Спосіб доставки лікарського препарату для посилення синтезу білка в кістках

Реферат: Винахід стосується стабільної при зберіганні композиції, яка містить аналог білку, зв'язаного з гормоном прищитовидної залози (РТНrР), а також способів застосування аналога РТНrР і запропонованих композицій на основі РТНrР в лікуванні остеопорозу, для збільшення кісткової маси або для покращання якості кісткової тканини. UA 98776 C2 (12) UA 98776 C2 UA 98776 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 Дана заявка претендує на пріоритет попередньої заявки на винахід США № 60/848,960, поданої 3 жовтня 2006 р. Весь зміст вказаної заявки включено в цей опис за посиланням. Білок, зв'язаний з гормоном прищитовидної залози ("PTHrP") містить від 139 до 173 амінокислот. Відомо, що PTHrP і певні його аналоги здатні збільшувати кісткову масу і поліпшувати якість кісткової тканини в лікуванні остеопорозу і споріднених розладів. Однак клінічне використання таких білків в якості фармацевтичних препаратів вимагає розробки рецептури, яка була б прийнятною з точки зору стабільності при зберіганні і легкого приготування. Більш того, препарати, які на теперішній час застосовуються в лікуванні остеопорозу, мають обмеження щодо прийнятного діапазону доз через небажані побічні ефекти, такі як гіперкальцемія і посилена стимуляція резорбції кісток. Ці небажані побічні ефекти і пов'язані з ними обмеження доз негативно впливають на результати лікування остеопорозу і споріднених розладів, не дозволяючи реалізувати можливості таких препаратів. Отже, існує потреба в сполуках, які можна було б вводити в дозі, яка посилить корисні ефекти без збільшення небажаних побічних ефектів. Даний винахід стосується стабільної при зберіганні композиції, яка містить аналог білка, зв'язаного з гормоном прищитовидної залози (PTHrP), і способів використання цих аналогів і композицій, що містять такі аналоги, як описано тут, для лікування остеопорозу з метою збільшення кісткової маси і поліпшення якості кісткової тканини. Такі композиції випускаються в стерильній формі і є стабільними при зберіганні. Загалом, вони можуть зберігатись при кімнатній температурі впродовж щонайменше кількох тижнів, що забезпечує їх зручне парентеральне введення пацієнтам. В одному варіанті здійснення даний винахід стосується стабільної при зберіганні композиції, придатної для введення суб'єкту (наприклад, людині). Така композиція включає аналог PTHrP і ефективну кількість буферу для підтримання рН композиції в межах від 2 до 7. В одному 22,25 23,28,31 29 26,30 конкретному варіанті здійснення PTHrP - це [Glu , Leu , Aib , Lys ]hPTHrP(1-34)NH2 (SEQ ID NO.: 2). В іншому варіанті здійснення даний винахід стосується герметичного контейнеру, який містить стабільну при зберіганні композицію, придатну для введення суб'єкту. Композиція містить PTHrP або його аналог і ефективну кількість буферу для підтримання рН композиції в межах від 2 до 7. В одному конкретному варіанті здійснення аналогом PTHrP є 22,25 23,28,31 29 26,30 [Glu , Leu , Aib , Lys ] hPTHrP(1-34)NH2 (SEQ ID NO.: 2). В іншому варіанті здійснення даний винахід стосується пристрою для доставки лікарського препарату, який включає один чи більше ніж один контейнер одноразового використання, що містить стабільну при зберіганні композицію, яка має в своєму складі PTHrP або його аналог і ефективну кількість буферу для підтримання рН композиції в межах від 2 до 7. В одному 22,25 23,28,31 29 26,30 конкретному варіанті здійснення аналогом PTHrP є [Glu , Leu , Aib , Lys ]hPTHrP(134)NH2 (SEQ ID NO.: 2). В іншому варіанті здійснення даний винахід стосується пристрою для доставки лікарського препарату, який включає один чи більше ніж один контейнер багаторазового використання, що містить стабільну при зберіганні композицію, яка має в своєму складі PTHrP або його аналог і ефективну кількість буферу для підтримання рН композиції в межах від 2 до 7. В одному 22,25 23,28,31 29 26,30 конкретному варіанті здійснення аналогом PTHrP є [Glu , Leu , Aib , Lys ]hPTHrP(134)NH2 (SEQ ID NO.: 2). В іншому варіанті здійснення даний винахід стосується способу лікування остеопорозу у суб'єкта, що того потребує, який включає введення цьому суб'єкту однієї добової підшкірної 22,25 23,28,31 29 26,30 дози [Glu , Leu , Aib , Lys ] hPTHrP(1-34)NH2 (SEQ ID NO.: 2) у кількості між 40 і 160 мкг впродовж періоду часу, достатнього для виліковування суб'єкта, типово від приблизно 3 до приблизно 36 місяців. В певних інших варіантах здійснення тривалість лікування становить від приблизно 3 до приблизно 18 місяців. В іншому варіанті здійснення даний винахід стосується способу збільшення кісткової маси і поліпшення якості кісткової тканини у суб'єкта, 22,25 що того потребує, який включає введення цьому суб'єкту однієї добової підшкірної дози [Glu , 23,28,31 29 26,30 Leu , Aib , Lys ] hPTHrP(1-34)NH2 (SEQ ID NO.: 2) у кількості між 40 і 160 мкг впродовж періоду часу, достатнього для виліковування суб'єкта, типово від приблизно 3 до приблизно 36 місяців. В певних інших варіантах здійснення тривалість лікування становить від приблизно 3 до приблизно 18 місяців. Композиції на основі PTHrP і його аналогів за цим винаходом демонструють стабільність при зберіганні з точки зору гормонального складу і активності. Більш того, такі композиції можуть вводитись, загалом, в більш високих дозах, ніж наявні сьогодні препарати для лікування остеопорозу, і забезпечують зменшення чи усунення небажаних побічних ефектів, таких як 1 UA 98776 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 гіперкальцемія чи стимуляція резорбції кісток. їх перевагою є збільшення корисних фізіологічних ефектів внаслідок збільшених доз і можливе скорочення тривалості лікування. На фіг. 1 представлено графік, який показує стабільність послідовності SEQ ID NO.:2 впродовж 24 місяців при 5 °C і 25 °C без застосування будь-якого хімічного стабілізатора. На фіг. 2 представлено графік, який показує стабільність ліофілізованої послідовності SEQ ID NO.:2 впродовж 24 місяців при 5 °C, 25 °C і 40 °C. Послідовність нативного hPTHrP (1-34) є наступною: Ala Val Ser Glu His Gin Leu Leu His Asp Lys Gly Lys Ser He Gin Asp Leu Arg Arg Arg Phe Phe Leu His His Leu He Ala Glu He His Thr Ala (SEQ ID NO.:1). 22,25 23,28,31 29 В конкретному варіанті здійснення аналогом PTHrP є [Glu , Leu , Aib , 26,30 Lys ]hPTHrP(1-34)NH2 (SEQ ID NO.: 2). Інші аналоги PTHrP описані в патентах США №№ 6,921,750, 5,955,574, 6,544,949, 5,723,577 і 5,696,095, зміст яких в повному об'ємі вважається включеним в цей опис за посиланням. Термін "буфер", як він тут використовується, стосується будь-якої комбінації кислоти чи солі, що є фармацевтично прийнятною і здатна підтримувати композицію за цим винаходом в межах бажаних значень рН. Буфери в описаних тут композиціях підтримують рН в межах від приблизно 2 до приблизно 7, від приблизно 3 до приблизно 6, від приблизно 4 до приблизно 6, від приблизно 4,5 до приблизно 5,6 або на рівні приблизно 5,1. Придатні буфери включають будь-який фармацевтично прийнятний буфер, здатний підтримувати вищенаведені значення