Способи лікування або профілактики раку, спосіб проведення хірургічної операції по видаленню раку та застосування моноокису вуглецю

1. Спосіб лікування або профілактики раку, що природно виникає, у пацієнта, який включає в себе: введення пацієнту, у якого діагностовано рак, який природно виник, або який має ризик його розвитку, терапевтично ефективної кількості композиції, яка містить моноокис вуглецю. 2. Спосіб за п. 1, який відрізняється тим, що композиція має газоподібну форму і вводиться пацієнту шляхом інгаляції. 3. Спосіб за п. 1, який відрізняється тим, що композиція має газоподібну форму і вводиться пацієнту місцево в орган, відмінний від легень пацієнта. 4. Спосіб за п. 1, який відрізняється тим, що композиція має газоподібну форму і вводиться в черевну порожнину пацієнта. 5. Спосіб за п. 1, який відрізняється тим, що композиція має рідку форму і вводиться пацієнту перорально. 6. Спосіб за п. 1, який відрізняється тим, що композиція має рідку форму і вводиться місцево у той або інший орган пацієнта. 7. Спосіб за п. 1, який відрізняється тим, що композиція має рідку форму і вводиться в черевну порожнину пацієнта. 8. Спосіб за п. 1, який відрізняється тим, що пацієнт раніше зазнавав хірургічної операції по видаленню ракової тканини. 9. Спосіб за п. 1, який додатково включає в себе проведення хірургічної операції по видаленню у пацієнта ракової тканини. 10. Спосіб за п. 1, який відрізняється тим, що введення відбувається під час хірургічної операції по видаленню ракової тканини. UA (21) a200500061 (22) 05.06.2003 (24) 27.07.2009 (86) PCT/US03/17731, 05.06.2003 (31) 60/386,561 (32) 05.06.2002 (33) US (46) 27.07.2009, Бюл.№ 14, 2009 р. (72) ОТТЕРБАЙН ЛЕО Е., US, ЧОІ ОГАСТІН М.К., US (73) ЙЄЙЛ ЮНІВЕРСІТІ, US, ЮНІВЕРСІТІ ОФ ПІТТСБУРГ ОФ ДЗЕ КОММОНВЕЛТ СІСТЕМ ОФ ХАЙЄР ЕДЬЮКЕЙШН, US (56) US 6069132 A 30.05.2000 WO 9947512 A1, 23.09.1999 WO 9808523 A1, 05.03.1998 OTTERBEIN L.E. ET AL. / Carbon monoxide has anti-inflammatory effects involving the mitogenactivated protein kinase pathway // NATURE MEDICINE, NATURE PUBLISHING, CO, US. - vol. 6, no. 4. - April 2000 (2000-04), P. 422-428 SUGANUMA M. ET AL. / A new process of cancer prevention mediated through inhibition of tumor necrosis factor alpha expression // CANCER RESEARCH/ - vol. 56, no. 16. - 1996. - P. 3711-3715 LIU YUXIANG; CHRISTOU HELEN; MORITA TOSHISUKE; LAUGHNER ERIK; SEMENZA GREGG L; KOUREMBANAS STELLA / Carbon monoxide and nitric oxide suppress the hypoxic induction of vascular endothelial growth factor gene via the 5' enhancer // JOURNAL OF BIOLOGICAL CHEMISTRY/ - vol. 273, no. 24. - 12 June 1998 (1998-06-12). - P. 1525715262 GOLDBERG MARK A., SCHNEIDER THOMAS J. / Similarities between the oxygen-sensing mechanisms regulating the expression of vascular endothelial growth factor and erythropoietin // JOURNAL OF BIOLOGICAL CHEMISTRY. - vol. 269, no. 6. - 11 February 1994 (1994-02-11). - P. 4355-4359 JADWIGA JOSKO, BOLESLAW GWOZDZ, HALINA JEDRZEJOWSKA-SZYPULKA, STANISLAW HENDRYK / Vascular endothelial growth factor (VEGF) and its effect on angiogenesis // MEDICAL 2 (19) 1 3 87438 4 11. Спосіб за п. 1, який відрізняється тим, що (a) ідентифікацію пацієнта, який страждає від раку, пацієнт раніше зазнавав хіміотерапії або променещо природно виник, або має ризик його розвитку; вої терапії. (b) підведення резервуара, який містить газ, що 12. Спосіб за п. 1, який відрізняється тим, що знаходиться під тиском, який містить газоподібний додатково включає в себе проведення хіміотерапії моноокис вуглецю; або променевої терапії пацієнту для лікування (c) вивільнення газу, що знаходиться під тиском, з раку. резервуара зі створенням атмосфери, яка містить 13. Спосіб за п. 1, який відрізняється тим, що газоподібний моноокис вуглецю; і введення відбувається під час хіміотерапії або (d) вміщення пацієнта в атмосферу, в якій міститьпроменевої терапії для лікування раку. ся кількість моноокису вуглецю, достатня для ліку14. Спосіб за п. 1, який відрізняється тим, що вання або профілактики раку у пацієнта. пацієнтом є людина. 27. Спосіб за п. 26, який відрізняється тим, що 15. Спосіб за п. 1, який відрізняється тим, що рак пацієнта піддають впливу атмосфери безперервно являє собою рак, що природно виникає в частині щонайменше протягом однієї години. організму пацієнта, вибраній з групи, яка склада28. Спосіб за п. 26, який відрізняється тим, що ється зі шлунка, ободової кишки, прямої кишки, пацієнта піддають впливу атмосфери безперервно рота/глотки, стравоходу, гортані, печінки, підшлунщонайменше протягом шести годин. кової залози, легені, молочної залози, шийки мат29. Спосіб за п. 26, який відрізняється тим, що ки, матки, яєчників, передміхурової залози, яєчок, пацієнта піддають впливу атмосфери безперервно сечового міхура, шкіри, кістки, нирки, мозщонайменше протягом 24 годин. ку/центральної нервової системи, голови, шиї та 30. Спосіб за п. 26, який відрізняється тим, що горла. пацієнта піддають впливу вказаної атмосфери 16. Спосіб проведення хірургічної операції по вибезперервно щонайменше протягом трьох днів. даленню раку, що природно виник у пацієнта, який 31. Спосіб за п. 26, який відрізняється тим, що включає в себе: пацієнта піддають впливу вказаної атмосфери (a) ідентифікацію у пацієнта щонайменше одного безперервно або в переміжному режимі протягом органа, який має ракову тканину, що природно періоду щонайменше в один тиждень. виникла; 32. Спосіб за п. 26, який відрізняється тим, що (b) проведення хірургічної операції по видаленню у пацієнта піддають впливу вказаної атмосфери пацієнта щонайменше частини ракової тканини; і безперервно або в переміжному режимі протягом (c) перед, під час або після стадії (b) введення періоду щонайменше в чотири тижні. пацієнту терапевтично ефективної кількості компо33. Спосіб за п. 26, який відрізняється тим, що зиції, яка містить моноокис вуглецю. пацієнта піддають впливу вказаної атмосфери 17. Спосіб за п. 16, який відрізняється тим, що безперервно або в переміжному режимі протягом композицію вводять перед стадією (b). періоду щонайменше в один рік. 18. Спосіб за п. 16, який відрізняється тим, що 34. Спосіб за п. 26, який відрізняється тим, що композицію вводять під час стадії (b). рак являє собою рак, що природно виникає в час19. Спосіб за п. 16, який відрізняється тим, що тині організму пацієнта, вибраній з групи, яка композицію вводять після стадії (b). складається з шлунка, ободової кишки, прямої 20. Спосіб за п. 16, який відрізняється тим, що кишки, рота/глотки, стравоходу, гортані, печінки, композицію вводять перед, під час і після стадії підшлункової залози, легені, молочної залози, (b). шийки матки, матки, яєчників, передміхурової за21. Спосіб за п. 16, який відрізняється тим, що лози, яєчок, сечового міхура, шкіри, нирки, мозкомпозиція має газоподібну форму і вводиться ку/центральної нервової системи, голови, шиї та пацієнту шляхом інгаляції. горла. 22. Спосіб за п. 16, який відрізняється тим, що 35. Спосіб за п. 26, який відрізняється тим, що композиція має газоподібну форму і вводиться концентрація моноокису вуглецю в атмосфері місцево в ділянку, піддану хірургічній операції. складає приблизно від 0,01 мас. % і приблизно до 23. Спосіб за п. 16, який відрізняється тим, що 0,22 мас. %. композиція має рідку форму і вводиться пацієнту 36. Спосіб за п. 26, який відрізняється тим, що перорально. пацієнтом є людина. 24. Спосіб за п. 16, який відрізняється тим, що 37. Спосіб лікування або профілактики раку у пацікомпозиція має рідку форму і вводиться місцево в єнта, який включає в себе введення пацієнту, у той або інший орган пацієнта. якого діагностовано рак, що природно виник, або 25. Спосіб за п. 16, який відрізняється тим, що який має ризик його розвитку, терапевтично ефекрак являє собою рак, що природно виникає в частивної кількості композиції, яка містить моноокис тині організму пацієнта, вибраній з групи, яка вуглецю, де пацієнт не є представником гризунів. складається зі шлунка, ободової кишки, прямої 38. Спосіб лікування або профілактики раку у люкишки, рота/глотки, стравоходу, гортані, печінки, дини, який включає в себе введення людині, у якої підшлункової залози, легені, молочної залози, діагностовано рак, що природно виник, або яка шийки матки, матки, яєчників, передміхурової замає ризик його розвитку, терапевтично ефективної лози, яєчок, сечового міхура, шкіри, кістки, нирки, кількості композиції, яка містить моноокис вуглемозку/центральної нервової системи, голови, шиї цю. та горла. 39. Спосіб лікування раку у пацієнта, який включає 26. Спосіб лікування або профілактики раку, що в себе визначення того, чи експресують ракові природно виник, у пацієнта, який включає в себе: клітини пацієнта р21, і введення пацієнту терапев 5 87438 6 тично ефективної кількості композиції, яка містить 44. Застосування за п. 40, яке відрізняється тим, моноокис вуглецю, якщо ракові клітини експресущо пацієнт раніше піддавався хіміотерапії або ють р21. променевій терапії. 40. Застосування моноокису вуглецю для одер45. Застосування за п. 40, яке відрізняється тим, жання фармацевтичної композиції для лікування що рак являє собою рак, який природно виникає у або профілактики раку, який природно виникає у частині організму пацієнта, вибраній з групи, яка пацієнта. складається зі шлунка, ободової кишки, прямої 41. Застосування за п. 40, яке відрізняється тим, кишки, рота/глотки, стравоходу, гортані, печінки, що композиція має газоподібну форму. підшлункової залози, легені, молочної залози, 42. Застосування за п. 40, яке відрізняється тим, шийки матки, матки, яєчників, передміхурової защо композиція має рідку форму. лози, яєчок, сечового міхура, шкіри, кістки, нирки, 43. Застосування за п. 40, яке відрізняється тим, мозку/центральної нервової системи, голови, шиї і що пацієнт раніше піддавався хірургічній операції горла. по видаленню ракової тканини. 