Спосіб отримання насіння тетраплоїдного рапсу із розмноженим амфідиплоїдним геномом

Номер патенту: 107780

Опубліковано: 25.02.2015

Автори: Лернер Алон, Авідов Аміт

Є ще 11 сторінок.

Дивитися все сторінки або завантажити PDF файл.

Формула / Реферат

1. Спосіб отримання насіння тетраплоїдного рапсу з розмноженим амфідиплоїдним геномом, який включає:

(а) розмноження амфідиплоїдного геному насіння рапсу шляхом:

і) забезпечення впливу магнітного поля на насіння рапсу; та

іі) забезпечення контакту зазначеного насіння рапсу з інгібітором клітинного циклу у фазі G2/M;

(b) регенерацію рослини із зазначеного насіння етапу (а); та

(с) розведення або кросбридинг рослини етапу (b).

2. Спосіб за п. 1, який відрізняється тим, що згаданий інгібітор клітинного циклу у фазі G2/M є інгібітором полімеризації мікротрубочок.

3. Тетраплоїдний рапс із розмноженим амфідиплоїдним геномом, який не поступається за плідністю еуплоїдному рапсу, ізогенному до даного рапсу з розмноженим геномом, при вирощуванні в аналогічних умовах, і де тетраплоїдний рапс із розмноженим амфідиплоїдним геномом одержаний відповідно до способу за п. 1 або 2.

4. Рапс за п. 3, який демонструє геномну стабільність протягом не менш ніж 2 поколінь.

5. Рапс за п. 3, вага насіння якого перевищує вагу насіння згаданого еуплоїдного рапсу.

6. Частина рослини рапсу за будь-яким з пп. 3-5.

7. Частина рослини рапсу за п. 6, яка є насінням.

8. Рапсове борошно, вироблене з рослини або частини рослини за будь-яким з пп. 3-7.

9. Виділена регенерувальна клітина рапсу за будь-яким з пп. 3-7.

10. Клітина за п. 9, яка демонструє геномну стабільність протягом не менш ніж 2 пересівань у культурі.

11. Клітина за п. 10, одержувана з меристеми, пилка, листя, кореня, верхівки кореня, пильовика, маточки, квітки, насіння або стебла.

12. Тканинна культура, яка складається з регенерувальних клітин за п. 9.

