Набір моноклональних антитіл р2, р3, р4, р5, р6, специфічних до білка р24 вірусу імунодефіциту людини, придатних до використання у імуноферментному аналізі

УКРАЇНА (19) UA (11) 16041 (13) U (51) МПК (2006) C12N 5/00 МІНІСТЕРСТВО ОСВІТИ І НАУКИ УКРАЇНИ ДЕРЖАВНИЙ ДЕПАРТАМЕНТ ІНТЕЛЕКТУАЛЬНОЇ ВЛАСНОСТІ ОПИС ДО ДЕКЛАРАЦІЙНОГО ПАТЕНТУ НА КОРИСНУ МОДЕЛЬ видається під відповідальність власника патенту (54) НАБІР МОНОКЛОНАЛЬНИХ АНТИТІЛ Р2, Р3, Р4, Р5, Р6, СПЕЦИФІЧНИХ ДО БІЛКА Р24 ВІРУСУ ІМУНОДЕФІЦИТУ ЛЮДИНИ, ПРИДАТНИХ ДО ВИКОРИСТАННЯ У ІМУНОФЕРМЕНТНОМУ АНАЛІЗІ 1 2 Назва МКАТ Р2 Р3 Р4 Р5 Р6 Ізотип антитіл IgG1 IgG1 IgG1 IgG1 IgG1 Константа афінності, 1010моль/л 10,0 5,0 11,0 8,0 8,0 Титр антитіл у культуральній рідині* 1:1000 1:1000 1:2000 1:1000 1:2000 * тестування у непрямому твердофазному ІФА на р24 ВІЛ (сорбція 0,2мкг/мл) Приклад 1. Одержання та очистка МКАТ із асцитичної рідини. Для нагромадження значної кількості МКАТ гібридоми-продуценти певних антитіл культивували у черевних порожнинах мишей. Для цього за 10-14 днів до ін'єкції клітин мишам вводили внутрішньочеревно по 0,5мл пристану. Мінеральне масло служило сильним стимулятором асцитоутворення. Потім вводили від 106 до 107 гібридом-продуцентів МКАТ в 1мл середовища. Через 5-8 днів у мишей починала накопичуватися рідина в черевній порожнині. Її відбирали шляхом проколювання черевної стінки товстою голкою. З однієї миші і за кілька разів вдавалося отримати від 5 до 10мл асцитичної рідини. Після центрифугування при 3000об/хв. на протязі 5 хвилин асцит зберігали в замороженому стані. Антитіла, що знаходяться в асциті, осаджували сульфатом натрію (18% та 16%), розчиняли у дистильованій воді, переосаджували сульфатом (13) 16041 Характеристика моноклональних антитіл. (11) Найбільш близьким до запропонованих є моноклональні антитіла, які взаємодіють із білком р24 вірусу імунодефіциту людини [2]. У порівнянні із вищезгаданими антитілами клони Р2, Р3, Р4, Р5, Р6 характеризуються більшою специфічністю та активністю у імуноферментному аналізі. Моноклональні антитіла продукуються гібридними клітинами, що одержані при злитті мієломних мишачих клітин Sp2/0 та спленоцитів мишей лінії Balb/c. Клони МКАТ Р2, Р3, Р4, Р5, Р6 характеризуються наступними ознаками. UA Корисна модель стосується імунхімії та гібридомної технології і може бути використаний для одержання моноклональних антитіл (МКАТ) до білку р24 вірусу імунодефіциту людини (ВІЛ) та їхніх імуноферментних кон'югатів. Метою корисної моделі є одержання нових моноклональних антитіл до р24 ВІЛ, придатних для використання у імуноферментному аналізі (ІФА). Відомі МКАТ до білку р24 вірусу імунодефіциту людини [1]. Проте згадані моноклональні антитіла непридатні для використання у імуноферментних тест-системах для серологічної діагностики. U (57) Набір моноклональних антитіл Р2, Р3, Р4, P5, P6, специфічних до білка р24 вірусу імунодефіциту людини, придатних до використання у імуноферментному аналізі, який характеризується тим, що моноклональні антитіла набору мають високі константу афінності, титр у культуральній рідині. (19) (21) u200601618 (22) 16.02.2006 (24) 17.07.2006 (46) 17.07.2006, Бюл. №7, 2006р. (73) ТОВАРИСТВО З ОБМЕЖЕНОЮ ВІДПОВІДАЛЬНІСТЮ "НАУКОВО-ВИРОБНИЧА КОМПАНІЯ "ВІТРОТЕСТ" 3 16041 4 амонію (50%) та розчиняли у мінімальній кількості няли 2М сірчаною кислотою. Оптичну щільність води. при довжині хвиль 492нм і 630нм вимірювали на Приклад 2. Спосіб використання моноклонаспектрофотометрі. льних антитіл у складі імуносорбенту тест-системи Перелік літературних джерел: для визначення антигену р24 ВІЛ у сироватках чи 1. Welflea К., Misselwitza R., Hausdorf G. et al. плазмі крові людини. Conformation, pH-induced conformational changes, Сорбцію МКАТ до білку р24 ВІЛ у полістиролоand thermal unfolding of anti-p24 (HIV-1) monoclonal вих планшетах проводили у 0,05М карбонатantibody CB4-1 and its Fab and Fc fragments // бікарбонатном буфері (рН 9,6) протягом ночі при Biochimica et Biophysica Acta (BBA) - Protein 4°С в концентрації 5мкг/мл. Для відмивання викоStructure and Molecular Enzymology. - 1999. - Vol. ристовували фосфатно-сольовий буфер з дода1431, 1. - P.120-131. ванням 0,05% твін-20 (ФСБТ), рН 7,2-7,4. У лунки 2. Stevens P., Francis С., Jolley М. et al. планшету вносили досліджувані зразки сироваток Monoclonal antibodies to HIV-1 р24 core protein крові. Планшет інкубували 1 годину при 37°С і поinclude pairs which exhibit synergistic binding // тім відмивали. Для виявлення зв'язаних антитіл Molecular Immunology. - 1993. - Vol. 30, 3. - P.243використовували кон'югат поліклональних кроля254. чих антитіл до р24 ВІЛ з пероксидазою хрону, який 3. Tijssen P. Preparation of enzyme-antibody or інкубували 1 годину при кімнатній температурі. enzyme-macromolecule conjugates // Laboratory Планшет тричі відмивали ФСБТ і один раз водою. techiques in biochemistry and molecular biology: Як субстрат використовували 0,003% розчин переpractice and theory of enzyme immunoassays / кису водню в 0,15М цитратному буфері, рН 5,0, а Editors R.H. Burdon, P.H. van Knippenberg. як хромоген - тетраметилбензидін. Реакцію зупиAmsterdam: Elsevier, 1985. - P.221-241. Комп’ютерна верстка М. Ломалова Підписне Тираж 26 прим. Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601