N-заміщений індол-3-гліоксиламід з антиастматичною, антиалергійною та імуносупресивною/імуномодулюючою дією, спосіб його одержання, фармацевтична композиція та спосіб її одержання

1 N-заміщений індол-3-глюксиламід формули (І) а також його кислотно-адитивні солі, де R означає водень, (С-і-Сб)-алкіл, причому алкільна група одно- або багаторазово може бути заміщена фенільним кільцем, причому це фенільне кільце зі свого боку одно- або багаторазово може бути заміщене галогеном, (Сі-Сє)-алкілом, (С3-С7)циклоалкілом, карбоксильними групами, естерифікованими Сі-Сб-алканолами карбоксильними групами, трифторметильними групами, гідроксильними групами, метоксигрупами, етоксигрупами, бензилоксигрупами, а також одно- або багаторазово заміщена у фенільній частині ( d Сє)-алкільними групами, атомами галогенів або трифторметильними групами, бензильною групою, Ri може означати фенільне кільце, одно- або багаторазово заміщене (Сі-Сє)-алкілом, (С-і-Сє)алкокси, гідрокси, бензилокси, нітро, аміно, ( d Сб)-алкіламшо, (Сі-Сєі-алкоксикарбоніламшо та карбоксильною групою або естерифікованою d Сє-алканолами карбоксильною піридиновий каркас формули (II) групою, або причому піридиновий каркас необов'язково зв'язаний з атомами вуглецю кільця 2, 3 та 4 і може бути заміщений замісниками Rs та R§, причому радикали RsTa R6 можуть бути однакові або різні і можуть означати (С-і-Сб)-алкіл, а також (Сз-С7)-циклоалкіл, (Сі-Сб)-алкокси, нітро, аміно, гідрокси, галоген та трифторметил, а також можуть являти собою етоксикарбоніламшо-радикал, а також карбоксиалкілоксигрупу, причому алкільна група може мати понад 1-4 С-атоми, Ri також може бути 2- або 4піримідиніл-гетероциклом або піридилметилрадикалом, у якому СЬЬ може стояти у позиції 2, З, 4, причому 2-піримідинілове кільце одно- або багаторазово може бути заміщене метильною групою, а також заміщений (Сі-Сє)-алкілом, галогеном, нітрогрупою, аміногрупою та (Сі-Сб)-алкіламінорадикалом, заміщений 2-, 3- та 4-хшолільний каркас, може являти собою 2-, 3- та 4-хшолілметильну групу, причому вуглець у КІЛЬЦІ піридилметил- та хінолілметил-радикалів може бути заміщений ( d Сє)-алкілом, (Сі-Сб)-алкокси, нітро, аміно та ( d Сб)-алкоксикарбоніламшо, крім того, Ri уразі, коли R означає водень або бензильну групу, може являти собою кислотний радикал природної або неприродної амінокислоти, наприклад, а -гліцил-, а -саркозил-, а -аланіл-, а -лейцил-, аізолейцил-, а -серил-, а -фенілаланіл-, апстидил-, а -проліл-, а -арпніл-, а -лізил-, а аспарапл- та а -глутаміл-радикал, причому аміногрупи ВІДПОВІДНИХ амінокислот можуть бути незахищеними або захищеними, і як захисні групи амінофункцм розглядають карбобензокси-радикал (ZРадикал) та трет-бутоксикарбоніл-радикал (ВОСрадикал), а також ацетильну групу, і у разі необхідних для Ri аспарапл- та глутаміл-радикалів існує друга, незв'язана карбоксильна група як ві О C O О (О 60312 фторбензил)-шдол-3-іл]-глюксиламід, І\І-(піридин4-іл)-(1-метил-шдол-3-іл)-глюксиламід, І\І-(піридин3-іл)-[1 -(4-фторбензил)-шдол-3-іл]-глюксиламід, N(піридин-З-іл)-(і -бензилшдол-3-іл)-глюксиламід, N(піридин-3-іл)-[1-(2-хлорбензил)-шдол-3-іл]глюксиламід, І\І-(4-фторфеніл)-[1-(4-фторбензил)шдол-3-іл]-глюксиламід, г\І-(4-нггрофеніл)-[1-(4фторбензил)-індол-3-іл]-глюксиламід, N-(2хлорпіридин-3-іл)-[1-(4-фторбензил)-шдол-3-іл]глюксиламід, І\І-(піридин-4-іл)-(1 -бензилшдол-3-іл)глюксиламід, г\І-(піридин-4-іл)-[1-(3-піридилметил)шдол-3-іл]-глюксиламід, М-(4-фторфеніл)-[1-(2піридилметил)-шдол-3-іл]-глюксиламід, N-(4де R7 може являти собою алкіл-радикал, означати фторфеніл)-[1-(3-піридилметил)-шдол-3-іл]фенільне кільце, яке одно- або багаторазово може глюксиламід, г\І-(піридин-4-іл)-[1-(4-хлорбензил)бути заміщене (С-і-Сє)-алкілом, (Сі-Сб)-алкокси, шдол-3-іл]-глюксиламід, І\І-(піридин-4-іл)-[1-(2галогеном, нітрогрупою, амінофункцією, (С-і-Сє)хлорбензил)-шдол-3-іл]-глюксиламід, ІЧ-(піридин-2алкіламшо, бензпдрильною групою та біс-піл)-[1-(4-фторбензил)-шдол-3-іл]-глюксиламід, Nфторбензилпдрильною групою, R2 може означати (піридин-4-іл)-[1-(2-піридилметил)-шдол-3-іл]водень та (Сі-Сє)-алкільну групу, причому алкільна глюксиламід, (4-феніл-піперазин-1-іл)-[1-(4група одно- або багаторазово заміщена галогеном та фенілом, який, зі свого боку, одно- або багатофторбензил)-шдол-3-іл]-глюксиламід, І\І-(піридинразово може бути заміщений галогеном, (С-і-Сє)2-іл)-(1 -бензил-шдол-3-іл)-глюксиламід, 4-(піридиналкілом, (Сз-С7)-циклоалкілом, карбоксильними 4-іл)-піперазин-1 -іл)-[1 -(4-фторбензил)-шдол-3-іл]групами, естерифікованими Сі-Сє-алканолами глюксиламід, г\І-(піридин-4-іл)-[1-(4-фтор-бензил)карбоксильними групами, трифторметильними 6-етоксикарбоніламіно-шдол-3-іл]-глюксиламід, Nгрупами, гідроксильними групами, метоксигрупа(піридин-4-іл)-[1-(4-фторбензил)-5ми, етоксигрупами або бензилоксигрупами, ( d етоксикарбоніламіно-шдол-3-іл]-глюксиламід, NСє)-алкільна група,якою є F?2, також може бути (піридин-4-іл)-[1-(4-фторбензил)-6заміщена 2-ХІНОЛІЛЬНОЮ групою та 2-, 3- та 4циклопентилоксикарбоніламіно-індол-3-іл]піридильним