Препарат a-інтерферону у вигляді стабільного водного розчину

1 Водный препарат а-интерферона, содержащий буферную систему, поддерживающую значение рН раствора в интервале от 4,5 до 7,1, эффеїсгивное количество хелатообразователя, производное моно-9-окатадеканата поли-(окси-1,2этандиил)-сорбитана в количестве, необходимом для стабилизации а-интерферона и предотвращения потери его активности, эффективное количество агента, обеспечивающего осмотичность раствора, эффективное количество консерванта, обладающего антимикробной активностью и воду для инъекции в количестве, необходимом для приготовления раствора, отличающийся тем, что он содержит от 0,1хЮ6 до ЮОхЮ6 МЕ/мл аинтерферона 2 Водный препарат по п 1, отличающийся тем, что в качестве буферной системы содержит двузамещенный фосфат натрия и монозамещенный фосфат натрия 3 Водный препарат по п 1, отличающийся тем, что в качестве хелатообразователя содержит динатрий ЭДТА или лимонную кислоту 4 Водный препарат по п 1, отличающийся тем, что в качестве агента, обеспечивающего осмотичность раствора, содержит хлорид натрия 5 Водный препарат по п 1, отличающийся тем, что в качестве консерванта содержит вещество, выбранное из группы, включающей мета-крезол, фенол, метилпарабен, пропилпарабен или их смеси 6 Водный препарат по п 1, отличающийся тем, что в качестве а-интерферона содержит интерферон а-2 7 Водный препарат а-интерферона по п 1, отличающийся тем, что в качестве а-интерферона ю содержит интерферон а-2, в качестве буферной системы - безводный двузамещенный фосфат натрия и моногидрат однозамещенного фосфата натрия, в качестве хелатообразователя - дигидроэтилендиаминтетраацетат динатрия, в качестве агента, обеспечивающего осмотичность раствора - хлорид натрия, а в качестве консерванта - смесь полисорбата 80, метилпарабена и пропилпарабена, при следующем соотношении компонентов (мг/мл) безводный двузамещенный фосфат натрия 1,8 моногидрат однозамещенного фосфата натрия 1,3 дигидроэтилендиаминтетраацетат динатрия 0,1 полисорбат 80 0,1 метилпарабен 1,2 пропилпарабен 0,12 хлорид натрия 7,5 вода для инъекций до 1 мл, при этом концентрация интерферона а-2 составляет 5x106 -ь 50x106 МЕ/мл 8 Водный препарат по п 1, отличающийся тем, что в качестве а-интерферона содержит интерферон а-2, в качестве буферной системы - безводный двузамещенный фосфат натрия и моногидрат однозамещенного фосфата натрия, в качестве хелатообразователя - дигидроэтилендиаминтетраацетат динатрия, в качестве агента, обеспечивающего осмотичность раствора, - хлорид натрия, в качестве консерванта - полисорбат 80 и метакрезол, при следующем соотношении компонентов, мг/мл безводный двузамещенный фосфат натрия 1,8 моногидрат однозамещенного фосфата натрия 1,3 дигидроэтилендиаминтетраацетат динатрия 0,1 полисорбат 80 0,1 мета-крезол 1,5 хлорид натрия 7,5 вода для инъекций до 1 мл, при этом концентрация интерферона а-2 составляет 5x106 -ь 50x106 МЕ/мл о 00 О 42028 Настоящее изобретение относится к препаратам в виде стабильных водных растворов, не содержащим компонентов, полученных из сыворотки крови человека, и способным в течение длительного времени сохранять высокую биологическую активность, а также высокую химическую и физическую стабильность, свойственные а-интерферонам В патенте США № 4496537 описаны препараты биологически стабильных водных растворов аинтерферона, в состав которого входит а-интерферон, сывороточный альбумин человека, аланин или глицин, вода и буферная система для поддерживания рН раствора на уровне 6,5-8,0 Сывороточный альбумин человека (САЧ) играет роль стабилизатора а-интерферона и предотвращает потери аинтерферона в растворе, происходящие в результате отложения и/или адсорбции а-интерферона на поверхности из нержавеющей стали или стекла, из которых изготовлены сосуды для получения раствора, технологическое оборудование и контейнеры, предназначенные для хранения раствора, а-интерферон, входящий в состав препаратов, содержащих а-интерферон и САЧ, сохраняет биологическую и химическую стабильность в течение длительного времени, т е более 2-х лет, при хранении его при температуре 2-8°С В последние годы из-за эпидемии СПИД, распространившейся по всему земному шару, органы здравоохранения, контролирующие регистрацию лекарственных