Спосіб визначення морфо-функціонального стану сперматозоїдів при кріоконсервуванні сперми півнів

Корисна модель відноситься до ветеринарної біотехнології, а саме до способів низькотемпературного консервування сперми півнів. Є велика кількість способів низькотемпературного консервування сперми півнів. Але усі вони не дають можливості зберегти більш 30-50% функціонально повноцінних сперматозоїдів у процесі кріоконсервування. Завдяки тому, що вдосконалюються існуючі технології кріоконсервування, детальне вивчення впливу його на морфо-функціональний стан сперматозоїдів, температури й ступеня розріджування сперми, введення в неї кріопротектору використання різних речовин, що мають кріопротекторні властивості та їх суміш, вплив захисних середовищ, що входять до їх складу, використання нових захисних середовищ у прцесі підготовки сперми до заморожування. Таким чином головне при підвищенні життєздатності кріоконсервованих сперматозоїдів півнів є удосконалення технології їх низькотемпературного консервування. При розробці та удосконаленні технологій заморожування сперми птиці основоположною є оцінка якості деконсервованих зразків. Існують способи оцінки якості сперматозоїдів, а саме: визначення рухливості, визначення виживаності забарвлювання созин-нітрозилом, визначення активності маркерних ферментів, забарвлювання тіазиновимчервоним та етидіум бромідом. Але ці способи не завжди дозволяють прогнозувати запліднювальну здібність тому, що мають суттєві погрішності у результатах оцінки чи недоліки у використанні. Оцінюється рухливість та визначається цілосність мембран голівок але це не дає можливості одержання всієї необхідної інформації про стан статтєвих клітин півнів при розріджуванні сперми захисним середовищем, додавання до неї кріопротектору, заморожуванні-відтаюванні [Я.Кагава. Биомембраны. М.Высшая школа, 1985]. Є спосіб оцінки біологічної повноцінності сперматозоїдів [RU №2099024, от 07.02.1995. кл.А61D19/02]. Цей спосіб визначення морфо-функціонального стану плазматичних мембран сперматозоїдів щодо концентрації іонів калію в рідкій частині сім'я до та після додавання речовини, що руйнує плазматичні мембрани сперматозоїдів. Цей спосіб використовують для штучного запліднення сільськогосподарських тварин. Існує спосіб морфофункціональної оцінки стану сперматозоїдів індиків [Белецкий Е.М., дис.. "Морфофункциональные характеристики сперматозоидов индюков и их оплодотворяющая способность", Борки, 1989г.] Цей спосіб оснований на прижеттєвому забарвленні сперматозоїдів сумішшю родаміну С (0,05-0,1%) та малахітового зеленого (0,075-0,15%), що виготовлені на 0,05Н фосфатного буферу (рН-7,0), при цьому забарвленні акросоми стають малиново-червоного кольору, головки синє-зеленого, середня частина та хвіст також малиново-червоного кольору. Цей спосіб може бути прототипом. Недоліком його є те, що цей спосіб можливо використовувати тільки для оцінки якості нативної сперми, але не можливо після введення до неї кріопротектору та ще й після заморожування-відтавання. В основу корисної моделі поставлено задачу розробити спосіб визначення морфо-функціонального стану сперматозоїдів, що містить розріджування сперми, додавання забарвника, визначення цілосності сперматозоїдів, шляхом розріджування живильним сольовим середовищем, щоб забезпечити спосіб визначення морфофункціонального стану сперматозоїдів при кріоконсервуванні сперми півнів. Спосіб виконується таким чином. Сперму розводять у співвідношенні 1:1 розчинником, додають забарвник на такому ж розчиннику, розведена сперма витримується протягом 1 хвилини, виготовляється мазок. Після чого зразки висушують та проводять визначення морфо-функціального стану сперматозоїдів. Приклад 1. На предметне скло наносили 3m сперми півнів, яка розчинена у співвідношенні 1:1, додавали 12m . Забарвника - суміш родаміну С(0,05-0,1%) та малахітового зеленого (0,075-0,15%) на розчиннику, витримували протягом 1 хвилини виготовляли мазок та висушували. Таким чином одержували зразок. Приклад 2. Оцінку морфо-функціональної цілісності сперматозоїдів проводили під мікроскопом при збільшенні 90х15 із масляною імерсією. Обчислювали підряд 100 сперміїв та фіксували процентне співвідношення цілих і знешкоджених, а також відмічали знешкодження, які найбільш часто з устрічалися. Коефіцієнт кореляції оцінки якості сперми з запліднюючою здібністю за допомогою цього способу є 0,94. Спосіб визначення морфо-функціонального стану сперматозоїдів при кріоконсервуванні сперми півнів використовується для оцінки якості при збереженні сперматозоїдів усі х видів тварин та птиці.