Полівалентна імуногенна композиція

1. Полівалентна імуногенна композиція, яка містить вбиту цільноклітинну Bordetella pertussis, правцевий анатоксин, дифтерійний анатоксин, поверхневий антиген вірусу гепатиту В та кон'югат білка-носія і капсульного полісахариду або олігосахариду Н. іnfluenzae типу В, причому кількість полісахариду або олігосахариду в кон'югаті на 0,5 мл дози від маси вакцини складає 1-7 мкг, а імуногенність кон'югата є еквівалентною або поліпшеною в порівнянні з такими композиціями, які містять більші кількості полісахариду або олігосахариду в кон'югаті. 2. Полівалентна імуногенна композиція, яка містить вбиту цільноклітинну Bordetella pertussis, правцевий анатоксин, дифтерійний анатоксин та кон'югат білка-носія і капсульного полісахариду або олігосахариду Н. іnfluenzae типу В, причому білок-носій вибраний з групи, яка включає дифтерійний анатоксин, CRM197, OMPC з N. meningitidis UA (21) a200604994 (22) 27.06.2001 (24) 10.03.2009 (31) 0015999.6 (32) 29.06.2000 (33) GB (31) 0108363.3 (32) 03.04.2001 (33) GB (31) 0108364.1 (32) 03.04.2001 (33) GB (62) 20021210397, 27.06.2001 (46) 10.03.2009, Бюл.№ 5, 2009 р. (72) БУТРЬО ДОМЕНІК, КАПЬО КАРІН, ДЕМОН П'ЄР МІШЕЛЬ, ЛЕМУЕН ДОМЕНІК, ПОЛМАН ЯН (73) ГЛАКСОСМІТКЛАЙН БАЙОЛОДЖІКАЛЗ С.А. (56) Paradiso P.R. et al.: "Glycoconjugate vaccines: future combinations", Dev. Biol. Stand. Basel, Karger, 1996, vol. 87, pp. 269-275. CHOO S. et al.: "Immunogenicity and reactogenicity of a pneumococcal conjugate vaccine administered combined with a Haemophilus influenzae type b conjugate vaccine in United Kingdom infants", Pediatr Infect Dis. J., 2000, vol. 19, pages 854-862. Granoff D. Et al.: "MF59 adjuvant enhances antibody responses of infant baboons immunized with haemophilus influenzae type b and Neisseria meningitides group C oligosaccharide-CRM197 conjugate vaccine", Infection and Immunology, May 1997, p. 1710-1715. Zepp F.et al.:" Evidence for induction of polisaccharide specific B-cell-memory in the 1st year of life: plain haemophillus influenzae type b - PRP (Hib) boosters children primed with a tetanusconjugate Hib-DTPa-HBV combined vaccine", Eur. J. Pediatr, 1997, v.156, p. 18-24. WO A1 9942130, 26.08.1999. 2 (19) 1 3 85853 4 та білок D з H. influenzae, і кількість полісахариду на 0,5 мл дози від маси вакцини складає близько 5 або олігосахариду в кон'югаті на 0,5 мл дози від мкг. маси вакцини складає 1-7 мкг, а імуногенність 7. Імуногенна композиція за п. 1 або 2, в якій кількон'югата є еквівалентною або поліпшеною в порікість полісахариду або олігосахариду в кон'югаті внянні з такими композиціями, які містять більші на 0,5 мл дози від маси вакцини складає близько кількості полісахариду або олігосахариду в кон'ю2,5 мкг. гаті. 8. Імуногенна композиція за пп. 2-7, яка додатково 3. Полівалентна імуногенна композиція, яка місмістить поверхневий антиген вірусу гепатиту В. тить вбиту цільноклітинну Bordetella pertussis, 9. Імуногенна композиція за п. 8, в якій поверхнеправцевий анатоксин, дифтерійний анатоксин та вий антиген вірусу гепатиту В адсорбований на кон'югат білка-носія і капсульного полісахариду фосфа ті алюмінію. або олігосахариду Н. іnfluenzae типу В, причому 10. Імуногенна композиція за пп. 1-9, в якій кон'юкількість полісахариду або олігосахариду в кон'югат білка-носія і капсульного полісахариду або олігаті на 0,5 мл дози від маси вакцини складає блигосахариду Н. іnfluenzae типу В не адсорбований зько 2,5 мкг, а імуногенність кон'югата є еквіваленна ад'ювантній солі алюмінію. тною або поліпшеною в порівнянні з такими 11. Спосіб виготовлення полівалентної імуногенної композиціями, які містять більші кількості полісакомпозиції за пп.1-10, який включає стадію, на якій хариду або олігосахариду в кон'югаті. змішують разом індивідуальні компоненти. 4. Імуногенна композиція за п. 1 або 3, в якій вико12. Імуногенна композиція за пп. 1-10 для застосуристовуваний білок-носій вибраний з групи, яка вання як ліків. включає: правцевий анатоксин, дифтерійний ана13. Застосування імуногенної композиції за пп.1-10 токсин, CRM197, ОМРС з N. menіngitidis та білок D у виробництві ліків для лікування або попередженз Н. іnfluenzae. ня захворювань, викликаних інфекцією Bordetella 5. Імуногенна композиція за п. 1 або 2, в якій кільpertussis, Clostridium tetani, Corynebacterium кість полісахариду або олігосахариду в кон'югаті diphthehіae, вірусом гепатиту В або Haemophilus на 0,5 мл дози від маси вакцини складає 2-6 мкг. influenzae. 