каркасом, а обидва останні ВІДПОВІДглюксиламід, г\І-(3,4,5-триметоксибензил)-г\ІНО можуть бути одно- або багаторазово заміщені (аліламінокарбоніл-2-метил-проп-1 -іл)-[1 -(4галогеном, (Сі-С4)-алкільними групами або (С1-С4)фторбензил)-шдол-3-іл]-глюксиламід, І\І-(піридиналкоксигрупами, R2 також може бути ароіл4-іл)-[1-(4-фторбензил)-5-метокси-шдол-3-іл]радикалом, причому арильна частина, яка лежить глюксиламід, І\І-(піридин-4-іл)-[1 -(4-фторбензил)-5в основі цього радикалу, являє собою фенільне пдрокси-індол-3-іл]-глюксиламід, І\І-(піридин-4-ілкільце, яке може бути одно- або багаторазово за[1-(4-фторбензил)-5-етоксикарбоніламіно-метилміщене галогеном, (Сі-Сє)-алкілом, (С3-С7)шдол-3-іл]-глюксиламід циклоалкілом, карбоксильними групами, естерифі3 Сполуки формули (І) за одним з пп 1 та 2, які кованими Сі-Сб-алканолами карбоксильними грувідрізняються тим, що вони призначені для лікупами, трифторметильними групами, гідроксильнивання астматичних і/або алерпйних розладів, тами групами, метоксигрупами, етоксигрупами або ких як псоріаз, ревматоїдний артрит і хронічний бензилоксигрупами, R3 та R4 можуть бути однакополіартрит, і/або для застосування як імуносупревими або різними і означати водень, гідрокси, ( d сивний/імуномодулюючий агент Сє)-алкіл, (Сз-С7)-циклоалкіл, (Сі-Сє)-алканоіл, ( d 4 Фармацевтична композиція, що містить фармаСб)-алкокси, галоген та бензилокси, крім того, R3 цевтично активну сполуку разом з традиційними та R4 можуть означати нітрогрупу, аміногрупу, ( d носіями і/або розріджувачами або допоміжними С4)-моно- або діалкілзаміщену аміногрупу та ( d речовинами, яка відрізняється тим, що як активСз)-алкоксикарбоніламшофункцію або (С-і-Сз)ну сполуку вона містить сполуку формули (І) за алкоксикарбоніламшо-(Сі-Сз)-алкільну функцію, Z одним з пп 1 або 2 може означати О та S, де під алкільною, алканольною, алкокси- або алкіламшогрупами слід розу5 Спосіб одержання фармацевтичної композиції, міти характерні для радикалів R, Ri, R2, R3, R4, R5, який відрізняється тим, що сполуку формули (І) R6, R7 як "нерозгалужені", так і "розгалужені алкіза одним з пп 1 або 2 комбінують з традиційними льні групи", причому "нерозгалужені алкільні групи" фармацевтичними носіями і/або розріджувачами можуть означати радикали, такі як метил, етил, пабо іншими допоміжними речовинами та формупропіл, п-бутил, п-пентил, n-гексил, а "розгалужені ють у фармацевтичну композицію або надають алкільні групи" означають, наприклад, такі радикатерапевтично прийнятної форми ли, як ізопропіл або трет-бутил, і під "циклоалкі6 Фармацевтична композиція за п 4, яка відрізнялом" розуміють такі радикали, як, наприклад, цикється тим, що вона являє собою композицію у лопропіл, циклобутил, циклопентил, циклогексил формі таблеток, драже, капсул, розчинів або амабо циклогептил, "галоген" означає фтор, хлор, пул, супозиторіїв, пластирів, порошкових композибром або йод, "алкоксигрупа" являє собою радицій для інгаляцій, суспензій, кремів та мазей кали, наприклад, метокси, етокси, пропокси, буток7 Спосіб одержання N-заміщених індол-3си, ізопропокси, ізобутокси або пентокси глюксиламідів формули (І) за пп 1 або 2, у якому 2 Сполуки формули 1 за п 1 , які відрізняються R, R-і, R2, R3, R4Ta Z мають значення, вказані в п 1, тим, що вони являють собою І\І-(піридин-4-іл)-[1-(4який відрізняється тим, що похідну індолу формули (IV) льна карбоксильна група у формі естеру з С-і-Сєалканолами, наприклад, метилового, етилового або трет-бутилового естеру, Ri також може означати аліламшокарбоніл-2-метил-проп-1 -ільну групу, R та Ri також можуть разом з атомом азоту, з яким вони зв'язані, утворювати піперазинове кільце формули (III) або гомопіперазинове кільце, якщо Ri являє собою аміноалкіленову групу, 60312 де F?3 та F 4 мають вищезгадані значення, додають ? до протонного, диполярного, апротонного або неполярного розчинника суспендованої основи, перетворюють за допомогою реакційноздатної сполуки, яка несе радикал F?2, де F 2 має вищезгадане ? значення, похідну 1-індолу формули (V) де F?2, R3 та R4 мають вищезгадані значення, перетворюють в апротонному або неполярному розчиннику за допомогою реакційноздатної сполуки формули (VI) (C-Z-Halh (VI) де Z означає кисень, a Hal означає галоген - фтор, хлор, бром або йод, а після цього перетворюють первинним або вторинним аміном формули (VII) HNRRi, (VII) де R та Ri мають вищезгадані значення, в апротонному або диполярному апротонному розчиннику і виділяють кінцеву сполуку формули (І) або похідну індолу формули (IV) Індол-3-глюксиламіди широко застосовують як фармакодинамічно активні сполуки та як будівельний матеріал для синтезу у фармацевтичній хімії У патентній заявці NL 6502481 описано сполуки, які призначають через їхній протизапальний та жарознижуючий профіль дм та болевтамовуючу активність У британській заявці GB-PS 1028812 ПОХІДНІ ІНДОЛІЛ-3-ГЛІОКСИЛОВОІ кислоти та и аміди згадуються як болевтамовуючі, протисудомні та радренерпчноефективні сполуки У роботі Г Domschke et al (Бег 