Текст

Реферат: Винахід належить до способу отримання насіння тетраплоїдного рапсу з розмноженим амфідиплоїдним геномом. Винахід також належить до рослини тетраплоїдного рапсу із розмноженим амфіплоїдним геномом, який не поступається за плідністю еуплоїдному рапсу, ізогенному до даного рапсу з розмноженим геномом, при вирощуванні в аналогічних умовах. UA 107780 C2 (12) UA 107780 C2 UA 107780 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 Заявки, що мають відношення до даної заявки Дана заявка претендує на пріоритет, заявлений у попередній заявці на видачу патенту США 60/996213, поданій 6 листопада 2007 року; зміст цієї попередньої заявки включений до даного документу шляхом посилання на неї так само, як і у випадку її повного викладення у ньому. Галузь та рівень техніки Даний винахід, у деяких варіантах його здійснення, стосується рапсу з розмноженим геномом, а також отримуваних з нього сумішей та їх застосування. Рапс (Brassica napus), що також називається олійним рапсом або (одна з груп культиварів рапсу) канолою, є представником сімейства Brassicaceae (гірчичні або капустяні) з яскравими жовтими квітками. Рапс вирощують з метою виробництва кормів для тварин, рослинної олії, призначеної для споживання людиною, та біодизеля; провідними виробниками є Європейський Союз, Канада, Сполучені Штати, Австралія, Китай та Індія. В Індії рапс займає 13% оброблюваних земель. Згідно даних міністерства сільського господарства США, у 2000 році рапс займав третє місце у світі серед джерел рослинної олії, пропустивши вперед лише сою та олійну пальму, а також друге місце у світі серед джерел білкового борошна (із сої, що займає перше місце, виробляється у п'ять разів більша кількість білкового борошна). Світове виробництво рапсу зростає швидкими темпами: Продовольча та сільськогосподарська організація ООН (FAO) повідомила про те, що за сезони 2003-4 та 2004-5 років було вироблено відповідно 36 та 46 мільйонів тонн рапсу. Цінним компонентом даної сільськогосподарської культури, який збирають, є насіння рапсу. Рапс можна вирощувати як озиму покривну культуру. Він забезпечує добре покриття ґрунту взимку та зменшує виділення азоту. Рослину заорюють назад у ґрунт або використовують як покрив. Побічним продуктом виробництва олії з насіння рапсу є кормове борошно. Цей побічний продукт є кормом для тварин, що містить велику кількість білка, та конкурує із соєю. Він використовується, переважно, як корм для рогатої худоби, а також для свиней та курей (для курей та свиней він є менш цінним). Дане кормове борошно містить дуже малу кількість глюкозинолатів, що викликають порушення обміну речовин у рогатої худоби та свиней. Крім того, рапсова макуха використовується як добриво у Китаї і може бути використана при вирощуванні декоративних рослин - наприклад, бонсаїв. Листя та стебла рапсу їстівні, подібно до листя та стебел споріднених до нього китайської капусти та городньої капусті. Рапс активно виробляє нектар, з якого медоносні бджоли виробляють світлий, але гострий на смак мед. Олія каноли (або рапсова олія) містить жирні кислоти омега-6 та омега-3 у співвідношенні 2:1; за вмістом жирних кислот омега-3 олія каноли посідає друге місце, поступаючись лише лляній олії. Прихильники активного використання олії каноли стверджують, що вона належить до олій, найбільш корисних для серця; є відомості про те, що олія каноли знижує рівень холестерину та тригліцеридів сироватки, а також запобігає підвищенню згортуваності крові. Рапсова олія використовується у виробництві біодизеля, призначеного для використання як автомобільне паливо. У новіших двигунах біодизель може використовуватися у чистому вигляді без ушкодження двигуна; часто біодизель використовується у сполученні з викопним дизельним паливом, при цьому кількість біодизеля варіюють у межах від 2 до 20 %. Раніше, у зв'язку з витратами на вирощування та подрібнювання, а також очищення рапсового біодизеля, виробництво біодизеля рапсового походження обходилося дорожче за виробництво стандартного дизельного палива. Зараз (з листопада 2005 року) ціни на рапсову олію дуже високі у зв'язку зі зрослим попитом на неї для використання у даних цілях. У більшості країн Європи рапсова олія розглядається як краща сировина для виробництва біодизеля у порівнянні з іншими оліями; частково це пов'язане з тим, що рапс виробляє більшу кількість масла на одиницю площі землі у порівнянні з іншими джерелами масла - наприклад, соєю. Таким чином, рапс є важливою та цінною польовою культурою. У зв'язку з цим, задача виведення стабільних, високопродуктивних та агрономічно прийнятних культиварів рапсу залишається актуальною для рослинництва. Очевидними причинами постановки даної мети є необхідність максимального збільшення кількості насіння, виробленого на використовуваній землі, та постачання продуктами харчування людини та тварин. Для того, щоб досягти цієї мети, рослинникам необхідно здійснити селекцію та виростити культивари рапсу, що мають ознаки, які забезпечують перевагу над іншими рослинами. Дотепер не існує тетраплоїдних сортів рапсу, і основними перешкодами для їх виведення є, очевидно, генетична нестабільність та відсутність достатньої плідності для досягнення комерційно цінного гібрида. Сучасний рівень техніки додатково відображають такі роботи: C. Möllers, M. C. M. Iqbal and G. Röbbelen; Efficient production of doubled haploid Brassica 1 UA 107780 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 napus plants by colchicine treatment of microspores, Euphytica, Vol. 75, Numbers 1-2 / January, 1994, Springer, Netherlands. Zhang, G. Q.; Resynthesizing Brassica napus from interspecific hybridization between Brassica rapa and B. oleracea through ovary culture. Euphytica 140(3), 2004. Robert T. Gaeta, J. Chris Pires, Federico Iniguez-Luy, Enrique Leon and Thomas C. Osborn; Genomic Changes in Resynthesized Brassica napus and Their Effect on Gene Expression and Phenotype; The Plant Cell 19:3403-3417, 2007. Короткий опис винаходу Одна з ознак деяких варіантів здійснення даного винаходу пов'язана з рапсом з розмноженим геномом, що не поступається за плідністю еуплоїдному рапсу, ізогенному до даного рапсу з розмноженим геномом, при вирощуванні у аналогічних умовах. Відповідно до деяких варіантів здійснення даного винаходу, визначають плідність на підставі як мінімум одного з таких показників: кількості насіння, що приходиться на одну рослину; результатів гаметного аналізу плідності; та результатів фарбування ацетокарміном. Відповідно до деяких варіантів здійснення даного винаходу, ця рослина демонструє геномну стабільність протягом не менш ніж 2 пересівань. Відповідно до деяких варіантів здійснення даного винаходу, за вагою насіння дана рослина перевершує еуплоїдний рапс. Одна з ознак деяких варіантів здійснення даного винаходу пов'язана з