6. Імуногенна композиція за п. 1 або 2, в якій кількість полісахариду або олігосахариду в кон'югаті Винахід стосується нових комбінованих вакцинних препаратів. Комбіновані вакцини (які забезпечують захист від декількох патогенів) дуже бажані для зменшення числа імунізацій, необхідних для забезпечення захисту від декількох патогенів, для зниження витрат на введення і для збільшення прийняття і ступенів охоплення. Добре відоме явище антигенної конкуренції (або інтерференції) ускладнює розробку багатокомпонентних вакцин. Антигенна інтерференція відноситься до спостереження того факту, що введення декількох антигенів часто призводить до ослабленої відповіді на деякі антигени в порівнянні з імунною відповіддю, яка спостерігається, коли такі антигени вводять окремо. Відомі комбіновані вакцини, які можуть запобігати Bordetella pertussis, Clostridium tetani, Corynebacterium diphtheriae і, можливо, вірус гепатиту В та/або Haemophilus influenzae типу b [див., наприклад, WO 93/24148 і WO 97/00697]. Винахід стосується виробництва найбільш активних на сьогодні полівалентних вакцин, введення яких може запобігати або лікувати інфекцію Bordetella pertussis, Clostridium tetani, Corynebacterium diphtheriae, вірусу гепатиту В, Haemophilus influenzae і N. meningitidis, і переважно також вірусу гепатиту А та/або вірусу поліомієліту, причому компоненти вакцини не перешкоджають у значній мірі імунологічній дії кожного з компонентів вакцини. Відповідно, в одному аспекті винаходу запропонована полівалентна імуногенна композиція для забезпечення захисту в організмі хазяїна проти захворювання, викликаного Bordetella pertussis, Clostridium tetani, Corynebacterium diphtheriae, вірусом гепатиту В, Haemophilus influenzae і N. meningitidis, яка містить: (а) або вбиту цільноклітинну Bordetella pertussis (Pw), або два або більш ніж два безкліткових коклюшних компоненти (Ра) (переважно, перше), (б) правцевий анатоксин (ТТ), (в) дифтерійний анатоксин (DT), (г) поверхневий антиген вірусу гепатиту В (НерВ), (д) кон'югат білка-носія та капсульного полісахариду Н. influenzae типу В (Hib), і (e) один або більш ніж один кон'югат білканосія і капсульного полісахариду бактерп, вибраної з групи N. meningitidis типу A (Men А) і N. meningitidis типу С (Men С). Способи отримання правцевого анатоксину (ТТ) добре відомі в даній галузі техніки Наприклад, ТТ переважно отримують шляхом очищення токсину з культури Clostridium tetani з наступною хімічною детоксифікацією, однак альтернативно отримують шляхом очищення рекомбінантного, або генетично детоксифікованого аналога токсину [наприклад, як описано в ЕР 209281]. "Правцевий анатоксин" також містить імуногенні фрагменти повнорозмірного білку [наприклад Фрагмент С див. ЕР 478602]. Способи отримання дифтерійного анатоксину (DT) також добре відомі в даній галузі техніки. Наприклад, DT переважно отримують шляхом очищення токсину з культури Corynehacterium 5 85853 6 diphthehae з наступною хімічною детоксифікацією, При CDAP ціануючий реагент 1-ціанооднак альтернативно отримують шляхом очищендиметиламінопіридинію тетрафторборат (CDAP) ня рекомбінантного, або генетично детоксифіковапереважно використовують для синтезу полісаханого аналога токсину [наприклад, CRM197 або інші рид-білкових кон'югатів. Реакцію ціанування можна мутанти, як описано в US 4709017, US 5843711, здійснювати у відносно м'яких умовах, щоб уникUS 5601827 і US 5917017]. нути гідролізу полісахаридів, чуттєви х до лугу. Цей Безклітинні коклюшні компоненти (Ра) добре синтез дає можливість прямого зв'язування з білвідомі в даній галузі техніки. Приклади містять ком-носієм. коклюшний анатоксин (РТ), філаментний гемаглюВищевказана імуногенна композиція може дотинін (FHA), пертактин (PRN) та аглютиногени 2 і датково містити один, два, три, чотири, п'ять, шість 3. Ці антигени є частково очищеними або високоабо сім компонентів, вибраних з наступного списочищеними. Переважно 2 або більш ніж два безку: полісахарид N. meningitidis типу Υ [Men Υ] (пеклітинних коклюшних компоненти використовують реважно кон'югований), полісахарид N. meningitidis у вакцині. Найбільш переважно 2, 3, 4 або всі 5 з типу W [Men W] (переважно кон'югований), Vi полівищевказаних прикладів безклітинних коклюшних сахарид Salmonella typhi, везикули зовнішньої компонентів включені у вакцину. Найпереважніше мембрани N. meningitidis - (переважно серотипу В), включені РТ, FHA і PRN. PT можна отримувати один або більш ніж один білок (поверхневорізними способами, наприклад шляхом очищення експонований) зовнішньої мембрани N. токсину з культури В. pertussis з наступною хімічmeningitidis (переважно серотипу В), вбитий атеною детоксифікацією, або, альтернативно, шляхом нуйований вірус гепатиту А (НерА - переважно очищення генетично детоксифікованого аналога продукт, відомий як «HavrixÔ » [SmithKline РТ [наприклад, як описано в US 5085862]. Beecham Biologicals]), та інактивований вірус поСпособи отримання вбитої цільноклітинної ліомієліту (IPV - який переважно містить типи 1, 2 і Bordetella pertussis (Pw), яка придатна для даного 3, які є стандартними в технології вакцин, найпевинаходу, розкриті в [WO 93/24148], що є придатреважніше вакцина Солка від поліомієліту), без ними способами приготування лікарського засобу суттєвих проблем інтерференції для будь-якого з для отримання DT-TT-Pw-HepB і DT-TT-PA-HepB антигенів даної композиції. вакцин. Імуногенні композиції за винаходом переважно Кон'югати бактеріального