04, 2353 (1961)) описано 3-індоліл-глюксиламіди, які не були фармакологічно охарактеризовані У роботі Е Walton et at, J Med Chem 11,1252 (1968) повідомляється про ПОХІДНІ де R3 та R4 мають вищезгадані значення, перетворюють в апротонному або неполярному розчиннику за допомогою реакційноздатної сполуки формули (VI) (C-Z-Halh (VI) де Z означає кисень, a Hal означає галоген - фтор, хлор, бром або йод, а потім в апротонному або диполярно апротонному розчиннику перетворюють первинним або вторинним аміном формули (VII) HNRRi, (VII) де R та Ri мають вищезгадані значення, а після цього похідну 3-шдолу формули (VIII) де R, R-і, R3, R4 та Z мають вищезгадані значення, перетворюють у протонному, диполярному апротонному або неполярному розчиннику у присутності суспендованої основи реакційноздатною сполукою, яка несе радикал R2, і де R2 має вищезгадане значення, і виділяють кінцеву сполуку формули (І) панкреатиту, при лікуванні алергічного риніту та ревматичного артриту Задача даного винаходу полягає у застосуванні нових сполук ряду індоліл-3-глюксилових кислот, які мають антиастматичний та імуномодулюючий вплив Крім того, описується ХІМІЧНИЙ спосіб приготування цих сполук, а також галеновий спосіб перетворення нових сполук на фармацевтичні композиції та форми їх приготування Предмет винаходу включає сполуки загальної формули І, ІНДОЛІЛ-3 ГЛІОКСИЛОВОІ кислоти, які мають інгібуючий вплив на гліцерофосфатдепдрогеназу та лактатдегідрогеназу В описі винаходу Європейської заявки ЕР 0675110А1 описано аміди 1Н-ІНДОЛ-3-ГЛІОКСИЛОВОІ кислоти, які профілюються як інгібітори SPLA2 і застосовуються при лікуванні септичного шоку, причому радикали R, Ri, R2, R3, R4 та Z мають такі значення R= водень, (С-і-Сб)-алкіл, причому алкільна група одно- або багаторазово може бути заміщена фенільним кільцем Це фенільне кільце, зі свого боку, може бути одно- або багаторазово заміщене галогеном, (Сі-Сє)-алкілом, (С3-С7) циклоалкілом, карбоксильними групами, естерифікованими d Сє-алканолами карбоксильними групами, трифторметильними групами, гідроксильними групами, метоксигрупами, етоксигрупами, бензилоксигрупами, а також може включати одно- або багаторазово заміщену у феніл ьній частині (С-і-Сє)алкільними групами, атомами галогенів або трифторметильними групами бензильну групу Ri може означати фенільне кільце, одно- або багаторазово заміщене (С-і-Сє)-алкілом, (С-і-Сє)алкокси, гідрокси, бензилокси, нітро, зміно, (С-і-Сб)алкіламшо, (Сі-Сєі-алкоксикарбоніламшо та карбоксильною групою або естерифікованою С-і-Сєалканолами карбоксильною групою, або піридиновий каркас Формули II ФормулаЛ причому піридиновий каркас необов'язково може бути з'єднаний з атомами вуглецю цього кільця 2, 3 та 4 і заміщений замісниками Rs та R6 Радикали Rs та R6 можуть бути однаковими або різними і означати (С-і-Сб)-алкіл, а також (С3-С7) циклоалкіл, (Сі-Сє) -алкокси, нітро, аміно, гідрокси, галоген та трифторметил, можуть являти собою етоксикарбоніламшо-радикал, а також групу карбоксиалкілокси, де алкільна група може мати понад 1-4 С-атомів Ri також може бути 2- або 4-піримідинільним гетероциклом або піридилметильним радикалом, у якому СЬІ2 може стояти у позиції 2-, 3-, 4, причому 2-піримідинільне кільце може бути одно- або багаторазово заміщене метильною групою, означати заміщений (Сі-Сє)-алкілом, галогеном, нітрогрупою, аміногрупою та (Сі-Сб)-алкіламіно-радикалом 2-, 3- та 4-ХІНОЛІЛЬНИЙ каркас, являти собою 2-, 3та 4-хшолілметильну групу, причому вуглець у КІЛЬЦІ піридилметильного та ХІНОЛІЛметильного радикалів може бути заміщений (С-і-Сє)-алкілом, (С-і-Сб) -алкокси, нітро, зміно та (С-і-Сє)алкоксикарбоніламшо Ri у разі, коли R означає водень або бензильну групу, може бути кислотним радикалом природної або неприродної амінокислоти, наприклад, являти собою а-гліцил-, а-саркозил-, а-аланіл-, алейцил-, а-ізолейцил-, а-серил-, а-фенілаланіл-, а-пстидил-, а-проліл-, а-арпніл-, а-лізил-, ааспарапл- та а-глутаміл-радикал, причому аміногрупи ВІДПОВІДНИХ амінокислот можуть бути незахищеними або захищеними Як захисні групи амінофункцм розглядають карбобензокси-радикал (ZРадикал) та трет-бутоксикарбоніл-радикал (ВОСрадикал), а такожацетильну групу У разі необхідних для Ri аспарапл- та глутаміл-радикалів існує друга, незв'язана карбоксильна група як вільна карбоксильна група у формі естеру з С-і-Сєалканолами, наприклад, метилового, етилового або трет-бутилового естеру Крім того, Ri може 60312 8 означати аліламшокарбоніл-2-метил-проп-1-ільну групу R та Ri також можуть разом з атомом азоту, з яким вони зв'язані, утворювати піперазинове кільце Формули III або гомопіперазинове кільце, якщо Ri являє собою аміноалкіленову групу, де R7 являє собою алкіл-ради кал, означає фенільне кільце, яке одно-або багаторазово може бути заміщене (С-і-Сє)-алкілом, (С-і-Сє)-алкокси, галогеном, нітрогрупою, амінофункцією, (С-і-Сє)алкіламшо, бензпдрильною групою та бі-рфторбензилпдрильною групою R2 може означати водень та (Сі-Сє)-алкільну групу, причому алкільна група одно- або багаторазово