рапсом, депонованим, відповідно до Будапештського договору, у Ncimb Ltd. з наданням номера доступу NCIMB 41592 Brassica napus 187-2-4N. Одна з ознак деяких варіантів здійснення даного винаходу пов'язана з частиною рослини рапсу. Одна з ознак деяких варіантів здійснення даного винаходу пов'язана з рапсовою олією, отримуваною з рослини або частини рослини. Одна з ознак деяких варіантів здійснення даного винаходу пов'язана з рапсовим борошном, отримуваним з рослини або частини рослини. Відповідно до деяких варіантів здійснення даного винаходу, частиною рослини є насіння. Одна з ознак деяких варіантів здійснення даного винаходу пов'язана з виділеною регенерувальною клітиною рапсу. Відповідно до деяких варіантів здійснення даного винаходу, дана клітина демонструє геномну стабільність протягом не менш ніж 2 пересівань у культурі. Відповідно до деяких варіантів здійснення даного винаходу, клітину отримують з меристеми, пилка, листя, кореня, верхівки кореня, пильовика, маточки, квітки, насіння або стебла. Одна з ознак деяких варіантів здійснення даного винаходу пов'язана з тканинною культурою, що складається з регенерувальних клітин. Одна з ознак деяких варіантів здійснення даного винаходу пов'язана зі способом виробництва насіння рапсу, що включає чисте розведення або кросбридинг даної рослини. Одна з ознак деяких варіантів здійснення даного винаходу пов'язана зі способом виробництва рапсової олії, що включає: (а) збирання насіння рапсу або частини даної рослини; та (б) оброблення насіння з метою отримання рапсової олії. Одна з ознак деяких варіантів здійснення даного винаходу пов’язана зі способом отримання рапсу з розмноженим геномом, що полягає у забезпеченні контакту насіння рапсу з інгібітором клітинного циклу у фазі G2/M в умовах дії магнітного поля та отриманні внаслідок цього контакту генетично мультиплікованого насіння рапсу. Відповідно до деяких варіантів здійснення даного винаходу, інгібітор клітинного циклу у фазі G2/M є інгібітором полімеризації мікротрубочок. Відповідно до деяких варіантів здійснення даного винаходу, інгібітор полімеризації мікротрубочок вибирають з групи, що складається з колхіцину, нокодазолу, оризаліну, трифлураліну та вінбластину сульфату. Усі використовувані у даному документі технічні та/або наукові терміни, при відсутності інших визначень, мають значення, що, як правило, вкладаються у них пересічними фахівцями у галузі, до якої належить даний винахід. Нижче описані приклади методів та/або матеріалів; разом з тим, на практиці або при проведенні випробувань варіантів здійснення даного винаходу можуть бути використані методи й матеріали, аналогічні або еквівалентні тим, що описані у даному документі. У випадку будь-яких невідповідностей, перевагу слід надавати опису винаходу до патенту, включаючи наведені у ньому визначення. Крім того, наведені матеріали, 2 UA 107780 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 методи й приклади використані тільки лише як ілюстрації і не повинні обмежувати обсяг даного винаходу. Короткий опис креслень Наведені нижче деякі варіанти здійснення даного винаходу описані тут, лише для прикладу, з посиланнями на прикладені креслення. Стосовно цих детальних креслень варто підкреслити, що показані на них подробиці є лише прикладами, призначеними для ілюстрації обговорюваних варіантів здійснення даного винаходу. Для фахівців у даній галузі цей опис у поєднанні з даними кресленнями дає чітке уявлення про те, яким чином різні варіанти здійснення даного винаходу можуть бути виконані на практиці. На даних кресленнях показане таке: На Фіг. 1A-D показані зображення, отримані при флуоресцентно-активованому сортуванні клітин (ФАСК; FACS), що демонструють фарбування йодидом пропідію мультиплікованого рапсу (Фіг. 1C-D) у порівнянні з контрольною еуплоїдною рослиною (Фіг. 1A-B). Для виявлення барвника йодиду пропідію використовували лазер FL2. Флоуцитометричний аналіз проілюстрований на гістограмах. Монопараметрична гістограма демонструє розподіл клітин відповідно до вмісту у них ДНК. G1-фаза немультиплікованої рослини позиціонується по каналу 300 (M1). Друга гістограма - точкова діаграма показує, що усі клітини, які належать до каналу 300, мають однакові розміри (FL2W). S-фаза клітинного циклу позначена "M2". G2-фаза клітинного циклу немультиплікованої рослини позиціонується по каналу 600 (M3). На зображеннях, показаних на Фіг. 1C та 1D, область M3 відповідає фазі G1 мультиплікованої рослини. Точкова діаграма демонструє переміщення клітин на 600 та їх більший фенотип. На Фіг. 2 наведена таблиця статистичних даних щодо ознаки стерильності у гібрида мультиплікованої рослини з чоловічою стерильністю та мультиплікованої повністю плідної рослини. На Фіг. 3A-F показані фотографії, що показують відмінності між мультиплікованим рапсом, отриманим відповідно до даного винаходу, та еуплоїдними рослинами за величиною коробочки, кількістю насіння, розмірами насіння та розмірами квіток. Опис варіантів здійснення даного винаходу Даний винахід, у деяких варіантах його здійснення, стосується рапсу з розмноженим геномом, а також отримуваних з нього сумішей та їх застосування. Перед початком докладного розгляду варіантів здійснення даного винаходу необхідно уточнити, що застосування даного винаходу не обов'язково обмежується деталями, наведеними нижче в описі або у розділі "Приклади". Можливі й інші варіанти здійснення даного винаходу, а також різні шляхи його реалізації або виконання. Рапс вирощують з метою виробництва кормів для тварин, рослинної олії, призначеної для споживання людиною, та біодизеля. Провідними виробниками є Європейський Союз, Канада, Сполучені Штати, Австралія, Китай та Індія. В Індії рапс займає 13% оброблюваних земель. Протягом багатьох років вчені роблять спроби підвищити загальний вміст олії у насінні рапсу без порушення агрономічних характеристик рослини. З метою забезпечення цих потреб, даними винахідниками були визначені умови розмноження геному у насінні рапсу. Рапс із розмноженим геномом, отримуваний відповідно до даного винаходу, дає потомство, що характеризується такими ж високими рівнями продуктивності (наприклад, продукції насіння та олії) і плідності, які мають й ізогенні до нього еуплоїдні рослини рапсу. Таким чином, одна з ознак даного винаходу пов'язана з рапсом з розмноженим геномом, який не поступається за плідністю еуплоїдному рапсу, ізогенному до даного рапсу з розмноженим геномом, при вирощуванні в аналогічних умовах. У рамках даного документа термін "рапс", синонімами якого є "олійний рапс" або (одна з груп культиварів рапсу) "канола", є представником сімейства Brassicaceae (гірчичні або капустяні) з яскравими жовтими квітками. Рапс – двоосновний алотетраплоїд (тобто, амфідиплоїд), утворений двома геномами (тобто, A-геномом і C-геномом), що має 38 хромосом. A-геномний компонент походить від Brassica campestris і складається з 20 хромосом. C-геномний компонент походить від Brassica oleracea і складається з 18 хромосом. Вищеописаний рапс, що має 38 хромосом, у даному документі називається "еуплоїдним" (тобто, немультиплікованим). Відповідно до деяких варіантів здійснення даного винаходу, дана еуплоїдна рослина є ізогенною. У рамках даного документа ця еуплоїдна рослина є ізогенною до мультиплікованої рослини - тобто, набори хромосом містять практично ідентичні алелі у всіх положеннях. Дана еуплоїдна рослина може зустрічатися у природних умовах, а також може бути продуктом генетичної модифікації або 3 UA 107780 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 селекції. У рамках деяких варіантів здійснення даного винаходу термін "рапс" позначає цілу рослину або її частини, оброблені чи необроблені (наприклад, насіння, олію, суху тканину, борошно, макуху і т.