46. Застосування за будь-яким з пп. 40-45, яке відрізняється тим, що пацієнтом є людина. У даній заявці заявляється пріоритет за попередньою заявкою на патент США No. 60/386561, поданою 5 червня 2002 року, яка включена у даний опис як посилання в усій своїй повноті. Даний винахід одержаний на основі результатів досліджень, проведених при фінансовій підтримці уряду, в рамках грантів Національного Інституту Охорони здоров'я No. HL 55330, HL 60234 та АІ 42365. Уряд має певні права на даний винахід. Даний винахід відноситься в основному до лікування раку та ангіогенезу. Газоподібний моноокис вуглецю у високих концентраціях отруйний. Однак у наш час він розглядається як важлива сигнальна молекула [Verma et al., Science 259:381-384, 1993]. У зв'язку з цим було висловлене припущення, що моноокис вуглецю діє як молекула нейронального переносника в мозку (Id.) і як нейроендокринний модулятор у гіпоталамусі [Pozzoli et al., Endocrinology 735: 2314-2317, 1994]. Як і окис азоту (NO), моноокис вуглецю являє собою релаксант гладких м'язів [Utz et al., Biochem Pharmacol. 47:195-201, 1991; Christodoulides et al., Circulation 97:2306-9, 1995] і інгібує агрегацію тромбоцитів [Mansouri et al., Thromb Haemost. 48:286-8, 1982]. На деяких моделях було показано, що вдихання невеликих кількостей моноокису вуглецю (CO) надає протизапального впливу. Рак являє собою захворювання, що характеризується проліферацією клітин, яка порушує системи клітинної регуляції. Порушення систем клітинної регуляції може призвести до нерегульованого росту клітин, втрати клітинного диференціювання, локальної інвазії клітин в тканини і до метастазів. Лікування пухлин, що вже є, і ракових клітин (метастазів), що поширюються, являє собою фундаментальну проблему клінічної медицини. Ангіогенез означає утворення нових капілярів в кровоносній системі і є важливим компонентом патологічних процесів, таких як хронічне запалення, деякі імунні реакції і рак. Ангіогенез представлений також в нормальних процесах, таких як ембріональний розвиток та загоєння ран. Даний винахід оснований частково на відкритті того факту, що введення CO може інгібувати ріст пухлинних клітин in vitro і суцільних пухлин in vivo. Крім того, було показано, що введення CO може приглушувати ангіогенез. Даний винахід відноситься, наприклад, до способів лікування пухлин і метастазів з використанням фармацевтичних композицій, які містять CO. Відповідно, даний винахід відноситься до способу лікування раку, профілактики раку або зниження ризику розвитку раку, наприклад, раку, що природно виникає у пацієнта. Даний спосіб включає в себе введення (і/або призначення) певному пацієнту (тобто пацієнту з встановленим діагнозом), який страждає від раку (або має підвищений ризик розвитку раку) терапевтично ефективної кількості композиції, яка містить моноокис вуглецю. Фармацевтична композиція, яка використовується в такому або будь-яких інших способах лікування, описаних нижче, може мати газоподібну або рідку форму і може бути введена пацієнту будь-яким відомим у даній галузі способом, що застосовується для введення газів та рідин пацієнтам, наприклад, шляхом інгаляції, інсуфляції, інфузії, ін'єкції і/або проковтування. В одному варіанті здійснення даного винаходу фармацевтична композиція має газоподібну або рідку форму (наприклад, має вигляд аерозолю або будь-якого іншого розчину, який розпилюється або розбризкується) і вводиться пацієнту шляхом інгаляції. У рідкій формі фармацевтична композиція може також вводитися пацієнту перорально. В іншому варіанті здійснення даного винаходу фармацевтична композиція має газоподібну і/або рідку форму і вводиться місцево в той або інший орган пацієнта. У ще одному варіанті здійснення даного винаходу фармацевтична композиція має газоподібну і/або рідку форму і вводиться безпосередньо в черевну порожнину пацієнта. Фармацевтична композиція може також вводитися пацієнту за допомогою пристрою для здійснення газообміну, що функціонує на основі екстракорпоральної мембрани або за допомогою штучної легені. Способи, що розглядаються, можуть використовуватися самі по собі або в поєднанні з іншими способами лікування раку у пацієнтів. Відповідно, в рамках іншого варіанту, наведені у даному описі способи можуть включати в себе лікування пацієнта хірургічним шляхом (наприклад, з метою видалення пухлини або її частини), методами хіміоте 7 87438 8 рапії, імунотерапії, генної терапії і/або променевої пацієнту для видалення ракової тканини і введентерапії. Описана фармацевтична композиція, яка ня пацієнту (або системно (наприклад, шляхом містить моноокис вуглецю, може бути введена інгаляції), або локально, в осередку, розрізаному пацієнту в будь-який час, наприклад, до, під час під час хірургічного втручання) терапевтично ефеабо після хірургічного втручання, хіміотерапії, імуктивної кількості композиції, яка містить моноокис нотерапії, генної терапії і/або променевої терапії. вуглецю. Композиція може бути введена в будьПацієнт, що розглядається, може являти соякій часовій точці здійснення даної процедури, бою тварину, а саме, людину або відмінну від люнаприклад, перед і/або під час і/або після проведини тварину, може бути представником гризунів дення хірургічної операції пацієнту. або відмінною від гризунів твариною. Наприклад, В іншому аспекті даний винахід відноситься до пацієнт, що розглядається, може бути будь-яким способу лікування або здійснення профілактики ссавцем, наприклад, людиною, іншим представни(наприклад, зниження ризику розвитку) раку у паком приматів, свинею, гризуном, таким як пацюк цієнта, який включає в себе ідентифікацію пацієнабо миша, кроликом, морською свинкою, хом'ячта, який страждає від раку або має ризик розвитку ком, коровою, конем, кішкою, собакою, вівцею або раку, шляхом підведення резервуара, який містить козою або твариною, відмінною від ссавця, такою газ, що знаходиться під підвищеним тиском, який як птах. Рак може являти собою результат розвитмістить газоподібний моноокис вуглецю, з подаку множини факторів, наприклад, канцерогенезу, льшим вивільненням стиснутого газу з вказаного інфекцій, наприклад, вірусних інфекцій, опромірезервуара, з утворенням атмосфери, яка містить нення і/або може характеризуватися розвитком газоподібний моноокис вуглецю, і поміщення паціспадкової схильності або може являти собою варієнта в дану атмосферу, де кількість моноокису ант проміжного походження. Фармацевтична комвуглецю в атмосфері є достатньою для лікування позиція може мати будь-яку форму, наприклад, абo зниження ризику розвитку раку. газоподібну або рідку форму. Пацієнт може зазнавати впливу фармацевтичНаведені у даному описі способи можуть здійної композиції або СО-вмісної атмосфери протяснюватися в поєднанні щонайменше з одним з гом будь-якого періоду часу, включаючи невизнанаведених варіантів лікування: індукцією НО-1 або чений період часу. Переважні періоди часу феритину у пацієнта; експресією НО-1 або феривключають в себе щонайменше одну годину, натину у пацієнта; і введенням пацієнту фармацевприклад, щонайменше шість годин, щонайменше тичної композиції, яка включає в себе НО-1, біліодин день, щонайменше один тиждень, два тижні, рубін, білівердин, феритин, залізо, десфераксамін, чотири тижні, шість тижнів, вісім тижнів, десять декстран заліза і/або апоферитин. тижнів або дванадцять тижнів; щонайменше один Даний винахід також відноситься до способу рік, щонайменше два роки і щонайменше п'ять лікування раку у пацієнта, який включає в себе років. Пацієнт може зазнавати впливу даної атмовизначення для даного пацієнта того, чи експресфери постійно або з перервами протягом таких сують його ракові клітини р21, і потім введення періодів. вказаному пацієнту терапевтично ефективної кільВ описаних у даному описі способах рак може кості композиції, яка містить моноокис вуглецю, являти собою рак, виявлений в будь-якій(их) діляякщо ракові клітини експресують р21. Спосіб може нці(ах) організму пацієнта, наприклад, рак шлунку, необов'язково включати в себе стадію ідентифікарак тонкої кишки, ободової кишки, прямої кишки, ції (наприклад, діагностики) пацієнта, хворого рарота/глотки, стравоходу, гортані, печінки, підшлунком. кової залози, легені, молочної залози, шийки матДаний винахід також включає в себе спосіб ки, матки, яєчників, передміхурової залози, яєчок, проведення пацієнту курсу хіміотерапії, імунотерасечового міхура, шкіри, нирок, мозку/центральної пії, генної терапії і/або променевої терапії. Спосіб нервової системи, голови, шиї, горла або їх будьвключає в себе проведення хіміотерапії, імунотеякого поєднання. рапії, генної терапії і/або променевої терапії пацієКонцентрація моноокису вуглецю у будь-якому нта і потім введення вказаному пацієнту терапевгазі, що вдихується, може являти собою будь-яку тично ефективної кількості композиції, яка містить концентрацію, наведену у даному описі, зокрема, моноокис вуглецю. Композиція може бути введена приблизно від 0,0001мас.% приблизно до в будь-якій часовій точці здійснення даного спосо0,25мас.%. У переважних варіантах здійснення бу, наприклад, перед і/або під час або після проданого винаходу концентрація моноокису вуглецю ведення хіміотерапії, імунотерапії, генної терапії у газі, що вдихується, складає приблизно від і/або променевої терапії пацієнту. Спосіб може 0,005мас.% до 0,24мас.