Спосіб очищення людського фібробластного інтерферону

Изобретение относится к медицине. Цель изобретения - повышение производительности процесса. Подкисленный раствор интерферона пропускают через колонку с поперечно сшитым декстраном. Интерферон элтоируют фосфатным буфером. Часть элюента пропускают через колонку с металлхелатным носителем. Затем интерферон элюируют раствором гистидина с хлористым натрием. Полученный элюент содержит незначительное количество пирогенных веществ, соответствующее требованиям для биологических веществ. 2 табл. СО С СО сх со О5 1 1389667 Изобретение относится к медицине методу Пората. Имидоуксусную кислоту и касается способа очистки чело,ве~ (14г) и карбонат натрия (20г) растческого фибробластного интерферона. воряют в воде (100 мл) и подвергают Целью изобретения является повывоздействию эпокси-активированную шение степени очистки человеческого сефарозу - 6В (135 мл, влажный фибробластного интерферона, которая объем) в течение 16 ч при 56°С. Посдостигается за счет хроматографии ле фильтрации и промывания носитель на поперечно сшитом декстране, сообрабатывают 1 И этанол-амином держащей сульфонильные группы, и (100 мл) в течение 4 ч при 56°С, на производных агарозы, включающих фильтруют, промывают и хранят при ++ карбоксиметиламиногруппу и ион С а , 4°С. ++ ++ ++ ++ или Ni S или Z n , или Си . Колонку для Z n - хелатной хроСпособ осуществляют следующим матографии (45 мл, 3 см х 6,4 см) образом. 15 приготавливают пропусканием 1%-ного Раствор человеческого фибробластраствора хлорида цинка через носиного интерферона с рН 1-3 пропускают тель в колонке. Через эту колонку 1 через колонку с SP-сефадексом, ко пропускают 2,28 л элюента с колонки лонку промывают водой, элюцию интерс SP-сефадексом и 800 мл физиолоферона осуществляют при рН 7,0-11,0 20 гического раствора. Раствор, котои затем через колонку с эпоксиактиви рый проходил через колонку, и пророванной сефарозой-бВ, содержащей мывной раствор содержали 8 х 10^ ME бискарбоксиметиламиногруппу, а в (4%) активности интерферона. Колон++ качестве иона металла С а , или ку затем промьюают 0,1 М раствором N i + + , или Zn"*"4, или Си**, элюцию 25 Na-фосфатного буфера (рН 4,5), соинтерферона осуществляют раствором держащим физиологический раствор гистидина. (1:9, объем на объем). Первая фракция (262 мл) содержала 1,4 х Ю в М Е П р и м е р 1. Интерферонсодер(72%) активности интерферона. Конжацую жидкость готовят обработкой центрация интерферона в этой фракчеловеческих фибробластных клеток 30 ции была 5,3 х 10 у МЕ/мл и концент(обычная диплоидная культура) порация белка - 2 мкг/мл с удельной 'средством Поли-И: Поли-С в среде активностью 2,7 х 10 МЕ/мг белка, Игла-Мем с последующей, обработкой что указывает на очистку в 1700 раз циклогексимидом и актиномицином Д и концентрацию в 166 раз по сравне(супериндукция). 35 нию с исходным раствором. Раствор интерферона \рН 7,4), , Исходный раствор интерферона, имеющий активность интерферона содержащий пирогенные вещества, да3200 МЕ/нл и концентрацию белка вал положительную реакцию при провер20 мкг/мл, доводят до рН 2,0 соляной ке по Лимулюс-тесту. Часть пнрогенкислотой и пропускают через колонку ных веществ после прохождения через с поперечно сшитым декстраном, соSP-сефадекс без снижения активности держащим сульфонильную группу, SP интерферона снова давала положительсефадексом (200 мл, 4,6 см х \2 с м ) . ную реакцию при проверке по ЛимулюсПосле пропускания 60 л раствора, тесту . Оставшиеся пирогенные вещестсодержащего интерферон (с общей ак45 ва не задерживались на Z n ++ -хелаттивностью 1,9 х 10 8 МЕ), колонку проной колонке и удалялись в процессе мывают 2 л воды. Элюат содержал пропускания через колонку и промыва9,5 х 10 НЕ (5%) активности интерфения. Элюент с металл-хелатной колонрона. Колонку затем промывают 0,1 И ки содержал незначительные количеNa-фосфатным буфером при рН 8,3, 50 ства пирогенных веществ. причем интерферон выходил в первых 2,28 л элюента. Эта фракция содерЧасть конечной фракции элюента жала 1,8 х 10* ME (94%) активности после фильтрации через 0,2 ммк интерферона и 23 мг белка. Удельная фильтр вводили внутривенно трем кроактивность была 8 х 10 6 МЕ/мг белка. ликам (1,5 х 10 МЕ/кг веса тела). 55 Сумма повышения температуры составКонцентрация составляла 26 раз и степень очистки 50 раз. ляла 0,63 С. Носитель для металл-хелатной П р и м е р 2. В качестве исходхроматографии приготавливают по ного раствора интерферона используют 1389667 интерферон, подобный по примеру 1. Подкисленный раствор интерферона (48 л, содержащих 5000 МЕ/мл, общая е активность 2,4 х 1 0 ME) с содержанием белка 25 мкг/мл пропускают через колонку с 200 мл SP-сефадекса и колонку промывают 2 л воды. Интерферон элюируют 2,0 л фосфатного буфера е рН 8,3. Получили 2 х 10 МЕ(83%) 10 ^активности и 100 мг (10,4%) белка (концентрация в 20 раз и очистка в» 10 раз). Часть элюента из колонки с SP-сефадексом (200 мл с активностью 7 2 х 10 , содержанием общего белка 10 мг) пропускают со скоростью 8 мл/ч через колонку с 2 мл Со**хелатного носителя. После промывания 20 мл воды и 20 мл физиологического раствора интерферон элюируют 0,2 М 20 раствора гистидина, содержащим 0,2 М хлористого натрия рН 7,5. Элюент