заміщена галогеном та фенілом, який, зі свого боку, одно- або багаторазово може бути заміщений галогеном, (Сі-Сє)-алкілом, (С3-С7)циклоалкілом, карбоксильними групами, естерифікованими Сі-Сб-алканолами карбоксильними групами, трифторметильними групами, гідроксильними групами, метоксигрупами, етоксигрупами або бензилоксигрупами (Сі-Сє)-алкільна група, якою є F?2, також може бути заміщена 2-ХІНОЛІЛЬНОЮ групою та 2-, 3- та 4-піридильним каркасом, а обидва останні ВІДПОВІДНО можуть бути одно- або багаторазово заміщені галогеном, (Сі-С4)-алкільними групами або (С1-С4) -алкокси групам и R2 також може бути ароіл-радикалом, причому арильна частина, яка лежить в основі цього радикалу, являє собою фенільне кільце, яке може бути одно- або багаторазово заміщене галогеном, (С-і-Сє)алкілом, (Сз-С7)-циклоалкілом, карбоксильними групами, естерифікованими Сі-Сє-алканолами карбоксильними групами, трифторметильними групами, гідроксильними групами, метоксигрупами, етоксигрупами або бензилоксигрупами R3 та R4 можуть бути однаковими або різними і означати водень, гідрокси, (С-і-Сб)-алкіл, (С3-С7)циклоалкіл, (Сі-Сб)-алканоіл, (С-і-Сє)-алкокси, галоген та бензилокси Крім того, R3 та R4 можуть означати нітрогрупу, аміногрупу, (С-і-С^-моно- або діалкілзаміщену аміногрупу та (С-і-Сз)алкоксикарбоніламшофункцію або (С-і-Сз)алкоксикарбоніламшо-(Сі-Сз)-алкільну функцію Z означає Ота S Під алкільною, алканольною, алкокси- або алкіламшо- групами слід розуміти характерні для радикалів R, Ri, R2, R3, R4, R5, R6, R7 як „нерозгалужені", так і „розгалужені" алкільні групи, причому „нерозгалужені алкільні групи" можуть означати радикали, такі як метил, етил, n-пропіл, п-бутил, ппентил, n-гексил, а „розгалужені алкільні групи" означають, наприклад, такі радикали, як ізопропіл або трет-бутил Під "циклоалкілом" розуміють такі радикали, як, наприклад, циклопропіл, циклобутил, циклопентил, циклогексил або циклогептил „Галоген" означає фтор, хлор, бром або йод "Алкоксигрупа" являє собою радикали, наприклад, метокси, етокси, пропокси, бутокси, ізопропокси, ізобутокси або пентокси Сполуки згідно з даним винаходом можуть також існувати як кислотноадитивні солі, наприклад, як солі мінеральних кис 60312 лот, таких як соляна кислота, сірчана кислота, фосфорна кислота, солі органічних кислот, таких як оцтова кислота, молочна кислота, малонова кислота, малеїнова кислота, фумарова кислота, глюконова кислота, глюкуронова кислота, лимонна кислота, ембонова кислота, м ета н сул ьфо нова кислота, трифтороцтова кислота т а бурштинова кислота Як сполуки Формули І, так і їхні солі є біологічно активними Сполуки Формули І призначають у ВІЛЬНІЙ формі або як солі фізіологічне прийнятних кислот Введення може бути пероральним, парентеральним, внутрішньовенним, підшкірним або у вигляді інгаляцій Крім того, винахід стосується фармацевтичних композицій з вмістом принаймні однієї сполуки Формули І або м солі фізіологічне прийнятної неорганічної або органічної кислоти та, якщо потрібно, застосовуваних у фармацевтиці носив т а розріджувачів або допоміжних речовин Підходящими лікарськими формами є, наприклад, таблетки, драже, капсули, розчини або ампули, супозиторії, пластирі, порошки для інгаляцій, суспензії, креми т а мазі Сполуки згідно з даним винаходом виявляють добру антиастматичну, антиалерпчну т а імуносупресивну/імуномодулюючу дію, наприклад, при трансплантаціях т а таких захворюваннях, як псоріаз, ревматоїдні захворювання т а хронічний поліартрит, у нижчеподаних фармакологічних моделях Інгібування "першої фази" - еозинофілія у BAL через 24 години після контрольного зараження алергеном у морських свинок ЧОЛОВІЧІ особини морських свинок (200-250г, Dunkm Hartley Shoe) підшкірно активно сенсибілі10 зують овальбуміном (Юмкг овальбуміну + 1мг АІ(ОН)з) і через 2 тижні піддають реімунізацм Через тиждень після реімунізацм овальбуміном тварин через інгаляцію стимулюють овальбуміном (0,5% розчин) протягом 20-30 секунд Через 24 години тварин умертвляють за допомогою передозування уретану, знекровлюють і здійснюють бронхоальвеолярне промивання (BAL) за допомогою 2 х 5мл 0,9% фізіологічного розчину кухонної солі Рідину, якою здійснювали промивання, збирають і протягом 10 хвилин 400г центрифугують, осад після центрифугування суспендують в 1мл 0,9% фізіологічного розчину кухонної солі Еозинофіли після забарвлення за допомогою комплекту для тестування Becton Dickinson №5877 підраховують під мікроскопом у камері Нойбауера Цей комплект для тестування включає флоксин В як селективний барвник для еозинофілу При цьому еозинофіли підраховують у BAL для кожної тварини і виражають в еозинофілах (мільйонл'варина) Для кожної групи визначають середнє значення т а стандартне відхилення Процентне інгібування еозинофіли для обробленої тестовою речовиною групи розраховується за такою формулою (А-В)-(В-С)/(А-С)хЮ0=% інгібування де А - еозинофіли необробленої стимульованої групи, В - еозинофіли обробленої групи і С еозинофіли нестимульованої контрольної групи Тваринам, аби запобігти