%, або приблизно від необов'язково включати в себе стадію ідентифіка0,01мас.% до 0,22мас.%. Більш переважно концеції (наприклад, діагностики) пацієнта як пацієнта, нтрація моноокису вуглецю у газі, що вдихується, який потребує хіміотерапії, імунотерапії, генної складає приблизно від 0,025мас.% до 0,1мас.%. терапії і/або променевої терапії. В іншому аспекті даний винахід відноситься до Даний винахід також відноситься до способу способу лікування небажаного ангіогенезу у пацієпроведення хірургічної операції для видалення нта. Даний спосіб включає в себе введення пацієраку, наприклад, раку, що природно виник у пацієнту, якому встановлений діагноз небажаного ангіонта. Спосіб включає в себе ідентифікацію пацієнгенезу або який має ризик його розвитку, та, який потребує проведення хірургічної операції терапевтично ефективної кількості композиції, яка для видалення у нього раку, і/або ідентифікацію у містить моноокис вуглецю. Спосіб може необов'язпацієнта щонайменше одного органу, що містить ково включати в себе стадію ідентифікації (наприракову тканину, проведення хірургічної операції клад, встановлення діагнозу) пацієнта як пацієнта, 9 87438 10 який страждає від небажаного ангіогенезу або має винаході, наприклад, у вигляді рідкої або газоподіризик його розвитку. бної композиції, яка містить CO. Композиція може мати газоподібну форму і Якщо особливо не обумовлено інше, всі техніможе бути введена пацієнту шляхом інгаляції, місчні і наукові терміни, що використовуються у дацево в той або інший орган пацієнта і/або в черевному описі, мають значення, загальноприйняте в ну порожнину пацієнта. В іншому варіанті здійстій галузі техніки, до якої відноситься даний винанення даного винаходу композиція може мати хід. Незважаючи на те, що в практиці здійснення рідку форму і вводитися пацієнту пероральнo, місабо тестування даного винаходу можуть викорисцево, в той або інший орган пацієнта і/або в черетовуватися способи і матеріали, аналогічні або вну порожнину пацієнта. еквівалентні описаним у даному винаході, нижче У ще одному аспекті даний винахід відноситьнаведений ряд відповідних способів та матеріалів. ся до способу лікування стану, асоційованого з Всі публікації, патентні заявки, патенти та інші манебажаним ангіогенезом. Спосіб включає в себе теріали, що цитуються у даному описі, наведені як введення пацієнту, у якого діагностований стан, посилання у всій їх повноті. У неоднозначних випов'язаний з небажаним ангіогенезом, або .який падках у даний опис включені визначення таких має ризик його розвитку, терапевтично ефективної термінів для адекватного контролю їх значення. кількості композиції, яка містить моноокис вуглеМатеріали, способи та приклади подані лише для цю, де вказаний стан, пов'язаний з небажаним ілюстрації, але не з метою обмеження обсягу даангіогенезом, не є раком. Спосіб може необов'язного винаходу. ково включати в себе стадію ідентифікації (наприДеталі одного або більше варіантів здійснення клад, діагностування) пацієнта як пацієнта, який даного винаходу наведені нижче в описі і в супростраждає від стану, асоційованого з небажаним воджуючих його малюнках. Інші особливості, об'ангіогенезом, або має ризик його розвитку. У даєкти та переваги даного винаходу будуть очевидні ному варіанті здійснення винаходу вказаний стан з наведеного опису і малюнків, а також з приклаявляє собою ревматоїдний артрит, вовчак, псоріденої формули винаходу. аз, діабетичну ретинопатію, синдром Террі, дегеФіг.1 являє собою графік, який ілюструє той нерацію жовтої плями, реакцію відторгнення ткафакт, що CO інгібує проліферацію клітин мезотенини рогівки, нейроваскулярну глаукому, ліоми мишей (АС29). Зачорнені кружки позначають ретролетальну фіброплазію, почервоніння, синдклітини, що зазнали впливу повітря. Зачорнені ром Ослера-Вебера, ангіогенез міокарда, реваскуквадратики позначають клітини, що зазнали вплиляризацію бляшок, телеангіектазію або ангіофібву CO. Стрілки вказують часові точки, в яких клітирому або будь-яке їх поєднання. ни видаляють з атмосфери, яка містить CO. В іншому аспекті даний винахід відноситься до Фіг.2 являє собою діаграму, яка показує, що резервуара, який містить медично чистий газопоклітини аденокарциноми людини (А549), які були дібний CO, що знаходиться під підвищеним тистрансфіковані геном НО-1 (який викликає у клітиком. Даний резервуар може мати етикетку, що нах надекспресію білка НО-1), демонструють знивказує на те, що газ може використовуватися для ження об'єму пухлини у мишей. Wt=клітини дикого лікування раку у людини. Альтернативно або в типу А549 (контроль); NЕО=клiтини А549, трансфідоповнення, резервуар може мати етикетку, що ковані тільки вектором (контроль); клони А5 та L1 вказує на те, що газ може бути введений пацієнту НО-1=дві різних лінії клітин А549, трансфікованих для лікування у пацієнта (наприклад, з метою геном НО-1. профілактики або зниження вираженості патології) Фіг.3 являє собою графік, який показує, що небажаного ангіогенезу або стану, асоційованого з вплив СО подовжує виживаність мишей, яким зронебажаним ангіогенезом. Газоподібний CO може били ін'єкцію летальної кількості клітин мезотеліоподаватися для використання в суміші з газоподіми. Зачорненими кружками показані миші, що забним азотом, газоподібним окисом азоту і газопознали впливу повітря. Зачорненими квадратиками дібним азотом або з газом, що містить кисень. Гапозначають мишей, що зазнали впливу CO. Стрілзоподібний CO може бути присутнім в суміші в ка вказує на часову точку, в якій половина мишей, концентрації, що складає щонайменше приблизно що зазнали CO, була видалена з камери, яка міс0,025%, включаючи концентрацію, що складає тить CO. щонайменше приблизно 0,05%, 0,10%, 0,50%, Фіг.4 являє собою графік, який ілюструє той 1,0%, 2,0%, 10%, 50% або 90%. факт, що вплив CO збільшує виживаність мишей, Даний винахід відноситься також до застосуяким були зроблені ін'єкції летальної кількості клівання СО при виробництві лікарського засобу, тин мезотеліоми, в тому випадку, коли експозиція призначеного для лікування або профілактики CO почалася через один тиждень після ін'єкції. стану, описаного у даному винаході, наприклад, Зачорненими кружками показані миші, що зазнали раку, небажаного ангіогенезу і/або стану (напривпливу повітря. Зачорненими квадратиками ознаклад, відмінного від раку), асоційованого з небачають мишей, що зазнали впливу CO. жаним ангіогенезом. Вказаний лікарський засіб Фіг.5 являє собою діаграму, яка показує, що може використовуватися в способі лікування раку, індукована впливом CO зупинка росту клітин А549 наприклад, для профілактики ангіогенезу і/або для залежить від cGMP. Клітини піддають in vitro вплилікування стану, асоційованого з небажаним ангіову: повітря; CO; СО+1Н-[1,2,4]оксадіазоло[4,3генезом, відповідно до способу, наведеного у даа]хіноксалін-1-он (ODQ) або CO+Rp-8-бром-сСМР ному описі. Лікарський засіб може бути представ(Rp8-Br). лений у будь-якій формі, описаній у даному Фіг.6 являє собою діаграму, яка показує, що індукована впливом CO зупинка росту клітин мен 11 87438 12 ше виражена в клітинах раку ободової кишки люУ випадку газів, ефективні кількості моноокису дини (НТС), які характеризуються дефіцитом р21. вуглецю в композиції загалом укладаються в діаWt=клітини НТС дикого типу; Wt+СО=клітини дикопазон, що складає приблизно від 0,0000001мас.% го типу, що зазнали впливу CO; р21-/-=клітиниприблизно до 0,3мас.%, наприклад, приблизно від НТС, дефіцитні по р21; р21 -/-+СО = НТС-клітини, 0,0001мас.% до 0,25мас.%, переважно щонаймедефіцитні по р21, що зазнали впливу CO. нше приблизно 0,001мас.%, наприклад щонаймеФіг.7 являє собою діаграму, яка показує, що нше 0,005мас.%, 0,010мас.%, 0,02мас.%, CO інгібує утворення клітинами А549 фактора рос0,025мас.%, 0,03мас.%, 0,04мас.%, 0,05мас.%, ту ендотелію судин (VEGF). Повітря=клітини А549, 0,06мас.%, 0,08мас.%, 0,10мас.%, 0,15мас.%, що зазнали впливу повітря; СО=клітини А 549, що 0,20мас.%, 0,22мас.% або 0,24мас.% моноокису зазнали впливу CO. вуглецю. Переважні діапазони включають в себе, Фіг.8 являє собою діаграму, яка показує, що наприклад, приблизно від 0,001мас.% до об'єм пухлини знижується у мишей, яким були 0,24мас.%, приблизно від 0,005мас.% до зроблені ін'єкції клітинами А549 і які зазнали впли0,22мас.%, приблизно від 0,005мас.% до ву СО+повітря (СО), в порівнянні з мишами, яким 0,05мас.%, приблизно від 0,010мас.% до були зроблені ін'єкції клітинами А549 і які зазнава0J20мас.%, приблизно від 0,02мас.% до ли впливу тільки повітря (повітря). 0,15мас.%, приблизно від 0,025мас.% до ФІГ.9А являє собою об'єднану картину імунних 0,10мас.%, приблизно від 0,03мас.% до 0,08мас.% блотів, яка показує, що вплив CO на клітини А549 або приблизно від 0,04мас.% до 0,06. У випадку протягом 24-часового періоду викликає зміни ексрідких розчинів CO, ефективні кількості в основнопресії р21, р27, проліферації антигену клітинних му укладаються в інтервал, що складає приблизно ядер (PCNA), Cdc25b і цикліну D1. Лінія 1=клітини, від 0,0001 до 0,0044г СО/100г рідини, наприклад, що зазнали впливу CO протягом 0 годин, лінія щонайменше 0,0001, 0,0002, 0,0004, 0,0006, 2=клітини, що зазнали впливу CO протягом 24 0,0008, 0,0010, 0,0013, 0,0014, 0,0015, 0,0016, годин. 0,00018, 0,0020, 0,0021, 0,0022, 0,0024, 0,0026, Фіг.9В являє собою картину імунних блотів, 0,0028, 0,0030, 0,0032, 0,0035, 0,0037, 0,0040 або яка показує, що вплив СО на клітини А549 протя0,0042г СО/100г рідкого розчину. Переважні діапагом періоду часу, що становить 4, 8 і 24 години, зони включають в себе, зокрема, приблизно від викликає зміни в експресії р21. 