(r)-(z)-1-азабіцикло[2.2.1]гептан-3-он, o-[3-(3-метоксифеніл)-2-пропініл]оксим малеат як фармацевтичний агент

1 (Р)-(2)-1-Азабіцикло[2,2,1]гептан-3-он, О-[3(3-метоксифеніл)-2-пропшіл]оксим малеат як фармацевтичний агент 2 Сполука за п 1, у якій більшість кристалічних часток має розмір більш ніж 10x10 мкм 3 Фармацевтична композиція, придатна для полегшення болю або для лікування симптомів погіршення пізнавальної здатності, що включає терапевтично ефективну КІЛЬКІСТЬ сполуки за п 1 разом з фармацевтично прийнятним носієм 4 Спосіб полегшення болю або лікування симптомів погіршення пізнавальної здатності у ссавця, що включає введення вказаному ссавцю сполуки за п 1 Даний винахід стосується кристалічної солі (Р)-(2)-1-азабіцикло[2 2 1]гептан-3-он, О-[3-(3метоксифеніл)-2-пропініл]оксиму та малеїнової кислоти (у співвідношенні 1 1) (сполука), яка є фармацевтичною формою, що за властивостями перевершує вільну основу чи будь-яку іншу фармацевтичну прийнятні сольові форми цієї сполуки Ця сіль має таку хімічну структуру роботи)) Одна із цих сполук, зокрема, (1), що містить (З-метоксифеніл)пропарпл оксим у боковому ланцюзі, була ідентифікована у цій та більш ранніх публікаціях (Davis R , та ш , Prog Brain Res , 1993, 98 439 - 445) як така, що має дуже сприятливі загальні характеристики фармакологічної активності, про що свідчать її висока спорідненість до мускаринових рецепторів кори мозочку, здатність витісняти радюмічений ліганд агоніста (цис-метилдюксолан) з мускаринових рецепторів у концентраціях, у 246 разів нижче за такі, що потрібні для витиснення радюліганду антагоніста (хінуклідинил бензилат), та и здатність селективно стимулювати т1-підтип мускаринових рецепторів без значного стимулювання інших не-т1 мускаринових рецепторів НОгС W н СО;Н н Сполуки наведеної нижче Формули І, а більш конкретно, підгрупа сполук, що мають наведену нижче формулу II, описані у патенті США № 5306718 та у його частковому продовженні патенті США № 5346911, як мускаринові агоністи, які є корисними агентами при лікуванні болю та погіршення пізнавальної здатності, пов'язаний з холшерпчними функціональними порушеннями головного мозку, такими як хвороба Альцгеймера Сполуки Формули II, де Аг позначає фенільну групу, заміщену однією чи двома метоксигрупами, мають чи не найбільш цікаві характеристики фармакологічної активності in vitro (Jaen та ш , Life Sciences, 1995, 56 845 - 852 (Таблиця І вказаної О со о (О 46032 Сполука, що має наведену вище хімічну структуру 1, може існувати у формі будь-якого із чотирьох стереохімічних ізомерів, представлених наведеними нижче формулами 1а, 1Ь, 1с та 1d (R)-(ZJ- стереоізомер 1c {Щ (El- стереавоиер Ізомери 1а та 1Ь є енантюмерами (тобто дзеркальними відображеннями один одного), і теж саме стосується ізомерів 1с та 1d Оскільки центр асиметрії цих молекул знаходиться на крайньому атомі вуглецю місточкового зв'язку, який не може епімерізуватись за будь-яких нормальних умов, розділення цих енантюмерних пар (тобто, відокремлення 1а від 1Ь або відокремлення 1с від 1d) може бути здійснено з використанням методів синтезу чи розділення, описаних у патенті США № 5346911, та є постійним Це означає, наприклад, що 1а не може перетворитись на його енантюмер 1Ь, а 1с не може перетворитись на 1d 3 іншого боку, 1а та 1с мають одну й ту саму абсолютну стереохімічну формулу у місточкового атома вуглецю, але є геометричними ізомерами один одного відносно оксимового подвійного зв'язку вуглець-азот Таке ж саме співвідношення існує між 1Ьта 1d Ефективність оксиму 1 як мускаринового агоністу забезпечується переважно ізомером 1а (Jaen, ibid, та Таблиця І нижче) Таблиці II та III зазначеної роботи вказують на те, що ізомер 1а (позначений як S-8 у роботі Jaen) проявляє більшу селективність щодо субтипу ml рецепторів та має більшу активність щодо m l , ніж ізомер 1Ь (позначений як S-8) Невеличка активність, що її проявляє 1Ь, може бути спричинена присутністю невеликої КІЛЬКОСТІ 1а у зразках 1Ь Порівняння між 1а та сумішшю 1c/1d, наведене нижче у Таблиці І, вказує на те, що 1а є більш сильним та більш ефективним мускариновим агоністом (як це визначено за більшими коефіцієнтами зв'язування хінуклідинил бензилату (QNB) порівняно