їхній смерті, за 2 години до контрольного зараження алергеном вводять Ні - антагоністи гістаміну (азеластин, 0,01 мг/кг перор ) Введення тестової речовини або зв'язуючої речовини відбувається через 4 години після контрольного зараження алергеном Процентне інгібування еозинофіли у BAL підраховується у групах по 6-10 тварин Таблиця Інгібування „пізньої фази" - еозинофіли через 24 після контрольного зараження морських свинок алергеном Речовина Циклоспорин А за Прикл 1 Доза [мг/кг] 5 10 ЗО 5 10 ЗО Введення в/чер +4год в/чер +4год перор +4год в/чер +4год в/чер +4год перор +4год Аналіз для визначення активності та інгібування пептидилпролілізомерази (PPIase) Пептидилпролілізомеразну активність циклофіліну вимірюють ферментативно згідно зі способом Фішера та ш (Fischer et al (1984)) Після ізомеризації субстрату пептид илпролілізомеразою він стає доступним для хімотрипсину, який розщеплює хромофор-р-нітроанілін Для визначення інгібування активності пептидилпролілізомерази у речовині застосовують рекомбінантнии Сур В людини Взаємодію Сур В з потенційним інгібітором здійснюють так певну концентрацію очищеного Сур В з 1мкМ речовини шкубують протягом 15хв Пептидилпролілізомеразну реакцію розпочинають через дода П 17 11 10 10 10 9 % інгібування 50,0 47,0 68,8 27,8 55,4 56,1 вання розчину субстрату до реакційної суміші, яка містить HEPES-буфер, хімотрипсин та тестові або контрольні проби За цих умов отримують кінетику ПерШОГО ПОРЯДКУ 3 КОНСТаНТаМИ Кспостервж=Ко+КфЄрм, де Ко - спонтанна ізомеризація, а КфВРн - швидкість ізомеризації активності пептидилпролілізомерази Значення згасання, які відповідають КІЛЬКОСТІ розщеплених хромофорів, вимірюють за допомогою спектрофотометра Beckman DU 70 при ПОСТІЙНІЙ температурі реакції 10°С Активність радикалу, що спостерігалася у присутності різних речовин, порівнюють з циклофілінами, обробленими лише розчинниками Результати вказують у % активності радикалу Як еталонну сполуку використовують циклоспорин А 12 11 60312 (CsA) Крім того, контролюють інгібування активпланшеті з 96 отворами, шкубують з розчином МІГ ності пептидилпролілізомерази через електрофоприблизно протягом 4 год Після ЦЬОГО інкубування рез додецилсульфату натрію у поліакриламідному утворюються пурпурово-червоні кристали осаду гелі формазану Ці кристали солі не розчиняються у водних розчинах, але можуть бути розчинені шляКолориметричний аналіз (на основі МТТ-тесту) хом додавання агенту розчинення та інкубації для нерадюактивної квантифікації розмноження та планшетів протягом доби виживаності клітин МІГ застосовують для КІЛЬКІСНОГО визначення Розчинений формазановий продукт квантифірозмноження та активації клітин, наприклад, при кують, піддаючи спектрофотометрії з використанреакції на фактор росту та цитокши, такі як IL-2 та ням рідера ферментного імуносорбентного тесту IL-4, а також для квантифікації антипроліферативЗростання КІЛЬКОСТІ живих клітин веде до зростанного або токсичного впливу Аналіз базується на ня загальної метаболічної активності проби Це розщепленні жовтої тетразолієвої солі МТТ до зростання є прямо пропорційним КІЛЬКОСТІ утворепурпурово-червоних кристалів формазану за доних пурпурово-червоних кристалів формазану, які помогою метаболічно-активних клітин вимірюють шляхом абсорбції Клітини, культивовані на культуральному Речовина Конц [мкМ] за Прикл 1 Циклоспорин А Інгібування активності Інгібування CD3пептид илпроліл-ізомерази індукованогопро дукування ІІ_-2[%] [%] 0,1 1 10 80-100 34 72 95 80-100 56 82 94 Спосіб приготування сполук згідно з даним винаходом описано у нижчеподаних схемах реакцій 1 та 2, а також у загальних інструкціях Усі сполуки приготовляють так, як описано, або за аналогією Сполуки загальної формули І одержують згідно з нижчеподаною схемою 1, представленою для побудови сполуки Прикладу 1 Схема J 2-й_єіап Загальна інструкція для одержання сполук загальної формули І згідно зі схемою 1, 1 етап, Похідну індолу, яка може бути незаміщеною або одноразово чи багаторазово заміщеною у С-2 або у фенільному каркасі, розчиняють у протонному, диполярному апротонному або неполярному розчиннику, такому як, наприклад, ізопорпанол, тетрапдрофуран, диметилсульфоксид, диметилформамід, диметилацетамід, N-метил пірол ідон, діоксан, толуол або метиленхлорид, і по краплях додають до підготованої у колбі з трьома горлами в атмосфері N2 молярної або надлишкової КІЛЬКОСТІ суспензії основи, наприклад, гідриду натрію, по Інгібування розмноження лімфоцитів [%] 0,1 18 8 1 39 7 10 61 11 рошкового гідроксиду калію, трет-бутилату калію, диметиламшопіридину або аміду натрію у відповідному розчиннику Після ЦЬОГО додають, наприклад, потрібний алкільний, аралкільний або гетероаралкільний галогенід, у разі необхідності - з додаванням каталізатора, наприклад, МІДІ, І залишають на певний час, наприклад, від ЗО хвилин до 12 годин, для подальшої реакції, підтримуючи температуру у межах від 0°С до 120°С, краще - від 30°С до 80°С, ще краще - від 50°С до 65°С По завершенні реакції реакційну суміш виливають