0,0010 до 0,0030г СО/100г рідини, приблизно від Термін "моноокис вуглецю" (або СО) в кон0,0015 до 0,0026г СО/100г рідини або приблизно тексті даного опису означає молекулярний моновід 0,0018 до 0,0024г СО/100г рідини. Практикуюокис вуглецю в газоподібному стані, стиснутий до чий фахівець у даній галузі може оцінити ситуацію, рідкої форми або розчинений у водному розчині. при якій можуть використовуватися кількості, що Терміни "композиція моноокису вуглецю" та "фарвиходять за межі даного діапазону, в залежності мацевтична композиція, яка містить моноокис вугвід напрямку застосування. лецю" використовуються у даному описі як указанТермін "пацієнт" в контексті даного опису ня на газоподібну або рідку композицію, яка включає в себе тварину, людину або відмінну від містить моноокис вуглецю, яка може бути введена людини тварину, відносно якої можна провести в організм пацієнта і/або в орган, наприклад, в лікування за способом згідно з винаходом. Ветеорган, уражений раком. Фахівець, що практикує у ринарні напрямки застосування також відповідаданій галузі, може визначити, яка форма фармають обсягу даного винаходу. Даний термін вклюцевтичної композиції, тобто газоподібна, рідка або чає в себе, але, не обмежується перерахованим, поєднання газоподібної або рідкої форм, переважптахів, плазунів, земноводних та ссавців, наприні для даного варіанту застосування. клад, людину та інших представників приматів, Терміни "ефективна кількість" та "ефективна свиней, гризунів, таких як миші та пацюки, кролидля лікування" в контексті даного опису відносятьків, морських свинок, хом'ячків, корів, коней, кішок, ся до кількості або до концентрації моноокису вугсобак, овець або кіз. Переважні суб'єкти включалецю, що використовуються протягом певного ють в себе людину, сільськогосподарських тварин періоду часу (включаючи гостре або хронічне ввета домашніх тварин, таких як кішки та собаки. Тедення, а також періодичне або безперервне ввермін "лікування" в контексті даного опису означає дення), які характеризуються ефективністю при їх досягнення приглушення, ослаблення ефекту або введенні з метою індукції запланованого ефекту подовження життя пацієнта, який страждає від або фізіологічного результату. Ефективні кількості певного стану, наприклад, від раку. моноокису вуглецю, призначені для використання Приклади розладів механізмів проліферації у даному винаході, включають в себе, наприклад, і/або диференціювання клітини включають в себе такі кількості, які приглушують ріст раку, наприрак, наприклад, карциному, саркому, утворення клад, пухлин і/або пухлинних клітин, для поліпметастазів і неопластичні захворювання крові, шення стану пацієнта, який страждає від раку або наприклад, лейкоз. має ризик розвитку раку, а також з метою поліпМетастазуюча пухлина може виникати на осшення результатів інших видів лікування. нові множини первинних типів пухлин, включаючи, Ефективні кількості моноокису вуглецю можуть але, не обмежуючись перерахованим, метастази, включати в себе, наприклад, кількості, які успішно що походять з клітин простати, ободової кишки, впливають на ангіогенез, на утворення фактора легені, молочної залози, кісток та печінки. Метаросту ендотеліальних клітин судин і/або будь-які стази розвиваються, наприклад, в тих випадках, клітинні механізми, що беруть участь в приглуколи пухлинні клітини, що поширюються з первиншенні росту пухлини, наведені у даному винаході. ної пухлини, прикріпляються до ендотелію судин, 13 87438 14 проникають в оточуючі тканини і ростуть з утвораніше, ніж виникають будь-які ознаки захворюренням незалежних пухлин в місцях, відділених вання. Індивідууми, які мають ризик розвитку завід первинних пухлин. хворювання, включають в себе, наприклад, тих, які Термін "рак" відноситься до клітин, що мають зазнають впливу канцерогенів, наприклад, шляхом здатність до автономного росту. Приклади таких вживання їх, зокрема, шляхом інгаляції і/або приклітин включають в себе клітини, що характеризуйому всередину, в кількостях, які, як випливає з ються аномальним станом або умовами, при яких статистичних даних, прискорюють розвиток раку у відбувається швидка проліферація зростаючих чутливих індивідуумів. В їх число включаються клітин. У контексті даного опису термін включає в також індивідууми, що мають ризик розвитку засебе раковий ріст, наприклад, пухлини, онкогенні хворювання в зв'язку з тим, що вони зазнають процеси, метастатичні тканини і трансформовані впливу ультрафіолетового опромінення або відпозлоякісним процесом клітини, тканини і органи, відного оточення в зв'язку з особливостями їх незалежно від типу гістопатології або стадії інвапрофесійної діяльності або за спадковими ознаказивності. Даний термін також включає в себе зломи, а також індивідууми, що мають ознаки переякісні новоутворення систем різних органів, таких дракового стану, такі як поліпи. Аналогічно, індивіяк дихальна, серцево-судинна, ниркова, репродукдууми на дуже ранніх стадіях раку або розвитку тивна, гематологічна, нервова, печінкова, шлункометастазів (наприклад, якщо в організмі індивідууво-кишкова та ендокринна системи, а також адема або у певному місці тканини індивідуума є одна нокарциноми, які включають в себе злоякісні або декілька аберантних клітин) можуть одержати новоутворення, такі як найбільш поширені види користь від такого профілактичного лікування. раку ободової кишки, карцинома ниркових клітин, Досвідчені фахівці, що практикують у даній гарак передміхурової залози і/або пухлини яєчок, лузі, можуть визначити пацієнта, який діагностованедрібноклітинний рак легень, рак тонкої кишки та ний лікарем (або ветеринаром, при використанні рак стравоходу. Рак, який відноситься до природвідповідних умов для діагностики пацієнтів) як но виникаючого виду, включає в себе рак, який не страждаючий від захворювання, описаного у давикликаний експериментально шляхом імплантації ному винаході, або який має ризик його розвитку, ракових клітин суб'єкту, і включає в себе, напринаприклад, раку, за допомогою відомого у даній клад, спонтанно виникаючий рак, рак, викликаний галузі способу, наприклад, шляхом аналізу історії впливом на пацієнта канцерогену(ів), рак, виникахвороби пацієнта, проведення діагностичних тестів ючий після вбудування трансгенного онкогену або і/або при використанні різних методик одержання виключення супресорного гена пухлини, і рак, визображення органів. кликаний інфекціями, наприклад, вірусними інфекФахівці, що практикують у даній галузі, можуть ціями. Термін "карцинома" відомий фахівцям у також визначити, що композиції моноокису вугледаній галузі і відноситься до злоякісних новоутвоцю необов'язково повинні вводитися пацієнту тією рень епітеліальних або ендокринних тканин. Терсамою особою, яка встановила діагноз (або примін також включає в себе карциносаркоми, які відзначила пацієнту застосування композиції мононосяться до злоякісних пухлин, що складаються з окису вуглеводу). Композиції моноокису вуглецю карциноматозних та саркоматозних тканин. Термін можуть вводитися (і/або введення може контро"аденокарцинома" відноситься до карциноми, вилюватися), наприклад, особою, яка встановила никаючої із залозистої тканини, або тканини, в якій діагноз і/або призначила лікування і/або будь-яким пухлинні клітини утворюють чітко розпізнавані заіншим індивідуумом, включаючи самого(саму) палозисті структури. цієнта (в тому випадку, наприклад, коли пацієнт Термін "саркома" відомий у даній галузі і відздатний здійснювати введення самостійно). носиться до злоякісних пухлин мезенхімного похоСпособи згідно з винаходом можуть також видження. Термін "гематопоетичні неопластичні розкористовуватися для інгібування небажаного (налади" означає захворювання, які включають приклад, шкідливого) ангіогенезу у пацієнта і для гіперпластичні/неопластичні клітини гематопоетилікування станів, залежних від ангіогенезу або чного походження. Гематопоетичний неопластичпов'язаних з ним. У контексті даного опису термін ний розлад може виникати з ліній мієлоїдних, лім"ангіогенез" означає утворення нових кровоносних фоїдних або еритроїдних клітин або їх клітинсудин в тканинах або органах. Термін "стан, залепопер'едників. жний від ангіогенезу або пов'язаний з ним" вклюВиди раку, які можуть зазнавати лікування з чає в себе будь-який процес або стан, який залевикористанням способів і композицій згідно з вижить або пов'язаний з ангіогенезом. Термін находом, включають в себе, наприклад, рак шлунозначає стани, які включають в себе рак, а також ку, ободової кишки, прямої кишки, рота/глотки, стани, відмінні від раку. Стани, залежні від ангіогестравоходу, гортані, печінки, підшлункової залози, незу або пов'язані з ним, можуть бути пов'язані з легені, молочної залози, шийки матки, матки, яєчнебажаним ангіогенезом (наприклад, виникати на ників, передміхурової залози, яєчок, сечового пуйого основі), а також з бажаним ангіогенезом (назиря, шкіри, кістки, нирки, мозку/центральної нерприклад, у випадку сприятливого процесу). Термін вової системи, шиї та горла, хвороби Ходжкіна, невключає в себе, наприклад, солідні пухлини, метаходжкінский лейкоз, саркоми, хоріокарциному та стази пухлин, доброякісні пухлини, наприклад, лімфому, в числі інших видів раку. гемангіоми, акустичні невриноми, нейрофіброми, Індивідууми, які розглядаються як такі, що матрахоми і піогенні гранульоми, ревматоїдний артють ризик розвитку раку, можуть одержати користь рит, вовчак та інші розлади з'єднувальної тканини, від даного винаходу головним чином в зв'язку з псоріаз, рожеві вугри, ангіогенні захворювання тим, що профілактичне лікування може початися