рН, такі як, наприклад, ацетатний, тартратний, фосфатний чи цитратний буфери. В одному варіанті здійснення буфером є ацетатний чи тартратний буфер. В іншому варіанті здійснення буфером є ацетатний буфер. В ще іншому варіанті здійснення буфером є оцтова кислота і натрію ацетат. В описаних тут композиціях концентрація буферу типово є в межах від приблизно 0,1 мМ до приблизно 1000 мМ, від приблизно 0,2 мМ до приблизно 200 мМ, від приблизно 0,5 мМ до приблизно 50 мМ, від приблизно 1 мМ до приблизно 10 мМ або становить приблизно 6 мМ. Термін "антимікробний препарат", як він тут використовується, стосується фармацевтично прийнятного консерванту, придатного для введення суб'єкту, який пригнічує, попереджає або уповільнює ріст мікроорганізмів, включаючи, наприклад, бактерії, віруси і гриби, в композиціях за цим винаходом. Придатні антимікробні препарати для використання в композиціях і способах за цим винаходом включають, не обмежуючись ними, крезоли, бензиловий спирт, фенол, бензалконію хлорид, бензетонію хлорид, хлорбутанол, фенілетиловий спирт, метилпарабен, пропилпарабен, тіомерсал, фенілмеркурнітрат і фенілмеркурацетат. В одному варіанті здійснення антимікробними препаратами є m-крезол, хлоркрезол чи фенол. В іншому варіанті здійснення антимікробним препаратом є фенол. Термін "ефективна кількість" антимікробного препарату означає таку його кількість, яка ефективно пригнічує, попереджає або уповільнює ріст мікроорганізмів, включаючи, наприклад, бактерії, віруси і гриби, в композиціях за цим винаходом. В композиціях за цим винаходом вміст антимікробного препарату типово становить від приблизно 0,1 до приблизно 20 мг/мл, від приблизно 0,2 до приблизно 30 мг/мл, від приблизно 0,2 до приблизно 10 мг/мл, від приблизно 0,25 до приблизно 5 мг/мл, від приблизно 0,5 до приблизно 50 мг/мл, від приблизно 1 до приблизно 10 мг/мл, або приблизно 3 мг/мл чи 5 мг/мл. Композиції за цим винаходом типово є готовими для введення водними розчинами, які є стерильними, стабільними при зберіганні і фармацевтично прийнятними без необхідності реконституції перед введенням. Композиції за цим винаходом є придатними для введення суб'єкту, а це означає, що вони є фармацевтично прийнятними, нетоксичними і не містять будьяких компонентів, які могли б негативно впливати на біологічні чи гормональні ефекти активного інгредієнту - пептиду. Композиції за цим винаходом не містять, наприклад, жодних клітин. Термін "стабільність при зберіганні", як він використовується тут, стосовно композицій за цим винаходом означає, що вміст і чистота PTHrP залишаються на рівні вище приблизно 95 % вихідного вмісту при кожній з наступних умов: (1) зберігання понад 2 роки при 5 °C; або (2) зберігання понад 30 днів при 25 °C. Композиції за цим винаходом типово зберігаються в герметичному контейнері, флаконі чи картриджі, які зазвичай придатні для довгострокового зберігання. Термін "придатний для довгострокового зберігання" означає, що флакон, контейнер чи картридж забезпечують як відсутність витікання компонентів композиції за цим винаходом, так і не проникнення всередину компонентів ззовні, таких як мікроорганізми, при зберіганні впродовж щонайменше 3 місяців при температурі 25 °C. Композиції за цим винаходом вводяться переважно шляхом ін'єкції, типово - підшкірної ін'єкції. 