у воду, розчин екстрагують, наприклад, діетиловим ефіром, дихлорметаном, хлороформом, метилтрет-бутиловим ефіром або тетрапдрофураном і кожну отриману органічну фазу висушують безводним сульфатом натрію Органічну фазу концентрують у вакуумі, кристалізують осад, який залишився, шляхом перетирання або очищають маслянистий осад шляхом перекристалізації, перегонки або за допомогою колонкової або флешхроматографм на силікагелі або оксиді алюмінію Розчинником служить, наприклад, суміш дихлорметану та діетилового ефіру у співвідношенні 8 2 (об'єм/об'єм) або суміш дихлорметану та етанолу у співвідношенні 9 1 (об'єм/об'єм) 2 етап Одержаний згідно з інструкцією для 1-го етапу N-заміщений індол розчиняють в атмосфері азоту в апротонному або неполярному розчиннику, такому як, наприклад, діетиловий ефір, метил-третбутиловий ефір, тетрапдрофуран, діоксан, толуол, ксилол, метиленхлорид або хлороформ, і додають до приготованого в атмосфері азоту розчину оксалілхлориду, у КІЛЬКОСТІ від молярної до 60%надлишкової, в апротонному або неполярному розчиннику, такому як, наприклад, діетиловий ефір, метил-трет-бутиловий ефір, тетрапдрофуран, діоксан, толуол, ксилол, метиленхлорид або хлороформ, підтримуючи температуру від -5°С до 20°С Після ЦЬОГО реакційний розчин нагрівають до температури від 10°С до 130°С, краще - від 20°С до 80°С, ще краще - від 30°С до 50°С від ЗО хви 60312 14 13 лин до 5 годин і відразу після цього упарюють розрозчин 4,75г (21,1 мкмоль) 1-(4-фторбензил)чинник Осад, що залишився, який являє собою індолу у 25мл ефіру Нагрівають протягом 2 годин утворений таким чином „хлорид індол іл-3до точки зворотного охолодження і відразу після глюксилової кислоти" розчиняють в апротонному цього упарюють розчинник Потім до осаду додарозчиннику, такому як, наприклад, тетрапдрофують 50мл тетрапдрофурану, розчин охолоджують ран, діоксан, діетиловий ефір, толуол, або у диподо -5°С і по краплях домішують до розчину 4,66г лярному апротонному розчиннику, такому як, на(49,5 мкмоль) 4-амшопіридину у 200мл тетрапдприклад, диметилформамід, диметилацетамід або рофурану Нагрівають протягом 3 годин до точки д и метил сульфоксид, охолоджують до температузворотного охолодження і залишають стояти при ри від 10°С до -15°С, краще - від -5°С до 0°С, і у кімнатній температурі протягом доби Пдрохлорид присутності кислотної "пастки" перемішують з роз4-амшопіридину відфільтровують, осад промивачином первинного або вторинного аміну в розріють тетрапдрофураном, фільтрат концентрують у джувачі вакуумі і осад перекристалізовують з оцтового естеру Як розріджувач розглядають вищезгаданий застосовуваний для розчинення хлориду ІНДОЛІЛ3-глюксиловоі кислоти розчинник Як кислотну "пастку" використовують триетиламш, піридин, диметиламшопіридин, осн іонообмінні речовини, карбонат натрію, карбонат калію, порошковий гідроксид калію, а також застосовуваний для реакції у надлишковій КІЛЬКОСТІ первинний або вторинний амін Реакція відбувається при температурі від 0°С до 120°С, краще - від 20 до 80°С, ще краще - від 40°С до 60°С Після 1-ЗГОД реакції та 24-годинного відстоювання при кімнатній температурі пдрохлорид кислотної "пастки" фільтрують, фільтрат концентрують у вакуумі і осад перекристалізовують з органічного розчинника або очищають шляхом колонкової хроматографії на силікагелі або оксиді алюмінію Як розчинник використовують, наприклад, суміш дихлорметану та етанолу (95 5, об'єм/об'єм) Приклади виконання Згідно З ЦІЄЮ загальною інструкцією для етапів 1 та 2, в основі яких лежить схема синтезу 1, синтезують нижчеподані сполуки, які, згідно з вказівками ВІДПОВІДНОГО ХІМІЧНОГО опису, випливають з наступного огляду У Таблиці 1, яка додається, залежно від загальної Формули 1 та замісників R r R4 і Z, подано структуру цих сполук та їхні точки плавлення Приклад 1 г\І-(піридин-4-іл)-[1-(4-фторбензил)-шдол-3іл]глюксиламід 1 етап 1 -(4-фюрбензил)-шдол До суміші 2,64г гідриду натрію (0,11 моль, суспензія мінеральної солі) у ЮОмл диметилсульфоксиду додають розчин 11,72г (0,1 моль) індолу у 50мл диметилсульфоксиду Протягом 1,5год нагрівають до 60°С, після цього залишають для охолодження й по краплях додають у 15,9г (0,11 моль) 4-фторбензилхлориду Розчин нагрівають до 60°С, залишають стояти протягом доби, а після цього при перемішуванні виливають у 400мл води Кілька разів екстрагують метиленхлоридом у загальній КІЛЬКОСТІ 150мл, органічну фазу висушують безводним сульфатом натрію, фільтрують і фільтрат концентрують у вакуумі Осад переганяють у високому вакуумі 21,0г (96% від теор) Т пл (0,5мм) 140°С 2 етап г\І-(піридин-4-іл)-[1-(4-фторбензил)-шдол-3іл]глюксиламід До розчину 2,25мл оксалілхлориду у 25мл ефіру при 0°С в атмосфері N2 по краплях додають Вихідна КІЛЬКІСТЬ 7,09г (90% від теор ) Точка плавлення 225-226°С Елементарний аналіз розрах С 70,77 Н 4,32 N 11,25 виявл С 71,09 Н 4,36 N 11,26 Приклад 2 І\І-(піридин-4-іл)-(1-метил-індол-3іл)-глюксиламід Приклад 3 І\І-(піридин-3-іл)-[1-(4-фторбензил)шдол-3-іл]-глюксиламід Приклад 4 І\І-(піридин-3-іл)-(1 -бензиліндол-3іл)-глюксиламід Приклад 5 І\І-(піридин-3-іл)-[1-(2-хлорбензил)шдол-3-іл]-глюксиламід Приклад 6 І\І-(4-фторфеніл)-[1-(4-фторбензил)шдол-3-іл]-глюксиламід Приклад 7 г\І-(4-нггрофеніл)-[1-(4-фторбензил)шдол-3-іл]-глюксиламід Приклад 8 І\І-(2-хлорпіридин-3-іл)-[1-(4фторбензил)-шдол-3-іл]-глюксиламід Приклад 9 І\І-(піридин-4-іл)-(1 -бензиліндол-3іл)-глюксиламід Приклад 10 І\І-(піридин-4-іл)-[1-(3піридилметил)-шдол-3-іл]-глюксиламід Приклад 11 І\І-(4-фторфеніл)-[1-(2піридилметил)-шдол-3-іл]-глюксиламід Приклад 12 І\І-(4-фторфеніл)-[1-(3піридилметил)-шдол-3-іл]-глюксиламід Приклад 13 І\І-(піридин-4-іл)-[1-(4-хлорбензил)шдол-3-іл]-глюксиламід Приклад 14 І\І-(піридин-4-іл)-[1-(2-хлорбензил)шдол-3-іл]-глюксиламід Приклад 15 І\І-(піридин-2-іл)-[1-(4фторбензил)-шдол-3-іл]-глюксиламід Приклад 16 І\І-(піридин-4-іл)-[1-(2піридилметил)-шдол-3-іл]-глюксиламід Приклад 17 (4-Феніл-піперазин-1 -іл)-[1 -(4фторбензил)-шдол-3-іл]-глюксиламід Приклад 18 І\І-(піридин-2-іл)-(1-бензил-індол-3іл)-глюксиламід Приклад 19 І\І-(піридин-4-іл)-[1-(4фторбензил)-6-етоксикарбоніламшо-шдол-3-іл]глюксиламід Приклад 20 І\І-(піридин-4-іл)-[1-(4фторбензил)-5-етоксикарбоніламшо-шдол-3-іл]глюксиламід Приклад 21 І\І-(піридин-4-іл)-[1-(4фторбензил)-6-циклопентилоксикарбоніламшошдол-3-іл]-глюксиламід Приклад 22 4-(піридин-4-іл)-піперазин-1-іл)-[1(4-фторбензил)-шдол-3-іл]-глюксиламід Приклад 23 г\І-(3,4,5-триметоксибензил)-І\І(аліламінокарбоніл-2-метил-проп-1 -іл)-[1 -(4 15 60312 16 фторбензил)-індол-3-іл]-глюксиламід фторбензил)-5-пдрокси-індол-3-іл]-глюксиламід Приклад 24 І\І-(піридин-4-іл)-[1 -(4Приклад 26 І\І-(піридин-4-іл-[1 -(4-фторбензил)фторбензил)-5-метокси-шдол-3-іл]-глюксиламід 5-етоксикарбоніламіно-метил-шдол-З-іл]Приклад 25 І\І-(піридин-4-іл)-[1-(4глюксиламід Приклад R Приклад 1 Н Приклад 2 Н Приіслад 3 н Приклад 4 н Приклад 5 н R, -о -о N -О R , « 3 А Ч v—— р В Приклад 8 н Приклад 7 и Приклад 8 и F ^_/" н Приклад 10 н Приклад 11 н 0 225-6°С н 0 176СС н н 0 173°С н 0 140°С н о 185°С R . H H H H H H z 0 0 0 0 0 0 R 3 H -о H H -9 H -О -о —о H H СІ . . . i**t • - / / — - " C H j K Приклад 9 н Jrnu 1 Нові індолшгліоксиламіди згідно ЗІ схемою реакції 1 Приклад н н С Н _. / Т. п л . н ~ \ Z н /• —л. С И Ґ \ R. \ \ ? СІ у.ттгт-f Х8блицз_1і Нові ІНДОЛілглюксиламщи ЗГІДНО ЗІ схемою реакції 1 F1 F T. гал. 199CC >250°C 149°C 178-180°C 179°C 132°C Приклад Приклад 12 Приклад 14 Приклад 15 н Приклад 16 н 0 144°С н н о 234°С н о 184°С н н 0 141°С н н о 202°С н н о 115°С н о 112-3°С R > 3 f О -О1 N — н н н 4 н Т. ПЯ. н Н Приклад 13 18 Z 6 0 3 1 2 я, R R4 н 17 f * 1J m i / * і-ч. Л \ СІ ^ і ш і П І і и і / ' > \ Г їй ЗЕЕУ Приклад 17 R+Й, разом Приклад 18 Н н—(і \Ч 1. Нові ІНДОЛілглюксиламіди згідно зі схемою реакції 1 в, R3 R4 z Т. пл. Н 6-NHCOOEt H 0 >25G°C Приклад 20 н 6-NHCOOEt H 0 183°С Приклад 21 н H 0 маслян. Приклад 22 R+R, H H 0 160-62°С H H 0 139-141 °С 5-OCH3 H 0 188°С 5-OH H о >250°С 5-CH2-NHCOOEt H о 175-176°С Приклад R Приклад 19 S-MHCOO—( H j о-о разом Приклад 23 с%-сн-сн_^о ас*. Приклад 24 н Приклад 25 н Приклад 26 н —СН,-^ CHf— F "T—F ТйблшдЯ 1- Нові індояшглкжсиламщм згідно зі схемою реакції 1 Етапи одержання сполук загальної формули І, які виготовляють згідно зі схемою синтезу 1 подані в таблиці Для кінцевих етапів синтезу сполук Прикладів 1 -22 та 24-26 усі попередні сполуки є доступними Крім того, сполуки загальної Формули І можуть бути одержані також шляхом синтезу за Схемою 2, представленою для побудови сполуки Прикладу 27 Схема 2 1-й етап (СОСІ)2 й' у—ми, 2-й етап NaH, D S &O Загальна інструкція для одержання сполук загальної формули 1 згідно, зі Схемою 2 20 19 60312 1 -й етап до 120°С, краще - від 30°С до 80°С, ще краще - від 50 до 70°С По завершенні реакції реакційну суміш До приготовленого в атмосфері азоту розчину виливають у воду, розчин екстрагують, наприклад, оксалілхлориду, у КІЛЬКОСТІ ВІД молярної до 60%діетиловим ефіром, дихлорметаном, хлорофорнадлишкової, в апротонному або неполярному мом, метил-трет-бутиловим ефіром, тетрапдророзчиннику, такому як, наприклад, діетиловий фураном або п-бутанолом і кожну одержану оргаефір, метил-трет-бутиловий ефір, тетрапдрофунічну фазу висушують безводним сульфатом ран, діоксан або дихлорметан, при температурі від натрію Органічну фазу концентрують у вакуумі, -5°С до +5°С по краплях додають розчинену у розосад, який залишився, кристалізують перетиранчиннику, такому як, наприклад, зазначено вище ням або очищають маслянистий осад шляхом педля оксалілхлориду, похідну індолу, яка може бути регонки або через колонкову або флешнезаміщеною або заміщеною у С-2 або фенільнохроматографію на силікагелі або оксиді алюмінію му КІЛЬЦІ Після ЦЬОГО реакційний розчин нагріваРозчинником служить, наприклад, суміш метиленють протягом 1-5год до температури від 10°С до хлориду та діетилового ефіру у співвідношенні 8 2 120°С, краще - від 20°С до 80°С, ще краще - від (об'єм/об'єм) або суміш метиленхлориду та етано30°С до 60°С і відразу після цього упарюють розлу у співвідношенні 