з цисметилдюксоланом (CMD) для 1а) У результаті цих та інших експериментів, 1а було визначено як оптимальну сполуку (високоефективний мускариновий агоніст з високою селективністю щодо субтипу ml мускаринових рецепторів) для створення курсу лікування погіршення пізнавальної здатності, пов'язаного з холшерпчними функціональними порушеннями головного мозку, такими як хвороба Альцгеймера Таблиця І Зв'язування мускаринових рецепторів Сполука |3в'язування СМР|Зв'язування QNB| ІС50 (нМ) 1а a 25 150 ІС50 (нМ) 5300 14800 використано (1с + 1d) Для цих аналізов було рацемічний (Е)-оксим Деякі ПОДВІЙНІ зв'язки вуглець-азот у оксимах є відносно стабільними, тоді як ІНШІ можуть зазнавати повільного перегрупування, звичайно у присутності кислотного каталізатора Конкретний характер заміщень поряд з оксимною групою звичайно визначає хімічну стабільність оксим у (здатність гідролізуватись на кетонний та пдроксиламінний компоненти), його стереохімічну ЦІЛІСНІСТЬ (тенденцію кожного геометричного ізомеру залишатись у Е або Z конфігурації), та точне положення термодинамічної рівноваги між обома стереохімічними формами (коли ХІМІЧНІ умови є такими, що рівновага може бути досягнена) Як показано у Таблиці II нижче, Сполука 1а може зазнавати каталізуємої кислотою ізомеризації з утворенням и геометричного ізомеру 1с Ця рівновага залежить від часу та значення рН Ми визначили, що термодинамічне рівноважне співвідношення 1а 1с у розчині становить приблизно 85 15 Таблиця II Залежність співвідношення площ ПІКІВ Z Е ВІД рН після інкубування 1а протягом 24 годин при 37°С Співвідношення площ ПІКІВ рН (1а 1с) 0,1Н НСІ 85 15 рН 1,97 88 12 рН 4,03 99,3 0,7 >4,03 100 0 Існує багато причин для того, щоб не вважати суміш цих двох ізомерів у співвідношенні 85 15 оптимальною для одержання фармацевтичного препарату співвідношення ізомерів 8515 не завжди КІЛЬКІСНО точно відтворюється у різних партіях, інтерпретація фармакологи, токсичності, клінічної ефективності такої суміші буде значно сложніше, ніж при використанні однієї сполуки, і вартість розробки суміші з постійним складом як КЛІНІЧНО корисного лікарського препарату буде також значно вищою, нарешті, фізичні властивості суміші ізомерів у співвідношенні 85 15 є менш оптимальними, ніж властивості чистого 1а з погляду кристалічності, фізичної та хімічної стабільності Розробка 1а як фармацевтичного лікарського препарату вимагала ідентифікації сольової форми чи вільної основи 1 а, яка б мала оптимальні фізичні та ХІМІЧНІ властивості Найбільш важливими властивостями є такі простота та відтворюваність способу одержання, кристалічність, не-пгроскопічність, розчинність у воді, СТІЙКІСТЬ до видимого та ультрафіолетового світла, низька швидкість розкладу за умов температури та вологості, що використовуються для проведення прискорених випробувань стабільності, низька швидкість ізомеризації 1а на його ізомер 1с за цих умов, та безпечність при довгостроковому введенні людині Вільна основа та деякі фармацевтичне прийнятні солі описані у патенті США № 5306718 46032 та його частковому продовженні 5346911 Юмкм Перелічено такі солі хлористоводнева, сірчана, Фігура 1 зображує розділення 1а та 1с фосфорна, оцтова, бензойна, лимоннокисла, методом рідинної хроматографії високого тиску малонова, саліцилова, яблучна, фумарова, (HPLC) оксалінова, бурштинова, винна, молочна, Фігура 2 є електронною мікрофотографією глюконова, аскорбінова, малеїнова, аспарагінова, кристалів 1а, перекристалізованих із етилацетату бензолсульфонова, метан- та етансульфонова, Фігура 3 є електронною мікрофотографією оксиметан- та оксіетансульфонова Немає ніяких кристалів 1а, одержаних осадженням із свідчень чи припущень про те, що малеат є такою діетилового ефіру сольовою формою вищевказаної сполуки, що має Фігура 4 зображує порівняння біологічної кращі властивості Очевидно, що чудові активності оксалатної та малеїнової солей 1а властивості малеїнової солі не були ВІДОМІ ЧИ Процес вибору солі для використання як оцінені до цього часу мускаринового агоністу за даним винаходом порушує проблеми, які є ключовими для Було виявлено, що на усі солі є однаково фармацевтичних сполук корисними, якщо брати до уваги вищенаведений перелік властивостей