Спосіб одержання бактеріального лектину, спеціфічного до сіалових кислот

сааз СОВЕТСКИХ СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ РЕСПУБЛИН SU,,,, 1622397 (19». «1)5 ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ ПРИ ГННТ СССР А1 С 12 F 19/ОА//(С 12 Р 19/O4j~ С 12 В 1:125) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ і (21) 4471130/13 (22) 01.08.88 (46) 2 3 , 0 1 . 9 1 . Бюл. Р 3 (71) Институт микробиологии и вирусологии им. Л.К.Заболотного (72) В.С.Подгорский, Э,А.Кояаленко, И.А.Симоненко и В.М.Лахтин (53) 547.9С0Й8.8) (56) Лахтин Я.М.Лектины в исследовании белков и углеводов./Итоги науки и техники» ВИНИТИ: Биотехнология, 1987, с.288. Бондарчук А.А., Ажмцкий Т.Ю. Характеристика ферментативного комплекса из Вас.mesentericus,-Микробиологический журнал» 1981, 40, К б.с.687-690. * (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ БАКТЕРИАЛЬНОГО ЛЕКТИНА, СПЕЦИФИЧНОГО К СИАЛОВЫМ КИСЛОТАМ (57) Изобретение относится к микро-* биологической промышленности,а именно к способу получения бактериального лектина, специфичного к сиаловым кислотам. Цель изобретения - упрощение способа получения бактериального сиалоспецифического лектина, а также увеличение выхода целевого продукта. Сущ.ность изобретения заключается в том, что, в качестве источника сырья используют непатогенную культуру Raccillus raesentericus ВКПМ В-2466, способную синтезировать внеклеточные сиалоспецифичные пектины. Продуцент выращивают в течение 14-16 ч глубинным способом на полусинтетической среде с биостимулятором - пвтолизатом из пивных дрожжейо Целевой продукт с выходом 46,8-60% получают осаждением культуралыюй жидкости сульфатом аммония при насыщении 60-70%, диализом и хранят в замороженном состоянии при -10°С. 1 з.п.ф-лы. . Изобретение относится к микробиологической промышленности, а именно к способу получения бактериального лектина, специфичного к сиаловым кислотам. Цель изобретения - повышение выхода целевого продукта и упрощение способа. В качестве источника сырья используется непатогенная культура Baccillus mesentericus RKTTM R-2466, у которой обнаружена способность к биосинтезу внеклеточных сналоспецифичных лектинов. Продуцент выращивается глубинным способом на среде, содержащей в качестве биостимулятора пред ,v почтительно автолизат из пивных дрожжей, что сокращает время культитшровзння до 14-16 ч по сравнению с 212ч ч выративания на среде, содержащей автолизат из хлебопекарских дрожжей. Препарат выделяют осаждением сернокислым аммонием при насыщении 60-70% и очисткой диализом, хранят в замороженном состоянии при -10 С, RMход целевого продукта 46,8% - 60%. П р и м е р 1. Бактерии Bacilkus mesentericus ВКПМ В-2466 выращивают глубинным способом на качалках (160 об./мин) в течение 21-24 ч при 37°С в колбах Эрленмейера со 100 мл питательной среды следующего го СО 1622397 состава, г/л: желатин 10,0, j ^ 1,6, MgSO* 0,75, ZnSO* 0,25, FeSO 4 * ПЕг0 0,02, NaCl 0,02, ( Щ ф ) 2 S 0 4 0,05, CaCl z 0,0В, мальтоза 1,0, автолизат из хлебсшекарских дрожжей 1,5. Бактериальную биомассу отделяют центрифугированием при 6000 g в течение 20 мян. К культуральной жидкости (1 л) прибавляют 242,03 г 10 ( ) (40% насыщения) и оставляют на ночь при 4°С. ВыпавщиЙ хлопьевидный осадок отделяют центрифугированием при 6000 g в течение 25 мин, растворяют в 5 мл дистиллированной t5 воды и диализуют 6-8 ч против водопроводной воды при комнатной температуре, затем ночь - против дистиллированной воды при 4 °С, осадок отделяют центрифугированием при 8000 g 20 в течение 15 мин, супернатант хранят в замороженном состоянии при -10°С. Выход целевого продукта по активности 2,6%, П р и м е р 2. Условия выращива- 25 ния, питательная среда и выделение бактериального лектнна аналогичны приведенным в примере 1, за исключением сульфата аммония, используемого для осаждения препарата: на 1 л 30 хультуральной жидкости (КЖ) 390,0 г (NH4)^SO4 (60£ насыщения). Выход целевого продукта по активности 16,1%. П р и м е р 3, Условия выращивания, питательная среда, выделение 35 бактериального лектина такие же, как в примере 1, за исключением количества сульфата аммония, используемого для осаждения лектина: на 1 л КЖ добавляли 472,0 г (НИц)^5О^ (70% 40 насыщения). Выход целевого продукта по активности 33,0%. П р и м е р 4. Условия культивирования продуцента и выделение лектина (40% насыщения сульфатом аммония) 45 аналогичны приведенным в примере 1. В питательной среде в качестве биостимулятора вместо автодизата из Редактор Н.Яцола хлебопекарских дрожжей использовали автолизат из пивных дрожжей из такого же расчета. На 14-16 ч роста продуцента из культуральной жидкости (после отделения биомассы) проводили выделение сналоспецифичного лектина, как описано в примере 1. Выход целевого продукта по активности 2,2%. П р и м е р 5. Условия выращивания и питательная среда с автолизатом из пивных дрожжей аналогичны приведенным в примере 4. Для осаждения препарата из 1 л КЖ использовали 390,0 г сернокислого аммония (60% насыщения). Выход целевого продукта по активности 46,8%. П р и м е р 6. Условия выращивания и питательная среда с автолиэятом из пивных дрожжей такие же, как и и примере 4, Для осаждения сиалоспецифичного бактериального лектина из 1 я КЖ использовали 472,0 г сернокислого аммония (70% насыщения). Выход целевого продукта по активности 60%. Дальнейшее увеличение процента насыщения (NH 4 ) Z SO4 не ведет к увеличению выхода целевого продукта. Ф о р м у л а и з о б р е т е н и я t. Способ получения бактериально-го лектина, специфичного к сиаловым кислотам, включающий выращивание бактериальной культуры-продуцента глубинным методом на питательной среде с биостимуляторами, отделение биомассы, осаждение препарата сернокислым аммонием и очистку диализом, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, с це-' лью повышения выхода целевого продукта и упрощения- способа, в качестве культуры-продуцента используют штамм бактерий Bacillus mesentericas ВКПМ В-2466, 2. Способ по п. 1, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что при осаждении используют сернокислый аммоний при степени насыщения 60-70%. Составитель О,Скородумова Техред П.Олийнык Корректор£.Шевкун : Заказ 88 Тираж Подписное ВНИИПИ Государстаенного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР t13035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5 Производственно-издательский комбинат "Патент", г.Ужгород, ул. Гагарина,101