Спосіб одержання біологічно активної речовини для профілактики і лікування патологічних станів, спосіб одержання фармакологічної композиції на основі біологічно активної речовини та спосіб лікування злоякісних

УКРАЇНА (19) U А «о 22549 (13) А (5і)б А 61 К 35/78 ОПИС ДО ПАТЕНТУ ДЕРЖАВНЕ ПАТЕНТНЕ ВІДОМСТВО НА ВИНАХІД без проведення експертизи по суті на підстав! Постанови ВерховноТ Ради України N* 3769-ХМ від 23.ХІІ. 1993 р. Публікується в редакції заявника (54) СПОСІБ ОДЕРЖАННЯ БІОЛОГІЧНО АКТИВНОЇ РЕЧОВИНИ ДЛЯ ПРОФІЛАКТИКИ І ЛІКУВАННЯ ПАТОЛОГІЧНИХ СТАНІВ, СПОСІБ ОДЕРЖАННЯ ФАРМАКОЛОГІЧНОЇ КОМПОЗИЦІЇ НА ОСНОВІ БІОЛОГІЧНО АКТИВНОЇ РЕЧОВИНИ ТА СПОСІБ ЛІКУВАННЯ ЗЛОЯКІСНИХ ПУХЛИН ЗА ДОПОМОГОЮ ФАРМАКОЛОГІЧНОЇ КОМПОЗИЦІЇ 1 (21)97063373 (22) 27.06.97 (24)17.03.98 (46) 30.06.98. Бюл. Ns З (47)17.03.98 (72) Атаманюк Віктор Петрович, Новік Анатолій Матвійович (73) Атаманюк Віктор Петрович, Новік Анатолій Матвійович (57) 1. Способ получения биологически активного вещества для профилактики и лечения патологических состояний, в котором в качестве растительного сырья используют зеленые части злаковых растений семейства Gramirteae, включающий выделение водорастворимых фракций и фильтрацию, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что в качестве сырья используют зеленые части растений семейства Gramineae в виде смеси растений рода Calamfgrostis Adans и рода Deschamsla Beauv, собранных после выметывания до начала цветения колосков, которые сначала сушат до содержания влаги 8-20%, выделение водорастворимых фракций проводят путем экстракции 92-99,8% этиловым спиртом при весовом соотношении сырья к спирту 1: (3-8), выдерживают при температуре 1847°С без доступа воздуха и при достижении показателя преломления 1,362-1,364 очищают от твердых примесей до получения конечного продукта. 2. Способ по п.1, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что смесь злаковых растений берут в следующем соотношении, вес.%: Catamfgrostls Adans 40-60 Deschamsia Beauv 60-40 3. Способ получения фармакологической композиции на основе биологически активного вещества, включающий смешивание вещества с носителем непосредственно перед введением, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что смешивание биологически активногр вещества с носителем осуществляют при соотношении (1:100)-{1:10 000). 4. Способ по п.З, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что в качестве носителя для орального введения фармакологической композиции используют дистиллированную воду, а смешивание биологически активного вещества с носителем осуществляют при соотношении 1:(3-10000). 5. Способ по п.З, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что в качестве носителя для местного введения фармакологической композиции используют димексид, а смешивание биологически активного вещества с носителем осуществляют при с о о т н о ш е н и и ( 1 6. Способ по п.З, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что в качестве носителя для внутримышечного введения фармакологической композиции используют изотонический раствор натрия хлорида для инъекций или раствор Рингера-Локка, а смешивание биологически активного вещества с носителем осуществляют при соотношении 1:{ 10-20). 7. Способ по п.З, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что в качестве носителя для внутривенного введения фармакологической композиции и с п о л ь з у ю т г е м о д и н а м и ч е с к и е растворы или гемодез, а смешивание биологически активного вещества с носите С > ел 22549 лем осуществляют при соотношении 1:(4,5100). 8. Способ лечения злокачественных новообразований с помощью фармакологической к о м п о з и ц и и , полученной по п.З, включающий введение пирогенного препарата, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что сначала вводят пирогенный препарат и после проявления его действия осуществляют введение фармакологической композиции. Изобретение относится к фармакологии и касается способа получения и применения фармакологической композиции для лечения и профилактики онкозаболеваний, воспалительных, аутоиммунных, иммунодефицитных заболеваний. Основным компонентом новой фармакологической композиции является биологически активное вещество (БАВ), полученное из растительного сырья. В фармакологии широко известны способы получения различных БАВ из растительного сырья путем их выделения обычно методом экстракции водо- и жирорастворимых компонентов [Авт.