препаратов, требуют от фармацевтических фирм, производящих лекарственные препараты, которые подобно а-интерферону, содержат компоненты, полученные из крови человека (такие, как САЧ), сопровождать препараты соответствующими предостережениями В связи с указанным возникла необходимость создания новой рецептуры препаратов, содержащих растворы а-интерферона, с тем, чтобы водные растворы, полученные в соответствии с новой рецептурой, не содержали бы компонентов, полученных из крови человека, подобных САЧ, сохраняя при этом в течение длительного периода хранения высокую физическую и химическую стабильность, а также высокую биологическую активность, присущую а-интерферону Настоящее изобретение относится к стабильному водному раствору препарата а-интерферона, способному сохранять высокую биологическую активность, и не содержащему компонентов, полученных из крови человека Указанный препарат включает следующее а от 0,1 х 106 до 100 х 106 МЕ/мл а-интерферона, б буферную систему, поддерживающую рН раствора в интервале от 4,5 до 7,1 рН, в эффективное количество хелатообразователя, г производное м он о-9-о ктаде каната поли(окси-1,2-этандиила) сорбитана - в количестве, достаточном для стабилизации а-интерферона и предотвращения его потери, д эффективное количество веществ, обеспечивающих осмотичность раствора, е эффективное количество консерванта, обладающего антимикробной активностью, ж воду для инъекций в количестве, необходимом для приготовления раствора, содержащего все перечисленные выше компоненты Настоящее изобретение относится к стабильному водному раствору препарата а-интерферона, обладающему высокой биологической активностью и не содержащему компонентов, полученных из крови человека Указанный препарат включает следующее а от 0,1 х 106 до 100 х 106 МЕ/мл а-интерферона, б буферную систему для поддержания рН раствора в интервале от 4,5 до 7,1 рН, в от 0,01 до 1 мг/мл дигидроэтилендиаминтетраацетата динатрия, г от 0,01 до 1 мг/мл производного моно-9октадеканата поли-(окси-1,2-этандиил)-сорбитана, д от 1 до 9 мг/мл хлористого натрия, е эффективное количество консерванта, обладающего антимикробной активностью, и выбранного из группы мета-крезол, фенол, метилпарабен, пропилпарабен или их смесь, ж воду для инъекций до общего объема 1 мл Предпочтительный вариант осуществления настоящего изобретения представляет собой стабильный водный раствор препарата а-интерферона, обладающий высокой биологической активностью и не содержащий компонентов, полученных из крови человека, который имеет следующий состав мг/мл а а-2 интерферон от 5 х 106 до 50 х 106 ME б Безводный двузамещенный фосфат натрия 1,8 в Однозамещенный фосфат натрия, моногидрат 1,3 г Дигидроэтилендиаминтетраацетат динатрия 0,1 д Полисорбат-80 0,1 е Метилпарабен 1,2 ж Пропилпарабен 0,12 з Хлорид натрия 7,5 и Вода для инъекций до общего объема до 1 мл В других случаях особенно предпочтительна форма осуществления настоящего изобретения, описанная далее, которая представляет собой стабильный водный раствор препарата а-интерферона обладающий высокой биологической активностью и не содержащий компонентов, полученных из крови человека, включающий мг/мл а а-2 интерферон от 5 х 106 до 50 х 106 ME б Безводный двузамещенный фосфат натрия 1,8 в Однозамещенный фосфат натрия, моногидрат 1,3 г Дигидроэтилендиаминтетраацетат динатрия 0,1 д Полисорбат 80 0,1 е Мета-крезол 1,5 ж Хлорид натрия 7,5 з Вода для инъекций сколько потребуется до 1 мл 42028 Настоящее изобретение также относится к способу получения стабильного водного раствора препарата а-интерферона, обладающего высокой биологической активностью и не содержащего компонентов, полученных из крови человека, путем смешивания эффективного количества а-интерферона с буферной системой, поддерживающей значения рН раствора в интервале от 4,5 до 7,1 рН, производным моно-9-октадеканата поли(окси-1,2-этандиил)-сорбитана в качестве хелатообразующего агента, обеспечивающего поддержание изоосмотичности раствора, консервантом, обладающим антимикробной активностью, и водой в количестве, достаточном для приготовления раствора Предпочтительным вариантом способа получения препарата, согласно настоящему изобретению, является приготовление и хранение раствора практически в отсутствии