д.), регенерувальну тканинну культуру або виділені з неї клітини. У рамках даного документа термін "розмножений геном" стосується рослини з більш високою (наприклад, подвійною) плоїдністю у порівнянні з ізогенним еуплоїдним попередником – тобто, з більшою кількістю копій хромосом у порівнянні з еуплоїдною рослиною (наприклад, 5N, 6N, 7N, 8N, 10N). Відповідно до деяких варіантів здійснення даного винаходу, рослина з розмноженим геномом є автополіплоїдною - тобто, результатом дуплікації хромосом. У рамках даного документа термін "плідність" позначає здатність рослини до статевого розмноження. Плідність може бути оцінена за допомогою способів, добре відомих у даній галузі. Оцінка плідності може здійснюватися шляхом визначення таких показників: кількості насіння; плідності гамет (оцінюваної за пророщенням пилка - наприклад, на сахарозному субстраті); та плідності пилка - наприклад, за допомогою мікроскопії після фарбування ацетокарміном, при якому виявляється плідний пилок. Відповідно до деяких варіантів здійснення даного винаходу, зрілий мультиплікований рапс має, як мінімум, приблизно таку ж кількість насіння (+/- 10%), як і ізогенний до нього попередник, вирощений у тих же умовах; крім того, на вибір, зрілий мультиплікований рапс має не менш ніж 90% плідного пилка, що офарблюється ацетокарміном; та, альтернативно або додатково, не менш ніж 90% насіння зрілого мультиплікованого рапсу пророщується на сахарозі. Як правило, аналізи з метою оцінки характеристик ознак мультиплікованих рослин за даним винаходом (наприклад, плідності, продуктивності, біомаси та потужності) здійснюються у порівнянні з ізогенним попередником (тобто, еуплоїдною рослиною), за умови, що ізогенний попередник перебуває на одній стадії розвитку з випробовуваною рослиною та в однакових з нею умовах вирощування. Так, відповідно до деяких варіантів здійснення даного винаходу, рослина з розмноженим геномом має більшу площу поверхні листа у порівнянні з еуплоїдним рапсом. У варіантах здійснення, наведених як приклад, площа листа рослини з розмноженим геномом була на 30100 % більшою, ніж у еуплоїдної рослини, й товщина листа рослини з розмноженим геномом була не менш ніж у 1,5-2,5 рази більшою за товщину листа еуплоїдної рослини. Відповідно до деяких варіантів здійснення даного винаходу, рослина з розмноженим геномом має більшу поверхню продихів, ніж у еуплоїдного рапсу. У варіанті здійснення, наведеному як приклад, площа поверхні продихів рослини з розмноженим геномом не менш ніж у 1,5-2,5 рази більша, ніж у еуплоїдної рослини. Відповідно до деяких варіантів здійснення даного винаходу, рослина з розмноженим геномом здатна до кросбридингу з еуплоїдною рослиною. Відповідно до деяких варіантів здійснення даного винаходу, рослина з розмноженим геномом має більш високу ефективність фотосинтезу у порівнянні з еуплоїдною рослиною. Відповідно до деяких варіантів здійснення даного винаходу, рослина з розмноженим геномом стабільна протягом не менш ніж 4, 5, 7, 9 або 10 поколінь. У рамках даного документа термін "стабільний" позначає сталість кількості хромосом або копій хромосом протягом декількох поколінь, що поєднується з відсутністю істотного зниження принаймні одного з таких показників рослини - продуктивності, плідності, біомаси та потужності. Відповідно до деяких варіантів здійснення даного винаходу, за насіннєвою продуктивністю (оцінюваною на підставі принаймні одного з таких показників - кількості насіння, розмірів насіння та об'ємного вмісту олії) рослина з розмноженим геномом не поступається ізогенній еуплоїдній рослині, що вирощена у таких же умовах та перебуває на тій же стадії розвитку. Відповідно до інших варіантів здійснення даного винаходу, рослина з розмноженим геномом перевершує еуплоїдну за насіннєвою продуктивністю з кратністю, що дорівнює не менш ніж приблизно 1,15, 1,25, 1,5, 1,75, 2, 2,5, 3 або 5. Відповідно до інших варіантів здійснення даного винаходу, вага насіння рослини з розмноженим геномом перевищує вагу насіння еуплоїдної рослини з кратністю, що дорівнює не менш ніж приблизно 1,15, 1,25, 1,5, 1,75, 2, 2,5, 3 або 5. Рослини за даною ознакою даного винаходу можуть бути отримані за допомогою удосконаленого способу колхіцинування, описаного нижче. Поліплоїдні рослини за даним винаходом можуть бути отримані за допомогою удосконаленого способу колхіцинування, описаного нижче. Насіння пророщують протягом 8 годин при температурі 27 °C у дистильованій воді. Потім насіння замочують у мультиплікуючому розчині, що містить 0,5% колхіцину, 0,5% 4 UA 107780 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 диметилсульфоксиду (DMSO) та 0,03% Triton X-100, на 20 годин. Нарешті, насіння промивають та висівають у відповідний субстрат для пророщення насіння при 27 °C. Як альтернатива або додатково, мультиплікований рапс за даним винаходом може бути отриманий за допомогою колхіцину або будь-якого іншого інгібітора клітинного циклу (наприклад, інгібіторів клітинного циклу у фазі G2/M - таких як інгібітори складання мікротрубочок, наприклад, колхіцин, вінбластин, нокодазол, оризалін та трифлуралін) при одночасному використанні націлюючого агента - магнітного поля - для прицільної доставки інгібітора до волокон хроматину. Нижче описаний конкретний варіант здійснення такого способу. Слід зазначити, що на кожному етапі вживаються заходи щодо підтримки зазначеного рівня pH (наприклад, шляхом додавання HCl або NaOH). Перший етап - 3 години: Насіння інкубують у чашці Петрі при температурі 26 °C у темному місці у 0,1% розчині (в об'ємному відношенні) вінбластину сульфату, що містить 0,5% диметилсульфоксиду (DMSO), відтитрованому до pH 5,6. На протязі усього цього етапу контролюють pH та постійно підтримують його на рівні 5,6. Посудину поміщають у магнітне поле напруженістю 1300 гаус, утворюване магнітами, розміщеними на відстані 10,5 см один від одного. Другий етап - 3 години: Насіння інкубують у вищевказаному розчині за умов денного