св. СССР (SU) № 1228860,05.07.86]. В известном аналоге приводится способ получения экстрактов из растительного сырья путем последовательного экстрагирования 96% этиловым спиртом, трихлортрифторатаном, глицерином и дистиллированной водой при перемешивании и нагревании. Однако, несмотря на сложную многоступенчатую схему, в результате осуществления которой выделяется большой комплекс БАВ неспецифического назначения, этот способ не позволяет целенаправленно экстрагировать избирательно действующие вещества требуемой группы. Наиболее близким к заявляемому является с п о с о б , о п и с а н н ы й в заявке PCT/AU91/00039, кл. А 61 К35/78, опублик. в ИЗР 14-6, 1992, где представлена схема получения БАВ и способ получения фармакологической композиции на основе БАВ для лечения патологических состояний; опухолей, вирусных инфекций, в частности герпеса, путем внутримышечного, внутривенного или местного введения. В качестве сырья используют зеленые части злаковых растений семейства Gramineae (например: ячмень, пшеница, и гибрид ячменя и ржи-triticale), собранные в определенный период вегетации - до образования узлов на стебле, которые обрабатывают до получения сока. Выделение водо- и жирорастворимых фракций осуществляют центрифугированием в течение двух часов с последующей очисткой путем ультрафильтрации. Полученное БАВ стабилизируют в два этапа: сначала путем сгущения, или с помощью распылительной (сублимационной) сушки, а затем вводят специальный консервант - стабилизатор. Полученное БАВ смешивают с фармакологически приемлемым жидким носителем в определенных сотношениях до получения фармакологической композиции. . Несмотря на проведение множества операций, требующих высокотехнологичного оборудования и специальных реактивов, полученная известная фармакологическая композиция, хогя и обладает специфической противоопухолевой активностью, однако активность этой композиции при дозировке соответствующей половинной концентрации относительно низкая - продолжительность жизни обработанных животных процент торможения - на 31 % больше, чем у необработанных животных контрольной группы. Фактов полного рассасывания опухолей (полных ремиссий) не обнаружено. При лечении патологических состояний известен способе использованием пирогенного эффекта в крови, например, путем введения пирогенала [ М а ш к о в с к и й М.Д. Лекарственные средства. - 4.2. - Кишинев. -1990]. Однако известно, что специфическая активность как пирогенала. так и эндогенных пирогенов. низкая. Кроме того, отсутствуют точные данные о том. является ли пирогенный эффект сам по себе, положительным или отрицательным для организма [Физиология человека/Под ред. Р.Шмидта, Г.Тевса, - М.: Мир. -1996. - С . 684]. В основу изобретения поставлена задача разработать простую технологию выделения в-ысокостабильного БАВ из растений семейства Gramineae, а также получить фармакологическую композицию для местного, орального и парентерального введения с высоким лечебным эффектом, в частности, для лечения злокачественных новообразований. Положительный результат при сравнений с известными аналогами заключается в следующем 5 10 15 20 25 30 35 40 45 22549 - использование растений определенного рода из семейства Gramineae и определение конкретного периода вегетации для сбора растений, а также выделение водорастворимых компонентов и очистка 5 от твердых примесей при разработанных приемах и условиях значительно упрощают технологию получения высокостабильной формы БАВ без дополнительных обработок; 10 - создание фармакологической композиции для различных форм введения, обладающей высоким лечебным эффектом; - разработка нового более эффективного способа лечения злокачественных ново- 15 образований, в частности, значительно повышающего процент торможения и снижающего среднюю массу опухолей. В соответствии с настоящим изобретением БАВ получают по следующей схеме. 20 В качестве сырья используют растения семейства злаковых Gramineae, рода Calamagrostts Adans и рода Deschamsla Beauv, в следующем соотношении, в вес.