капсульного полісаготують у виді вакцини для введення in vivo в орхариду можуть містити будь-який пептид-, поліпеганізм хазяїна, так що індивідуальні компоненти птид- або білок-носій, який містить щонайменше композиції включені в препарат таким чином, щоб один Т-хелперний епітоп. Переважно, використоімуногенність індивідуальних компонентів не була вуваний(і) білок-носій(білки-носії) вибраний(і) із суттєво знижена іншими індивідуальними компогрупи, яка містить: правцевий анатоксин, дифтенентами цієї композиції. «Не суттєво знижена» рійний анатоксин, CRM197, рекомбінантний дифозначає, що при імунізації отримують титр антитіл терійний токсин [як описаний у будь-якому з US проти кожного компонента, який складає більш ніж 4709017, WO 93/25210, WO 95/33481 або WO 60%, переважно більш ніж 70%, більш переважно 00/48638], пневмолізин (переважно хімічно детокбільш ніж 80%, ще більш переважно більш ніж сифікований, або детоксифікований мутант) з S. 90%, і найпереважніше більш ніж 95-100% титру, рпеитопіае, ОМРС з N. meningitidis і білок D (PD) з отриманого, коли антиген вводять окремо. Н. influenzae [ЕР 594610]. Внаслідок відомого ефеІмуногенні композиції за винаходом переважно кту індукованого носієм супресії, є переважним, готують у виді вакцини для введення in vivo в орякщо в кожній з композицій за винаходом полісаганізм хазяїна, так що вони забезпечують титр харидні антигени, які містяться в ній ("n" антигени), антитіл, який перевищує критерій для серологічнокон'юговані з більш ніж одним носієм. Таким чиго захисту для кожного антигенного компонента ном, (n-1) полісахаридів може бути нанесене для прийнятного відсотка суб'єктів людей. Це є (окремо) на один тип носія і 1 - на інший носій, або важливим тестом при оцінці ефективності вакцини (n-2) - на один і 2 - на два інших носія, і так далі. в популяції. Антигени з титром зв'язаних антитіл, Наприклад, у вакцині, що містить 4 бактеріальних вище якого вважається, що в організмі хазяїна полісахаридних кон'югата, 1, 2 або всі чотири моспостерігається сероконверсія проти антигену, жуть бути кон'юговані з різними носіями). Білок D, добре відомі, і такі титри опубліковані організаціяоднак, переважно використовують як носій в комми, такими як Всесвітня Організація Охорони здопозиціях за винаходом, тому що він може бути ров'я (ВООЗ). Переважно у більш ніж 80% статисвикористаний для різних (2, 3, 4 або більш) полісатично значимої вибірки суб'єктів спостерігається харидів у композиції без помітного ефекту індукосероконверсія, більш переважно у більш ніж 90%, ваної носієм супресп. Найпереважніше, Hib присуще більш переважно у більш ніж 93%, і найперетній у виді ТТ-кон'югату, a MenA, MenC, MenY і важніше у 96-100%. MenW є або ТТ-, або PD-кон'югати. Білок D також є Імуногенна композиція за винаходом переважкорисним носієм, оскільки він забезпечує додатконо містить ад'юванти. Підходящі ад'юванти містять вий антиген, який може забезпечити захист від Н. сіль алюмінію, таку як гель гідроксиду алюмінію influenzae. (галуни) або фосфат алюмінію, але можуть також Полісахарид може бути зв'язаний з білкомбути сіллю кальцію, заліза або цинку, або можуть носієм за допомогою будь-якого відомого способу бути нерозчинною суспензію ацильованого тиро[наприклад, Likhite, патент США 4372945 і Armor et зину або ацильованих цукрів, катіонні або аніонні al., патент США 4474757]. Переважно здійснюють похідні полісахаридів, або поліфосфазени. CDAP-кон'югацію [WO 95/08348]. 7 85853 8 Ад'ювант може також бути вибраний таким чиКрім того, також запропонований спосіб імуніном, щоб бути кращим індуктором відповіді ТМзації людини-хазяїна від захворювання, викликатипу, для того щоб сприяти розвиткові клітинноного Bordetella pertussis, Clostridium tetani, опосередкованій гілці імунної відповіді. Corynehacterium diphtheriae, вірусом гепатиту В, Високі рівні цитокінів Тh1-типу сприяють індукHaemophilus influenzae і N. meningitidis, при якому ції клітинно-опосередкованих імунних відповідей в організм хазяїна вводять імунопротективну дозу на даний антиген, у той час як високі рівні цитокінів імуногенної композиції за винаходом. Тh2-типу сприяють індукції гуморальних імунних Вакцинні препарати за винаходом можна завідповідей на даний антиген. стосовувати для захисту або лікування ссавця, Придатні системи ад'ювантів, які стимулюють підданого інфекції, за допомогою введення зазнапереважно Th1-відповідь, містять монофосфорил ченої вакцини системним шляхом введення або ліпід А або його похідне, зокрема 3-дез-Очерез слизові оболонки. Такі введення можуть ацильований монофосфорил ліпід А, і комбінацію містити ін'єкцію за допомогою внутрішньом'язовомонофосфорил ліпіду А, переважно 3-дез-Ого, вн утрішньочеревного, інтрадермального або ацильованого монофосфорил ліпіду А (3D-MPL), підшкірного шляхів введення; або за допомогою разом із сіллю алюмінію. Посилена система місвведення через слизові оболонки в пероральтить комбінацію монофосфорил ліпіду А та