очей, наприклад, діабетичну ретинопатію, ретино 15 87438 16 патію недоношеності, дегенерацію жовтої плями, може бути введений пацієнту в переміжному ререакцію відторгнення тканини рогівки, нейроваскужимі або безперервно, починаючи з періоду часу лярну глаукому, ретролентальну фіброплазію, від 0 до 20 днів до початку хіміотерапії, імунотерачервоність шкіри, синдром Ослер-Вебера, ангігепії, генної терапії або променевої терапії (і в тому нез міокарда, реваскуляризацію бляшок, телеангівипадку, коли призначають множинні дози перед оектазію, гемофілічну артропатію, ангіофіброму та введенням кожної індивідуальної дози), наприутворення грануляційної тканини в ранах. Інші клад, починаючи щонайменше приблизно за 30 процеси, в які залучений ангіогенез, включає в хвилин, зокрема, приблизно за 1, 2, 3, 5, 7 або 10 себе репродукцію та загоєння ран. У зв'язку з влагодин, або приблизно за 1, 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 18 стивими анти-VЕGF-властивостями, СО може бути або 20 днів або більше 20 днів, до початку лікутакож корисний при лікуванні захворювань, що вання. Альтернативно або в доповнення, CO може характеризуються надмірною або аномальною бути введений пацієнту одночасно з проведенням стимуляцією ендотеліальних клітин. Такі захворюхіміотерапії, імунотерапії, генної терапії або провання включають в себе, наприклад, спайки в обменевої терапії. Альтернативно або в доповнення, ласті кишечнику, атеросклероз, склеродерму, гіCO може бути введений пацієнту після проведенпертрофічні рубці, наприклад, келоїдні рубці, а ня хіміотерапії, імунотерапії, генної терапії або також ті види раку індотеліальних клітин, які чутпроменевої терапії, наприклад, починаючи відразу ливі до стимуляції VEGF. після введення, і продовжуватися в переміжному Кількості CO, ефективні для лікування раку, режимі або безперервно протягом приблизно 1, 2, станів, залежних від ангіогенезу або пов'язаних з 3, 5, 7 або 10 годин або приблизно 1, 2, 5, 8, 10, ним (наприклад, станів відмінних від раку), для 20, 30, 50 або 60 днів, одного року, протягом невиінгібування небажаного ангіогенезу у пацієнта, значеного часу або до того часу, коли лікар визнаможуть вводитися (або призначатися) пацієнту, чить, що введення CO більше не є обов'язковим. наприклад, лікарем або ветеринаром в день діагВ тому, що стосується хірургічних процедур, ностування даного пацієнта як пацієнта, що має CO може бути введений системно або місцево будь-який з вказаних розладів або станів або як пацієнту до, під час і/або після проведення хірургіпацієнта, що має фактор ризику, що визначає підчної операції. Пацієнти можуть вдихати СО в конвищену імовірністю того, що у пацієнта може розцентраціях, в інтервалі приблизно від 10ч/млн. до винутися такий(і) розлад(и) або стан(и) (напри1000ч/млн., зокрема, приблизно від 100ч/млн. до клад, у випадку пацієнта, який в недавньому 800ч/млн., приблизно від 150ч/млн. до 600ч/млн. зазнавав або зазнає впливу канцерогену(ів)). Паабо приблизно від 200ч/млн. до 500ч/млн. Перецієнти можуть вдихати СО в концентраціях, в діаважні концентрації включають в себе, зокрема, пазоні від 10ч/млн. до 1000ч/млн., зокрема, приприблизно 30ч/млн., 50ч/млн., 75ч/млн., 100ч/млн., близно від 100ч/млн. до 800ч/млн., приблизно від 125ч/млн., 200ч/млн., 250ч/млн., 500ч/млн., 150ч/млн. до 600ч/млн. або приблизно від 750ч/млн. або приблизно 1000ч/млн. СО може 200ч/млн. до 500ч/млн. Переважні концентрації бути введений пацієнту в переміжному режимі або включають в себе, зокрема, приблизно 30ч/млн., безперервно протягом 1 години, 2 годин, 3 годин, 50ч/млн., 75ч/млн., 100ч/млн., 125ч/млн., 4 годин, 6 годин, 12 годин або приблизно протягом 200ч/млн., 250ч/млн., 500ч/млн., 750ч/млн. або 1, 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 18 або 20 днів або більш 20 приблизно 1000ч/млн. СО може бути введений днів, до проведення операції. Газ може бути ввепацієнту в переміжному режимі або безперервно. дений в період часу, який безпосередньо передує СО може бути введений протягом щонайменше хірургічній операції, і необов'язково продовжуватиприблизно 1, 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 18 або 20 днів ся під час операції або вказане введення може або більш 20 днів, наприклад, протягом 1, 2, 3, 5, припинитися щонайменше за 15 хвилин до початку або 6 місяців, або до того часу, коли у пацієнта операції (наприклад, щонайменше за 30 хвилин, 1 більше не виявляються симптоми стану або загодина, 2 години, 3 години, 6 годин або 24 години хворювання, або до того моменту, коли пацієнт до початку операції). Альтернативно або в доповбільше не діагностується як пацієнт, що має ризик нення, СО може бути введений пацієнту під час розвитку вказаного стану або розладу. У кожний операції, наприклад, шляхом інгаляції і/або шляданий день СО може бути введений безперервно хом місцевого введення. Альтернативно або в протягом всього дня або в переміжному режимі, доповнення, СО може бути введений пацієнту піснаприклад, шляхом однократного пропускання ля проведення операції, наприклад, починаючи порції СО в день (коли використовується висока відразу після завершення операції, і продовжуваконцентрація) або протягом періоду часу до 23 тися протягом приблизно 1, 2, 3, 5, 7 або 10 годин годин в день, наприклад, до 20, 15, 12, 10, 6, 3 або або приблизно протягом 1, 2, 5, 8, 10, 20, 30, 50 2 годин, або до однієї години на день. або 60 днів, 1 року, протягом невизначеного періЯкщо пацієнт потребує проведення курсу хіоду часу або до того моменту після завершення міотерапії, променевої терапії, імунотерапії, генної операції, коли пацієнт вже більше не буде уражетерапії або хірургічного втручання (наприклад, ний раком або не буде мати ризик його розвитку. відповідно до призначення, зробленого лікарем Одержання газоподібних композицій або ветеринаром), то пацієнт може зазнавати ліКомпозиція моноокису вуглецю може являти кування СО (наприклад, газоподібною композицісобою газоподібну композицію моноокису вуглецю. єю СО) до, під час і/абo після проведення хіміотеСтиснутий газ або газ, що знаходиться під тиском, рапії, променевої терапії і/або хірургічної операції. який використовується в способах згідно з винахоТак, наприклад, що стосується хіміотерапії, імунодом, може бути одержаний з будь-якого комерційтерапії, генної терапії та променевої терапії, то СО ного джерела і знаходитися в резервуарі будь 17 87438 18 якого типу, придатного для зберігання стиснутого включає в себе газоподібний моноокис вуглецю газу. Так, наприклад, стиснуті гази або гази, що всередині даної камери або простору. Альтерназнаходяться під тиском, можуть бути одержані з тивно, вказані гази можуть вивільнятися всередибудь-якого джерела, яке займається постачанням ну апарату, який з'єднаний з маскою для дихання стиснутих газів, таких як кисень, для медичного або з дихальною трубкою, за допомогою чого застосування. Термін "медично чистий газ" в констворюється атмосфера, яка містить газоподібний тексті даного опису, відноситься до газу, придатмоноокис вуглецю в масці для дихання або в диного для введення пацієнтам, відповідно до даного хальній трубці, що гарантує те, що пацієнт буде винаходу. Газ, що знаходиться під тиском, який єдиною людиною, яка зазнає впливу значних кільмістить CO, що використовується в способах згідкостей моноокису вуглецю. но з винаходом, може постачатися таким чином, Рівні моноокису вуглецю в атмосфері або у що всі гази в необхідній готовій композиції (напривентиляційному контурі можуть бути виміряні або клад, CO, Не, NO, СO2, O2, N3) будуть знаходитися можуть зазнавати контролю з використанням спов одному і тому самому резервуарі, за винятком собів, відомих у даній галузі техніки. Такі способи того, що NO і O2 не можуть зберігатися разом. Невключають в себе методи електрохімічного визнаобов'язково способи згідно з винаходом можуть чення, газової хроматографії, радіоізотопного підздійснюватися з використанням множинних конрахунку, методи вимірювання інфрачервоного потейнерів, що містять індивідуальні гази. Так, наглинання, колориметричний та електрохімічні приклад, один резервуар може використовуватися методи, основані на використанні селективних для зберігання моноокису вуглецю, при наявності мембран [див., наприклад, Simderraan et al., Clin. або за відсутності в ньому інших газів, вміст якого Chem. 28: 2026-2032, 1982; Ingi et al.. Neuron 16: може бути необов'язково перемішаний з кімнатним 835-842, 1996]. Вміст моноокису вуглецю в діапаповітрям або з вмістом інших резервуарів, напризоні концентрацій меншому ч/млн. може бути виклад, резервуарів, які містять кисень, азот, двозначений, наприклад, методами газової хроматогокис вуглецю, стиснуте повітря або будь-який інрафії та радіоізотопного підрахунку. Крім того, у ший прийнятний газ або їх суміші. даній галузі відомо, що рівні моноокису вуглецю в Газоподібні композиції, що вводяться пацієнту, діапазоні концентрацій меншому ч/млн. можуть згідно з винаходом в типовому випадку містять від бути виміряні в біологічній тканині за допомогою 0мас.% приблизно до 79мас.% азоту, приблизно газового сенсора, який працює в середньому діавід 21мас.% і приблизно до 100мас.% кисню, і пазоні інфрачервоних променів [див., наприклад, приблизно від 0,0000001мас.% до 0,3мас.% (що Morimoto et al., Am. J. Physiol. Hert. Circ. Physiol відповідає приблизно від 1млрд.д. або 0,001ч/млн. 280: H482-H488, 2001]. Сенсори моноокису вуглеі приблизно до 3000ч/млн.) моноокису вуглецю. цю і пристрою для виявлення відповідного газу Переважно кількість азоту в газоподібній композишироко доступні з багатьох комерційних джерел. ції складає приблизно 79мас.