%: Calamfgrostis Adans 40-60 25 Deschamsia Beauv • 60-40 Сбор этих растений осуществляют в конкретный период вегетации: после выметывания колосков до начала цветения собирают надземные части указанных растений. Со- 30 бранные растения сушат отдельно до тех пор, пока влажность сырья не станет равной 8+20%. Высушенное сырье, взятое в соотношении, по весу, 40-60% Caiamagrostis Adans и 60-40% Deschamsla Beauv помеща- 35 ют в сосуд с возможностью герметизации. Выделение водорастворимых компонентов -экстракцию осуществляют 92*99,8% спиртом (этиловый ректификованный), который заливают в сосуд при соотношении по весу 40 сырья к экстрагенту от 1:3 до 1.8. После смачивания сырья производят герметизацию сосуда с целью исключения доступа воздуха. Экстракцию проводят путем мацерации в затемненном сосуде при термостэ- 45 тировании - температура 18-*-47°С, и контроле за показателями переломлення экстракта. Процесс прекращают, когда значение показателя преломления экстракта достига- 50 ет 1,362 + 1,364. Экстракт дополнительно контролируют по весу сухого остатка, который должен составлять (1.2±0,1)%. Затем экстракт сливают через стеклянный крупнопористый фильтр в посуду для хранения. 55 Полученное БАВ является высокостабильным средством. Для получения фармакологической композиции БАВ смешивают с носителем в соо т н о ш е н и и (1 00—1):(1 — 10000). Выбор носителя и соотношения БАВ к носителю определяют, исходя из формы введения полученной фармакологической композиции. Так, в частности: - для орального введения фармакологической композиции используют дистиллированную воду, а смешивание биологически активного вещества с носителем осуществляют при соотношении 1:(3—10000); - для местного введения фармакологической композиции используют димексид, а смешивание биологически активного вещества с носителем осуществляют при соотношении (1-100):(100-1); - для внутримышечного введения фармакологической композиции используют изотонический раствор натрия хлорида для инъекций или раствор Рингера-Локка. а смешивание биологически активного вещества с носителем осуществляют при соотношении 1:(10-20); - для внутривенного введения фармакологической композиции используют гемодинамические растворы или г е м о д е з , а смешивание биологически активного вещества с носителем осуществляют при соотношении 1:(4,5-100). Новый способ лечения злокачественных новообразований с помощью фармакологической композиции, полученной по разработанной схеме, включает введение пирогенного препарата, и после проявления его действия введение новой фармакологической композиции. Исследование получаемой в соответствии с изобретением фармакологической композиции показывает достигаемый лечебный эффект, а именно: процент торможения опухолей повышается до 47% передняя масса опухолей снижается на 42%. Предложенный новый способ лечения злокачественных новообразований с использованием пирогенного эффекта на основе получаемой фармакологической композиции, которая позволяет повысить процент торможения опухолей до 69,6-92,3% и снизить среднюю массу опухолей на 87,2%. Зафиксированы факты полной ремиссии. Сравнение нового способа и известных аналогов показывает сходство и различие между ними. Сходными признаками являются следующие: - использование в качестве сырья для получения БАВ зеленых частей растений из семейства Gramineae в качестве сырья: - выделение водорастворимых фракций и фильтрация; - смешивание полученного БАВ с носителем для получения фармакологической композиции; 22549 - для лечения злокачественных новообразований введение пирогенных препаратов. Отличительными признаками являются следующие: 5 - для получения БАВ использование к о н к р е т н о г о рода р а с т е н и й из рода Gramineae, а именно смесь Calamagrostis Adans и Deschamsla Beauv, причем выбирают для сбора определенный период вегета- 10 ции - зеленые части растений, собранные после выметывания до начала цветения колосков; - сушка перед выделением водорастворимых фракций до влажности сырья 8-20%; 15 - выделение водорастворимых фракций путем экстракции 92-99,8% этиловым спиртом при весовом соотношении сырья к спирту 1 :(3—8), при