похідний/травний, дихальний, сечостатевий тракт. ного сапоніну, зокрема комбінацію QS21 і 3D-MPL, Кількість антигену в кожній вакцинній дозі вибяк розкрито в [WO 94/00153], або менш реактогенрано як кількість, яка індукує імунопротективну ну композицію, де QS21 блокований холестеривідповідь без значних несприятливих побічних ном, як розкрито в [WO 96/33739]. Особливо сильефектів при типових вакцинах Така кількість буде нодіючий ад'ювантний препарат, який містить варіювати в залежності від того, який конкретно QS21, 3D-MPL і токоферол в емульсії типу «олія у імуноген використовують і як він представлений. воді», описаний у [WO 95/17210]. Вакцина може Звичайно очікується, що кожна доза буде містити додатково містити сапонін, більш - переважно 0,1-100мкг полісахариду, переважно 0,1-50мкг, QS21. Препарат може також містити емульсію типереважно 0,1-10мкг, з яких 1-5мкг є найбільш пу «олія у воді» та токоферол [WO 95/17210]. Некращим діапазоном. метиловані CpG-вмісні олігонуклеотиди [WO Вміст білкових антигенів у вакцині буде зви96/02555] також є кращими індукторами Th1чайно знаходитися в діапазоні 1-100мкг, переважвідповіді і є придатними для застосування за вино 5-50мкг, найбільш типово в діапазоні 5-25мкг. находом. Після первинної вакцинації суб'єкти можуть Солі алюмінію є кращими ад'ювантами у виотримувати одну або декілька бустерних імунізацій щевказаних імуногенних композиціях. Зокрема, з достатніми проміжками часу. НерВ слід переважно адсорбувати на фосфа ті Отримання вакцини в цілому описано в алюмінію перед змішуванням з іншими компонен[Vaccine Design («The subunit and adjuvant тами. Для того щоб зменшити рівні ад'юванту (зокapproach» (eds Powell M.F. & Newman M.J.) (1995) рема солей алюмінію) у композиціях за винахоPlenum Press New York)]. Інкапсуляція у ліпосоми дом, полісахаридні кон'югати можуть бути без описана Fullerton, [патент США 4235877]. ад'ювантів. Цікаво, що автори винаходу крім того знайЗа винаходом також запропонований спосіб шли, що для вакцин, які містять ТТ, DT, Pw і Hib, приготування вакцинного препарату, який містить несподіваним є той факт, що по суті більш низька стадію, на якій компоненти вакцини змішують радоза Hib може бути використана в комбінованій зом з фармацевтично прийнятним ексципіентом. вакцині (у порівнянні зі стандартною дозою, що Особливо краща DTPw композиція за винахоскладає 10мкг на 0,5мл дози) для отримання щодом містить: ТТ, DT, Pw, Hep (переважно адсорбонайменше еквівалентних титрів антитіл від капсуваний на фосфаті алюмінію), Hib (переважно кон'льного полісахаридного антигену Н. influenzae тиюгований з ТТ та/або не адсорбований), МеnА пу b. Це протилежно тому, що можна було (переважно кон'югований з білком D) і МеnС (пеочікувати. реважно кон'югований з білком D). Переважно ваВідповідно, у додатковому втіленні даного викцину можна поставляти в двох контейнерах, принаходу запропонована полівалентна імуногенна чому перший містить DTPw-Hep у рідкій формі, а композиція, яка містить вбиту цільноклітинну другий містить Hib-MenA-MenC у ліофілізованій Bordetella pertussis (Pw), правцевий анатоксин формі. Вміст контейнерів можна змішувати безпо(ТТ), дифтерійний анатоксин (DT) і кон'югат білкасередньо перед введенням в організм хазяїна у носія і капсульного полісахариду Н. influenzae типу виді однієї ін'єкції. В (Hib - переважно кон'югований з ТТ, DT або У додатковому аспекті винаходу запропоноваCRM197), де кількість кон'югату на 0,5мл дози від на імуногенна композиція або вакцина, як вона маси вакцини складає 1-8мкг, а імуногенність описана тут, для застосування як ліки. кон'югату є еквівалентною або поліпшеною в поріУ ще одному додатковому аспекті даного вивнянні з такими композиціями, що містять великі находу запропоноване використання імуногенних кількості кон'югату. Можливо, поверхневий антиген композицій за винаходом у виробництві ліків для гепатиту В також може бути включений. лікування або попередження захворювань, виклиКраща кількість кон'югату на 0,5мл дози від каних інфекцією Bordetella pertussis, Clostridium маси вакцини складає менш ніж 10мкг (полісахаtetani, Corynebacterium diphtheriae, вірусу гепатиту риду в кон'югаті), більш переважно 1-7 або 2-6мкг, В, Haemophilus influenzae і N. meningitidis. і найпереважніше приблизнo 2.5, 3, 4 або 5мкг. Найпереважніше Hib-кон'югат не адсорбований на 9 85853 10 ад'ювантній солі алюмінію перед змішуванням з во, коли він кон'югований) присутні у композиції на DTPw вакциною. 