растворенного кислорода и при наличии свободного пространства над раствором, заполненного инертной газовой средой, объемное содержание кислорода в которой не превосходит 4% Были найдены специфические количества и специфический набор ингредиентов, позволившие разработать препарат стабильного водного раствора а-интерферона, не содержащий сывороточный альбумин человека (САЧ), и при этом сохраняющий высокую химическую, физическую и биологическую стабильность содержащегося в нем аинтерферона при хранении его в течение длительного времени (не менее 24 месяцев) при температуре от 2 до 8°С Термин "не содержащий компонентов, полученных из крови человека", используемый в тексте в отношении препаратов согласно настоящему изобретению означает, что при получении препаратов растворов, согласно настоящему изобретению, не используются никакие компоненты, полученные из крови человека, такие как САЧ Термин "высокая химическая стабильность", используемый в данном тексте в отношении препаратов а-интерферона согласно настоящему изобретению означает, что при хранении в течение не менее 24 месяцев при температуре от 2 до 8°С, сохраняется не менее 85%, а в предпочтительной форме от 85% до 100% вещества, являющегося по своему химическому составу интактным а-интерфероном (см табл 1 и 2 ) Химическую однородность определяют путем измерения содержания белка по методу высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЖХ), подобно описанному Т L Nagabhushan и др , в статье "Определение характеристик генно-инженерного а-2-интерферона", стр 79-88 книги Interferon Research Clinical Application and Regulatory Consideration, Zoon и др , изд-во Elsevie Science Publishing Co , Inc 1984 (результаты представлены в табл 1-4) Термин "высокая биологическая стабильность", используемый в данном тексте в отношении препаратов а-интерферона согласно настоящему изобретению означает, что при хранении в течение не менее 24 месяцев при температуре от 2 до 8°С, а-интерферон в составе препарата сохраняет не менее 75%, в предпочтительной форме не менее 85%, а в наиболее предпочтительной форме от 90% до 100% присущей ему биологической активности Биологическую актив ность определяют по методу подавления цитопатического действия (ЦПД) вируса, описанному в статье W Р Protzman и др , в журнале J Clinical Microbiohgy, (1985), т 22, стр 596-599 Термин "высокая физическая стабильность", используемый в данном тексте в отношении препаратов а-интерферона согласно настоящему изобретению, означает, что при хранении в течение не менее 24 месяцев при температуре от 2 до 8°С, препарат согласно данному изобретению, сохраняет прозрачность, т е в нем отсутствуют помутнение или видимые макрочастицы, диаметр которых превышает 60-70 микрон (см табл 1,2 и 3) Результаты, представленные в табл 1, 2 и 3, неожиданны тем, что большинство растворов препаратов, в состав которых входят белки, подобные а-интерферону, проявляют тенденцию к появлению в них при длительном хранении твердых частиц, видимых невооруженным глазом (те частиц, диаметр которых превышает 60-70 микрон) даже при температуре от 2 до 8°С Для определения содержания твердых частиц в препаратах в виде растворов, являющихся объектом данного изобретения, использовался метод испытаний (см табл 1-4), описанный в The United States Phatmacopeia/The National Formulary USP 23/NF 18, опубликованной United States Pharmacopeial Convention, Inc, (1995), Rockville, Maryland, см Physical Test на стр 1813-1816 Метод, использованный для визуального описания растворов препаратов согласно данному изобретению, также описан в USP 23, как "General Requirement Test and Assays Injections, на стр 1650-1652 Было обнаружено, что добавление хелатообразующего агента в препараты в виде растворов, являющиеся объектом данного изобретения, позволяет избежать появления в растворе видимых твердых частиц Типичными подходящими хелатообразующими агентами являются дигидроэтилендиаминтетраацетат динатрия (или ЭДТА динатрия), и лимонная кислота Предпочтительнее использовать ЭДТА динатрия Без выдвижения какой-либо теории предполагается, что ЭДТА динатрия эффективно образует комплексы с катионами металлов, содержащимися в растворе в следовых количествах, такими как Zn 2+ , Fe +, Cu 2+ , Al 2+ , которые