поддержании температурного режима 18-47°С без доступа воздуха при 20 постоянном контроле показателя преломления экстракта и при Значениях его 1,362J , 3 6 4 о ч и с т к а фильтрацией твердые примеси; - использование для получения фарма- 25 кологических композиций различных известных носителей в зависимости от формы введения, которые смешивают с БАВ в определенных соотношениях; - для лечения злокачественных новооб- 30 разований новую фармакологическую композицию вводят после проявления действия пирогенного препарата. Новый способ получения БАВ при осуществлении всей совокупности операций 35 обеспечивает получение следующего положительного эффекта: - выделение стабильного вещества при значительном упрощении технологии, которое заключается в использовании простых 40 методов выделения водорастворимых функций путем экстракции, а также путем очистки при фильтрации твердых примесей вместо ультрафильтрации в прототипе; - сокращение количества проводимых 45 операций (три простые операции вместо четырех сложных). Новый способ получения физиологической композиции предопределяет достижение высокого лечебного эффекта: при 50 использовании полученной композиции процент торможения до 47% вместо 31 % у прототипа. Новый способ лечения злокачественных новообразований еще более усилива- 55 ет действие фармакологической композиции: процент торможения повышается до 69-92%, кроме того увеличивается количество ремиссий, которые не достигались при использовании фармако 8 логической композиции, полученной по способу-прототипу. П р и м е р 1. Получение БАВ. Неизмельченное сырье,- высушенное до 14% содержания влаги, берут в количестве: Calamagrostis Adans - 500 г (50%) и Deschamsia Beauv - 500 г (50%) и помещают в мацерационный бак. Сырье заливают спиртом этиловым ректификованным 96% (ГОСТ 5962-67), нагретым до температуры экстракции ЗО°С с количестве 4900 мл ± 1 % , соотношение по весу 1:4. После полного смачивания сырья мацерационный бак герметизируют и термостатируют при температуре 30°С. Экстракцию при настаивании (мацерации) производят при контроле показателя преломления (П°20). При достижении значения показателя преломления равного 1,362-» 1,364 мацерацию прекращают. Производят контроль веса сухого остатка, этот показатель равен 1,2%. Готовый экстракт сливают через стеклянный крупнопористый фильтр. При температурах хранения +15 -*• 40°С в затемненной упаковке полученный экстракт является стабильной формой БАВ. П р и м е р ы 2,3. БАВ получают в соответствии с описанным в примере 1 способ о м , но в режимах и при условиях, указанных в табл. 1. Полученное БАВ - это жидкость темнозеленого цвета, горьковатого вкуса. С равным объемом воды образует м у г ь с выпадением хлопьевидного осадка зеленого цвета. Содержание спирта составляет (52±2)% по обьему Определение проводят по фармакопейным методикам. Определение признаков, характеризующих подлинность БАВ, производят с использованием физико-химических методов анализа: спектрофотометри^, метода тонкослойной хроматографии, метода высокоэффективной жидкостной хроматографии. Для проведения спектрофотометрии в видимой и ультрафиолетовой области спектра 1 мл БАВ помещают в мерную колбу вместимостью 25 мл доводят объем раствора спиртом этиловым абсолютированным для спектроскопии до метки и перемешивают. Видимый и ультрафиолетовый спектр поглощения полученного раствора в области от 210 до 720 нм должны иметь максимумы при длинах волн, 272±2 нм, 332±2 нм, 372±2 нм, 415±2 нм, 540±2 нм, 615 ± 2 нм, 668+нм и плечо от 457±2 нм до 485±2 нм (фиг.1). 22549 Тонкослойную хроматографию БАВ осуществляют на хроматографической пластине "Сифулол". На л и н и ю старта хроматографической пластины размером 3x15 см 2 наносят 2 мкл БАВ. Пластинку сушат на воздухе в течение 5 мин, затем помещают в колбу со смесью растворителей хлороформ-этиловый спиртбензол (9:1:5) и хроматографируют восходящим с п о с о б о м (смесь растворителей заливают в камеру непосредственно перед хроматографированием). Когда фронт растворителей пройдет 10 см от линии старта, пластинку вынимают из камеры, сушат в вытяжном шкафу в течение 10 мин и просматривают в УФ-свете при длине волны 360 нм, при этом на хроматограмме