0,5мл дози, і, переважно, включено не менш ніж 3, Ще одне спостереження, яке зробили автори 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 12, 13, 14, 15, 17, 20, 25, 30, винаходу, є той факт, що комбіновані вакцини, що 35, 40, 45 або 50мкг. Переважно не більш ніж містять Hib-кон'югат, викликають значно більш 100мкг додаткового полісахариду включено на високі титри анти-Hib антитіл в організмі хазяїна (у 0,5мл дози. порівнянні з моновалентною вакциною на основі Переважно додаткові бактеріальні полісаханеадсорбованого Hib-кон'югату), якщо Hib-кон'югат риди вибрані з групи, що складає з: капсульного вводять у виді вакцини, яка додатково містить 1, полісахариду N. meningitidis серогрупи A (Men А), але особливо 2 або більш ніж два додаткових баккапсульного полісахариду N. meningitidis серогрутеріальних полісахаридів, і Hib-полісахарид (і пепи С (Men С), капсульного полісахариду N. реважно всі полісахариди) вакцини не адсорбовані meningitidis серогрупи Υ (Men Y), капсульного поліна ад'юванті (зокрема солях алюмінію). сахариду N. meningitidis серогрупи W (Men W), Додатковий, незалежний аспект даного винакапсульного полісахариду групи І стрептокока груходу, таким чином, полягає в тім, що запропонопи В, капсульного полісахариду групи II стрептоковано полівалентну імуногенну композицію, яка ка групи В, капсульного полісахариду групи lll містить кон'югат білка-носія і капсульного полісастрептокока групи В, капсульного полісахариду хариду Н. influenzae типу В (Hib), причому зазнагрупи IV стрептокока групи В, капсульного полісачена композиція додатково містить 1, але особлихариду гр упи V стрептокока групи В, капсульного во 2 або більш ніж два додаткових бактеріальних полісахариду Staphylococcus aureus типу 5, капсуполісахаридів (переважно більш ніж 2, 3, 4, 5, 6, 7, льного полісахариду Staphylococcus aureus типу 8, 8, 9, 10, 11, 12 або 13), здатних забезпечити заVi полісахариду з Salmonella typhi, ліпополісахарихист для організму хазяїна проти інфікування бакду (LPS) N. meningitidis, LPS M. catarrhalis і LPS H. теріями, від яких вони отримані, і причому Hibinfluenzae. Під LPS розуміють або нативний ліпополісахарид (і переважно жоден із зазначених пополісахарид (або ліпoолігосахарид), або ліпополілісахаридів) у композиції не адсорбовані на ад'юсахарид, де ділянка ліпіду А детоксифікована вантній солі алюмінію. Найпереважніше, щоб будь-яким з більшості відомих способів [див. наад'ювантна сіль алюмінію не була присутня в комприклад, WO 97/18837 або WO 98/33923], або позиції. будь-яку молекулу, що містить О-полісахарид, Під антигеном, що не «адсорбований на ад'юотриманий із зазначеного LPS. Під LPS N. вантній солі алюмінію» мають на увазі, що ніяка meningitidis мають на увазі один або більш ніж особлива або спеціально призначена стадія адсоодин з 12 відомих імунотипів (L1, L2, L3, L4, L5, L6, рбції для антигену на додатковій ад'ювантній солі L7, L8, L9, L10, L11 або L12). алюмінію, не входить у процес приготування даної Особливо кращими комбінаціями є композиції, композиції. які містять: 1) кон'югований Нib, кон'югований Hib може бути кон'югований з будь-яким носіМеnА і кон'югований МеnС; 2) кон'югований Hib, єм, який може забезпечити щонайменше один Ткон'югований MenY і кон'югований МеnС; і 3) кон'хелперний епітоп (приклади яких описані вище), і югований Hib і кон'югований МеnС. Кількість PS у переважно правцевим анатоксином. кожнім з вищевказаних кон'югатів може складати 5 Переважно, додаткові бактеріальні полісахаабо 10мкг кожного на 0,5мл дози для людини. Мориди також кон'юговані з білком-носієм (приклади жливо, вищевказані композиції можуть також місяких описані вище). У конкретних втіленнях капсутити везикули зовнішніх мембран N. meningitidis льний полісахарид Н. influenzae типу В та додатсеротипу В, або один або більш ніж один білок кові полісахариди не кон'юговані з тим самим носі(поверхностно-экспонированный) зовнішньої мемєм (Hib і жоден з додаткових полісахаридів не брани N. meningitidis серотипа В, або один або використовують спільно той самий носій), особлибільш ніж один LPS (як він визначений вище) N. во коли носієм є CRM197. У кращих втіленнях приmeningitidis для створення загальної вакцини прокладів щонайменше один з полісахаридів даної ти менінгіту. Переважно МеnА, МеnС і MenY є або композиції кон'югований з білком D, однак це не ТТ-, або PD-кон'югати. суттєво для здійснення винаходу - у дійсності, ні Додаткові бактеріальні полісахариди можуть Hib, ні будь-який інший полісахарид, не обов'язкотакож бути вибрані з будь-якого з капсульних пнево повинний бути кон'югований з білком D. вмококових полісахаридів (переважно більш ніж 7, У конкретному втіленні винаходу, тільки Hib і більш переважно 11 або більш, і найпереважніше додаткові бактеріальні полісахариди (та їх кон'юга13 або більш), таких як від серотипу: 1, 2, 3, 4, 5, ти) є антигенами, які присутні у композиції. 