Спосіб одержання специфічної гіперімунної сироватки на курчатах для ідентифікації в серологічних реакціях mycoplasma gallisepticum

Корисна модель відноситься до ветеринарної Імунології та мікробіології, зокрема до способів одержання специфічної гіперімунної сироватки до Mycoplasma gallisepticum-інфекції птиці. У великій кількості захворювань птиці, які протікають з ознаками ураження органів дихання, найбільш складними у діагностичному відношенні є респіраторний мікоплазмоз, який характеризується розвитком респіраторного синдрому, полісерозитами та запальними процесами суставів та сухожиллів. Відомо, що мікоплазмені інфекції у тварин можуть бути визваними 24 видами мікоплазм. Існує спосіб одержання специфічної сироватки проти мікоплазм Lin M.Y. и Kleven S.H. [Avian diseases - 1984, T.28, №1.-Р.88-89]. Імунізацію здійснюють одноразово аерозольне (експозиція 5хв) курчатам віком 21 доба. При цьому застосовують антиген Mycoplasma gallisepticum. Недоліком першого способу є незначна ефективність - бо в результаті отримують сироватку із невисокими титрами антитіл. Є спосіб одержання специфічних сироваток за Soeripto S. із співавт. [Austral, veter. J - 1989, Т. 66, № 3.- Р. 7377]. В цьому випадку курчат імунізують інтракон'юнктивально атенуйованим штамом мікоплазм у віці 49 діб. Недоліком цього способу є екологічна небезпека, бо в роботі застосовують живий штам мікоплазм. Найбільш близьким до запропонованого є спосіб одержання специфічних сироваток проти мікоплазм за Barbur E.K., Newman J.A. та Sivandan V [Avian diseases - 1987, T.31, № 4.-P.723-729-89], що включає дворазову імунізацію в 13-тижневому та 17-тижневому віці. При цьому вводять інтратрахеально живий штам мікоплазм, а у сережку -мікоплазменний антиген. Відбір крові здійснюють при повному знекровленні тварин на 5 добу після останньої імунізації. Після цього від отриманої крові відокремлюють цільовий продукт (гіперімунну сироватку) за стандартною методикою. Це рішення може бути прототипом. Недоліком є те, що у цьому випадку отримують специфічну сироватку із високими титрами антитіл, але спосіб є проблематичним з погляду біобезпеки та біоетики, бо в роботі використовують живий штам мікоплазм. В основу корисної моделі поставлено задачу розробити спосіб одержання специфічної гіперімунної сироватки на курчатах для ідентифікації в серологічних реакціях Mycoplasma gallisepticum, що включає введення антигену Mycoplasma gallisepticum, відбір крові, та відокремлення цільового продукту шляхом введення антигену Mycoplasma gallisepticum триразове інтратрахеально та інтраторакально (у грудний повітроносний міхур) у дозі 0,2см3, який додатково містить 5% пенентранту димексиду (диметилсульфоксиду), щоб забезпечити ефективність способу. Спосіб відрізняється застосуванням в роботі антигену мікоплазм замість живого штаму, збільшеною кратністю введення імунізуючого матеріалу (триразове введення), шляхами введення імунізуючого матеріалу (антиген вводять інтратрахеально та інтраторакально) та додаванням до антигену 5% пенетранту димексиду. Все це дозволяє отримати гіперімунну сироватку із високими титрами антитіл біобезпечним та екологічно чистим шляхом. Спосіб одержання специфічної гіперімунної сироватки для ідентифікації в серологічних реакціях Mycoplasma gallisepticum включає триразове введення антигену Mycoplasma gallisepticum курчатам у віці 22-х, 27-ми та 32-х діб. Антиген вводять інтратрахеально та інтраторакально (у грудний повітроносний міхур) в об'ємах 0,2см3 із додаванням 5% пенетранту димексиду (диметилсульфоксиду). Відбір крові здійснюють при повному знекровленні тварин на 5 добу після останньої імунізації. Після цього від отриманої крові відокремлюють цільовий продукт (гіперімунну сироватку) за стандартною методикою. Приклад 1 Проведено імунізацію 30 курчат породи Ломан-Браун. Курчатам введено антиген еталонного штаму Mycoplasma gallisepticum S6 (виготовлений за стандартною методикою) тричі у віці 22-х, 27-ми та 32-х діб інтратрахеально в об'ємі 0,2см3 та інтраторакально (у грудний повітроносний міхур) в об'ємі 0,2см3. На 5 добу після останньої імунізації здійснено відбір крові. Після цього від отриманої крові відокремлено цільовий продукт (гіперімунну сироватку). При дослідженні сироватки крові гіперімунізованих курчат встановлено, що титр специфічних антитіл в СКРА складав + ++ +, а в ПРА - 1:1280 при застосуванні антигену із концентрацією 30 млрд.м.т. в об'ємі 1см3. Приклад 2 При дослідженні сироватки крові гіперімунізованих курчат в ІФА (імуноферментний аналіз) із стандартним антигеном до М. galiisepticum встановлено, що екстинція позитивної сироватки перевищує цей показник для негативної сироватки у два рази, при найбільшому розведенні сироватки 1:200. Таким чином, спосіб, що заявляється дозволяє отримати високоспецифічні гіперімунні сироватки для ідентифікації в серологічних реакціях Mycoplasma galiisepticum та може слугувати для створення діагностичних препаратів при Mycoplasma gallisepticum-інфекції птиці.