должно появиться 2 пятна, флюоресцирующие сиреневым цветом и 5 пятен п р и о б р е т а ю т желто-зеленую окраску в видимом свете. Одновременно, при тех же условиях, хроматографируют раствор смеси стандартных образцов рутина и кверцетина. При сравнении хроматограмм БАВ и смеси упомянутых веществ первые два пятна должны иметь одно и то же значение Rf (фиг.2). Хроматограмма БАВ, полученная методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (хроматограф W a t e r s 600), представлена на фиг, 3. Условия хроматографирования следующие: - колонка размером 150x2 мм 2 , заполненная сорбентом Nova-Pak C 1 8 с размером частиц 4 мкм (фирма Waters) или аналогичная; - подвижная фаза - метанол, элюируется с постоянной скоростью 0,3 мл/мин; - температура колонки 2С^С; - масштаб регистрации - 0,15 единиц оптической плотности. С целью подтверждения стабильности свойств, БАВ во времени проведено тестирование пяти производственных серий. Результаты обобщены в табл,2, из которой следует, что в течение 15 месяцев описательные и основные физико-химические свойства всех пяти серий БАВ соответствуют описанным выше. Фармакологическую композицию получают по схеме,описанной: - для орального введения - в примерах 4.5,6.7 (табл.3); - для местного введения - в примерах 8,9,10 (табл.4); -для внутримышечного введения-примерах 11,12,13 (табл. 5); - для внутривенного введения - в примерах 14.15,16,17 (табл. 6). Отнесение БАВ к определенному клаосу безопасности осуществляют на основании 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 10 материалов тестирования при трех возможных путях введения в организм. Лимитирующим является ингаляционно-токсическое действие - 3-й класс. При других путях введения (оральном, внутрибрюшинном, внутримышечном, внутривенном) БАВ действовало как мало опасное вещество с умеренно токсическими свойствами (4-й класс). Среднелетальная доза (LD50) при .парентеральном введении белым мышам составляла от 180мг/кгдо350 мг/кг, а белым крысам от 170 мг/кг до 300 мг/кг. Полученное значение коэффициента междуєидовой чувствительности (0,85 - которое меньше единицы) свидетельствует о возможности междувидовой экстраполяции полученных показателей токсичности. БАВ по результатам тестирования отнесена к веществам со средней степенью проявления кумуляции. Срок проявления апогея острой токсичности ограничен 48 часами с момента апликации. Выявлено, что при тест-дозе, равной 0,2мл,(внутрибрюшинное введение) не наблюдалось гибели животных в течение 40 часов. Эта доза служила базовой для последующих тестов на хроническую токсичность. Кроме того, при сравнении разных образцов БАВ не выявлено отличий между ними за их токсикологическими свойствами и характером реакций-ответов. По результатам тестов на хроническую токсичность определена максимально переносимая доза при многократном введении, а именно на уровне доз составляющих 0,1 от среднелетальной дозы (LD50). Кроме того, определен показатель порога хронического приспособительно-физиологического действия (Llm хрон.) БАВ, который равен дозе 90 мг (0,1 мл) на килограмм массы тела. Указанная доза я вляется базовой при определении специфических эффектов влияния. За результатами тестирования, БАВ не отличается по д е й с т в и ю на ж и в о т н ы х при парентеральных и пероральном путях введения. Выбор носителя и соотношение БАВ к носителю проводят путем тестирования, на острую и хроническую токсичность по известным методикам. Оральное введение. Приготовление БАВ для орального введения'осуществляют перед применением ex tempore и в качестве носителя выбирают дистиллированую воду. Необходимую дозу фармакологического средства смешивают с дистиллированной водой в соотношении (по обьрму) от 1:3 до 1:10000. Нижний предел соотношения определяется разведением со 22549 хракяющим стабильность фармакологической композиции. Верхний предел соотношения (1.10000) определяется возможностью терапии биотическими или гомеопатическими дозами. • 5 П р и м е р 4. Рекомендованная доза БАВ для приема в целях профилактики, т.е. 0,1 от порогового значения дозы для хронического введения (0,1 от Llm хрон.), составляет 1 мл (45 капель) в сутки. Разовую дозу 10 (15 капель) готовят для приема путем разведения не менее, чем водном миллилитре дистиллированной воды при соотношении по объему V.3. Разведение осуществляют перед применением ex tempore. 