освітлення при температурі 4 °C та pH, відтитрованого до 6. Третій етап - 6 годин: Насіння інкубують за умов денного освітлення при температурі 20 °C та pH, відтитрованого до 5,4. Четвертий етап - 12 годин: Насіння інкубують за умов денного освітлення при температурі 26 °C та pH, відтитрованого до 6. Магнітне поле усувають і додають нокодазол до концентрації 5 м/мл (m/ml). П'ятий етап - 12 годин: Насіння інкубують за умов денного освітлення при постійній температурі 26 °C. Насіння ретельно промивають у воді, щоб підвищити pH до 7. Потім насіння висівають у відповідний ростовий субстрат та витримують за умов денного освітлення протягом 16 годин при температурі 26 °C. За допомогою цієї методики винахідники отримували генетично мультиплікований рапс – наприклад, депонований, відповідно до Будапештського договору, у Ncimb Ltd. з наданням номера доступу NCIMB 41592 Brassica napus 187-2-4N. Отриманий рапс за даним винаходом можна розмножувати статевим або безстатевим шляхами - наприклад, за допомогою методик культивування тканин. У рамках даного документа термін "тканинна культура" означає рослинні клітини або частини рослин, з яких може бути отриманий рапс, включаючи рослинні протопласти, калюси рослин, групи пагонів або стовбурів, що мають спільну кореневу систему, та рослинні клітини, інтактні у рослин, або частини рослин - наприклад, насіння, листя, стебла, пилок, корінь, верхівки коренів, пильовики, насіннєві зачатки, пелюстки, квітки, ембріони, волокна та насіннєві коробочки. Відповідно до деяких варіантів здійснення даного винаходу, культивовані клітини демонструють стабільність геному протягом не менш ніж 2, 3, 4, 5, 7, 9 або 10 пересівань культури. Методики отримання рослинної тканинної культури та рослин з тканинної культури добре відомі у даній галузі. Так, наприклад, ці методики наведені у роботах Vasil., 1984. Cell Culture and Somatic Cell Genetics of Plants, Vol I, II, III, Laboratory Procedures and Their Applications, Academic Press, New York; Green et al., 1987. Plant Tissue and Cell Culture, Academic Press, New York; Weissbach and Weissbach. 1989. Methods for Plant Molecular Biology, Academic Press; Gelvin et al., 1990, Plant Molecular Biology Manual, Kluwer Academic Publishers; Evans et al., 1983, Handbook of Plant Cell Culture, MacMillian Publishing Company, New York; and Klee et al., 1987. Ann. Rev. of Plant Phys. 38:467 486. Тканинна культура може бути отримана з клітин або протопластів тканини, вибраних з групи, що включає насіння, листя, стебла, пилок, корінь, верхівки коренів, пильовики, насіннєві зачатки, пелюстки, квітки, ембріони, волокна та насіннєві коробочки. Слід мати на увазі, що рослини за даним винаходом також можуть бути використані з метою розведення рослин поряд з іншими рослинами рапсу (тобто, з метою чистого розведення чи кросбридингу) для отримання нових рослин або ліній рослин, які мають принаймні деякі характеристики рапсу за даним винаходом. 5 UA 107780 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 Рослини, отримані в результаті схрещування будь-якої з цих рослин з іншою рослиною, можуть бути використані для розведення, трансформації та/або зворотного схрещування рослин, що мають відповідний родовід, з метою отримання додаткових культиварів, які мають характеристики рапсу за даним винаходом та будь-які інші бажані ознаки. З метою забезпечення збереження важливих цільових комерційних характеристик у кожному поколінні, в процесі розведення можуть бути використані методики скринінгу з використанням молекулярних або біохімічних способів оцінки, добре відомих у даній галузі. Метою зворотного схрещування є зміна або заміна окремої ознаки або характеристики рекурентної батьківської лінії. З цією метою один ген рекурентної батьківської лінії заміняють або доповнюють бажаним геном нерекурентної лінії, одночасно зберігаючи практично усі інші бажані гени, а отже, й бажану фізіологічну та морфологічну конституцію вихідної лінії. Вибір конкретного нерекурентного батька залежить від мети зворотного схрещування. Однією з основних цілей є надання рослині будь-якої комерційно бажаної та агрономічно важливої ознаки. Точний протокол зворотного схрещування залежить від змінюваної або додаткової характеристики чи ознаки, що визначають відповідний протокол тестування. Менш складні методи зворотного схрещування використовуються у тих випадках, коли характеристика, що передається, визначається домінантною алеллю; разом з тим, можуть передаватися також і характеристики, обумовлені рецесивними алелями. В останньому випадку може бути необхідним використання тесту потомства, що оцінює успішність передачі бажаної характеристики. Крім того, можливе впровадження у рослину трансгенів; з цією метою може бути використаний будь-який з численних надійних методів трансформації, добре відомих фахівцям в даній галузі - наприклад, методів, описаних у роботах Gressel, 1985. Biotechnologically Conferring Herbicide Resistance in Crops: The Present Realities, у кн.: Molecular Form and Function of the plant Genome, L van Vloten-Doting, (ed.), Plenum Press, New York; Huftner, S. L., зі співавт., 1992, Revising Oversight of Genetically Modified Plants, Bio/Technology; Klee, H., зі співавт., 1989, Plant Gene Vectors and Genetic Transformation: Plant Transformation Systems Based on the use of Agrobacterium tumefaciens, Cell Culture and Somatic Cell Genetics of Plants; і Koncz, C., зі співавт., 1986, Molecular and General Genetics. Слід мати на увазі, що рапс за даним винаходом (попередник або мультиплікований) може бути генетично модифікований - зокрема, з метою введення потрібних ознак - наприклад, поліпшення складу олії та підвищення опірності стресу (біотичному чи абіотичному). Як приклади послідовностей нуклеїнових кислот, придатних для використання з метою зміни складу рапсової олії, та методів трансформації рапсу, а також приклади конструктів нуклеїнових кислот, придатних для використання з цією метою, що не обмежують обсяг даного винаходу, можна навести приклади, описані у патенті США № 6974893; цей патент повністю включений до даного документу шляхом посилання на нього. Відповідно до деяких варіантів здійснення даного винаходу, склад жирних кислот мультиплікованого рапсу приблизно відповідає складу жирних кислот еуплоїдного рапсу, хоча рівні окремих компонентів можуть різнитися. Таким чином, у даному винаході представлені нові рослини рапсу та їх культивари, а також насіння та тканинна культура для їх отримання. Рапс, отримуваний відповідно до даного винаходу, може бути підданий додатковій обробці з метою отримання продуктів рапсу, широко використовуваних у промисловості, включаючи виробництво кормів для тварин, рослинної олії, призначеної для споживання людиною, та біодизеля. У патенті США № 6441278 наведені приклади методів обробки рапсу; цей патент