Зокрема, ми знайшли До найбільш важливих властивостей несподівано чудові властивості малешовокислої належать простота та відтворюваність способу солі 1а (1 1), які чітко відрізняють цю сіль одержання, кристалічність, не-пгроскопічність, розчинність у воді, СТІЙКІСТЬ до видимого та Із великої КІЛЬКОСТІ одержаних та досліджених ультрафіолетового світла, низька швидкість солей Сполуки 1 а цілком несподівано лише розкладу за умов температури та вологості, що малеїнова (1 1) сіль задовольняла усім вимогам використовуються для проведення прискорених винахідників щодо фармацевтичне прийнятних та випробувань стабільності, низька швидкість потрібної солі простота одержання без ізомеризації 1а до його ізомеру 1с за цих умов, та ізомеризації, постійна та відтворювана безпечність при довгостроковому введенні людині стехіометрія, кристалічність, розчинність у воді, СВІТЛОСТІЙКІСТЬ, не-пгроскопічність, нетоксичність, Було перевірено солеутворюючі властивості та загальна фізична та хімічна стабільність Тому багатьох протиюнів Дивись Таблицю III нижче даний винахід стосується (1 1) солі Сполуки 1а з Наведені у Таблиці III дані відповідають на такі малеїновою кислотою, її приготування таким запитання (1) чи утворюється твердий осад солі у чином, щоб одержувати великі за розміром ефірі при обробці вільної основи 1 а кожною кристали цієї солі, та способу застосування цієї кислотою'?, (2) які розчинникі використовуються солі для лікування погіршення пізнавальної для перекристалізації солі після збирання солі здатності та болю Ця сіль має таку хімічну назву шляхом фільтрації чи випарювання ефіру, та чи (Р)-(2)-1-азабіцикло[2 2 1]гептан-3-он, О-[3-(3одержують кристалічну сіль із кожного розчинника'?, (3) інформація про точку плавлення, метоксифеніл)-2-пропініл]оксим, (2)-бутендюєва і (4) загальна оцінка кожної солі з урахуванням кислота, (1 1 сіль) БІЛЬШІСТЬ кристалічних часток простоти утворення та кристалічності мають розмір, більший за 10 х Юмкм, щонайменше половина часток більші за 10 х Таблиця Оцінка солей приєднання кислоти (Р)-(2)-1-азабіцикло[2 2 1]гептан-3-ону, О-[3-(3-метоксифеніл)-2пропініл]оксиму Результати Загальна Точка Аніон КИСЛОТИ Осадження із Розчинник для перекристалізації Результати оцінка плавлення ефіру СОЛІ Неорганічні Аморфна тверда речовина 1 Гідробромид Так 1 Et2O Осадження Низька (дуже гігроскопічна) Біла тверда речовина Біла тверда 158-160 1 Et2O Осадження 2 Гідрохлорид Так Висока 2 ЕЮАс Перекристалізація речовина 159-160 Утворення Еізомеру Монокарбонові 1 Et2O Масляниста 2 Петролейний рідина Випарювання ефір Масляниста 3 Ацетат Ні Тритурування Низька 3 рідина Кристалізація ІРА/Петролейний Масляниста ефір рідина 4 Бензоат НІ 1 Et2O Випарювання Масляниста 86-88 Висока 7 46032 2 Пентан Тритурування 3 т-бутил Кристалізація метиловий ефір 5 н-Бутират Hi 1 Et2O 2 Пентан 6 третБутирата H1 I I 1 1 Et2O 2 Пентан Випарювання Тритурування 7 Ц+)-Лактат Hi (MeOH) 1 MeOH 2 Пентан Випарювання Тритурування 8 1-Нафтоат Hi 1 Et2O 2 Пентан Випарювання Тритурування HI 1 Et2O 2 Пентан 3 Толуол 4 Ацетон 5 тБути л метиловий ефір 6 Циклогексан Випарювання Тритурування Кристалізація Кристалізація Кристалізація Кристалізація а 9 2-Нафтоат Випарювання Тритурування Було використано рацемічний оксим 10 Пропюнат Ні 1 Et2O 2 Пентан Випарювання Тритурування 11 Стеарат НІ 1 Et2O Кристалізація НІ 1 Et2O Випарювання Так 1 Et2O Осадження 14 Фумарат Ні (МеОН) (0,5екв) 1 MeOH 2 ЕЮАс 3 ЕЮ Ас Пентан (1 1) 4 ЕЮАс 5 ЕЮАс/ 6 I PA/ 7 ЕЮН 8 IPA 9 Циклогексан/СНСІз Випарювання Тритурування Тритурування Кристалізація Кристалізація Кристалізація Кристалізація Кристалізація Кристалізація 15 Фумарат Так (1екв) 1 2 3 4 5 Осадження Перекристалізація Перекристалізація Перекристалізація Перекристалізація 12 Ундеканоат Полікарбонові 13 Цитрат Et2O ЕЮН/Пентан ІРА/Пентан Еон IPA 8 рідина 88-89 БІЛІ кристали БІЛІ кристали Масляниста рідина Масляниста рідина Масляниста рідина Масляниста рідина Масляниста рідина Масляниста рідина Масляниста рідина Масляниста рідина Смола Смола Осад не утворюється Осад не утворюється Осад не утворюється Тверда речовина = 2нафтойна кислота Масляниста рідина Масляниста рідина Тверда речовина = стеаринова кислота Масляниста