15 П р и м е р 5. Приготовление для приема в биотических дозах осуществляют следующим образом: в одном миллилитре 45 капель. При соотношении 1:10000 одну каплю БАВ добавляют к 223 мл дистиллированой 20 воды и взбалтывают до равномерного растворения. П р и м е р 6. Проводят аналогично описанию примера 5, однако соотношение • БАВ к носителю берут 1:5000. 25 П р и м е р 7. Для определения специфического иммуностимулирующего действия фармакологической композиции на сурфактантную систему легких готовят тестдозы для мышей: LD50, 0,5, LD50, 0,1 LD50, 30 Llm ас исходя из того, что LD50 = 9435 мг/кг или 1,2 мл на 100 г веса. Введение осуществляют орально, причем выбранную дозу фармакологической композиции разводят носителем - дистиллированной водой в со- 35 отношении 1:10. Спустя 12 и 24 часа после введения фармакологической композиции определяют показатели содержания альвеолярных макрофагов (МФ), пользуясь известными мето- 40 ділками. Результаты приведены на фиг.4. Данные, представленные на фиг.4, показывают, что количество альвеолярных макрофагов увеличивается при введении меньших доз, по сравнению с LD50, фэрмакологиче- 45 ской композиции. При введении доз на уровне Limac количество МФ по сравнению с контролем возрастает на 10%, т.е. происходит стимуляция неспецифического иммунитета. 50 Местное введение. П р и м е р 8. При приготовлении раствора для компрессов используют 10% димексид. Производят забор димексида в количестве {по объему) 50% от необходимо- 55 го объема для приготовления апликации. Далее добавляют 50% БАВ (соотношение 50:50) и взбалтывают до равномерного растворения. 12 Соотношения по смешиванию БАВ с димексидом при различных локализациях патологического процесса обобщены в табл.4. П р и м е р ы 9,10. Для накожного применения используют соотношение от 100:1 до 50:50, а при локализации патологического процесса во внутрикожном и/или подкожном слоях используют соотношение от 50:50 до 1:100, причем % содержание димексида 10, 50, 100% определяют в соответствии с инструкцией по применению для конкретной локализации патологического процесса. Внутримышечное введение. П р и м е р ы 1 1 - 1 3 (табл.5). При приготовлении фармакологической композиции для внутримышечного введения в качестве носителя выбирают раствор натрия хлорида изотонический для инъекций (пример І1,13) или раствор Рингера-Локка (при мер Ї2). Раствор для внутримышечного введения готовят перед введением (ex tempore), для чего необходимое количество БАВ смешивают с носителем в соотношении по объему 1:10 (пример 11), 1:15 (пример 12), 1:20 (пример 13) и взбалтывают в шприце до полного растворения. Нижний предел разведения (1:10) определяют ограничениями физиологии на количество срдержание спирта в растворе для внутримышечного введения. Верхний предел разведения (1:20) определяют ограничением количество жидкости допустимого для внутримышечного введения. Внутривенное введение. П р и м е р ы 14-17 (табл.6). При приготовлении фармакологической композиции для внутривенного введения в качестве фармакологически приемлемого носителя выбирают: - амические растворы, например, реополиглюкин (Rheopolyglucinum) или полиглюкин (Polyglucinum) или реоглюман (Rheoglumanum) или гемодез (Haem odes urn). Разведение фармакологического средства с носителем осуществляется в соотношении пообьему от 1:4,5 до 1:100 перед введением (ex tempore). Нижний предел разведения (1:4,5) обусловлен ограничителями физиологии на содержание с п и р т а в растворе для внутривенного введения. Верхний предел разведения (1:100) определяется ограничениями по количеству жидкости, допустимому для разового внутривенного введения капельным путем (путем капельной инфузии). Пример 14. Производим забор в шприц 0,1 мл БАВ. Далее в тот же шприц производим забор реополиглюкина в коли 13 225*9 честве 1 мл (соотношение 1:10), взбалтываем до равномерного растворения. Приготовление фармакологической композиции для внутривенного введения с реополиглюкином. Перед введением в шприц 5 производят забор БАВ в соотношении к реополиглюкину 1:10 по схеме, описанной ниже (от 0,1 мл"доО,8 мл) далее в тот же шприц производят забор реополиглюкина (от 1 мл до 8 Mfl)(Rheopolyglueinum). 