2 UA 98776 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 Композиції за цим винаходом можуть зберігатись в однодозових чи багатодозових герметичних контейнерах, флаконах чи картриджах. Такий герметичний контейнер, флакон чи картридж типово є придатним для використання з одно- чи багатодозовим шприцом олівцевого типу чи пристроєм для доставки лікарських препаратів, які звичайно дозволяють самим пацієнтам вводити собі пептид за цим винаходом. Герметичний контейнер може містити одну чи більше доз пептиду за цим винаходом, за умови, що кожна доза містить ефективну кількість цього пептиду, як тут описано. Розрахований на одну дозу шприц олівцевого типу чи пристрій для доставки лікарських препаратів типово передбачають одноразове використання і містять герметичний контейнер з єдиною дозою ефективної кількості PTHrP у складі описаних тут композицій. Багатодозовий шприц олівцевого типу чи пристрій для доставки лікарських препаратів типово вміщують більше, ніж одну дозу ефективної кількості PTHrP у складі описаних тут композицій. Багатодозовий шприц олівцевого типу можна відрегулювати таким чином, щоб щоразу вводити бажаний об'єм стабільних при зберіганні композицій, описаних тут. В певному варіанті здійснення цього винаходу багатодозовий шприц олівцевого типу гарантує від попадання всередину контейнера чи картриджу мікробної контамінації, яка могла б трапитись при багаторазовому використанні однієї голки. Шприци олівцевого типу, як вони тут використовуються, можуть містити два контейнери, один з яких призначений для PTHrP, як він тут описаний, у вигляді ліофілізованого порошку, як буде описано далі, а другий містить рідину для реконституції цього ліофілізованого порошку. Вміст цих двох контейнерів змішують перед введенням пацієнту композицій за цим винаходом. Як вже йшлося, композиції за цим винаходом можуть вводитись шляхом ін'єкції. Прийнятні об'єми композицій за цим винаходом для ін'єкції становлять від приблизно 0,5 до 1 мл, від приблизно 0,1 до 1 мл, від приблизно 0,02 до 0,04 мл, від приблизно 0,1 до 5,0 мкл мл або від приблизно 0,1 до 1,0 мкл. В композиціях за цим винаходом концентрація пептидів становить від приблизно 20 мг/мл до приблизно 20000 мг/мл, від приблизно 100 мг/мл до приблизно 10000 мг/мл, від приблизно 300 мг/мл до приблизно 3000 мг/мл, від приблизно 500 мг/мл до приблизно 2000 мг/мл або приблизно 2 мг/мл. Композиції за цим винаходом можуть також бути ліофілізованими за допомогою методів ліофілізації, добре відомих спеціалістам в цій галузі, і зберігатись у вигляді порошку, який перед введенням розчиняють. Термін "ліофілізація", як він тут використовується, означає метод сушки виморожуванням чи дегідратації, який передбачає видалення розчиннику, переважно такого, що змішується з водою, а краще води з композиції за цим винаходом. Типово це робиться шляхом сублімації під високим вакуумом, коли композиція знаходиться в замороженому стані. Звичайно, ліофілізація здійснюється на спеціалізованому устаткуванні (ліофілізаторі), яке включає сушильну камеру з регульованою температурою, конденсатор для збирання води і вакуумсистему для зниження тиску в сушильній камері. Термін "ліофілізована композиція", як він тут використовується, означає твердий залишок або порошок, який отримується або який залишається після процесу ліофілізації, як його було визначено вище. Ліофілізована композиція за цим винаходом типово додатково включає фармацевтично прийнятний наповнювач. Термін "фармацевтично прийнятний наповнювач", як він тут використовується, стосується речовини, яка додається до розчину перед ліофілізацією для посилення таких характеристик, як забарвлення, текстура, концентрація і об'єм ліофілізованого коржа. Фармацевтично прийнятні наповнювачі можуть бути, наприклад, буферамиі регуляторами