могут присутствовать в эксципиентах и компонентах упаковки, например, в составе резиновых пробок и прокладок Поскольку ЭДТА динатрия имеет большее химическое сродство к катионам этих металлов, чем а-интерфероны, введение этого компонента позволяет избежать взаимодействия между а-интерфероном и катионами металлов, т е избежать образования нерастворимых комплексов (например, в форме видимых твердых частиц), и, следовательно, потери активности а-интерферона Эффективное количество хелатообразующего агента (из расчета содержания а-интерферона в пределах от 0,1 х х 10 до 100 х 106 Международных единиц/мл (МЕ)/мл) находится в интервале от 0,01 до 1 мг/мл В случае препарата, содержащего от 5 х х 106 до 50 х 106 ME а-интерферона, предпочтительнее использовать 0,1 мг ЭДТА динатрия Буферные системы, используемые в препаратах, являющихся объектом данного изобретения, должны обеспечивать поддержание рН 42028 водного раствора препаратов в интервале от 4,5 до 7,1 рН, более предпочтительно, в интервале от 6,5 до 7,1 рН, а наиболее предпочтительно - рН 6,8 Предпочтительным вариантом является использование буферной системы, содержащей двузамещенный фосфат натрия и однозамещенный фосфат натрия Обычно для препарата, содержащего от 0,1 х 106 до 100 х 106 МЕ/мл а-интерферона, предпочтительным вариантом является использование буферной системы, приготовленной из монозамещенного/двузамещенного фосфата натрия в концентрации 0,005-0,1 М К другим пригодным буферным системам, обеспечивающим требуемое значение рН раствора на уровне от 4,5 до 7,1, относятся системы цитрат натрия/лимонная кислота и ацетат натрия/ уксусная кислота В качестве агента, используемого для поддержания осмотичности растворов препаратов, являющихся объектом данного изобретения, может быть любое вещество, способное обеспечивать осмотичность представленных препаратов, соответствующую осмотичности сыворотки крови человека Типичными агентами, используемыми для поддержания осмотичности раствора, являются хлористый натрий, маннит, глицин, глюкоза и сорбит Использование в качестве агента, обеспечивающего осмотичность раствора хлористого натрия, является предпочтительным Количество агента, добавляемого для обеспечения осмотичности, находится в пределах от 1 до 10 мг/мл, при содержании а-интерферона в препаратах, являющихся объектом данного изобретения в интервале от 0,1 х 106 до 100 х 106 МЕ/мл В препаратах, являющихся объектом данного изобретения и содержащих от 5 х 106 до 50 х 106 МЕ/мл а-интерферона, предпочтительным является использование 7,5 мг/мл хлористого натрия Производные м он о-9-о кта де каната поли-(окси-1,2-этандиил)-сорбитана, такие как полисорбат-80 или полисорбат-20, используются в качестве стабилизирующих агентов, позволяющих предотвратить абсорбцию белков, относящихся к а-интерферонам, таких как а-2Ь интерферона, на поверхности оборудования, изготовленного из стекла или нержавеющей стали и используемого для получения указанных препаратов, содержащих аинтерфероны Эффективное количество полисорбата-20 или полисорбата-80, добавляемое в препараты, согласно данному изобретению, содержащие от 0,1 х 106 до 100 х 106 МЕ/мл интерферона, находится в пределах от 0,01 до 1,0 мг/мл Предпочтительным является использование полисорбата-80 Использование полисорбата-80 в концентрации 0,1 мг/мл, представляет собой наиболее предпочтительный вариант при использовании во всех растворах препаратов, являющихся объектом данного изобретения Если концентрация а-интерферона, например, а-2Ь интерферона не достигает 15 х 10 6 МЕ/мл (например, 6 х 10 МЕ/мл), потеря активности а-интерферона вследствие абсорбции его при отсутствии полисорбата-80 значительно снижает биологическую активность препарата Неожиданно было обнаружено, что введение полисорбата-80, предотвращает потери а-2Ь интерферона и делает возможным системную дачу а-2Ь интерферона без потери его биологической активности В процессе разработки препаратов, являющихся объектом данного изобретения, неожиданно обнаружили, что наличие полисорбата-80 наилучшим образом, по сравнению с другими неионными поверхностно-активными веществами (ПАВ) (например Plurmic F127 и Pluromc F-68), обеспечивает химическую и биологическую стабильность а-2Ь интерферона Количество