повністю включений до даного документу шляхом посилання на нього. Нижче наведений опис, що не обмежує обсяг даного винаходу. Здійснюють збирання та подрібнювання насіння рапсу за допомогою способів, відомих у даній галузі. Насіння звичайно кондиціюють за допомогою обприскування його водою з метою підвищення вологості до рівня, що дорівнює, наприклад, 8,5%. Кондиційоване насіння плющать (перетворюють на пластівці) на гладких вальцях з використанням діапазону встановлення зазору, що дорівнює, наприклад, від 0,23 до 0,27мм. З метою полегшення процесу екстракції може застосовуватися дезактивування ферментів шляхом нагрівання пластівців, що прискорює подальше руйнування клітин, мимовільне злиття краплинок олії та з'єднання часток білка. Як правило, олію витягають з нагрітих пластівців рапсу за допомогою гвинтового преса, що вичавлює з пластівців основну частину олії. В отримуваній макусі присутня деяка кількість залишкової олії. Нерафіновану олію, отримувану в результаті вичавлення, звичайно пропускають крізь відстійний чан з розміщеною зверху дренажною дротяною сіткою для видалення твердих 6 UA 107780 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 частинок, присутніх в олії, що віджимається за допомогою гвинтового преса. Просвітлена олія може бути пропущена крізь рамний фільтрпрес з метою видалення залишкових дрібних твердих частинок. Екстракція рапсової олії з макухи, отримуваної в результаті вичавлення гвинтовим пресом, може бути здійснена за допомогою комерційно доступного н-гексану. Рапсову олію, отримувану за допомогою екстракції, поєднують з проясненою олією, отримуваною шляхом вичавлення гвинтовим пресом, і в результаті отримують змішану нерафіновану олію. Вільні жирні кислоти та смоли звичайно видаляють з нерафінованої олії шляхом нагрівання у казані для рафінування партії олії з додаванням фосфорної кислоти харчового сорту. Дана кислота використовується з метою перетворення негідратованих фосфатидів на гідратовану форму та хелатування металів, присутніх у нерафінованій олії у невеликих кількостях. З олії видаляються фосфатиди, солі металів та мила. Олійно-кислотну суміш оброблюють розчином гідроокису натрію з метою нейтралізації вільних жирних кислот та фосфорної кислоти, що містяться у ній. Нейтралізовані вільні жирні кислоти, фосфатиди та подібні до них речовини (мила) вимиваються з нейтралізованої олії. З метою додаткового зменшення вмісту мила в олії може здійснюватися промивання олії водою. За бажанням, перед використанням олія може бути піддана відбілюванню та дезодорації за допомогою способів, відомих у даній галузі. Передбачається, що за період дії патенту, виданого на основі цієї заявки, буде розроблена велика кількість відповідних продуктів рапсу, і область, охоплювана даним патентом, повинна апріорі охоплювати усі такі нові технології. У рамках даного документа термін "приблизно" означає допуск  10%. Терміни "включає", "включаючи", "включають", "такий, що включає", "такий, що має" та різні їх дієвідміни охоплюються терміном "включаючи, крім іншого". Цей термін також охоплює терміни "складається з" та "складається переважно з". Термін "складається переважно з" означає, що даний склад або спосіб може включати додаткові інгредієнти та/або етапи, за умови, що ці додаткові інгредієнти та/або етапи не приводять до істотних змін базових та нових характеристик заявленого складу або способу. У рамках даного документа іменники в однині включають також і відповідні іменники у множині за умови, що у контексті відсутні чіткі свідчення зворотного. Так, наприклад, термін "сполука" або "принаймні одна сполука" може включати велику кількість сполук, включаючи їх суміші. У цій заявці різні варіанти здійснення можуть бути наведені з використанням діапазонів величин. Слід мати на увазі, що такі описи з використанням діапазонів величин наведені виключно з метою зручності та стислості і не повинні розглядатися як засіб жорсткого обмеження обсягу даного винаходу. Відповідно, зазначені діапазони повинні розглядатися як такі, що включають усі можливі конкретні піддіапазони, а також індивідуальні числа, що не виходять за межі даного діапазону. Так, наприклад, зазначення діапазону від 1 до 6 повинне розглядатися як зазначення піддіапазонів - наприклад, від 1 до 3, від 1 до 4, від 1 до 5, від 2 до 4, від 2 до 6, від 3 до 6 і т.д. - а також зазначення індивідуальних чисел у межах цього діапазону - наприклад, 1, 2, 3, 4, 5 та 6. Це стосується усіх діапазонів незалежно від їх ширини. У випадках зазначення у даному документі числового діапазону мається на увазі, що цей діапазон включає будь-яке можливе число (дробове або ціле), присутнє у рамках зазначеного діапазону. Фрази "у діапазоні між" першим зазначеним числом та другим зазначеним числом і "у діапазоні від" першого зазначеного числа "до" другого зазначеного числа використовуються у цьому документі як рівнозначні і припускають включення до діапазону першого та другого зазначених чисел, а також усіх дробових та цілих чисел, що є присутніми у рамках зазначеного діапазону. У рамках даного документа термін "спосіб" позначає прийоми, засоби, методики та процедури, використовувані для виконання визначеної задачі, включаючи, крім іншого, ті прийоми, засоби, методики та процедури, які відомі фахівцям у хімічній, фармакологічній, біологічній, біохімічній або медичній галузях, або можуть бути легко розроблені цими фахівцями на основі відомих прийомів, засобів, методик та процедур. Слід мати на увазі, що певні ознаки даного винаходу, описані у зв'язку з окремими варіантами здійснення як пояснення, можуть бути також наявні у сполученні одна з одною у будь-якому одному варіанті здійснення. Навпаки, різні ознаки даного винаходу, які, для стислості, описані у контексті будь-якого одного варіанта здійснення, можуть бути також наявні окремо або у будь-якій придатній субкомбінації або у контексті будь-якого іншого придатного описаного варіанта здійснення даного винаходу. Певні ознаки, описані у контексті різних варіантів здійснення, повинні вважатися найважливішими ознаками цих варіантів здійснення тільки у тому випадку, якщо без цих елементів варіант здійснення виявляється нездійсненним. 