рН, агентами для кристалічного розбухання коржа, стабілізаторами і засобами для підвищення тонічності. В певних кращих варіантах здійснення фармацевтично прийнятним наповнювачем є наповнювач, який забезпечує кристалічне розбухання коржа. Терміни "наповнювач, який забезпечує кристалічне розбухання" або "агент, який забезпечує кристалічне розбухання" стосуються наповнювача, який забезпечує потрібні об'єм і структуру ліофілізованого коржа. Такі агенти для кристалічного розбухання є інертними і не вступають в реакцію з пептидом. До того ж, агенти для кристалічного розбухання здатні кристалізуватись в умовах ліофілізації. Приклади придатних агентів для кристалічного розбухання включають гідрофільні наповнювачі, такі як водорозчинні полімери; такі види цукру, як манітол, сорбіт, ксилітол, глюцитол, дуцитол, інозитол, арабінітол, арабітол, галактітол, ідітол, малтітол, фруктоза, сорбоза, глюкоза, ксилоза, трегалоза, алоза, декстроза, алтроза, лактоза, гулоза, ідоза, галактоза, талоза, рибоза, арабіноза, ликсоза, сахароза, мальтоза, лактулоза, фукоза, рамноза, мелезітоза, мальтотріоза, рафіноза, алтритол, їх оптично активні форми (D- або L-форми), а також відповідні рацемати; неорганічні і органічні солі, такі як солі кальцію, наприклад, лактат, 3 UA 98776 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 глюконат, гліцерилфосфат, цитрат, фосфат одноосновний і двохосновний, сукцинат, сульфат і тартрат, а також ці самі солі алюмінію і магнію; вуглеводи, такі як звичайні моно- і дисахариди, а також відповідні багатоатомні спирти; білки, такі як альбумін; амінокислоти, такі як гліцин; жири, що піддаються емульгації, і полівінілпиролідон. Кращі агенти для кристалічного розбухання вибираються з групи, яка містить гліцин, манітол, декстран, декстрозу, лактозу, сахарозу, полівінілпиролідон, трегалозу, глюкозу та їх комбінації. Особливо корисним агентом для кристалічного розбухання є декстран. Термін "стабілізатор", як він тут використовується, стосується стабілізуючого агента в складі композиції, який підтримує хімічну, біологічну чи гормональну стабільність пептиду. Приклади стабілізуючих агентів включають поліоли, які включають сахарид, переважно моносахарид чи дисахарид, наприклад глюкозу, трегалозу, рафінозу чи сахарозу; цукровий спирт, такий як, наприклад манітол, сорбіт чи інозитол, багатоатомний спирт, такий як гліцерин чи пропілен гліколь або їх суміші, і альбумін. Описані тут композиції можуть використовуватись для стимуляції росту кісток у суб'єкта. Відповідно, вони є корисними в лікуванні хвороб чи розладів, які асоціюються з недостатнім ростом кісток, такими як остеопороз і переломи кісток. В одному з варіантів здійснення даний винахід пропонує спосіб лікування остеопорозу у суб'єкта, який включає введення цьому суб'єкту ефективної кількості композиції, описаної тут. Термін "лікування", як він тут використовується, може включати і профілактику, і терапію. Наприклад, терапевтичне лікування може включати уповільнення, пригнічення або попередження прогресування остеопорозу, зменшення чи усунення симптомів, пов'язаних з остеопорозом. Профілактичне лікування може включати попередження, пригнічення чи уповільнення початку розвитку остеопорозу. Термін "ефективна кількість", як він тут використовується, стосується кількості, яка достатня для того, щоб викликати бажану реакцію. В даному винаході бажаною реакцією є зменшення швидкості втрати кісткової тканини та/або збільшення кісткової маси чи покращання якості кісткової тканини у суб'єкта. Придатні дози для