Спосіб одержання екстракту жовтків яєць диких птахів для використання в імунологічних реакціях

Винахід, що передбачається відноситься до ветеринарії, а саме до імунології та біотехнології. Екстракти жовтків яєць, що виготовляють на фізіологічному розчині, або з використанням хлороформу, придатні для постановки імунологічних реакцій РЗГА, РИГА, РН та інших. Існує визначення титра антитіл в інкубаційних яйцях для контролю за імунним статусом курей-несучок (Coleman A. choice in titer testing-Use cull hatching eggs instead of bleeding freeders. Poultry Dig 1982 41.479:46-49, РЖ „Ветеринария", 1983, №5). З метою попередження стресу у курей, пов'язаного з відбором крові, відпрацьована методика визначення титрів антитіл (AT) у жовтках яєць. Проведено визначення AT у сироватці крові та екстрактів жовтків яєць, що були одержані від імунізованих кур проти хвороби Н’юкасла та інфекційного бронхіту курей. При цьому рекомендовано визначення AT в жовтках яєць замість сироватки крові курей. Є „Способ получения специфических антител" (SU №1412065 от 17.09.86г., кл. А61К39/00). За цим рішенням використовують жовтки яєць перепілок для визначення AT. Існує спосіб одержання специфічних антитіл до вірусу СНІДу, де як біологічну рідину використовують жовток яєць японських перепелів (SU №1459004 от 26.11.86г., кл. А61К39/42). В цьому рішенні також використовують жовтки яєць свійських птахів. Для визначення рівня антитіл у курчат, що щеплені утиним аденовірусом, використовують екстракти жовтків яєць, що виготовлені розчиненням у фосфатному буфері, екстракцією за допомогою хлороформу, заморожуванням та відтаюванням розчинених у фосфатному буфері жовтків (US of egg yolk to determine antibody levels in chickens inoculated with a hemagglutinating duck adenovirus (adenovirus 127-Like). Theresa H. Piela, Vance J. Yates, P.W. Chang Avian Diseases vol.29 no 2 p.457-464). Це рішення може бути прототипом. В основу винаходу поставлено задачу розробити спосіб одержання екстракту жовтків яєць птахів для використання в імунологічних реакціях розчиненням жовтків у фосфатному буфері, екстракцією жовтків за допомогою хлороформу, заморожуванням та відтаюванням розчинених у фосфатному буфері жовтків, шляхом використання жовтків яєць диких птахів, щоб забезпечити одержання екстракту жовтків яєць диких птахів для використання в імунологічних реакціях та проведення імуномоніторингу щодо інфекційних хвороб в популяціях диких птахів. Приклад 1 Для приготування екстрактів використовували свіжознесені яйця або яйця на початковій стадії насиджування. Акуратно розбивали шкаралупу і відокремлювали жовток від білку. Після цього жовток змішували із стерильним фізіологічним розчином з рН7,2-7,4 у співвідношенні 1:2. Суміш ретельно шуттелювали протягом 10-15 хв. Потім екстракти центрифугували при 2500-3000 об/хв. 10-15хв. Рідину, що утворилась над осадом, відбирали і використовували в імунологічних реакціях. Отримані екстракти мали жовте забарвлення різної інтенсивності - від світло-жовтого до жовтогарячого (в залежності від забарвлення жовтків). Виготовлені таким чином екстракти можна зберігати у холодильнику при +4+8°С протягом 3-4 днів. Такі екстракти не придатні для зберігання у замороженому стані. Приклад 2 Приготування хлороформенних екстрактів. Після відокремлювання жовтка від білку жовток змішували із стерильним фізіологічним розчином з рН7,2-7,4 у співвідношенні 1:1, ретельно перемішували протягом 5-10хв., потім до одержаної суміші додавали рівний об'єм хлороформу, шуттелювали 3-5хв., і центрифугували при 2500-3000тис./об.хв. Рідину, що утворилась над осадом, відбирали і використовували в імунологічних реакціях. Одержані екстракти прозорі, мають жовтувате забарвлення, або не мають забарвлення зовсім. Такі екстракти можна зберігати при +4+8°С протягом 3-4 днів, а також довгостроково у замороженому стані при -20°С. Приклад 3 Екстракти, приготовані як на фізіологічному розчині, так і з використанням хлороформу придатні для постановки імунологічних реакцій: РЗГА, РНГА, РН та ін. Перед дослідженням екстрактів жовтків у імунологічних реакціях для видалення неспецифічних термолабільних інгібіторів аглютинації екстракти жовтків прогрівали на водяній бані при 56-58°С 30хв. Для видалення неспецифічних термостабільних інгібіторів екстракти обробляли вуглекислим газом (СО2). Вуглекислий газ пропускали через екстракти із апарата Кіпа протягом 5-7хв. до помутніння. Потім екстракти центрифугували при 1500об/хв. 10хв. Замість газоподібної вуглекислоти можна використовувати сухий лід у пробірки з екстрактами додавали маленькі шматочки льоду до появи муті. Екстракти жовтків яєць диких птахів використовують для проведення імуномоніторингу щодо інфекційних хвороб в популяціях диких птахів.