%, кількість кисню Одержання рідких композицій складає приблизно 21мас.% і кількість моноокису Композиції моноокису вуглецю можуть бути вуглецю складає приблизно від 0,0001мас.% до також представлені у вигляді рідкої композиції мо0,25мас.%, переважно щонайменше приблизно ноокису вуглецю. Рідка форма композиції моно0,001мас.%, зокрема, щонайменше приблизно окису вуглецю може бути одержана шляхом обро0,005мас.%, 0,01мас.%, 0,02мас.%, 0,025мас.%, бки будь-яким відомим у даній галузі способом, 0,03мас.%, 0,04мас.%, 0,05мас.%, 0,06мас.%, який спричиняє розчинення газів в рідинах. Напри0,08мас.%, 0,010мас.%, 0,15мас.%, 0,20мас.%, клад, рідина може бути вміщена в так званий "ін0,22мас.% або 0,24мас.%. Переважні діапазони кубатор СО2" і далі може бути піддана впливу безвмісту моноокису вуглецю включають в себе приперервного потоку моноокису вуглецю, переважно близно від 0,005мас.% до 0,24мас.%, приблизно збалансованого відповідною кількістю двоокису від 0,01мас.% і приблизно до 0,22мас.%, приблизвуглецю, до досягнення бажаної концентрації моно від 0,015мас.% приблизно до 0,20мас.%, приноокису вуглецю в рідині. Як інший приклад можна близно від 0,08мас.% приблизно до 0,20мас.% і указати спосіб, відповідно до якого газоподібним приблизно від 0,025мас.% приблизно до 0,1мас.%. моноокисом вуглецю безпосередньо "барботують" Потрібно зазначити, що газоподібні композиції рідину до досягнення в ній бажаної концентрації моноокису вуглецю, які містять моноокис вуглецю моноокису вуглецю. Кількість моноокису вуглецю, в концентрації вище ніж 0,3% (наприклад 1% або яка може бути розчинена у даному водному розвище), можуть використовуватися лише протягом чині, підвищується при зниженні температури. Як короткострокових періодів часу (наприклад, протяінший приклад можна указати спосіб пропускання гом одного або декількох вдихів), в залежності від відповідної рідини через трубку, яка дозволяє напрямку застосування. здійснювати дифузію газу, де трубка проходить Газоподібна композиція моноокису вуглецю через атмосферу, яка містить моноокис вуглецю може використовуватися для створення атмосфе(наприклад, з використанням пристрою, такого як ри, яка містить газоподібний моноокис вуглецю. оксигенатор, що містить екстракорпоральну мемАтмосфера, яка містить відповідні рівні моноокису брану). Моноокис вуглецю дифундує в рідину з вуглецю, може бути створена, наприклад, шляхом утворенням рідкої композиції моноокису вуглецю. підведення резервуара, який містить газ, що знаЗрозуміло, що така рідка композиція, признаходиться під тиском, який включає в себе газопочена для введення в живий організм тварини, подібний моноокис вуглецю, і вивільнення газу, що винна в момент введення в організм тварини мати знаходиться під тиском, з резервуара в камеру або температуру 37°С або близько того. певний простір, із створенням атмосфери, яка 19 87438 20 Вказана рідина може являти собою будь-яку ся в терапевтичній газоподібній композиції, залерідину, відому фахівцям у даній галузі, яка придажить від рівня поглинання, рівня розподілу, рівня тна для введення пацієнтам [див., наприклад, інінактивації і виділення (в основному через диханструкцію Oxford Textbook of Surgery, Morris and ня) моноокису вуглецю, а також від ряду інших Malt, Eds., Oxford University Press (1994)]. В основфакторів, відомих фахівцям у даній галузі. Потрібному рідина може являти собою водний розчин. но також розуміти, що у випадку будь-якого конкПриклади розчинів включають в себе забуфереретного суб'єкта підбираються конкретні схеми ний фосфатом фізіологічний розчин (PBS);, дозування протягом часу, який відповідає потребам даного індивідуума, і на основі висновку фахіCelsiorÔ, PerfadexÔ, розчин Колінса, цитратний вця, що здійснює введення або контроль введення розчин і розчин, що одержується за методикою композиції, і що встановлені діапазони концентраУніверситету Вісконсин (UW) [Oxford Textbook of ції є лише прикладами і не обмежують обсяг і Surgery, Morris and Malt, Eds., Oxford University практику здійснення даного винаходу. Курс лікуPress (1994)]. В одному варіанті здійснення даного вання може контролюватися і дозування CO мовинаходу рідина являє собою розчин Рінгера, нажуть коректувати для цілей гарантії оптимального приклад, розчин Рінгера з вмістом лактату, або лікування пацієнта. Даний винахід відноситься до будь-яку іншу рідину, яка може використовуватися гострого, підгострого та хронічного введення модля інфузії пацієнту. В іншому варіанті рідина ноокису вуглецю, що визначається, наприклад, включає в себе кров, наприклад, суцільну кров. тяжкістю або персистенцією захворювання у паціПри цьому кров може бути повністю або частково єнта. Моноокис вуглецю може доставлятися пацінасичена моноокисом вуглецю. єнту протягом часу (включаючи невизначений пеБудь-яка відповідна рідина може бути до певріод часу), достатнього для лікування стану і для ної концентрації насичена моноокисом вуглецю за досягнення заданого фармакологічного або біолодопомогою газових дифузорів. Альтернативно, гічного ефекту. можуть використовуватися заздалегідь приготоваНаведені нижче приклади описують способи ні розчини, які, за результатами контролю якості, та пристрої, які можуть використовуватися для містять задані рівні моноокису вуглецю. Точний введення газоподібних композицій моноокису вугконтроль дози може бути досягнутий шляхом вилецю пацієнтам. мірювання з використанням проникної для газу і не Вентилятори проникної для рідини мембрани, з'єднаної з аналіМонооксид вуглецю медичної якості (концентзатором моноокису вуглецю. Розчини можуть бути рації можуть варіюватися) може постачатися в насичені до бажаних ефективних концентрацій і суміші з повітрям або іншим кисневмісним газом в підтримуватися на таких рівнях. стандартному резервуарі, який містить стиснутий Лікування пацієнтів з використанням композигаз (наприклад, який містить 21% О2, 79% N2). Газ цій моноокису вуглецю не має реактивності і концентрація, яка потрібна Пацієнт може бути підданий лікуванню комподля здійснення способів згідно з винаходом, істотзицією моноокису вуглецю будь-яким способом, но нижче межі запалення (10% в повітрі). У лікарвідомим у даній галузі, який включає в себе ввенях газ переважно підводять до ліжок пацієнтів, де дення пацієнтам газу і/або рідини. Композиції мойого перемішують з киснем або кімнатним повітноокису вуглецю можуть бути призначені і/або рям за допомогою змішувача до досягнення бажавведені пацієнту, якому встановлений діагноз, наної концентрації в ч/млн. (частин на мільйон). Паприклад, рак, або відносно якого відомо, що він цієнт вдихає суміш повітря за допомогою має ризик розвитку раку. Даний винахід включає в вентилятора, який встановлений на швидкість посебе системне введення рідких або газоподібних дачі, що відповідає потребам і комфортним відчуткомпозицій моноокису вуглецю пацієнтам (напритям пацієнта. Рівень визначається за дихальним клад, шляхом інгаляції і/або введення всередину) і графіком (тобто за швидкістю дихання, об'єму місцеве введення композицій в органи пацієнта in вдиху-видиху і т.п.). В дану систему доставки моsitu (наприклад шляхом, проковтування, інсуфляції жуть бути також введені один або більша кількість і/або введення в черевну порожнину). Композиції запобіжних механізмів для запобігання ситуації, можуть вводитися і/або їх введення може контропри якій пацієнт може одержати більшу, ніж потрілюватися будь-якою особою (наприклад, медичбно, кількість моноокису вуглецю. Рівень моноокиним працівником, ветеринаром або людиною, що су вуглецю, необхідний для пацієнта, відстежуєтьздійснює догляд, наприклад, власником тварини ся при аналізі (1) рівня карбоксигемоглобіну (Cob), (наприклад, собаки або кішки)), в залежності від що вимірюється у венозній крові, і (2) за рівнем виду пацієнта, що підлягає лікуванню, і/або самим моноокису вуглецю, що видихається, в боковому пацієнтом, якщо пацієнт здатний здійснювати таку порту вентилятора. Вплив моноокису вуглецю мопроцедуру. же бути скоректований відповідно до стану здороСистемна доставки моноокису вуглецю в'я пацієнта і за оцінкою визначних маркерів. При Газоподібні композиції моноокису вуглецю монеобхідності, моноокис вуглецю може бути вимижуть доставлятися системно пацієнту, наприклад, тий у пацієнта шляхом переключення на вдихання пацієнту, у якого діагностований рак або відносно 100% Ο2. Моноокис вуглецю не метаболізується, якого відомо, що він має ризик розвитку раку. Гатаким чином все, що пацієнт вдихає, буде в кінцезоподібні композиції моноокису вуглецю в типововому результаті видихатися, за винятком дуже му випадку вводяться шляхом вдихання через рот невеликого відсотка, який перетворюється в СО2. або носові проходи в легені, де моноокис вуглецю Моноокис вуглецю може бути також змішаний з швидко поглинається в кровотік пацієнта. Конценбудь-якою кількістю О2 для забезпечення терапевтрація активної сполуки (CO), що використовуєть 21 87438 22 тичної доставки моноокису вуглецю без розвитку Даний винахід також відноситься до водних згодом стану гіпоксії. розчинів, які містять моноокис вуглецю, які можуть Маска для обличчя і намет використовуватися для системної доставки пацієГазову суміш, яка містить моноокис вуглецю, нту, наприклад, шляхом пероральної доставки одержують відповідно до вказаного вище опису, і/або шляхом інфузії пацієнту, наприклад, внутрішдля використання її пацієнтом шляхом інгаляції за ньовенно, внутрішньоартеріально, внутрішньочедопомогою маски для обличчя або намету. Концеревинно і/або підшкірно. Наприклад, рідкі компонтрація у газі, що