рідина Ниікігя 1 1 г| J D I \ u Низька — Низька Низька Низька Низька Низька Біла тверда 53-54 аморфна речовина Смола Тверда речовина Тверда речовина Смола Осад не 79-109 утворюється 106-108 Осад не утворюється Осад не утворюється Осад не утворюється Аморфна тверда речовина Масляниста рідина Низька Середня Середня Низька 9 16 Малеат Так 17 Малат Так 18 Оксалат Так 19 Сукцинат Ні (МеОН) 20 Тартрат (L)-(+) (0,5екв) Ні (МеОН) 21 Тартрат (Ц-(+)(1екв) Ні (МеОН) 22 Тартрат (D)-(-) (0,5екв) Ні (МеОН) 23 Тартрат (D)-(-)(1eKB) Ні (МеОН) Сульфонові 24 Бензолсульфонат Сульфонат Ні 10 46032 Масляниста 6 ЕЮАс Перекристалізація рідина Масляниста рідина Масляниста рідина Масляниста рідина БІЛІ кристали 115-116 1 Et2O Випарювання 2 ЕЮАс Перекристалізація БІЛІ кристали 118-119 3 ІРА/ЕЮН/Пентан Перекристалізація БІЛІ кристали 116,5-118 4 ЕЮН/Пентан Перекристалізація БІЛІ кристали 118,5-121 5 СНСІз/Пентан Перекристалізація БІЛІ кристали 118-119,5 6 ЕЮН Перекристалізація БІЛІ кристали 115-118 Біла смола Масляниста 1 Et2O Осадження 3 ІРА/ЕЮН/Пентан Перекристалізація рідина 4 ЕЮН/Пентан Перекристалізація Масляниста рідина Біла тверда Змінна, 110 речовина -113 для 1 Et2O Осадження непостійної СОЛІ 1 1 стехіометрії Масляниста рідина 1 МеОН Випарювання Масляниста 2 т-Бутилметиловий Кристалізація рідина ефір/Пентан Кристалізація Масляниста 3 Et2O/neHTaH рідина Смола Липка смола Аморфна біла 1 МеОН тверда 2 Пентан Випарювання речовина 3 МеОН/Ефір Тритурування Осад не 4 т-Бутилметиловий Кристалізація утворюється ефір Кристалізація 58 (скло) Утворюється 5 ЕЮАс Кристалізація маслянистий 6 ЕЮАс/ Кристалізація осад 7 Кристалізація Осад не ЕЮН/Петролейний утворюється ефір Осад не утворюється Висока Низька Середня Низька Низька Випарювання Кристалізація Масляниста рідина Осад не утворюється Низька Випарювання Кристалізація Смола Осад не утворюється Низька 1 МеОН Випарювання Смола Низька 1 Et2O 2 Пентан Випарювання Тритурування Масляниста рідина Масляниста рідина Низька Випарювання Тритурування Масляниста рідина Низька Випарювання Тритурування Масляниста рідина Низька 1 МеОН 2 ЕЮН/Петролейний ефір 1 МеОН 2 ЕЮН/Петролейний ефір АМІНОКИСЛОТНІ 25 N- НІ 1 ЕЮАс/МеОН ацетилглщина (ЕЮАс/МеОН 2 Et2O та пентан т ) ІНШІ 26 Сахарин Ні (МеОН) 1 МеОН 2 Пентан 11 46032 3 Ефір Тритурування 4 т-Бутил метиловій Кристалізація ефір Кристалізація 5 Ацетон/Пентан Із більш ніж 26 досліджених солей лише чотири солі утворювались у достатньо кристалічній формі пдрохлорид, оксалат, малеат та бензоат Нижче у Таблиці IV наведено величини поглинання вологи трьома із цих чотирьох солей Сіль З НСІ має найбільшу швидкість поглинання вологи і поглинає найбільшу її КІЛЬКІСТЬ, малеат має найнижчі показники Загалом, гігроскопічність є важливим, але не критичним фактором у виборі солі У виробництві можуть бути прийняті застережні міри для запобігання різноманітних факторів 3 іншого боку, за прочих рівних умов, непгроскопічній формі надається дуже велика перевага Для Сполуки 1а тот факт, що хлористоводнева сіль є дуже гігроскопічною, має велике значення, оскільки поглинання вологи знижує значення рН у мікросередовищі навколо твердої речовини, що призводить до утворення 1с, навіть у твердому стані Попередні дослідження показали, що перетворення 1а на 1с відбувається за низьких 12 Масляниста рідина Осад не утворюється Утворюється маслянистий осад значень рН Крім того, хлористоводнева форма погано перекристалізується без перетворення 1а на 1с Для фармацевтики високі точки плавлення є більш бажаними, ніж низькі, оскільки сполуки з високими точками плавлення звичайно мають більшу стабільність, як фізичну, так і хімічну, під час виготовлення фармацевтичних препаратів Як малеїнова, так і хлористоводнева сіль мають бажані з цієї точки зору характеристики Оксалатна сіль, хоч і має нижчу гігроскопічність, ніж пдрохлорид, не може бути одержана з постійним стехіометричним складом, що обмежує можливості и використання для розробки препаратів Крім того, існує значне занепокоєння стосовно токсичності щавлевої кислоти при її довгостроковому введенні пацієнтам (The Merck Index, 10 th Edition, Merck & Co, Inc , Rahway, New Jersey 1983 6784, та Gosselm R E та IH , Ed , Clinical Toxicology of