використання в композиціях і способах за цим винаходом становлять від приблизно 40 до приблизно 160 мкг, від приблизно 80 до приблизно 120 мкг, від приблизно 80 до приблизно 100 мкг; або від приблизно 40 до приблизно 50 мкг, від приблизно 50 до приблизно 60 мкг, від приблизно 60 до приблизно 70 мкг, від приблизно 70 до приблизно 80 мкг, від приблизно 80 до приблизно 90 мкг, від приблизно 90 до приблизно 100 мкг, від приблизно 100 до приблизно 110 мкг, від приблизно 110 до приблизно 120 мкг, від приблизно 120 до приблизно 130 мкг, від приблизно 130 до приблизно 140 мкг, від приблизно 140 до приблизно 150 мкг, від приблизно 150 до приблизно 160 мкг; або від приблизно 40 до приблизно 45 мкг, від приблизно 45 до приблизно 50 мкг, від приблизно 50 до приблизно 55 мкг, від приблизно 55 до приблизно 60 мкг, від приблизно 60 до приблизно 65 мкг, від приблизно 65 до приблизно 70 мкг, від приблизно 70 до приблизно 75 мкг, від приблизно 75 до приблизно 80 мкг, від приблизно 80 до приблизно 85 мкг, від приблизно 85 до приблизно 90 мкг, від приблизно 90 до приблизно 95 мкг, від приблизно 95 до приблизно 100 мкг, від приблизно 100 до приблизно 105 мкг, від приблизно 105 до приблизно 110 мкг, від приблизно 110 до приблизно 115 мкг, від приблизно 115 до приблизно 120 мкг, від приблизно 120 до приблизно 125 мкг, від приблизно 125 до приблизно 130 мкг, від приблизно 130 до приблизно 135 мкг, від приблизно 135 до приблизно 140 мкг, від приблизно 140 до приблизно 145 мкг, від приблизно 145 до приблизно 150 мкг, від приблизно 150 до приблизно 155 мкг, від приблизно 155 до приблизно 160 мкг, які вводяться один раз на день, через день, двічі на тиждень, один раз на тиждень, один раз на два тижні, один раз на місяць. Ці дози можуть бути пульсуючою ін'єкцією, наприклад, один раз на місяць, що викликає пульсуюче вивільнення однократних доз композиції, описаної тут. Коли наведені вище дози вводяться один раз на день, один раз на тиждень і т п., типово ці дози є однаковими. Термін "суб'єкт", як він тут використовується, може бути твариною, наприклад ссавцем, таким як людина. Фармацевтично прийнятною сіллю є сіль, придатна для ведення суб'єкту, такому як людина. Пептиди за цим винаходом можуть мати один чи більше сильно кислотних протонів, які можуть вступати в реакцію з відповідною органічною чи неорганічною основою з утворенням солі приєднання основи. Солі приєднання основи включають ті, які походять від неорганічних основ, таких як гідрооксиди амонію, лужних чи лужноземельних металів, карбонати, бікарбонати і т п., і органічних основ, таких як алкоксиди, алкіл аміди, алкіл і арил аміни і т.п. Отже, основи, придатні для використання в приготуванні солей за цим винаходом, включають гідрооксид натрію, гідрооксид калію, гідрооксид амонію, карбонат калію і т.п. Ті пептиди за цим винаходом, 4 UA 98776 C2 5 10 15 20 25 які мають сильну основну групу, таку як аміногрупу, можуть вступати в реакцію з органічною чи неорганічною кислотою з утворенням солі приєднання кислоти. Кислотами, які широко використовуються для отримання солей приєднання кислоти зі сполук з основними групами, є неорганічні кислоти, такі як соляна кислота, бромисто-воднева кислота, йодисто-воднева кислота, сірчана кислота, фосфорна кислота і т.п., і органічні кислоти, такі як ртолуолсульфонова кислота, метансульфонова кислота, щавлева кислота, р-бромфенілсульфонова кислота, карбонова кислота, бурштинова кислота, лимонна кислота, бензойна кислота, оцтова кислота і т.