а-интерферона, используемое в препаратах, являющихся объектом настоящего изобретения, находится в пределах от 0,1 х 10 до 100 х 106 МЕ/мл, предпочтительно, от 5 х 106 до 50x10 6 МЕ/мл Термин "а-интерферон", используемый в данной заявке, относится к классу высокогомологичных видо-специфичных белков, способных подавлять репликацию вирусов, клеточную пролиферацию, а также модулировать иммунный ответ организма Типичными а-интерферонами, обладающими указанными свойствами, являются а2а-интерферон, такой как а-2а-интерферон ROFERON, производимый фирмой Hoffmann-La Roche, Nutley, N J , а-2Ь-интерферон, такой как INTRON А а-2Ь-интерферон, производимой фирмой Schenng Corporation, Kemlworth, N J , а-2с-интерферон, такой как а-2а-интерферон ROFERON, производимой фирмой Boehnnger Ingelheim Pharmaceutical, Inc , Ridgefield, C T , a-n1-интерферон, представляющий собой очищенную смесь природных a-интерферонов, например SUNIFERON, производимой фирмой The Wellcome Foundation Ltd , London, Great Britain, а также а-интерферон, содержащий типичную последовательность, предлагаемый Amgen, Inc , Newbury Park, California, или а-пЗ-интерферон, представляющий собой смесь природных а-интерферонов, производимых Interferon Sciences и предлагаемых Purdue Frederick Со , Norwalk, CT, под товарным названием ALFERON Предпочтительным является использование а-2а-интерферона и а-2Ь-интерферона, а наиболее предпочтительным - а-2Ь-интерферона К консервантам, обладающим антимикробной активностью, и пригодным согласно настоящему изобретению, относятся мета-крезол, фенол, метилпарабен и пропилпарабен, а также смеси вышеуказанных консервантов, например смесь фенола и метилпарабена Обнаружено, что эффективное количество мета-крезола, при добавлении в препараты, являющиеся объектом данного изобретения и содержащие от 0,1 х 106 до 100 х х 106 МЕ/мл а-интерферона, находится в пределах от 0,5 до 2,0 мг/мл Для использования в препаратах, содержащих от 5 х 106 до 50 х 106 МЕ/мл а-2Ь-интерферона, в особенности предпочтителен мета-крезол в концентрации 1,5 мг/мл Обнаружено, что эффективное количество фенола, используемого в качестве компонента препаратов растворов, содержащих от 0,1 х 10 6 до 100 х 106 МЕ/мл а-интерферона, составляет от 0,5 до 5 мг/мл Эффективное количество метилпарабена при использовании его в качестве компонента препаратов, являющихся предметом настоящего изобретения и содержащих от 0,1 х 106 до 100 х 106 МЕ/мл а-интерферона, находится в интервале от 42028 0,6 до 1,8 мг/мл, а количество пропилпарабена - в интервале от 0,06 до 0,18 мг/мл В качестве компонента препаратов, являющихся объектом данного изобретения и содержащих от 0,1 х 106 до 100 х 106 МЕ/мл а-2Ь-интерферона, наиболее предпочтительно использовать 1,2 мг/мл метилпарабена в комбинации с 0,12 мг/мл пропилпарабена Использование мета-крезола в качестве консерванта, обладающего антимикробными свойствами, наиболее предпочтительно При приготовлении препаратов, являющихся объектом данного изобретения, следует отдать предпочтение воде для инъекций В процессе разработки препаратов в виде водных растворов, являющихся объектом данного изобретения, и способных в течение длительного периода хранения сохранять высокую биологическую активность, а также высокую химическую и физическую стабильность содержащегося в них а-интерферона в отсутствие обладающего стабилизирующим действием САЧ, установили, что количество производного моно-9окатадеканата поли-(окси-1,2-этандиил)-сорбитана, такого как полисорбат-80, необходимого для стабилизации а-интерферона, оказывает непосредственное влияние на эффективное количество консерванта, обладающего антимикробной активностью Это количество консерванта может быть добавлено в водные растворы препаратов для того, чтобы в соответствии с принятыми во всем мире требованиями органов здравоохранения, контролирующих регистрацию лекарственных препаратов, обеспечить необходимую защиту упомянутых растворов от микроорганизмов, не вызывая при этом нежелательного помутнения растворов Таким образом, когда наиболее предпочтительный стабилизирующий агент, полисорбат-80, присутствовал в препаратах, являющихся объектом данного изобретения, и его наиболее предпочтительное эффективное количество составляло 0,1 мг/мл, эффективное