Commercial Products Williams & Wilkms, Baltimore, 4L" Edition, 1976, розділ III 260-263) Таблиця IV Гігроскопічність солей Сполуки 1а Бензоат Оксалат Малеат Пдрохлорид Гігроскопічність (%мас Т)а Не визначалась 6,38+1,40 0,32 ± 0,02 27,77 ± 0,40 Точка плавлення (°С) 110 158 119 СДСК) 89 (ДСК)° Гігроскопічність при ВІДНОСНІЙ вологості, витримування при відносної вологості 81% протягом 16 днів у гофрованих чашках для ДСК 6 ДСК = диференційна скануюча калориметрія Дія температури, відносної вологості та світла на кристалічні солі 1а У Таблиці V нижче підсумовано результати дослідження стабільності найменш гігроскопічних кристалічних солей 1а Солі малеїнової та бензойної кислот було досліджено найбільш детально Ніякої зміни властивостей під дією 30°С/60% ТИЖНІ температури/вологості при проведенні прискорених випробувань на стабільність при 30°С/60% відносної вологості протягом 2 тижнів, виявлено не було, як малеат, так і бензоат залишались стабільними при 25°С/60% відносної вологості та при 30°С/60% відносної вологості Таблиця V Стабільність кристалічних солей 1а при зберіганні за умов прискореного старіння Малеат Бензоат Оксалат відносної вологості 2 О О Не визначалось Ксенон 26 годин О Е Е Флуоресценція 5,5 МІСЯЦІВ О Не визначалось Не визначалось Де Е = присутність 2 - 4% 1с Солі малеїнової та бензойної кислот було перекристалізовано із етилацетату та т-бутил метилового ефіру, ВІДПОВІДНО Опромінювання ксеноновим світлом проводили за допомогою пристрою Atlas SunChex при (0,4 ± 0,1)Вт/м2 Опромінювання флуоресцентним світлом проводили при 10764 ± 1076,4лк (1000 ± 100 фут-свічок) О - присутності Е не було виявлено Розчинність кристалічних солей 1с у воді Сполуки, такі як мускариновій агоніст 1а, що призначені для довгострокового перорального прийняття, звичайно мають кращу системну бюдоступність після перорального прийняття, якщо вони є легкорозчинними у воді Таким чином, розчинність у воді є ще одним фактором, що має ключове значення при визначенні придатної солі 1а Як показано у Таблиці VI, розчинність 13 46032 малеїнової солі 1а у воді приблизно у 15 разів більше, ніж бензойнокислої солі 1а Таблиця VI Розчинність у воді малешовокислого та бензойнокислого 1а Малеат Бензоат Розчинність у воді (мг/мл, 89 6 кімнатна температура) Як свідчать усі раніше наведені дані, малешовокисла сіль 1а є єдиною кристалічною сіллю, що відповідає усім критеріям, що задовольняють вимогам оптимального використання 1а у фармацевтиці Хоч малешовокислі солі широко використовуються у фармацевтиці, той факт, що лише малешовокисла сіль 1а із більш ніж 25 досліджених солей має бажані фізичні та ХІМІЧНІ властивості, що забезпечують можливість фармацевтичного застосування 1а, є зовсім несподіваним відкриттям ФІГУРА 1 Тест на селективність щодо ізомерів Для аналітичних цілей було проведено розділення Сполуки 1а від 1с за допомогою колонки Zorbax SCBN 5мкм розміром 4,6 х 250mm (PN 880975 905) на системі НР-1090 з трьома резервуарами для розчинників Умови проведення розділення були такими А = 80% 50мМ триетиламшу, доведеного до рН 3 за Рухома фаза ДОПОМОГОЮ Н3РО4 В = 10%CH 3 CN С = 10% МеОН Швидкість подання 1,5мл/хв рухомої фази Температура кімнатна Обсяг ін'єкції ЮОМКЛ ШВИДКІСТЬ випускання 83,3мкл/хв Фігура 1 зображує типовий приклад розділення зразка малеата 1а, що містить деяку КІЛЬКІСТЬ мелеата 1с Перший пік при З.Зхв викликаний протиюном малеата, а ПІКІ 11,3 та 13,0 спричинені 1а та 1с, ВІДПОВІДНО Така ідентифікація підтверджується даними ЯМР Хроматограма показує, що майже рівноважне співвідношення 1а до 1 с становить 85,5 14,5 ФІГУРИ 2 та 3 Вплив розміру часток Фігури 2 та 3 зображують різницю у порядку величин розміру часток для малешовокислої солі сполуки, перекристалізованої із етилацетату (Фігура 2), порівняно з продуктом, одержаним осадженням із ефіру (Фігура 3) Для Фігури 2 діапазон розмірів часток змінюється від 150 х Юмкм до менш ніж 10 х Юмкм, для осадженого із ефіру продукту на Фігурі 3, усі частки були менше ніж 10 х Юмкм Цей продукт утворюється, коли розчин сполуки у формі вільної основи у діетиловому ефірі змішують з розчином малеїнової кислоти у діетиловому ефірі Такий тип утворення солі in situ дозволяє одержувати дуже