п. Приклади таких солей включають сульфат, піросульфат, бісульфат, сульфіт, бісульфіт, фосфат, моногідрогенфосфат, дигідрогенфосфат, метафосфат, пірофосфат, хлорид, бромід, йодид, ацетат, пропіонат, деканат, каприлат, акрилат, формат, ізобутират, капроат, гептаноат, пропіонат, оксалат, малонат, сукцинат, суберат, себакат, фумарат, малеат, бутин-1,4-диоат, гексин-1,6-диоат, бензоат, хлорбензоат, метилбензоат, динітробензоат, гідроксибензоат, метоксибензоат, фталат, сульфонат, ксиленсульфонат, феніл ацетат, фенілпропіонат, фенілбутират, цитрат, лактат, гамма-гідроксибутират, глюконат, тартрат, метансульфонат, пропансульфонат, нафталін-1-сульфонат, нафталін-2-сульфонат, манделат і т.п. Композиції за цим винаходом типово не дають або дають знижені побічні ефекти, такі як гіперкальцемія, і звичайно не посилюють стимуляцію резорбції кісток при використанні вище перелічених доз. Це зменшення побічних ефектів дозволяє вводити більш високі дози у порівнянні з дозами препаратів, які в теперішній час застосовуються в лікуванні остеопорозу. Композиції за цим винаходом можуть вводитись шляхом ін'єкції, як тут описано. Композиції за цим винаходом можуть вводитись окремо або в комбінації з додатковим лікарським препаратом, таким як бісфосфонат і кальцитонін, які використовуються в антирезорбційній терапії. ПРИКЛАДИ 22,25 23,28,31 29 26,30 ПРИКЛАД 1 демонструє стабільність Glu , Leu , Aib , Lys ] hPTHrP(1-34)NH2 (SEQ ID NO.:2) при низькій концентрації ацетату (1 мМ) і без використання стабілізатора. ТАБЛИЦЯ 1 Матеріал (SEQ ID NO.: 2) Тригідрат натрію ацетат 0,1 N Оцтова кислота 0,1 N Вода для ін'єкцій Картридж 1,5 мл з прозорого скла типу І, промитий, силіконізований і стерилізований Картридж з сірого ПТФЕ бромбутилу з резиновою пробкою Картридж з хлорбутилової резини-металу, гофрований Постачальник Ipsen Ireland Prolabo Prolabo Meram Bunderglass via Vetter Єдиний склад (на картридж) 0,140 мг (вільна основа) 14,6 мг 9 мг qs pH 5,1 qs 1,4 г Daїkyo 1 West Pharmaceutical 1 1 qs = скільки знадобиться для 30 35 Склад містив 100 мкг (SEQ ID NO.: 2) на 0,1 мл. (SEQ ID NO.: 2) розчинили у воді для ін'єкцій, яка містила розведений ацетатний буфер у кількості, яка забезпечувала рН 5,1. Результати підтверджують відмінну хімічну стабільність на протязі понад 24 місяці при температурі 5 °C, як показано на Фіг. 1. Цей розчин не містив ні стабілізатора, ні консерванту, а містив всього 6 мМ ацетатного буферу. З цього можна зробити висновок, що для (SEQ ID NO.: 2) стабілізатор не потрібний, оскільки він демонструє відмінну стабільність у розчині. ПРИКЛАД 2: Використання буферу на основі лимонної кислоти в ліофілізованій формі (SEQ ID NO.: 2). 5 UA 98776 C2 ТАБЛИЦЯ 2 Матеріал (SEQ ID NO.: 2) Декстран 70 Лимонна кислота 0,25 % (в/о) Вода для ін'єкцій** Флакон з прозорого скла типу І, 11-13 мл Сіра пробка з хлорбутилу ПТФЕ, 20 мМ Запобіжний металічний ковпачок Постачальник Ipsen Ireland Interchemical Prolabo Meram Verretubex DaTkyo West Pharma Єдиний склад (на флакон) 0,1 мг (вільна основа) 50 мг qs рН 4.5* qs 1 г 1 1 1 * qs = скільки знадобиться для ** щоб отримати рН 5-5,5 після ліофілізації сушкою виморожуванням. 