7 UA 107780 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 Різні варіанти здійснення та ознаки даного винаходу, описані вище і заявлені у розділі "Формула винаходу" нижче, експериментально підтверджуються наступними прикладами. Приклади Нижче наведені приклади, які, у сукупності з вищенаведеним описом, ілюструють деякі варіанти здійснення даного винаходу, жодним чином не обмежуючи його застосування. Приклад 1 Отримання поліплоїдного рапсу Сільськогосподарською академією провінції Ан-Юй (Китай) були надані дві чоловічі батьківські лінії (CHARO 1 та CHARO 8) і одна жіноча лінія з генетичною стерильністю (CHAO 1). Геноми рослин цих батьківських ліній розмножували за допомогою технології безмутаційного розмноження геному (БМРГ; MFGM) відповідно до будь-якого з протоколів, описаних в даному документі. Оброблені рослини були піддані попередній селекції на стадії саджанця і потім посаджені на ділянці, захищеній сіткою від проникнення комах. Після досягнення рослинами стадії 5-го листа, що розпустився, проводили тестування усіх рослин на мультиплікацію геному за допомогою приладу для флуоресцентно-активованого сортування клітин (ФАСК; FACS). Коротко кажучи, було здійснене вивільнення ядер з тканини листа розмірами 2×2 см шляхом занурення у буфер подрібнювання на 30 секунд. Буфер подрібнювання містив 4,575 г MgCl2, 2,095 г 3-(N-морфоліно)пропансульфокислоти (MOPS), 4,4 г цитрату натрію, 1 г дитіотреітолу (DTT) та 1,65 г Triton X-100, розчинених у 500 мл дистильованої води. Подрібнювання здійснювали лезом бритви, в одному напрямку. Подрібнену тканину переносили у чашку Петрі, потім чашку Петрі поміщали на лід. Зразок перед використанням фільтрували за допомогою фільтра 20 меш. Зразки ядер (2-6 3 см ) поміщали до ФАСК-пробірки; до кожного зразку додавали 15 мкл йодиду пропідію (ЙП; PI). Через 15 хвилин здійснювали аналіз зразків за допомогою флоуцитометра, обладнаного аргоновим лазером Cyonics (488 нм; 15 мВт). Пропускалася флюоресценція, довжина хвилі якої перевищувала 635 нм; результати виводили на дисплей у вигляді монопараметричних гістограм кількостей ядер у кожному з 1024 каналів. Канал № 300 був контрольним. На Фіг. 1A-D показані дані, отримані за допомогою приладу ФАСК для контрольної еуплоїдної рослини у порівнянні з поліплоїдною рослиною. Усі рослини з розмноженим геномом були перевірені відносно плідності пилка шляхом пророщування пилка на основі, що містить розчин сахарози. У полі з метою самозапилення та отримання гібридів F1 були залишені лише ті рослини, що мали нормальну плідність пилка та не мали видимих ушкоджень зерен пилка при візуальному мікроскопічному дослідженні. Після досягнення зрілості насіння здійснювали збирання насіння, отриманого у результаті самозапилення, від 50 мультиплікованих рослин кожного з двох китайських чоловічих різновидів (CHARO 1 та CHARO 8). Це насіння було посіяне з метою перевірки стабільності 2 поколінь, і лише стабільні лінії були збережені для використання у подальшій програмі. Були здійснені гібридизації між усіма плідними мультиплікованими рослинами та між усіма стерильними мультиплікованими рослинами жіночої лінії CHAO 1. Тільки рослини з генотипом Aaaa здатні підтримувати стерильну лінію, і розподіл гамет кросу Aaaa X aaaa показаний на Фіг. 2. Висаджували усе гібридизаційне потомство для проведення тестів потомства з метою виявлення популяцій з рівною кількістю плідних та стерильних рослин. У кожній такій популяції з метою підтримання стерильної лінії здійснювалося запліднення стерильних рослин пилком, зібраним з плідних рослин. Висаджували гібридне тетраплоїдне насіння з метою проведення тесту порівняльної продуктивності, який виконувався з чотирикратним повторенням. Приклад 2 Плідність поліплоїдних рослин, визначена за допомогою пророщення пилка та підрахунку насіння у коробочках Відомо, що поліплоїдні рослини рапсу характеризуються меншою плідністю пилка та, відповідно, меншою кількістю насіння у коробочках. З метою оцінки плідності поліплоїдних рослин, отримуваних відповідно до даного винаходу, було здійснене порівняння 2N-популяцій каноли з рослинами ізогенної поліплоїдної 4N-лінії, виведеної за допомогою технології MFGM, за показниками відсотків пророщення та кількостей насіння, що приходиться на одну коробочку. Пилок збирали у період цвітіння та пророщували на цукровому розчині. Коротко кажучи, насіння інкубували на сахарозному субстраті (2% сахарози та 2 мМ H 3BO3) протягом 12 годин при 26 °C. Потім оцінювали пророщення. Розраховували відсоток пророщення шляхом 8 UA 107780 C2 підрахунку пророслих зерен пилка під мікроскопом. Після повного дозрівання коробочок здійснювали збирання та підрахунок насіння усіх 10 верхніх коробочок тих саме рослин. Результати: Таблиця 1 Пророщення пилка та кількість насіння, що приходиться на одну коробочку (2N-немультиплікований; 4N-мультиплікований) Лінія 2N CHARO 1-1 CHARO 1-2 CHARO 1-3 CHARO 1-4 CHARO 1-5 CHARO 1-6 CHARO 1-7 CHARO 1-8 CHARO 1-9 CHARO 1-10 CHARO 1-11 CHARO 1-12 CHARO 1-13 CHARO 1-14 Пророщення пилка, % 92 94 93 94 95 97 95 93 94 94 95 96 95 94 Кількість насіння у коробочці 17 15 20 19 17 18 16 19 18 17 15 18 19 20 Лінія 4N Пророщення пилка, % CHARO 1-1-2 CHARO 1-1-3 CHARO 1-1-4 CHARO 1-1-5 CHARO 1-1-6 CHARO 1-11-1 CHARO 1-11-2 CHARO 1-11-3 CHARO 1-11-4 CHARO 1-11-5 CHARO 1-11-6 CHARO 1-11-7 CHARO 1-11-8 CHARO 3-5-8 94 94 97 96 96 93 95 94 94 93 95 95 94 92 Кількість насіння у коробочці 19 18 16 17 18 19 17 15 15 20 21 17 18 18 5 10 Аналіз підібраних пар продемонстрував відсутність значних розходжень між еуплоїдними рослинами та ізогенними мультиплікованими рослинами у кількості насіння, що приходиться на одну коробочку, та відсотках пророщення пилка. У таблиці 2 нижче наведене порівняння мультиплікованих рослин з ізогенними еуплоїдними попередниками (CHAR1, Chao1), по відношенню до ваги насіння. Таблиця 2 Номер поля 3 5 23 49 81 Кількість повторень 1 2 3 4 1 2 3 4 1 2 3 4 1 2 3 4 1 2 3 4 Кількість насіння Вага (г) 40 40 40 40 40 40 40 40 40 40 40 40 40 40 40 40 40 40 40 40 0,274 0,259 0,263 0,255 0,195 0,187 0,183 0,183 0,251 0,252 0,25 0,242 0,248 0,247 0,252 0,247 0,237 0,23 0,219 0,227 9 Вага 1000 (г) 6,56875 0,26275 4,675 0,187 6,21875 0,24875 6,2125 0,2485 5,70625 0,22825 UA 107780 C2 Продовження таблиці 2 Номер поля 82 98 99 289 290 291 292 293 294 295 296 CHAR1 2n Рапс Chao1 2009 Кількість повторень 1 2 3 4 1 1 1 1 1 2 3 4 1 2 3 4 1 2 3 4 1 2 3 4 1 2 3 4 1 2 3 4 1 2 3 4 1 2 3 4 1 2 3 4 1 2 3 4 1 2 3 4 Кількість насіння Вага (г) 40 40 40 40 40 40 40 40 40 40 40 40 40 40 40 40 40 40 40 40 40 40 40 40 40 40 40 40 40 40 40 40 40 40 40 40 40 40 40 40 40 40 40 40 40 40 40 40 40 40 40 40 0,25 0,225 0,244 0,229 0,235 0,233 0,224 0,237 0,225 0,224 0,208 0,221 0,224 0,235 0,238 0,237 0,248 0,239 0,244 0,237 0,222 0,217 0,218 0,197 0,235 0,24 0,232 0,252 0,222 0,225 0,217 0,245 0,228 0,233 0,238 0,24 0,244 0,228 0,253 0,235 0,162 0,168 0,154 0,161 0,133 0,131 0,127 0,135 0,146 0,138 0,142 0,141 10 Вага 1000 (г) 5,925 0,237 5,80625 0,23225 5,4875 0,2195 5,8375 0,2335 6,05 0,242 5,3375 0,2135 5,99375 0,23975 5,68125 0,22725 5,86875 0,23475 6 0,24 4,03125 0,16125 3,2875 0,1315 3,54375 0,14175 UA 107780 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 Ці результати показують, що мультипліковані лінії не відрізняються від еуплоїдних ліній за плідністю. Хоча даний винахід описаний у зв'язку з конкретними варіантами його здійснення, ясно, що багато альтернатив, модифікацій та варіантів стануть