тонкодисперсні частки завдяки швидкому осадженню Продукт, одержаний осадженням із ефіру (Фігура 3), розчинявся у сорбованій з повітря волозі та через 2 тижня витримування в умовах прискорених випробувань на стабільність 14 40°С/75% відносної вологості - повертався до свого рівноважного співвідношення Z-та Е-оксимів (85%Z 15%Е) Продукт, одержаний перекристалізацією із етилацетату (Фігура 2), який описано у Таблиці II, був більш стабільним Ця підвищена стабільність форми продукту, одержаної кристалізацією із етилацетату, викликана, найбільш імовірно, відносно малою загальною площею поверхні більш великих перекристалізованих часток (Фігура 2) порівняно з меншими за розміром осадженими частками (Фігура 3) ФІГУРА 4 Біологічна активність Фігура 4 показує порівняння здатності оксалатної та малеатної солей 1а підвищувати результати тестування мишей з недостатністю ппокампа у водному лабіринті для мишей (дивись Jaen та ш , робота у Life Sci та посилання у ній для більш детального опису цього тесту) Цей тест визначає здатність сполуки скорочувати час, потрібний мишам для знаходження прихованої платформи у басейні з водою Графі к зображує резул ьтати д вох експериментів, кожен з яких проводився зі своєю власною контрольною групою Наведені дані демонструють, що оксалатна сіль Сполуки 1а, яку було раніше використано для визначення впливу 1а при проведенні тестування мишей у водному лабіринті, може скорочувати час, потрібний для знаходження платформи, приблизно на 18 секунд (при дозі 1 мг/кг) Використаний у якості позитивного контролю інгібітор ацетилхолінестерази такрин (ТНА) призводив до покращення приблизно на 27 секунд У окремій серії експериментів, малешовокисла сіль 1а при дозі 1 мг/кг призводила до покращення періоду латентності приблизно на 20 секунд, тоді як у контрольній групі, що одержувала такрин, покращення становило 24 секунди Ці дані демонструють, що малешовокисла сіль 1а не спричинює втрати біологічної активності порівняно з іншими дослідженими солями Для оцінки потенціалу малешовокислої солі сполуки щодо утворення поліморфних модифікацій, було досліджено кристалізацію у п'яти різних сумішах розчинників ізопропанол/етанол/пентан, етанол/пентан, етанол, хлороформ/пентан та дихлорметан/пентан Об'єм використаного розчинника, відсоток виходу, точка плавлення до перекристалізації та точка плавлення після перекристалізації наведені у Таблиці VI Для кожного із експериментів у Таблиці VI 1,0г малешовокислої солі оксиму сполуки розчиняли за звичайних умов у більш полярному із розчинників, що входить до суміші Після ЦЬОГО ПОВІЛЬНО додавали зростаючу КІЛЬКІСТЬ пентана доти, поки не з'являлись дрібні частки Після цього суміш запечатували та зберігали у холодильнику протягом ночі, після чого здійснювали холодну фільтрацію, споліскували пентаном, та піддавали дії високого вакууму Усі продукти були чистими за даними елементного аналізу та аналізу методом рідинної хроматографії високого тиску Було проведено рентгенівські дифракційні дослідження 15 46032 16 порошкоподібних зразків з цих партій, які матеріалу з більшим розміром часток, який має засвідчили, що малешовокисла сіль сполуки, більшу стабільність за умов проведення перекристалізована з різних розчинників, мала прискорених випробувань на стабільність одну й ту саму дифракційну картину і одну й ту Малешовокисла сіль, як було описано раніше, саму кристалічну форму Загалом, розчинники, які була ідентифікована як така, що має властивості, забезпечують повільну кристалізацію значно кращі за усі ІНШІ досліджені сольові форми малешовокислої солі, призводять до одержання Таблиця VI Суміш розчинників Ізопропанол - етанол пентан Етанол - пентан Етанол Хлороформ - пентан Дихлорметан - пентан Перекристалізація при кімнатній температурі Точка плавлення до Об'єм (мл/г) % виходу перекристалізації Точка плавлення після перекристалізації 202 77,2 116-119 116,6-118 125 50 32,5 13 85,8 50,1 83,1 64,5 116-118 116-118 116-118 116-118 118,5-121 114-118 118-119,5 118-120 Одержання малеата 1а може бути здійснено різними способами Наприклад, чистий ізомер 1а може бути одержаний методом хроматографії на колонці суміші 1а та 1с у співвідношенні приблизно 1 1, одержаної шляхом синтезу (США № 5306718, США №5346911, і Tecle та ш , Bio Org Med Chem Letters 1995(5) 631-636) Вільну основу 1а одержують типово у вигляді маслянистої рідини або маслянистої твердої речовини Цю вільну основу можна зберігати охолодженою до -4°С протягом кількох днів без помітного розкладу або ізомеризації до утворення 1с Приготування малешовокислої солі типово включає розчинення 1а у органічному розчиннику і додання розчину приблизно одного молярного еквівалента малеїнової кислоти у тому ж самому розчиннику Придатними для цього органічними розчинниками є, наприклад, розчинники-ефіри, такі як діетиловий ефір, тетрапдрофуран і т ін, етилацетат, ізопропілацетат т н , спиртові розчинники, такі як метанол, етанол, ізопропанол т н , вуглеводневі розчинники, такі як гексан, бензол, толуол і т ш , ті будь-які ІНШІ органічні розчинники, які не реагують з 1а Розчинники, яким надається перевага, включають діетиловий ефір, етилацетат і етанол У залежності від обраного розчинника, сіль або буде осаджуватись безпосередньо із органічного розчинника (такого як діетиловий ефір), або може бути виділена послідуючим доданням другого розчинника (таким як доданням діетилового ефіру або гексану до розчину солі у етанолі), або випарюванням розчинника при зниженому тискові Солі, одержані за цими методиками, звичайно мають кристалічні частки малого розміру Оскільки малий розмір часток призводить до підвищеної гігроскопічності, одержаний вихідний малеат 1а може бути перекристалізований із органічного розчинника або суміші розчинників, звертаючи при цьому увагу на використання розчинників, які не потребують нагрівання для розчинення солі Прикладами придатних для цього розчинників є етилацетат, ізопропанол і діетиловий ефір, хоч можуть бути використані і ІНШІ нереакційноздатні розчинники, включаючи воду та суміші води зі змішуваними з водою органічними розчинниками Температури проведення перекристалізації звичайно підтримуються на рівні кімнатної температури або нижче її для обмеження можливості ізомеризації оксиму У деяких випадках, таких як при використанні апротонних розчинників, таких як етилацетат, температура перекристалізації може бути вищою за кімнатну температуру За іншим варіантом, суміші вільних основ 1а та 1с з різним співвідношенням компонентів можуть бути перетворені на ВІДПОВІДНІ суміші малешовокислих солей за методиками, подібними до тих, що були описані раніше для чистого 1а, які можуть бути перекристалізовані із органічних чи водних розчинників або сумішей розчинників для одержання чистого малеату 1а Розчинники, придатні для проведення перекристалізації сумішей малешовокислих солей 1а/1с включають, наприклад, ізопропанол, етанол, хлороформ, дихлорметан, пентан, гексан, етилацетат і т ін ФІЗИЧНІ властивості малеату 1а мають вплив на його хімічну стабільність Важливою початковою подією при цьому є, мабуть, розпливання під дією атмосферної вологи Але розпливання під дією атмосферної вологи у великій мірі залежить розміру часток солі завдяки тому, що маленькі частки мають більшу площу поверхні, що контактує з вологою Крім того, забруднення малеату 1а, який має вищу точку плавлення, малеатом 1с з нижчою точкою плавлення сприяє розпливанню часток під дією атмосферної вологи Таким чином, підвищення стабільності твердого малеату 1а можна досягти шляхом зменшення КІЛЬКОСТІ домішкового ізомеру 1с та проведенням перекристалізацією малеату 1а таким чином, щоб забезпечити утворення кристалів з великим розміром часток ПРИКЛАД 1 Одержання [1 11] малешовокислої солі [R-(Z)]1-азабіцикло[2 2 1]гептан-3-он О-[3-(3метоксифеніл)-2-пропінил]оксиму Вільну основу азабіцикло[2 2 1]гептан-3-он О-[3-(3метоксифеніл)-2-пропінил]оксиму (1а) (6,8г, 0,025моль) розчиняли у ефірі Деяку КІЛЬКІСТЬ нерозчинної твердої речовини білого кольору відокремлювали на фільтрі та викидали 18 17 46032 Малеїнову кислоту (2,942г, 0,025моль) розчиняли 0,01) 3,36 (м, 5Н), 2,24 (м, 1Н), 1,75(м,1Н), у ефірі Розчин малеїнової кислоти по краплям ^С ЯМР (ДМСО-de) 5 26,0, 51,6, 55,7, 55,8, додавали до ефірного розчину вільної основи при 59,5, 62,4, 85,9, 86,3, 115,9, 116,8, 123,2, 124,3, енергійному перемішуванні Осад, що 130,4, 136,1, 158,6, 159,5, 167,6, утворюється, відокремлювали