10 Смесь взбалтывают до равномерного растворения. Исходя из результатов тестирования на токсичность целесообразно применять схему введения с нарастающими дозировками. В этом случае раствор для вве- 15 дения в конкретном примере соотношения 1:10 готовят каждый раз перед введением по схеме: 1-й день - 0,1 мл фармакологического средства + 1 мл реополиглюкина. 20 2-й день - 0,2 мл фармакологического средства + 2 мл реополиглюкина. с 3-го дня по 7-й день ежедневное увеличение фармакологического средства на 0,1 мл, а реополиглюкина на 1 мл. 25 8-й день - 0,8 мл фармакологического средства + 8 мл реополиглюкина, с 9-го дня по 14 день дозировки такие же, как на 8-й день. П р и м е р 15. Приготовление фармако- 30 логической композиции осуществляют по схеме, описанной в примере 14, но соотношение к реополиглюкину берут 1:4,5. П р и м е р 16. Приготовление фармакологической композиции для введения с ге- 35 модезом путем капельной инфузии. В подготовленный для капельного введения флакон с гемодезом (Haemodesum) емкостью 500 мл вводится шприцом рекомендованное количество БАВ, 5 мл исходя 40 из расчета 0,1 мл на 50 кг веса, (соотношение 1:100). Флакон взбалтывается до равномерного растворения БАВ в гемодезе и далее производится введение по методике принятой для капельного введения гемодеза 45 П р и м е р 17. Приготовление фармакологической композиции осуществляют по описанию примера 16, но соотношение БАВ к носителю берут 1:50. С целью повышения специфической 50 противоопухолевой активности целесообразно применение полученного в соответствии с настоя щим изобретением фармакологической композиции в сочетании с пирогеналом (Pyrogenalum). Причем 55 пирогенал применяют по известной схеме в соответствии с инструкцией на пирогенал. После введения пирогенала, спустя 3-4 часа необходимые для возникновения пирогенного эффекта вводят фармакологическую 14 композицию в физиологически приемлемых дозировках, определенных из тестов по хронической токсичности. Приготовление фармакологической композиции для введения в ткани тела и/или сосуды осуществляют способами, описанными в настоящем изобретении. П р и м е р 18 (табл. 7). Тесты на специфическую активность выполнены на 80 лабораторных крысах-самцах массой тела 130±10 г, которым по стандартной методике подкожно в области правого бедра задней конечности перевивали карцином Герена в виде 20%-ной взвеси опухолевых клеток в физиологическом растворе, полученной из десятидневной опухоли, освобожденной от капсул сосудов и соединительнотканных прослоек. Животных разделяют на четыре группы по 20 крыс: 1. Опухолевый-контроль - без введения каких-либо препаратов. 2. На девятые сутки после перевивки, с появлением пальпируемых опухолей, начат курс введения фармакологической композиции, полученной в соответствии с настоящим изобретением. 3. На девятые сутки после перевивки, с появлением пальпируемых опухолей начат курс введения пирогенала внутримышечно (в левую заднюю конечность из расчета 0,1 мл на крысу). 4. На девятые сутки после перевивки вводят пирогенал и спустя три часа фармакологическое средство. Введение осуществляют внутрибрюшинно, вводят 1,8 мл смеси БАВ с дистиллированной водой в соотношении 1:4,8. Курс введения продолжается до 20 суток после перевивки (всего было сделано.7 инъекций животным второй и третьей групп и 14 инъекций животным четвертой группы). На 21-е сутки тестирования все животные были забиты, а опухоли выделены и взвешены. Динамика роста объемов опухолей по группам и средние массы опухолей на 21-е сутки представлены в табл. 7. Как видно из табл. 7, во второй,третьей и четвертой группах получено отчетливое торможение роста опухоли (карциномы Герена) относительно медленного контроля, выразившееся в более медленном росте опухолей и в уменьшении средней их массы на 21-е сутки тестирования. Во второй группе полная ремиссия (рассасывание) опухолей не была достигнута ни у одного животного, в третьей группе полная ремиссия достигнута у двух крыс из 20, т.е. в 10% случаев, а в четвертой группе полная ремиссия достинута у 12 крыс из 20-ти, т.