6А, 6В, 7F, 8, 9N, 9 V, 10А, 11А, 12F, 14, 15В, 17F, Кількість полісахариду, що здатна забезпечити 18С, 19А, 19F, 20, 22F, 23F або 33F. Переважно захист для організму хазяїна (ефективна кількість) пневмококові полісахариди кон'юговані (найпереможе легко визначити фахівець у даній галузі техважніше PD-кон'югати). ніки. Звичайно очікується, що кожна доза буде Наприклад, пневмококові полісахариди, отримістити 0,1-100мкг полісахариду, переважно 0,1мані від щонайменше чотирьох серотипів (вклю50мкг, переважно 0,1-10мкг, з яких 1-5мкг є найчаючи 6В, 14, 19F і 23F, наприклад), або від щобільш кращим діапазоном. Hib-кон'югат переважно найменше 7 серотипів (включаючи 4, 6В, 9V, є присутнім у кількості 3-15мкг (полісахариду в 14,18С, 19F і 23F, наприклад) можуть бути вибрані кон'югаті), більш переважно 4-12мкг, і найперевазі списку, зазначеного вище. Більш переважно, жніше 5-10мкг. У кращому втіленні сумарно не полісахариди від більш ніж 7 серотипів включені в менш ніж 2мкг додаткового полісахариду (особликомпозицію, наприклад, щонайменше 11 сероти 11 85853 12 пів. Наприклад, композиція в одному втіленні місними компонентами цієї композиції (див. вищевкатить 11 капсульних полісахаридів, отриманих від зане визначення). Таким чином, у кращих втіленсеротипів 1, 3, 4, 5, 6В, 7F, 9V, 14, 18С, 19F і 23F нях ніякого (значного) несприятливого ефекту не (переважно кон'югованих). У кращому втіленні виникає у відношенні до додаткових бактеріальних даного винаходу щонайменше 13 полісахаридних полісахаридів (як захисної ефективності) у комбіантигенів (переважно кон'югованих) включені, хоча нації, у порівнянні з їхнім введенням окремо. додаткові полісахаридні антигени, наприклад 23Переважно, полівалентну імуногенну композивалентні (такі як серотипи 1, 2, 3, 4, 5, 6В, 7F, 8, цію за цим аспектом винаходу готують у виді вак9N, 9V, 10А, 11А, 12F, 14, 15В, 17F, 18С, 19А, 19F, цини для введення in vivo в організм хазяїна, що 20, 22F, 23F і 33F) також включені у винахід. забезпечує титр антитіл, перевищуючий критерій Для вакцинації людей похилого віку (напридля серологічного захисту для кожного антигенноклад для попередження пневмонії) краще включиго компонента для прийнятного відсотка суб'єктівти серотипи 8 і 12F (і найпереважніше 15 і 22 талюдей (див. вище вказане визначення). кож) у кращу 11-валентну антигенну композицію, Композиції за даним аспектом винаходу переописану вище, з утворенням 13/15-валентної вакважно готують у виді вакцини. Використання поліцини, тоді як для немовлят або дітей раннього віку валентної імуногенної композиції за даним аспек(коли велике значення має отит середнього вуха) том винаходу у виробництві ліків для лікування серотипи 6А та 19А переважно включені з отриабо попередження захворювань, викликаних інфеманням 13-валентної вакцини. кцією Haemophiius influenzae (і переважно також Пневмококові полісахариди можуть бути адсотими організмами, від яких отримані додаткові рбовані або можуть не бути адсорбовані на ад'юбактеріальні полісахариди), також передбачено, як вантних солях алюмінію. і спосіб імунізації людини-хазяїна від захворюванНib (переважно ліофілізований) і пневмококові ня, викликаного Haemophiius influenzae (і переважполісахариди (переважно в рідкій формі) можна но також тих організмів, від яких отримані додатзмішува ти безпосередньо перед введенням в оркові бактеріальні полісахариди), при якому в ганізм хазяїна в одному введенні/ін'єкції. За допоорганізм хазяїна вводять імунопротективну дозу могою такого препарату можливо, при імунізації, полівалентної імуногенної композиції за даним отримати титри антитіл проти Hib капсульного поаспектом винаходу. лісахариду понад 100% титру, отриманого, коли Також запропонований спосіб готування поліHib-кон'югат вводять окремо. У кращих втіленнях валентної імуногенної композиції за даним аспекніякого (значного) несприятливого ефекту не винитом винаходу, що включає в себе стадію, на якій кає по відношенню до пневмококових полісахаризмішують разом індивідуальні компоненти. Якщо дних кон'югатів (як захисної ефективності) у комбідодаткові бактеріальні полісахариди повинні бути нації, у порівнянні з їхнім введенням окремо. Це адсорбовані на ад'ювантній солі алюмінію, це поможна оцінити в одиницях виміру пост-первинних винно бути зроблене перед додаванням Hib до геометричних середніх концентрацій (GMC) антипрепарату. Переважно надлишок ад'ювантної солі тіла проти полісахариду через 1 місяць після алюмінію не повинний бути використаний. Найпеостанньої праймінг-дози (праймінг-дози є первинреважніше Hib повинний бути доданий до додатними введеннями - звичайно 3-у перший рік житкового полісахариду, який містить ад'ювантний тя). GMC (у мкг/мл) для вакцини за даним винахоалюміній, безпосередньо до композиції, яку вводом повинна бути переважно вище 55% (більш дять в організм хазяїна. переважно вище 60, 70, 80 або 90%) від GMC, коУсі цитовані посилання і публікації включені ли пневмококові полісахариди вводять без Ніbтут як посилання. кон'югату. Іншим зазначенням на те, що ніякого Приклади несприятливого ефекту не виникає, є те, що % Приклади запропоновані тільки для цілей ілюсуб'єктів з концентраціями антитіла не менш ніж страції і не призначені для обмеження об'єму да0,5мкг/мл відрізняється не більш, ніж на 10% (пеного винаходу. реважно менш ніж 9, 7, 5, 3 або 1%), при порівнянПриклад 1: Отримання DT-TT-Pw-HepB (DTPwні 1-місячних пост-первинних введень вакцини за HepB) вакцини винаходом проти вакцини без Ніb-кон'югату. Це отримання здійснювали, як описано в [WO Хоча