количество наиболее предпочтительного консерванта с антимикробной активностью, например, мета-крезола, добавление которого в раствор не сопровождалось помутПример 1 Активное вещество нением упомянутого раствора, являлось критическим Например, если содержание мета-крезола, добавленного в раствор, содержащий 0,1 мг/мл полисорбата-80, как показано в примере 3, превосходило 1,75 мг/мл, (см пример 3), происходило помутнение раствора Аналогичная проблема, связанная с помутнением раствора, возникала, когда количество полисорбата-80 в препарате после добавления всех компонентов, оказывалось в пределах от 0,01 до 1 мг/мл Помутнения раствора не происходило при добавлении 1,75 мг/мл или менее (предпочтительно около 1,5 мг/мл) мета-крезола в препарат, приготовленный согласно методике, указанной в примере 3, и содержащий 0,1 мг/мл полисорбата-80 Критическое состояние наблюдалось также в случае использования в качестве консервантов, обладающих антимикробной активностью, парабенов и фенола Для того, чтобы избежать помутнения препаратов, являющихся объектом данного изобретения и содержащих от 0,01 до 1 мг/мл полисорбата-80, эффективное количество метилпарабена (при одновременном использовании в сочетании с пропилпарабеном в концентрации 0,12 мг/мл) не должно превосходить 1,2 мг/мл, а эффективное количество фенола (в случае использования его вместо парабенов) должно быть выше 0,5 мг/мл, но не достигать при этом 4 мг/мл Препараты а-интерферона используются для лечения различных болезненных состояний, в том числе рака почки, СПИД - ассоциированной саркомы Капоши, хронического и острого гепатита В, хронического и острого гепатита ни А, ни В/С Препараты, являющиеся объектом настоящего изобретения, имеют ценность для лечения этих заболеваний преимущественно в форме водных растворов для инъекций Примеры Приведенные ниже не ограничивающие объем изобретения примеры иллюстрируют приготовление водных растворов а-интерферонов Методики, описанные после примера 5, используются для приготовления препаратов согласно данному изобретению, представленных в примерах 1-5 а-2Ь-интерферон 0,1 х Ю -100 х 10е МЕ/мл* Буферная система Na-фосфатный буфер (однозамещенный/двузамещенный) 0,005-0,1 М Хелатообразователь ЭДТА динатрия 0,01-1 мг/мл Стабилизирующий агент Полисорбат-80 0,01 -1 мг/мл Агент, обеспечивающий изоосмотичность раствора Хлорид натрия 1 - 9 мг/мл Консервант, обладающий антимикробной активностью мета-к резол или фенол или метилпарабен + пропилпарабен Вода для инъекций, 0,5 - 1 , 75 мг/мл 0,5 - 10 мкм >25 мкм >50 мкм 'ее - степень стабильности **ПБР - прозрачный, бесцветный раствор, в котором практически отсутствуют видимые частицы 42028 Таблица 2 Данные по стабильности а-2Ь интерферона в препарате, приготовленном по примеру № 3 ДлиТемпетель- ратура (°С) ность хранения (месяцы) Исходный момент времени Тест на антивирусную активность (Подавление ЦПД) Содержание белка (метод ВЖХ) Наличие твердых частиц (количество частиц на флакон) Характеристика (хЮ 8 МЕ/мл) (% с.с.) (мкг/мл) (в % от исходного) >10ji >25ji >50ji 10,3 103 37,9 100 68 4 3 ПБР** 1 4 10 100 38,2 101 142 24 23 ПБР 3 4 10 100 38,9 103 311 63 35 ПБР 6 4 10 100 40,0 105 206 17 16 ПБР 9 4 10 100 37,1 97,9 211 109 50 ПБР 12 4 10 100 36,6 96,6 300 65 12 ПБР 15 4 10 100 36,1 95,3 123 8 6 ПБР 'ее - степень стабильности **ПБР - прозрачный, бесцветный раствор, в котором практически отсутствуют видимые частицы Таблица 3 Данные по стабильности а-2Ь интерферона в препарате, приготовленном по примеру № 4 Длительность хранения (месяцы) ТемПопе- ложерату- ние ра фла(°С) кона* Тест на антивирусную активность (Подавление ЦПД) Содержание белка (метод ВЖХ) Тест на метакрезол рН Наличие і вердых ч астиц (ко- Харакличество частиц на флакон) теристика >10 мкм >25 мкм >50 мкм (хЮ6 МЕ/мл) 3 3 6 4 25 4 25 12 4 6,48 108 25,7 100 1,47 98,0 6,91 23 2 0 В 6,00 100 24,8 96,5 1,47 98,0 6,90 109 61 16 ПБР** П Исходный момент времени 1 30 25мкм >50мкм 25 12 4 6,85 144 4 В 6,00 100 19,5 76,5 1,49 99,3 6,82 89 3 1 ПБР* 6,00 100 19,5 76,5 1,50 100 6,83 64 1 0 ПБР В 6,00 100 24,0 94,1 1,43 95,3 6,81 39 1 0 ПБР 6,00 100 24,0 94,1 1,43 95,3 6,82 77 19 6 ПБР в 6,00 100 20,2 79,2 1,39 92,7 6,82 57 1 0 ПБР 6,00 100 19,6 76,9 1,41 94,0 6,82 140 24 1 ПБР в 