е. в 60% случаев. 16 22549 15 на 67,2%, т.е. в 3,0 раза, а под влиянием Процент торможения роста карциномы Герена при введении фармакологического комбинации пирогенала и фармакологичесредства колебался к пределах 63% (3-й сутской композиции на 87,2%, т.е. в 7,8 раза. ки); 34 (5-е сутки); 47,1% (7-е сутки); 30,4% (10-е сутки). При введении пирогенала соотТаким образом, по всем использованветствующие значения торможения роста ным критериям специфическая активность опухоли составили: 69,6%; 90,3%; 80,8%, повышается при сочетанном применении 70,0%, при сочетанном введении пирогенаполученного в соответствии с настоящим ла и фармакологической композиции: изобретением фармакологической компози69,6%, 92,3%, 90,0%, 90,4%. 10 ции и пирогенала. Описанное в настоящем примере сочетзнное применение дает высоСредняя масса опухолей на 21-е сутки кий стабильный процент торможения роста тестирования снизилась под влиянием ввеопухоли и максимальный выход полных редения фармакологической композиции на с миссий. 42,0% (в 1,7 раза), под влиянием пирогенала Таблица 1 Условия режимов Пример 2 1 3 40 60 Количество Calamag. Adans. % 50 Количество Descham. Beauv, % 50 60 40 Влажность сырья, % 20 8 14 Весовое соотношение сырья и спирта 1:4 1:8 1:3 Этиловый спирт, об. % 96 92 99,8 Температура, °С 30 18 47 1,362-1,364 1.362-1,364 1,362-1,364 Показатель преломления экстракта • Таблица 2 серии Дата изготовления Время проверки Описание Подлинность Спектрофотометрия тех Соответ- Соответ- Соответствует ствует ствует Тоже Тоже Тоже 12.95 12.95 через 3 мес. через 6 мес. через 9 мес. через 1 год через 1 год 3 мес. 12.95 12.95 через 3 мес. через 6 мес. через 9 мес. через 1 год через 1 год 3 мес. Рефрактометрия 1,363 1,364 1,362 1,364 1.363 1.363 1.362 1,363 1,364 1.363 1,363 1.363 Спирт, об. % Сухой остаток, 50 50 50 50 50 50 51 51 51 51 51 51 1.2 1,2 1.2 1.2 1,2 1.2 1.1 1.1 1.1 1.1 1.1 1.1 17 18 22549 Продолжение табл. 2 fsfe Дата изсерии готовления 3 12.95 Время проверки 12.95 через 3 мес. через 1 год 3 мес. 12.95 * 12.95 через 3 мес. через 6 мес. через 9 мес. через 1 год через 1 год 3 мес. 5 12.95 Подлинность Спирт, тех об. % Спект Рефрактомет рофотометрия через 6 мес. через 9 мес. через 1 год 4 Описание 12.95 через 3 мес. через 6 мес. через 9 мес. через 1 год через 1 год 3 мес. Тоже То же „ » _ _ » „ -"_«— и н » Щ 1 > _»| и II __и и я -••_ и - " 53 53 1.3 1.3 53 53 1.3 1.3 52 53 1.3 1,3 51 50 50 50 50 1,2 Г,2 1.2 1.2 1.2 50 1.2 - " 1.364 1,364 и - " _••_ _••_ _»_ и п я и _«_ н 1.2 1.2 1,363 _«_ •»__ 50 50 _"_ ••_ и _ _"— 1,2 1,363 1,362 1,362 _»_ _ ч 1,2 1,2 50 50 1,363 1,362 - " 50 1,363 1.362 t,2 1,363 - " - " _ 50 1,363 1.363 1.362 _ » _ - " _ " % рия Соответ- Соответ- Соответствует ствует ствует То же _»_ Сухой остаток, ' 1,363 1.363 1.363 1.363 Таблица 3 Способ введения Наименование носителя Соотношение по примеру 4 5 6 7 Оральный Д истилл ирован ная вода 1:3 1:10000 1:5000 1:10 I Таблица 4 Способ введения Наименование носителя Местный Димексид Соотношение по примеру 8 (внутрикожнап) 9 (накожная) 10 (подкожная) 50 50 100:1 1:100 20 22549 19 Таблица 5 Способ введения Внутримышечный Соотношение по примеру Наименование носителя Изотонический раствор хлорида натрия для инъекций • 11 12 13 1:10 1:20 Раствор РингераЛокка 1:15 Таблица 6 Способ введения Внутривенный Соотношение по примеру Наименование носителя Гемодинамический раствор Гемодез 14 15 1:10 16 1:4,5 17 1:50 1:100 Таблица 7 Объемы опухолей К-во крыс До введ. 20 20 Масса опухолей 0,8±0,03 3-й сутки 6,7±0,9 5-е сутки 39,1 ±4,2 7-е сутки 53,7±5,1 10-е сутки 73,1 ±6,7 41.16±3,3 2,47 ±0,3* 2,1 ±0,2* 25,9±2.2* 20 0.8+0,04 0,7 ±0,02 3,8±0,9* 28,4 ±1,9* 10,3±0,9* 50,8±6.1* 22 ±2,1* 24±2,8* 13,5±2* 20 0,7±О,03 2,1 ±0,3* 3,1 ±0,5* 5,2 ±0,6* 7,1 ±0,7 5,25±1,4* * Отличие от контроля достоверно. Единицы оптической плотности ю к> ел да 22549 ФИГ. 2 о о иіооншіш исоюэьтио 22549 -зо . 1/2 LD 50 • 1/10 LO 50 ї : 9иг ч. Упорядник Замовлений 4493 Техред М.Келемеш • Доза препарата Коректор О. Обручар Тираж Підписне Державне патентне відомство України, 254655, ГСП, Київ-53, Львівська пл., З Відкрите акціонерне товариство "Патент", м. Ужгород, вул.ГагарІна, 101