вдихується, може бути змінена зиції CO, такі як розчин Рінгера, насичений CO, або видалена за рахунок вимивання шляхом просможуть бути введені шляхом інфузії пацієнту, який того переключення на подачу 100% О2. Моніторинг страждає від раку або який має ризик розвитку рівнів моноокису вуглецю здійснюється в або в раку. Альтернативно або в доповнення, пацієнту безпосередній близькості від маски або намету за може бути шляхом інфузії введена кров, частково допомогою пристрою безвідмовно працюючого або повністю насичена CO. механізму, який перешкоджає проникненню до Даний винахід також відноситься до тих засоскладу газу, що вдихується, дуже великої концентбів, які здатні здійснювати доставку доз газоподібрації моноокису вуглецю. них композицій CO або рідких композицій CO (наПереносний інгалятор приклад, СО-вивільняючі камеді, креми, мазі, Стиснутий моноокис вуглецю може бути ввепастилки або бляшки). дений в переносний пристрій для інгаляції та виМісцеве лікування органів з використанням користаний для інгаляції в дозі, що відмірюється, моноокису вуглецю наприклад, для здійснення лікування в переміжАльтернативно або в доповнення, композиції ному режимі реципієнта, який не знаходиться в моноокису вуглецю можуть наноситися безпоселікарняних умовах. У контейнери можуть бути редньо на органи, наприклад, на шкіру та внутрівведені різні концентрації моноокису вуглецю. шні органи. Газоподібні композиції можуть наносиПристрій може бути простим і являти собою неветися безпосередньо на внутрішню або зовнішню ликий резервуар (наприклад, до 5кг), який містить частину організму пацієнта для лікування органів відповідним чином розбавлений СО і забезпечепацієнта. Газоподібні композиції можуть наноситиний регулюючим клапаном і трубкою, з якої пацієнт ся безпосередньо на внутрішні органи пацієнта за відбирає порцію СО відповідно до стандартного допомогою будь-якого способу, відомого у даній режиму або згідно з встановленою потребою. галузі для інсуфляції газів пацієнту. Так, наприВнутрішньовенна штучна легеня клад, гази, зокрема, двоокис вуглецю, часто піддуШтучна легеня (комп'ютерний пристрій для вають в черевну порожнину пацієнта для полегздійснення газообміну в крові), призначена для шення огляду органів в процедурах лапароскопії доставки О2 і видалення СО2, може використову[див., наприклад, Oxford Textbook of Surgery, Morris ватися для доставки моноокису вуглецю. Катетер and Malt, Eds., Oxford University Press (1994)]. Фапри її імплантації залишається у великих венах і хівці, що практикують у даній галузі, розуміють, що може використовуватися для доставки моноокису аналогічні процедури можуть використовуватися вуглецю в заданих концентраціях або шляхом сисдля введення композицій моноокису вуглецю безтемної доставки, або шляхом введення в локальну посередньо у внутрішній орган пацієнта. Шкіру ділянку. Доставка може являти собою місцеву доможна піддати місцевому лікуванню з використанставку високої концентрації моноокису вуглецю ням газоподібної композиції, наприклад, шляхом протягом короткого періоду часу в дану ділянку впливу на уражену шкіру газоподібною композиціпухлини (вказана висока концентрація буде швидєю в нормобарометричній камері (описаній вище) ко розбавлятися в кровотоці) або може забезпечуі/або шляхом видування композиції моноокису вугвати відносно тривалу експозицію меншою концелецю безпосередньо на шкіру. Якщо пацієнт не нтрацією моноокису вуглецю [див., наприклад, вдихає газ, концентрація СО в газоподібній компоHattler et al., Artif. Organs 18(11): 806-812, 1994; зиції може бути досить високою, наприклад, понад and Golob et al., ASAIO J. 47(5): 432-437, 2001]. 0,25% і приблизно аж до 100%. Нормобарична камера Рідкі композиції моноокису вуглецю також моУ деяких випадках буває бажано піддавати жуть вводитися місцево в органи пацієнта. Рідкі всього пацієнта впливу моноокису вуглецю. При форми композиції можуть вводитися будь-яким цьому пацієнт може знаходитися всередині гермеспособом, відомим у даній галузі, який застосовутичної камери, через яку пропускають моноокис ється для введення рідин пацієнтам. Як і у випадку вуглецю (до досягнення рівня, який нешкідливий газоподібних композицій, рідкі композиції можуть для пацієнта, або до рівня, який характеризується застосовуватися безпосередньо для нанесення на прийнятним ступенем ризику для пацієнта без ривнутрішню і/або зовнішню частину тіла для лікузику впливу на оточуючих). Після завершення сеавання органів пацієнта. Так, наприклад, рідкі комнсу впливу камера може бути заповнена повністю позиції можуть вводитися перорально, наприклад, повітрям (наприклад, яке містить 21% О2 і 79% N2) шляхом проковтування інкапсульовдної або неіні проби можуть бути аналізовані за допомогою капсульованої дози водної композиції моноокису аналізаторів моноокису вуглецю, для гарантії того, вуглецю. Як інший приклад, рідина, наприклад, що в камері не залишилося моноокису вуглецю, сольовими розчинами, які містять розчинний CO, після чого пацієнту дозволяють покинути систему, можуть бути зроблені ін'єкції безпосередньо в чев якій він зазнавав впливу газу. ревну порожнину пацієнта в ході лапароскопічних Системна доставка рідких композицій CO процедур. Альтернативно або в доповнення, вплив in situ або на органи може бути здійснено за 23 87438 24 допомогою будь-якого відомого у даній галузі мекористання екзогенно введеного гена (наприклад, тоду, наприклад, шляхом наповнення in situ органу рекомбінантного гена). НО-1 або феритин переварідкою композицією моноокису вуглецю під час жно беруть з організму того самого виду (наприхірургічної операції [див., наприклад, Oxford клад, людини, миші, пацюка і т.п.), до якого налеTextbook of Surgery, Morris and Malt, Eds., Oxford жить даний пацієнт, з метою мінімізації якихUniversity Press (1994)]. Шкіру можна піддати міснебудь імунних реакцій. Експресія може бути здійцевому лікуванню рідкою композицією, наприклад, снена за допомогою конститутивного промотору шляхом ін'єкції рідкої композиції в шкіру. Як ще (наприклад, промоторів цитомегаловірусів) або один приклад, шкіру можна піддати місцевому літканиноспецифічного промотору (наприклад, прокуванню шляхом нанесення рідкої композиції безмотору молочної сироватки, у випадку клітин мопосередньо на поверхню шкіри, наприклад, шлялочної залози, або промотору альбуміну для кліхом протирання або збризкування шкіри даною тин печінки). Відповідний вектор для проведення рідиною і/або шляхом занурення шкіри в рідку генної терапії (наприклад, ретровіруси, аденовірукомпозицію. Інші доступні для зовнішнього впливу си, аденоасоційовані віруси (AAV), віруси віспи поверхні, такі як поверхні очей, рота, горла, піхви, (наприклад, вірус вісповакцини), вірус імунодефішийки матки, сечових шляхів, ободової кишки та циту людини (ВІЛ), "мінут-вірус" миші, вірус гепаануса, можуть бути аналогічним чином піддані титу В, вірус грипу, вірус-1 простого герпесу і ленмісцевому лікуванню рідкими композиціями. тивіруси), що кодує НО-1 або феритин, вводиться Застосування гемоксигенази-1 та інших сполук пацієнту перорально, інгаляцією або ін'єкцією лоВ обсяг даного винаходу також входять індуккально в місце, призначене для лікування описація, експресія і/або ведення гемоксигенази-1 (НОного розладу або стану. Особливо переважним є 1) в поєднанні з введенням моноокису вуглецю. локальне введення безпосередньо в ділянку локаНаявність НО-1 може бути забезпечена у пацієнта лізації даного патологічного стану, наприклад, в шляхом індукції експресії НО-1 у пацієнта або пухлину і/або орган, що містить пухлину, або в шляхом введення екзогенного НО-1 безпосередякому починає розвиватися пухлина. Аналогічно ньо пацієнту. У контексті даного опису термін "інможуть вводитися плазмїдні вектори, що кодують дукція" означає спосіб викликати підвищене утвоНО-1 або апоферитин, наприклад, у вигляді "огорення білка, наприклад НО-1, у виділених клітинах леної" ДНК, ліпосом або в складі мікрочастинок. або клітинах тканини, органу або тварини з викоКрім того, екзогенний білок НО-1 "може бути ристанням власного клітинного ендогенного (навведений безпосередньо пацієнту будь-якими віприклад, нерекомбінантного) гена, який кодує бідомими у даній галузі способами. Екзогенний НО-1 лок. може бути введений безпосередньо, в доповнення НО-1 може бути індукований у пацієнта будьабо альтернативно, до індукції або експресії НО-1 яким відомим у даній галузі способом, наприклад, у пацієнта, як описано вище. Білок НО-1 може бути утворення НО-1 може бути індуковане геміном, доставлений пацієнту, наприклад, в складі ліпосом залізовмісним протопорфірином або кобальтвмісі/або у вигляді білка злиття, наприклад, білка злитним протопорфірином. Множина негемових засотя ТАТ [див., наприклад, Becker-Hapak et al., бів, включаючи важкі метали, цитокіни, гормони, Methods 24, 247-256 (2001)]. закис азоту (NO), СOСl2, ендотоксиновий і теплоАльтернативно або в доповнення, пацієнту вий шок є також сильними індукторами експресії можуть вводитися, в поєднанні з моноокисом вугНО-1 [Otterbein et al. Am. J. Physiol. Lung. Cell Mol. лецю, будь-які продукти метаболізму НО-1, наприPhysiol. 279: L1029-L1037, 2000; Choi et al., Am. J. клад, білірубін, білівердин, залізо і/або феритин, Respir. Cell Mol. Biol. 15:9-19, 1996; Maines, Annu. для запобігання або лікуванню розвитку стану або Rev. Pharmacol. Toxicol. 