6,00 100 24,6 96,5 1,47 98,0 6,82 66 1 0 ПБР 6,00 100 24,6 96,5 1,47 98,0 6,83 220 87 27 ПБР в 6,00 100 17,2 67,5 1,47 98,0 6,83 92 3 0 ПБР 6,00 100 16,1 63,1 1,48 98,7 6,84 241 5 0 ПБР в 7,56 126 23,3 91,4 1,58 105 6,88 63 1 0 ПБР п 4 98,0 п 6 1,47 п 25 100 п 3 25,5 п 4 100 П 3 6,00 4 7,00 117 23,2 91,0 1,41 94,0 6,88 119 6 1 ПБР *ПБР - прозрачный, бесцветный раствор, в котором практически отсутствуют видимые частицы А Приготовление препаратов водных растворов, содержащих парабен, по примеру 2 1 Загружают приблизительно 80% воды для инъекций, имеющей температуру выше 70°С в подходящий для этих целей реакционный сосуд с двойными стенками, оснащенный мешалкой 2 Отдельно загружают приблизительно 30% воды для инъекций в другой подходящий сосуд Воду охлаждают, и в дальнейшем поддерживают температуру воды в интервале от 20°С до 25°С Приступают к продуванию фильтрованным азотом воды, которую предполагается использовать для доведения данной порции раствора до конечного объема, а также к наслаиванию азота на поверхность этой воды, таким образом, чтобы содержание растворенного в воде кислорода поддерживалось на уровне, не превышающем 0,25 млн долей (0,000025%) 3 В реакционный сосуд, загруженный на 1-м этапе, добавляют метилпарабен и пропилпарабен и растворяют их, перемешивая раствор и поддерживая температуру в интервале 70-80°С 4 Охлаждают раствор, полученный на этапе 3, до температуры 20-25°С Барботируют через раствор азот, одновременно напуская азот над поверхностью раствора Поддерживают содержание растворенного кислорода на уровне, не превышающем 0,000025% 5 Вводят в раствор, полученный на этапе 4, следующие компоненты и растворяют их, переме шивая раствор и продолжая барботирование через раствор азота и напуск его над поверхностью раствора Безводный двузамещенный фосфат натрия Однозамещенный фосфат натрия, моногидрат ЭДТА динатрия Хлорид натрия 6 Прекращают барботаж через раствор, полученный на этапе 5 Продолжают напуск азота над раствором в реакционном сосуде 7 Загружают в отдельный сосуд приблизительно 50 мл воды для инъекций (конечный объем реакционной смеси составляет 1 л) и растворяют в ней полисорбат-80 Переносят раствор полисорбата-80 в раствор, полученный на этапе 6 8 Проверяют значение рН полученного раствора, которое должно быть в интервале от 6,6 до 7,0 Корректировку рН проводить не требуется 9 При перемешивании вводят основной объем раствора а-2Ь-интерферона в раствор, полученный на этапе 8 10 Для получения конечного объема реакционной смеси добавляют воду, подвергнутую барботированию азота (этап 2) Осторожно перемешивают раствор, до тех пор, пока он не станет гомогенным 11 В условиях соблюдения асептики, отфильтровывают раствор с помощью стерилизующего фильтра, предварительного промытого и 42028 проверенного на целостность Собирают стерилизованный раствор в простерилизованный сосуд, предварительно обработанный прошедшим через стерилизующий фильтр азотом После фильтрации раствора следует проверить целостность фильтра 12 После напуска стерильного азота на поверхность раствора в сосуде для хранения (этап 11), герметично укупоривают сосуд Б Приготовление препаратов водных растворов, содержащих мета-крезол, по примеру 3 Технология получения водных растворов препаратов, содержащих в качестве консерванта мета-крезол, (согласно примеру 3) в точности соответствует процессу, описанному выше, за исключением двух особенностей температуру раствора, полученного на этапе 3, поддерживают на уровне 20-25°С, и мета-крезол вносят после завершения этапа 6 В Получение водных растворов препаратов альфа-интерферона, не содержащих САЧ, в условиях атмосферного воздуха Методика получения препаратов водных растворов, не содержащих САЧ, состав которых указан в примерах 1-4 в точности соответствует методике получения препаратов по примеру 5, за исключением того, что все этапы получения препарата проводят в условиях атмосферного воздуха, барботирование через раствор азота, а также напуск азота над поверхностью раствора не производится, и все свободное пространство над раствором занято атмосферным воздухом (содержащим обычно около 20% кислорода) Для сохранения химической, биологической и физической стабильности растворов предпочтительно, чтобы вода, используемая для