9 1 (об'єм/об'єм) чинник Осад хлориду (ІНДОЛ-З-ІЛ)-ГЛІОКСИЛОВОІ кислоти, що залишився, розчиняють або суспенПриклади виконання дують в апротонному розчиннику, такому як, наЗгідно З ЦІЄЮ загальною інструкцією для етапів приклад, тетрапдрофуран, діоксан, діетиловий 1 та 2, в основі яких лежить схема синтезу 2, синефір, толуол, або у диполярному апротонному тезують сполуки, які вже були одержані згідно з розчиннику, такому як, наприклад, диметилфорпроцесом синтезу за схемою реакції 1, і які предмамід, диметилацетамід або диметилсульфоксид, ставлені у Таблиці 1 Такі попередні сполуки для охолоджують до температури від -10°С до +10°С, цих сполук представлені у Таблиці 2 краще - від -5°С до 0°С, і у присутності кислотної Приклад 27 "пастки" розводять розчином первинного або втог\І-(піридин-4-іл)-[1-(4-фторбензил)-шдол-3-іл]ринного аміну у розріджувачі Як розріджувач розглюксиламід глядають використовуваний для розчинення „хло(кінцевий етап, ідентичний Прикладові 1) риду індоліл-3-глюксиловоі кислоти" розчинник Як 1 -й етап кислотні "пастки" застосовують триетиламш, піриг\І-(піридин-4-іл)-(індол-3-іл]глюксиламід дин, диметиламшопіридин, основні іонообмінні До розчину 9мл оксалілхлорид у 100 мл безречовини, карбонат натрію, карбонат калію, пороводного ефіру по краплях при 0°С додають розчин шковий гідроксид калію, а також надлишкову КІЛЬ10г (853 мкмоль) індолу у ЮОмл ефіру Суміш КІСТЬ застосовуваного для реакції первинного або тримають 3 години при зворотному охолодженні вторинного аміну Реакція відбувається при темПісля ЦЬОГО при -5°С по краплях додають суспенпературі від 0°С до 120°С, краще - від 20 до 80°С, зію з 12г (127,9 мкмоль) 4-амінопіридину у 500мл ще краще - від 40°С до 60°С Після 1-4-годинноі тетрапдрофурану, реакційну суміш при перемішуреакції та 24-годинного відстоювання при кімнатній ванні протягом 3 годин нагрівають до температури температурі фільтрують, осад диґерують водою, зворотного охолодження і залишають стояти провідфільтровують і висушують у вакуумі Потрібну тягом доби при кімнатній температурі Осад фільсполуку очищають шляхом перекристалізації в трують, обробляють водою й очищають висушену органічному розчиннику шляхом колонкової хросполуку на колонці з силікагелем (Kieselgel 60, Fa матографії на силікагелі або оксиді алюмінію Як Merck AG, Darmstadt) з використанням як елюенту розчинник використовують, наприклад, суміш дихметиленхлориду/етанолу (10 1, об'єм/об'єм) лорметанута етанолу (10 1, об'єм/об'єм) Вихідна КІЛЬКІСТЬ 9,8г (43,3% від теор ) 2-й етап Ер від 250°С Одержаний згідно з інструкцією для 1 етапу 2-й етап "індол-3-іл-глюксиламід" розчиняють у протонног\І-(піридин-4-іл)-[1-(4-фторбензил)-шдол-3му, диполярному апротонному або неполярному іл]глюксиламід розчиннику, такому як, наприклад, ізопропанол, Одержаний згідно з 1 етапом І\І-(піридин-4-іл)тетрапдрофуран, диметилсульфоксид, диметил(шдол-З-іл)глюксиламід перетворюють згідно з формамід диметилацетамід, N-метил пірол ідон, „інструкцією з бензилування" (стор 14) за допомодіоксан, толуол або метиленхлорид, і по краплях гою 4-фторбензилхлориду і виділяють отриману додають до молярної або надлишкової КІЛЬКОСТІ сполуку підготовленої у колбі з трьома горлами в атмосВихідна КІЛЬКІСТЬ 41% від теор фері N2 суспензії основи, такої як, наприклад, гідТпл 224-225°С рид натрію, порошковий гідроксид калію, третЕлементарний аналіз бутилат калію, диметиламшопіридин або амід наРозрах 070,77 Н 4,32 N11,25 трію, у відповідному розчиннику Після ЦЬОГО доВиявл 070,98 Н 4,40 N 11,49 дають потрібний алкільний, аралкільний або гетеПриклад 28 г\І-(4-нггрофеніл)-[1-(4роалкільний галогенід, або нерозріджений, або у фторбензил)-шдол-3-іл]-глюксиламід (Кінцевий розріджувачі, такому, який, наприклад, використоетап, ідентичний Прикладові 7) вували для розчину „індол-3-іл-глюксиламідів", у Приклад 29 І\І-(4-фторфеніл)-[1-(4разі необхідності - з додаванням каталізатора, фторбензил)-шдол-3-іл]-глюксиламід (Кінцевий наприклад, МІДІ, І залишають на певний час, наетап, ідентичний Прикладові 6) приклад, від ЗО хвилин до 12 годин, для подальшої Приклад ЗО І\І-(піридин-3-іл)-[1-4-фторбензил)реакції і підтримують температуру у межах від 0°С шдол-3-іл]-глюксиламід (Кінцевий етап, ідентичний 21 60312 Прикладові 3) За Схемою 2 одержують такі попередні сполуки (1-й етап схеми реакції 2, Таблиця 2) Приклад 31 М-(піридин-4-іл)-(шдол-3іл)глюксиламід Приклад 32 М-(4-нітрофеніл)-(шдол-3 22 іл)глюксиламід Приклад іл)глюксиамід Приклад іл)глюксиламід 33 М-(4-фторфеніл)-(індол-3 34 М-(піридин-3-іл)-(шдол-3 -R, Приклад R R, Приклад 31 Н -О Приклад 32 Н Приклад 33 Приклад 34 вг Z R3 Т. пл. н н н О >250°С н н н О >250°С н н н н о 233°С н н н н о 235°С С %—NO, Таблиця 2; НОВІ гмдояілглюксиламіди згідно зі схемою рєакціі 2 Комп'ютерна верстка О Воробей Підписне Т и р а ж 3 9 прим Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, Львівська площа, 8, м Київ, МСП, 04655, Україна ДП "Український інститут промислової власності", вул Сім'ї Хохлових, 15, м Київ, 04119