрію та гідроксиду амонію, промивання дистильованою водою, підсушування на повітрі, визначення за допомогою світлового мікроскопа міді у гранулоцита х крові за темно-зеленим забарвленням цитохімічної реакції. Відмінними від прототипу ознаками є: фіксація мазків у парах формаліну, забарвлення їх протягом 3 год. при 70°С у суміші, яка містить 1 об'ємну частину насиченого спиртового розчину рубеанової кислоти, 19 об'ємних частин 2%-ного водного розчину ацетату натрію, 0,02 об'ємних частин 25%-ного водного розчину гідроксиду амонію. Спосіб здійснюють таким чином: виконують забір крові, готують мазки, які фіксують протягом 5 хвилин у парах формаліну, для цього в чашку Петрі наливають 20мл формаліну, на дно чашки кладуть два скляних валики, поверх валиків кладуть два предметних стекла мазками донизу, чашку Петрі накривають кришкою, по завершенні фіксації кришку знімають, мазки забарвлюють протягом 3год. при температурі 70°С у суміші, яка складається з 1 об'ємної частини насиченого спиртового розчину рубеанової кислоти, 19 об'ємних частин 2%-ного водного розчину ацетату натрію, 0,02 об'ємних частин 25%-ного водного розчину гідроксиду амонію, потім мазки промивають протягом 5 хвилин у дистильованій воді, підсушують на повітрі і проводять дослідження під світловим мікроскопом. На препаратах присутність міді визначають за темно-зеленим забарвленням гранул у цитоплазмі зернистих лейкоцитів. Оцінку інтенсивності цитохімічної реакції проводять в умовних одиницях (у.о.) за трибальною системою: за один бал приймають слабо позитивну, два бали - помірну, три бали - виражену за інтенсивністю реакцію. Приклад 1. У здорової (контрольної) людини отримували кров із пальця і готували мазки, які фіксували впродовж 5 хвилин парами формаліну. Потім протягом 3 годин мазки забарвлювали сумішшю, яка містить 5мл насиченого спиртового розчину рубеанової кислоти, 95мл 2%-ного водного розчину ацетату натрію, 2 краплі 25 %-ного водного розчину гідроксиду амонію, промивали їх у дистильованій воді, підсушували на повітрі, визначали інтенсивність цитохімічної реакції за допомогою світлового мікроскопа. На препаратах за темно-зеленим забарвленням оцінювали вміст міді в гранулоцитах крові. У нормі інтенсивність цитохімічної реакції складає 0,5±0,04у.о. Приклад 2. У людини з цукровим діабетом мазки крові обробляли, як вказано у випадку зі здоровою людиною. Інтенсивність цитохімічної реакції була вище, ніж у здорової людини, і складала 0,8±0,05у.о. (р