приготовления водных растворов, и полученные растворы а-интерферона, практически не содержали растворенного кислорода, а также, чтобы при получении и хранении водных растворов свободный объем над раствором был заполнен инертным газом, например азотом, так, чтобы концентрация кислорода в свободном пространстве не превышала 4 объемных процентов Использованный в данном случае термин "практическое отсутствие растворенного кислорода" означает, что содержание кислорода в растворе не должно превышать 0,25 млн долей (0,000025%), при температуре воды около 2025°С Как правило, для того, чтобы обеспечить такое предпочтительное содержание кислорода, составляющее 0,000025%, приемлемо продувание в течение достаточного времени (например, около 30 минут) инертного газа, например азота, через воду, используемую для приготовления водных растворов (температура которых поддерживается на уровне 20-25°С) Это позволяет снизить содержание растворенного кислорода приблизительно до 0,000025% Чтобы поддержать содержание растворенного кислорода на уровне 0,000025%, барботирование продолжают в течение всей процедуры приготовления препарата Установлено, что через 3 месяца хранения при температуре 25°С потери химической стабильности а-интерферона в водных растворах пре паратов, являющихся объектом настоящего изобретения и содержащих более 0,0001% растворенного кислорода и более 7% кислорода в свободном пространстве над раствором, значительно превосходят потери стабильности а-интерферона в аналогичных водных растворах препаратов, хранившихся при тех же условиях, в которых, однако, содержание растворенного кислорода соответствовало предпочтительному уровню 0,000025%, а содержание кислорода в свободном пространстве над раствором поддерживалось на уровне 4% Сравнение соответствующих данных по стабильности а-2Ь-интерферона, представленных в табл 3 и 4, демонстрирует, что при хранении в течение 12 месяцев при 4°С не наблюдается существенного различия в стабильности водных растворов препаратов, являющихся объектом данного изобретения и приготовленных в атмосфере азота/низкого содержания кислорода (пример 4) и в условиях обычного атмосферного воздуха (пример 5) В противоположность этому, сравнение стабильности а-2Ь-интерферона в водных растворах, приготовленных согласно примерам 4 и 5 и хранившихся при более высоких температурах (25 и 30°С), демонстрирует защитное действие, достигнутое благодаря соблюдению предпочтительных условиях получения препарата - при барботировании азотом, позволяющем поддерживать низкий уровень растворенного кислорода в водном растворе, и при одновременном поддержании содержания кислорода в свободном пространстве над раствором на уровне, не превышающем 4 объемных процентов Водные растворы препаратов, являющихся предметом настоящего изобретения, можно хранить в любых подходящих для этой цели чистых и стерилизованных сосудах или контейнерах, например, стеклянных флаконах типа I объемом 2 мл и 5 мл, укупориваемых серыми бутил-каучуковыми пробками Допускается также хранение водных растворов препаратов, являющихся предметом настоящего изобретения, в предварительно заполненных шприцах, содержащих несколько доз препарата, наподобие шприцев, используемых для выпуска растворов лекарств, например, инсулина Типичные пригодные для этих целей шприцы представляют собой системы, в состав которых входит флакон, заполненный лекарственным препаратом при выпуске, в комплекте с шприцем-ручкой, например Novolet Novo Pen, выпускаемый фирмой Novo Nordisk Типичные пригодные для этих целей системы представляют собой шприцы, позволяющие пользователю устанавливать шприц на введение точных воспроизводимых доз лекарственного средства, и без проблем и посторонней помощи делать инъекции Возможна лиофилизация водных растворов препаратов, являющихся предметом настоящего изобретения, подобных описанным в примерах, с образованием порошка, который перед применением растворяют в воде Предполагается, что лиофилизированный порошок а-интерферона сохраняет химическую и биологическую стабильность при температуре хранения от 2 до 8°С в течение по крайней мере 2-х лет 42028 Тираж 50 екз Відкрите акціонерне товариство «Патент» Україна, 88000, м Ужгород, вул Гагаріна, 101 (03122) 3-72-89 (03122) 2-57-03 10