ви щевказане відноситься до Hib і додат93/24148]. Ця вакцина є у продажу під назвою ковим бактеріальним «полісахаридам» (краще Tritanrix-HepBÔ (SmithKline Beecham Biologicals). втілення), передбачено, що даний винахід може Приклад 2: Отримання MenA-MenC-Hib бути розширений до Hib і додаткових бактеріаль(MenAC-Hib) вакцин них «олігосахаридів» (які в природі мають низьке 1) MenC-Hib або MenA-MenC-Hib без ад'юванчисло повторюваних одиниць, або які є полісахатів ридами, зменшені в розмірі для здійснення, але які MenAC-Hib: капсульний полісахарид N. усе ще здатні до індукції захисної імунної відповіді meningitidis типу А, кон'югований з білком D (з вив організмі хазяїна), які добре відомі в те хнології користанням CDAP-методики), капсульний полісавакцин. харид N. meningitidis типу С, кон'югований з білком Переважно, полівалентну імуногенну композиD,. і капсульний полісахарид Н. influenzae типу b, цію за цим аспектом винаходу, готують у виді ваккон'югований з ТТ, змішували разом у кількості цини для введення in vivo в організм хазяїна, при5мкг кожного полісахариду в кожнім кон'югаті на чому індивідуальні компоненти композиції готують 0,5мл дози для людини. Значення рН доводили до таким чином, щоб імуногеність індивідуальних 6,1, і ліофілізували в присутності сахарози. компонентів не була знижена іншими індивідуаль 13 85853 14 MenC-Hib: капсульний полісахарид N. заного приклада, які давали немовлям у виді meningitidis типу С, кон'югований з білком D (з витрьох-дозової первинної вакцинації. користанням CDAP-методики) і капсульний полісаДане дослідження є фазою II, рандомізованє харид Н. influenzae типу b, кон'югований з ТТ, змідослідження, і містило п'ять досліджуваних гр уп. шували разом у кількості 5мкг полісахариду в Препарати, що оцінювали, були люфілізований кожнім кон'югаті на 0,5мл дози для людини. Знапростий і адсорбований препарат Men AC-Hib і чення рН доводили до 6,1, і ліофілізували в присупростий препарат MenC-Hib. Ці три препарати тності сахарози. вводили немовлям у віці 3, 4 i 5 місяців у трьох 2) MenA-MenC-Hib з ад'ювантами перших досліджуваних групах; Tritanrix-HepBÔ Капсульний полісахарид N. meningitidis типу А, давали відповідним чином (у виді окремої ін'єкції) кон'югований з білком D (з використанням CDAPу ци х трьох гр упах. Простий препарат Men AC-Hib методики), капсульний полісахарид N. meningitidis також розводили в рідкій комбінованій дифтерійнотипу С, кон'югований з білком D, і капсульний поліправцевій, цільно-клітинній коклюшній, гепатит В сахарид Н. influenzae типу b, кон'югований з ТТ, вакцині (Tritanrix-HepBÔ ) і вводили у виді єдиної адсорбували кожний окремо в сольовому розчині ін'єкції немовлям у віці 3, 4 і 5 місяців у четвертій на фосфаті алюмінію (5мкг кожного кон'югату на досліджуваній групі. У п'ятій групі (контроль) вво100мкг, 100мкг і 60мкг Аl3+, відповідно, на дозу). дили Tritanrix-HepBÔ-Hib вакцину немовлям у віці Адсорбовані вакцини змішували разом при рН 6,1 і 3, 4, 5 місяців. Дослідження було відкритим, але в ліофілізували в присутності са харози. двох перших група х, що отримують два різних Приклад 3: Клінічне випробування препарати MenAC-Hib, було подвійним сліпим, У дослідженні MenAC-Hib 001 оцінюється імутакож як і в двох останніх групах, які отримують ногенність, реактогенність і безпека, індукована Tritanrix-HepBÔ -MenAC-Hib i Tritanrix-HepBÔ-Hib MenC-Hib і MenAC-Hib (адсорбованої і не адсорвакцини. У результаті, досліджуваними групами бованої), виготовленими відповідно до вищевкабули: ! Результати показали, що кожен препарат, що оцінювали, індукував гарну імунну відповідь проти кожного антигену (визначали антитіла проти менінгококових груп А та С, Полі-Рібозил Фосфата (капсульного полісахариду Н. influenzae типу b), дифтерійного анатоксину, правцевого анатоксину, Bordetella pertussis і гепатиту В). Кожний вакцинний препарат добре переносився. \ 0,15 і 1,0мкг/мл є типовими порогами титрів, які спостерігають для оцінки серологічного захисту. У випадку DTPw-HepB/MenAC-Hib вакцини Hib-інтерференція відсутня. Це також можна бачити на Фіг.1, що показує зворотну кумулятивну криву (RCC) даних Крім того, є несподіваним те, що не адсорбована MenAC-Hib вакцина показала значно більш високий анти-PRP титр у порівнянні з адсорбованим препаратом 15 85853 16 Дивися також Фіг.2 для відповідних RCC анти-PD IgG кривих. Як можна бачити, усі препара ти індукували імунну відповідь до білка-носія (білок D). Цей тест є тестом ELISA, в якому визначають вміст IgG проти менінгококового полісахариду А. На Фіг.3 показані RCC графіки даних. Відсутня інтерференція МепА полісахаридного антигену, з індукцією щонайменше тієї ж кількості антитіл, які є у випадку DTPw-HepB/MenAC-Hib вакцини. 