на фільтрі, сушили Елементний аналіз (C16H18N2O2 C4H4O4) у вакуумі при 40°С протягом 16 годин, одержуючи С, 62,17, Н, 5,74, N, 7,25, 8,93г (вихід 92%) малеату 1а, точка плавлення Знайдено С, 61,98, Н, 5,69, N, 7,14 116,5 - 118,0°С, [а]-10,7°(с = 0,646, МеОН), МассПРИКЛАД 3 Перекристалізація малеату 1а при +1 спектр m/z 272 (М ), 271, 174, 145, 109, 99, кімнатній температурі Малешовокислу сіль 1а (15,02г) розчиняли у ІЧ (КВг) 2926, 2237, 1697, 1618, 1606, 1576, 800мл абсолютного етанолу при перемішуванні за 1487, 1360, 1294, 1208, 1173, 1055, 1030, 1 звичайних умов Додавали пентан (500мл) 916,870,779см , 1 порціями по ЮОмл до початку візуального Н ЯМР (ДМСО-de) 5 7,31 (1Н, т, J = 7,7Гц), спостереження кристалізації Починалось швидке 7,00 (м, ЗН), 6,04 (с, 2Н), 4,92 (с, 2Н), 4,09 (дд, 2Н, утворення осаду білої кристалічної твердої J = 2,4Гц, J = 16,4Гц), 3,76 (с, ЗН), 3,52 (д, 1Н, J = речовини Суміш розводили додатковою порцією 0,001), 3,36 (м, 6Н), 2,24 (м, 1Н), 1,75 (м, 1Н), 13 600мл абсолютного етанолу при енергійному СЯМР (ДМСО-de) 5 26,0, 51,6, 55,7, 55,8, перемішуванні до одержання гомогенної суміші 59,5, 62,4, 85,9, 86,3, 115,9, 116,8, 123,2, Пентан (1,25л) додавали порціями до візуального 124,4, 130,4, 136,0, 158,5, 159,6, 167,6, спостереження кількох маленьких кристалів Елементний аналіз (C16H18N2O2 C4H4O4) Кристалізаційну колбу запечатували та залишали С, 62,17, Н, 5,74, N, 7,25, на ніч у морозильнику Знайдено С, 61,97, Н, 5,77, N, 7,15 БІЛІ кристали збирали фільтруванням під Аналіз методом рідинної хроматографії вакуумом та сушили у високовакуумнм печі високого тиску 100% 1а, час утримування = 6,18хв (приблизно 10мм ртст, 40°С) протягом 2 годин, (Колонка = Altech altima CN 4,5 х 150см, 5мкм, одержуючи 11,96г (вихід 80%) 1а у вигляді Рухома фаза = 15% МеОН AcCN (1 1) та 85% безбарвної кристалічної твердої речовини, точка 50ммоль розчину Et3N у НгО, 1,5мл/хв) плавлення 118 - 119°С Рідинна хроматографія ПРИКЛАД 2 Перекристалізація 1а із високого тиску 99,93% 1а, 0,07% 1с (Колонка = етилацетату Altech altima CN 4,5 х 150см, 5мкм, Рухома фаза = Малешовокислу сіль 1 а (0,6297г, 1,6ммоль) 15% МеОН AcCN (1 1) та 85% 50ммоль розчину розчиняли у 13мл киплячого етилацетату Після Et 3 NyH 2 O, 1,5мл/хв), охолодження до кімнатної температури 1 утворювались білі кристали Залишали суміш у Н ЯМР (400МГц, ДМСО-de) 5 7,31 (1Н, т, J = холодильнику на 14 годин Одержані білі кристали 7,7Гц), 7,04 - 7,00 (м, 2Н), 6,99 (с, 1Н), 6,06 (с, 2Н), відокремлювали на фільтрі, сушили під високим 4,93 (с, 2Н), 4,19 - 4,03 (м, 2Н), 3,77 (с, ЗН), 3,52 (д, вакуумом при 50°С, одержуючи 0,528г (вихід 84%) 1Н, J = 4,1 Гц), 3,45 - 3,29 (м, 4Н), 2,27 - 2,20 (м, перекристалізованого матеріалу, точка плавлення 1Н), 1,78-1,72 (м, 1Н)млн 1 , 118-119°С, Масс-спектр (хімічна іонізація) (М+1) = 271, ІЧ (КВг) 2926 (ш), 2237 (ш), 1697 (ш), 1575 (с), Рідинна хроматографія високого тиску 99,8% 1360 (с), 1293 (середи), 1207 (с), 1172 (середи), 1а, 0,2% 1с, (Колонка = Zorbax CN 4,5 х 250см, 1054 (середи), 1029 (середи), 960 (ш), 915 5мкм, Рухома фаза = 15% МеОН AcCN (1 1) та (середи), 871 (середи), 780 (середи), 755 (ш), 85% 50ммоль розчину Et3N у НгО, 1,5мл/хв, 685 (ш), 647 (ш), 584 (ш) см \ [а]-9,5° (с = 0,503, МеОН), Масс-спектр m/z ft +1 C ЯМР (100МГц, ДМСО-de) 5 167,67, 159,60, 272 (М ), 174, 145, 99, 82, 158,62, 136,19, 130,41, 124,37, 123,18, 116,82, ІЧ (КВг) 2926, 2237, 1697, 1618, 1606, 1576, 115,87, 86,33, 85,92, 62,40, 59,48, 55,79, 55,69, 1487, 1360, 1294, 1208, 1173, 1055, 1030, 51,58, 26,02 млн 1 916,870,779см1, 1 Елементний аналіз (C16H18N2O2 C4H4O4) Н ЯМР (ДМСО-de) 5 7,31 (1Н, т, J = 7,7Гц), С, 62,17, Н, 5,74, N,7,25, 7,00 (м, ЗН), 6,04 (с, 2Н), 4,92 (с, 2Н), 4,09 (дд, 2Н, Знайдено С, 62,27, Н, 5,86, N, 7,23 J = 2,4Гц, J = 16,4Гц), 3,76 (с, ЗН), 3,52 (д, 1Н, J = 19 20 46032 IIFI Фіг. 2 Фіг. З С - ЕОНфОПЬНІ ТВЦИНЛ, OfieptteftaKA HOCtt Т Н А И О Л Лаівчтмй пвріад 80 • Эи-апат Пвр05алв*ввавдвнііндо*і(иг/аг ЗО Ні) ФІГ. 4 ДП «Український інститут промислової власності» (Укрпатент) вул Сім'ї Хохлових, 15, м Київ, 04119, Україна (044)456-20- 90 ТОВ "Міжнародний науковий комітет" вул Артема, 77, м Київ, 04050, Україна (044)216-32-71