37: 517-554, 1997; і розладу. Далі, даний винахід відноситься до молеTenhunen et al, J. Lab. Clin. Med. 75: 410-421, кул, то зв'язують залізо, відмінних від феритину, 1970]. НО-1 також індукується у високій мірі мнонаприклад, до десфероксаміну (DFO), залізовмісжиною засобів та умов, які створюють окислюваного декстрану і/або апоферитину, які можуть ввольний стрес, включаючи пероксид водню, засоби, дитися пацієнту. Крім того, у даному винаході розщо призводять до виснаження глутатіону, УФглядається варіант, згідно з яким ферменти опромінення і гіпероксію [Choi et al., Am. J. Respir. (наприклад, білівердинредуктаза), які каталізують Cell Mol. Biol. 15: 9-19, 1996; Maines, Annu. Rev. розпад будь-якого з вказаних продуктів, можуть Pharmacol. Toxicol. 37: 517-554, 1997; і Keyse et al, бути інгібовані, що дозволяє створити/посилити Proc. Natl. Acad. Sci. USA 86:99-103, 1989]. Фраза бажаний ефект. Будь-який з вказаних продуктів "фармацевтична композиція, яка містить індуктор може бути введений, наприклад, перорально, внуНО-1" означає фармацевтичну композицію, яка трішньовенно, внутрішньочеревинно або місцево. містить будь-який засіб, здатний індукувати НО-1 у У даному винаході також розглядається варіпацієнта, наприклад, будь-який засіб, з числа, опиант, згідно з яким сполуки, які вивільняють в оргасаних вище, наприклад, NO, гемін, залізовмісний нізмі СО після їх введення в організм (наприклад, протопорфірин і/або кобальтвмісний протопорфіСО-вивільняючі сполуки, наприклад, фотоактиворин. вані СО-вивільняючі сполуки), наприклад, декакаЕкспресія НО-1 в клітині може бути підвищена рбоніл димарганцю, димер трикарбонілдихлоррушляхом перенесення гена. У контексті даного опитенію (II) і метиленхлорид (наприклад, в дозі від су термін "експресуєть(ся)" означає, що причиною, 400 до 600мг/кг, наприклад, в дозі приблизно яка спричиняє підвищення утворення білка, напри500мг/кг) можуть застосовуватися в способах згідклад, НО-1 або феритину, у виділених клітинах но з винаходом як замісники карбоксигемоглобіну і або в клітинах тканини, органу або тварини, є виСО-поставляючого гемоглобіну. 25 87438 26 Вказані вище сполуки можуть вводитися паціслідження матригелю самців ліній СВА та С57В1/6 єнту будь-яким способом, наприклад, шляхом пемишей (масою 25-30г) від компанії Джексон рорального, внутрішньочеревинного, внутрішньо[Jackson Labs, Bar Harbor, ME] також витримують венного або внутрішньоартеріального введення. для акліматизації протягом одного тижня перед Будь-яка з вказаних вище сполук може бути ввеекспериментом. дена пацієнту локально і/або системно і в будьКлітинні лінії якому поєднанні. В описаних нижче дослідженнях використовуКомбінована терапія ють клітинну лінію аденокарциноми людини, що У даному винаході також розглядається варіпозначається А549, клітинну лінію мезотеліоми ант введення пацієнту СО в поєднанні щонайменмишей АС29 і клітинну лінію клітин раку ободової ше з одним іншим видом лікування, наприклад, в кишки людини, що позначається НСТ. поєднанні з хіміотерапією, променевою терапією, Вплив CO імунотерапією, генною терапією і/або хірургічною Клітинні культури і мишей піддають впливу СО операцією, для лікування станів та розладів, навев концентрації 250ч/млн. Стисло, процедура полядених у даному описі (наприклад, раку). Напригає у тому, що повітря з вмістом 1% CO змішують клад, СО може бути введений пацієнту з викорисіз звичайним повітрям (21% кисню) в циліндрі для танням будь-якого вказаного вище способу в перемішування з нержавіючої сталі, і потім суміш поєднанні з хірургічною операцією для видалення направляють в скляну камеру для експозиції об'ракової тканини у пацієнта. Альтернативно або в ємом 3,70фут3 зі швидкістю 12л/хв. У камері бездоповнення, описане лікування може проводитися перервно вимірюють вміст CO з використанням в поєднанні з хіміотерапією. Хіміотерапія може аналізатора CO [InterScan, Chatsworth, СА]. Конвключати в себе введення будь-якої сполуки з нацентрацію CO підтримують на рівні 250ч/млн. проведених нижче класів: алкілуючі засоби, антиметягом всього часу дослідження. Клітинні культури і таболіти, наприклад, антагоністи фолату, пуринові мишей вміщують в камеру для експозиції. антагоністи і/або піримідинові антагоністи; отрути Основні процедури стадії утворення веретена у клітинному циклі, наНабори ELIZA для визначення рівня VEGF від приклад, алкалоїди вінки (наприклад, паклітаксел) компанії R&D Systems використовують відповідно та подофілотоксини; антибіотики, наприклад, докдо рекомендацій виробника. сорубіцин, блеоміцин і/або мітоміцин; нітрозосечоПроводять імуноблотинг для виявлення ексвина; неорганічні іони, наприклад, цисплатина; пресії білка стандартними методами, відомими у модифікатори біологічної відповіді, наприклад, даній галузі. Антитіла одержують від компанії Santa Cruz, StressGen and Cell Signaling. фактор некрозу пухлини a (TNF-a) та інтерферон; Для виявлення включення [3Н]-міченого тиміферменти, наприклад, аспарагіназа; білкові токсидину виснажені по сироватці клітини стимулюють ни, кон'юговані з групами-мішенями; антисмислові протягом ночі 20% сироваткою, що містить молекули; і гормони, наприклад, томоксифен, леу5мСі/мл [3Н]-тимідину [New England Nuclear, пролід, флутамід та мегестрол. Альтернативно Boston, MA]. Включення [3Н]-тимідину вимірюють або в доповнення, описане лікування може провоза допомогою сцинтиляційної спектроскопії. дитися в поєднанні з променевою терапією, наCO приглушує ріст клітин in vitro приклад, в поєднанні з використанням gКлітинні лінії клітин раку людини і мишей викоопромінення, електронних пучків і/або радіоактивристовують в дослідженні ефекту СО на швидкість них ізотопів. Альтернативно або в доповнення, pосту клітин в культурі. Клітини аденокарциноми описане лікування може проводитися в поєднанні людини (А549), клітини мезотоліоми мишей (АС29) з імунотерапією, наприклад, шляхом введення і клітини А549 тa AC29, трансформовані геном пацієнту специфічних ефекторних клітин, пухлингемоксигенази-1 (НО-1) (який викликає надекспрених антигенів і/або пухлинних антитіл. Альтернасію НО-1), піддають впливу низьких рівнів СО тивно або в доповнення, описане лікування може (250ч/млн.) в культурі. Будують криві росту клітин проводитися в поєднанні з генною терапією, напротягом чотирьох днів. Картина росту клітин, що приклад, шляхом введення пацієнтам ДНК, що зазнали впливу СО в поєднанні з повітрям, аналокодує пухлинні антигени і/або цитокіни. Способи гічна картині росту клітин, які здійснюють надексплікування раку, наприклад, хірургічні способи, споресію НО-1, тобто спостерігається більш ніж 40% соби хіміотерапії, імунотерапії і променевої теразниження кількості клітин за три дні, в порівнянні з пії, більш повно описані у відповідній інструкції контролями (дані не наведені). Вказане зниження [The Merck Manual of Diagnosis and Therapy, 17th кількості клітин не пов'язане з токсичністю, оскільEdition, Section 11, Chapters 143 and 144], повний ки поступово досягається злиття клітин, хоча і зі зміст якої включений в даний опис як посилання. значно зниженою швидкістю. Нижче даний винахід частково ілюструється Фіг.1 являє собою криву шестиденного росту, прикладами, які не треба розглядати як такі, що яка показує, що СО інгібує проліферацію ракових обмежують будь-яким чином даний винахід. клітин мезотеліоми мишей АС29. На день 5 кульПриклад 1. CO інгібує ріст пухлин та ракових тури клітин, що зазнали впливу СО, відбирають з клітин як in vivo, так і in vitro і приглушує ангіогенез атмосфери, яка містить СО, і далі спостерігається Тварини їх проліферація з нормальною швидкістю. Для дослідження пухлин людини самок мишей СО та НО-1 приглушують пухлинний ріст in SCID (масою 20-30г), придбаних від компанії Такоvivo нік [Taconic, White Plains, NY], витримують для Мишачі моделі росту пухлин використовують акліматизації протягом одного тижня перед експедля оцінки здатності НО-1 та CO приглушувати риментом. Для дослідження мишачих пухлин і до 27 87438 28 ріст пухлини. Використовують три моделі пухлинБули також клітинні механізми, за допомогою ного росту у мишей. яких CO спричиняє вказане приглушення, досліПерша модель являє собою мезотеліому джені. З метою виявлення того, чи залежить інду(АС29), в рамках якої мишам лінії СВА роблять кована CO зупинка росту від cGMP, клітини А549 ін'єкцію внутрішньочеревинно 1x106 клітин АС29 і були піддані впливу повітря, CO, CO+ODQ або відстежують виживання тварин при безперервноCO+Rp-8-BR. ODQ являє собою сполуку, яка селему впливі звичайного повітря або атмосфери, яка ктивно інгібує гуанілатциклазу, a Rp-8-Br являє містить 250ч/млн. СО, протягом періоду, що стасобою неактивний аналог cGMP, який конкурентно новить шість тижнів. Як показано на Фіг.3, миші, інгібує сигнальний шлях, опосередкований cGMP. що зазнали впливу CO, прожили довше, ніж миші, Здатність клітин проліферувати визначають по що зазнали впливу тільки повітря. Рівень виживимірюванню поглинання [3Н]-тимідину клітинами вання мишей, що зазнали впливу CO, підвищився (Фіг.5). Клітини піддають впливу CO (250ч/млн.) більш ніж на 90%, в порівнянні з мишами, що запротягом 3 годин перед додаванням сироватки і знали впливу тільки повітря. Стрілкою, показаною [3Н]-тимідину (5мСі/мл). Після додавання сироватна Фіг.3, позначена часова точка, в якій половину ки і [3Н]-тимідину клітини витримують в атмосфері мишей, що зазнали впливу CO, видаляють з СОCO протягом 24 годин. Потім клітини промивають, вмісної камери. Половину мишей видаляють в фіксують та аналізують за допомогою сцинтиляпевний момент часу для визначення того, чи поційної спектроскопії. Як показано на Фіг.5, клітини трібний, при наявності впливу CO на виживаність А549, що зазнали впливу повітря, CO+ODQ або мишей, додатковий вплив CO. Значна кількість CO+Rp-8-BR, демонструють підвищене поглинанмишей (50%, р