17 85853 18 Цей тест є бактерицидним тестом, в якому визначають антитіла з бактерицидними властивостями проти менінгококу серогрупи А. Відсутня інтерференція МепА полісахаридного антигену, з індукцією щонайменше тієї ж кількості антитіл, які є у випадку DTPw-HepB/MenAC-Hib вакцини. Цей тест є тестом ELISA, в якому визначають вміст IgG проти менінгококового полісахариду С. На Фіг.4 показані RCC графіки даних. SBA-MenC є бактерицидним тестом, в якому визначають бактерицидну активність сироватки проти менінгококу С. Це є одиницею виміру функціональних антитіл. На Фіг.5 показані RCC графіки даних. Відсутня інтерференція на МепС полісахаридний антиген, з індукцією такої ж кількості функціональних антитіл, як у випадку, коли він присутній у DTPw-Hep/MenAC-Hib вакцині. Цей тест є бактерицидним тестом, в якому визначають антитіла з бактерицидними властивостями проти менінгококу серогрупи А. Це є одиницею виміру функціональних антитіл Відсут ня інтерференція на МепС полісахаридний антиген, з індукцією такої ж кількості функціональних антитіл, як у випадку, коли він присутній у DTPwHepB/MenAC-Hib вакцині. 19 85853 20 ВР відноситься до В. pertussis. Тест ELISA був зроблений з визначенням IgG проти цільноклітинних бактерій. З попередніх двох таблиць спостерігалося, що імунна відповідь на DT, ТТ, Pw i НерВ подібна до відповідей, отриманих за допомогою зареєстрованої Tritanrix-HepB вакцини, з точки зору як сероконверсії, так і GMT. Приклад 4: Отримання Hib - 11-валентної пневмококової вакцини на основі кон'югату (Hib/Strep11V) Капсульний полісахарид Н. influenzae типу Ь, кон'югований з ТТ (10 мкг полісахариду в кон'югаті на дозу), що був ліофілізований при рН 6,1 у присутності лактози [HiberixÔ (SmithKlme Beecham Biologicals)] розчиняли безпосередньо (у день використання) у рідкому розчині 11валентного пневмококового капсульного поліса хариду (серотипи 1, 3, 4, 5, 6В, 7F, 9V, 14,18С, 19F і 23F), кон'югованого з PD (1мкг полісахариду в кожнім кон'югаті на дозу). Пневмококову вакцину попередньо адсорбували на 0,5мг АІ3+ (у виді АІРО4). Приклад 5: Клінічні випробування вакцини з Прикладу 4 Вакцину з Прикладу 4 і контрольну вакцину вводили в трьох-дозовом режимі (3-, 4-, 5місячний вік) німецьким немовлям. Результати імунної відповіді (визначена через 1 місяць після останнього первинного введення) були наступними. Анти-пневмококові IgG антитіла: GMC (мкг/мл) (за допомогою ELISA) Група А=11Pn-PD+Infanrix-HeXaÔ (Infanrix-Penta плюс доданий Hibкон'югат); 21 85853 22 Група D=11Pn-PD/Hib+Infanrix-PeNTaÔ . + позначає супутнє (у різних частинах), а не комбіноване введення. Відсоток суб'єктів з концентраціями антитіл не менш ніж 0,5мкг/мл Анти-PRP антитіла: GMC (мкг/мл) (за допомогою ELISA) 100% суб'єктів мали концентрації анти-PRP (Hib-полісахарид) антитіл не менш ніж 1,0мкг/мл. Hiberix (не адсорбований Hib-ТТ-кон'югат) мала GMC після подібної схеми введення приблизно 6мкг/мл. Імунна відповідь, у показниках антитіл, визначених ELISA, у немовлят, що отримували 11Pn-PD/Hib вакцину, був подібний відповіді, що спостерігається в тих, хто отримував 11Pn-PD вакцину, для всіх серотипів, за винятком серотипів 1, 3 і 9V, для яких тенденція до більш низьких геометричних середніх концентрацій спостерігалася для 11Pn-PD/Hib вакцини. Однак ці відмінності були незначні, як показано перекриванням 95% довірчих інтервалів. 11Pn-PD/Hib вакцина індукувала функціональні (опсонофагоцитинні) антитіла до всіх 11 серотипів. Комбінована Hib-вакцина з пневмококовою кон'югатною вакциною не перешкоджала в значній мірі пневмококовій імунній відповіді і, на подив, підсилювала анти-PRP відповідь у порівнянні з обома зареєстрованими вакцинами InfanrixHeXa і Hiberix. Приклад 6: Клінічне випробування ефекту більш низьких кількостей Hib у DTPwHepB вакцині Рандомізоване випробування для оцінки імуногеності вакцини на основі Ніb-ТТ-кон'югату в різних дозах у SB Biologicals DTPwHepB (TritanrixÔ -HB) вакцини здійснювали у виді первинної вакцинації у здорових немовлят у віці 6, 10 і 14 тижнів. 544 суб'єктам у чотирьох група х (по 136 кожна) вводили наступні вакцини: Група 1: DTPwHepB безпосередньо змішували з повною дозою Hib-TT (PRP 10мкг; ТТ 10-20мкг; лактоза 12,6мкг; алюміній (у виді солей) 0,15мг); Група 2: DTPwHepB безпосередньо змішували з половинною дозою Hib-TT (PRP 5мкг; ТТ 10-20мкг; лактоза 10мкг; алюміній (у виді солей) 0,0755мг); Група 3: DTPwHepB безпосередньо змішували з четвертинною дозою Hib-TT (PRP 2,5мкг, ТТ 5-10мкг; лактоза 10мкг; алюміній (у виді солей) 0,036мг); Група 4. DTPwHepB супутнім чином вводили (у різних частинах) з повною дозою Hib-TT. Геометричні середні титри (GMTs) анти-PRP антитіл через один місяць після третьої дози були наступними: Препарат з низькою дозою, несподівано, виявляв самі високі величини GMT. Цей ефект повинний бути навіть більше, якщо Hib-TT вакцина не адсорбована. 23 85853 24 25 85853 26 27 Комп’ютерна в ерстка О. Гапоненко 85853 Підписне 28 Тираж 28 прим. Міністерство осв іт и і науки України Держав ний департамент інтелектуальної в ласності, вул. Урицького, 45, м. Київ , МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислов ої в ласності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601