5 10 15 20 Розчини в Таблиці 2 були відновлені за і допомогою 0,9 % NaCI, щоб отримати: ОДИН флакон на 2 мл (=50 мкг/мл), який забезпечує 10-80 мкг/д дози (при об'ємі ін'єкцій від 200 мкл до 1,6 мл), або ОДИН флакон на 5 мл (=20 мкг/мл), який забезпечує 5-40 мкг/д дози (при об'ємі ін'єкцій від 250 мкл до 2 мл). Лимонна кислота була використана для регулювання рН, а декстран був використаний як засіб для кристалічного розбухання, який сприяє формуванню потрібного коржа при ліофілізації. Описані розчини були ліофілізовані в скляних флаконах і зберігались при різних 22,25 23,28,31 29 26,30 температурах до 24 місяців. Визначення вмісту [Glu , Leu , Aib , Lys ] hPTHrP(134)NH2 (SEQ ID NO.: 2), чистоти та інших фізичних параметрів проводилось на зразках, які брали через різні періоди часу. Результати представлені на фіг. 2 стосовно концентрації пептиду як відсоток, що залишився. Дані на фіг. 2 показують відмінну стабільність композиції за цим винаходом впродовж 24 місяців при температурі 2-8 °C. 22,25 23,28,31 29 26,30 ПРИКЛАД 3: Скринінг препаратів Glu , Leu , Aib , Lys ] hPTHrP(1-34)NH2 (SEQ ID NO.: 2) різної рецептури для порівняння різних консервантів. Таблиця 3 показує, що метилпарабен і бензиловий спирт не підходять на роль консервантів 22,25 23,28,31 29 26,30 для використання з Glu , Leu , Aib , Lys ] hPTHrP(1-34)NH2(SEQ ID NO.: 2), оскільки спостерігаються осідання та/або відсутність активності консервантів. ТАБЛИЦЯ 3 Приклад За Приклад Зb Метилпарабен 1,5 мг/мл 1,35 мг/мл Пропилпарабен 0,15 мг/мл Фенол Хлорокрезол Бензиловий спирт Тест на ефективність Не проходить Проходить консерванту Спостереження або Осідання проблеми Тест на ефективність Не тестувався консерванту після 4,5 через вже Проходить С місяців при 5 С наявний осад Приклад Зс 5 мг/мл Приклад 3d 3 мг/мл Приклад Зе 10 мг/мл Проходить Проходить Проходить Проходить Проходить Не проходить 22,25 25 30 23,28,31 29 26,30 Були приготовані розчини, які містили 2 мг/мл [Glu , Leu , Aib ,Lys ]hPTHrP(134)NH2 (SEQ ID NO.: 2), 6 мМ ацетатного буфера і воду для ін'єкцій з різними консервантами в тій концентрації, яка рекомендувалась для ефективної антимікробної активності. Розчини готувались при кімнатній температурі шляхом розчинення інгредієнтів у воді для ін'єкцій при перемішуванні впродовж понад 30 хвилин для забезпечення повного розчинення. Потім розчини профільтрували через 0,2-мікронний фільтр і розлили у скляні флакони, які закрили резиновими пробками і металевими ковпачками для надійного закриття. Розчин з метилпарабеном був менш прийнятним через осідання і зниження активності відразу після приготування розчину. Потім розчини зберігали до 3 місяців при температурі 25 °C 6 UA 98776 C2 і до 4,5 місяців при температурі 5 °C, після чого тест на ефективність консерванту повторювали, як описано в Прикладі 5. 22,25 ПРИКЛАД 4: Оцінка антимікробної ефективності консервантів в складі композиції Glu , 23,28,31 29 26,30 Leu , Aib , Lys ] hPTHrP(1-34)NH2 (SEQ ID NO.:2) (дослідження стабільності). 5 ТАБЛИЦЯ 4 Р87228 2 мг/мл Фенол 5 мг/мл рН5,1 (SEQ ID NO.: 2) Антимікробний препарат Ацетатний буфер Р87229 2 мг/мл Хлорокрезол 3 мг/мл рН 5,1 Р87230 2 мг/мл Хлорокрезол 2 мг/мл рН 5,1 Р87231 2 мг/мл Бензиловий спирт 10 мг/мл рН 5,1 Тестування розчинів здійснювалось у відповідності до Європейської Фармакопеї, Розділ 5.1.3 "Efficacite de la conservation anti-microbienne" (тест на антимікробну ефективність) з метою випробування ефективності консервантів. 10 ТАБЛИЦЯ 5 Тест на ефективність консервантів після приготування Організми: Бактерії Початкова концентрація організмів в КУО/мл Staphylococcus aureus 3,8 × 10 5 Pseudomonas aeruginosa 1,3 × 10 6 E. coli 6,7 × 10 5 Інтервал тестування Т0 Т+6 год. Т+24 год. Т+28 днів Т0 Т+6 год. Т+24 год. Т+28 днів Т0 Т+6 год. Т+24 год. Т+28 днів Кількість КУО присутня / препарат (чашковий метод підрахунку) Р87228 Р87229 Р87230 Р87231 Бензил. Фенол Хлорокрезол Хлорокрезол спирт 5 мг/мл 3 мг/мл 2 мг/мл 10 мг/мл 5 5 3,4 × 10