очевидними для фахівців у даній галузі знань. Відповідно, метою даного винаходу є охоплення усіх таких альтернатив, модифікацій та варіантів, що відповідають суті та широкому обсягу прикладеної формули винаходу. Усі публікації, патенти та заявки на винахід, згадані в цій специфікації, включені до даного документу у всій їх повноті шляхом посилання на дану специфікацію - так само, як було б у тому випадку, коли кожна окрема публікація, патент або заявка на винахід були конкретно та індивідуально включені до даного документу шляхом посилання на них. Крім того, цитування або зазначення у цій заявці будь-якого посилання не повинно розглядатися як визнання доступності інформації, на яку дане це посилання, у відомому рівні техніки. Заголовки розділів не повинні розглядатися як такі, що обов'язково обмежують обсяг даного винаходу. Джерела інформації: (інші посилання процитовані в різних розділах даної заявки) Auger, D. L., Gray, A. D., Ream, T. S., Kato, A., Coe, E. H. J., & Birchler, J. A. (2005). Nonadditive gene expression in diploid and triploid hybrids of maize. Genetics 169: 389-397. Auger, D. L., Ream, T. S., & Birchler, J. A. (2004). A test for a metastable epigenetic component of heterosis using haploid induction in maize. Theor Appl Genet, 108(6), 1017-23. Birchler, J. A., & Auger, D. L. (2004). Biological consequences of dosage dependent gene regulatory mechanisms in multicellular eukaryotes. In: Biology of Dominance. Ed. Veitia, R. Landes Bioscience. Birchler, J. A., Auger, D. L., & Kato, A. (2004). Cytogenetics of corn. In: Corn: Origin, History, Technology and Production. Ed. Smith, CV, Betran, J, Runge, E. John Wiley and Sons, New York. Birchler, J. A., Auger, D. L., & Riddle, N. C. (2003). In search of the molecular basis of heterosis. Plant Cell 15: 2236-2239 Birchler, J. A., Bhadra, U., Bhadra, M. P., & Auger, D. L. (2001). Dosage-dependent gene regulation in multicellular eukaryotes: implications for dosage compensation, aneuploid syndromes, and quantitative traits. Dev Biol, 234(2), 275-88. Black, M. (2002). Statistical issues in the design and analysis of spotted microarray experiments. Ph.D. Dissertation,Department of Statistics, Purdue University, West Lafayette, IN. Black, M. A., & Doerge, R. W. (2002). Calculation of the minimum number of replicate spots required for detection of significant gene expression fold change in microarray experiments. Bioinformatics, 18(12), 1609-16. Cao, D., Craig, B.A., & Doerge, R.W. 2005. A model selection based interval mapping method for autopolyploids. Genetics (published ahead of print on January 31, 2005 as doi: 10.1534 / Genetics. 104.035410) Cao, D., Osborn, T.C. and Doerge, R.W. 2004. Correct estimation of preferential chromosome pairing in polyploids. Genome Research. 14:1-4. Chen, Z. J., Wang, J., Tian, L., Lee, H. S., Wang, J. J., Chen, M., Lee, J. J., Josefsson, C., Madlung, A., Watson, B., Pires, J. C., Lippman, Z., Vaughn, M. W., Colot, V., Birchler, J. A., Doerge, R. W., Martienssen, R., Comai, L., & Osborn, T. (2004). The development of an Arabidopsis model system for genome-wide analysis of polyploidy effects. Biological Journal of the Linnean Society, 82, 689-700. Comai, L. (2000). Genetic and epigenetic interactions in allopolyploid plants. Plant Mol Biol, 43(23), 387-99. Comai, L., Tyagi, A. P., & Lysak, M. A. (2003). FISH analysis of meiosis in Arabidopsis allopolyploids. Chromosome Res, 11(3), 217-26. Comai, L., Madlung, A., Josefsson, C., & Tyagi, A. (2003). Do the different parental 'heteromes' cause genomic shock in newly formed allopolyploids. Philos Trans R Soc Lond B Biol Sci, 358(1434), 1149-55. Craig, B. A., Black, M. A., & Doerge, R. W. (2003). Gene Expression Data: The technology and statistical analysis. Journal of Agricultural, Biological and Environmental Statistics, 8(1), 1-28. Dilkes, P.B., and L. Comai. 2004. A differential dosage hypothesis for parental effects in seed development. Plant Cell 16: 3174-3180. Dilkes, B., Dobrozsi, S., Scott, R., & Comai, L. The Col blooded killer phenotype: a lethal paternal effect in interploidy crosses. In preparation. Doerge, R. W. (2002). Mapping and analysis of quantitative trait loci in experimental populations. Nature Reviews Genetics, 3(1), 43-52. 60 11 UA 107780 C2 ФОРМУЛА ВИНАХОДУ 5 10 15 20 25 1. Спосіб отримання насіння тетраплоїдного рапсу з розмноженим амфідиплоїдним геномом, який включає: (а) розмноження амфідиплоїдного геному насіння рапсу шляхом: і) забезпечення впливу магнітного поля на насіння рапсу; та іі) забезпечення контакту зазначеного насіння рапсу з інгібітором клітинного циклу у фазі G2/M; (b) регенерацію рослини із зазначеного насіння етапу (а); та (с) розведення або кросбридинг рослини етапу (b). 2. Спосіб за п. 1, який відрізняється тим, що згаданий інгібітор клітинного циклу у фазі G2/M є інгібітором полімеризації мікротрубочок. 3. Тетраплоїдний рапс із розмноженим амфідиплоїдним геномом, який не поступається за плідністю еуплоїдному рапсу, ізогенному до даного рапсу з розмноженим геномом, при вирощуванні в аналогічних умовах, і де тетраплоїдний рапс із розмноженим амфідиплоїдним геномом одержаний відповідно до способу за п. 1 або 2. 4. Рапс за п. 3, який демонструє геномну стабільність протягом не менш ніж 2 поколінь. 5. Рапс за п. 3, вага насіння якого перевищує вагу насіння згаданого еуплоїдного рапсу. 6. Частина рослини рапсу за будь-яким з пп. 3-5. 7. Частина рослини рапсу за п. 6, яка є насінням. 8. Рапсове борошно, вироблене з рослини або частини рослини за будь-яким з пп. 3-7. 9. Виділена регенерувальна клітина рапсу за будь-яким з пп. 3-7. 10. Клітина за п. 9, яка демонструє геномну стабільність протягом не менш ніж 2 пересівань у культурі. 11. Клітина за п. 10, одержувана з меристеми, пилка, листя, кореня, верхівки кореня, пильовика, маточки, квітки, насіння або стебла. 12. Тканинна культура, яка складається з регенерувальних клітин за п. 9. 12 UA 107780 C2 13 UA 107780 C2 14 UA 107780 C2 15 UA 107780 C2 16 UA 107780 C2 Комп’ютерна верстка Л. Ціхановська Державна служба інтелектуальної власності України, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601 17

Дивитися

Додаткова інформація

Назва патенту англійською

Genomically multiplied rapeseed plants, compositions derived therefrom and uses of same

Автори російською

Avidov, Amit, Lerner, Alon

МПК / Мітки

МПК: A01H 5/00, C12N 15/05

Мітки: тетраплоїдного, розмноженим, геномом, отримання, амфідиплоїдним, насіння, спосіб, рапсу

Код посилання

<a href="https://ua.patents.su/19-107780-sposib-otrimannya-nasinnya-tetraplodnogo-rapsu-iz-rozmnozhenim-amfidiplodnim-genomom.html" target="_blank" rel="follow" title="База патентів України">Спосіб отримання насіння тетраплоїдного рапсу із розмноженим амфідиплоїдним геномом</a>

Подібні патенти