Спосіб одержання гангліозидів

Изобретение относится к способам получения индивидуальных липидов, используемых для приготовления липосо- ( Изобретение относится к химии природных соединений, а именно к способам получения индивидуальных липидов, которые могут быть использованы при изучении структуры и функций биологических мембран, а также для получения препаратов различной направлен' НОСТИ. Целью изобретения является повышение выхода целевого продукта и и н тенсификация способа. Способ осуществляется следующим образом. Мозг крупного рогатого скота и з мельчают гомогенизацией в ацетоне, а затем ткань экстрагируют смесью хлороформа и метанола. Полученный хлороформно -метанольный экстракт упари17-91 малъных препаратов, изучения структу ры и функций биологических мембран. Целью изобретения является повышение выхода целевого продукта. Согласно способу мозг крупного рогатого скота экстрагируется ацетоном, смесью хлороформа и метанола, а затем смесью 70%-ного изопропилового спирта и г е к сана в объемных соотношениях (3,8— 4 , 2 ) : ( 0 , 9 - 1 , 1 ) . Экстракты ткани объе диняют и отделяют водный слой, к о т о рый подвергают хроматографии на с о р бенте, содержащем тетраалкиламмониевые группы. Элюирование ганглиозидов проводят 0 , 0 5 - 0 , 2 М раствором бикарбоната аммония в водном метаноле. Ї табл. ; вают и объединяют с хлороформно-метанольным экстрактом, перемешивают, о т - І деляют водно-метанольный слой, содер- ' жащий неочищенные ганглиозиды Воднометанольный слой подвергают хроматографии на сорбенте, содержащем т е т р а алкиламмониевые группы. Ганглиозиды элюируют 0,05-0,2 М раствором с I кг мозга. Длительность технологического цикла 7~9 с у т . П р и м е р . 1 кг мозга крупного рогатого скота, предварительно очищенного от соединительной ткани, н а резают и гомогенизируют порциями по 100 г в ацетоне (4 мл ацетона на 1 г ткани).Гомогенаты объединяют, м о з г о вую ткань отделяют фильтрацией. Полученный осадок помещают в 2,7 л смеси •та > А 1Чл О5 1647960 хлороформа и метанола в объемных соотношениях 2 : 1 , смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 40 мин. Осадок ткани отделяют фильтра-с цией, добавляют к нему 5 л смеси 70%-ного изопропилового спирта и г е к сана в объемных соотношениях 3 , 8 : 0 , 9 . Смесь перемешивают в течение 1 ч при комнатной температуре, после чего о с а - ю док отделяют фильтрацией и удаляют, а фильтрат упаривают на роторном испарителе при температуре не выше 37°С до конечного объема 1,0 л . К полученному раствору добавляют оба хлороформ- 5 'но-метанольных экстрактов и 1 ,3 л хлороформа . Смесь перемешивают. Образовавшийся водно-метанольный слой отделяют. К нижнему хлороформному слою добавляют 0,9 л смеси дистиллирован- 20 ной воды и метанола в объемном соотношении 1:1 и перемешивают. Верхнюю водно-метанольную фазу отделяют, к хлороформному слою добавляют смесь дистиллированной воды и метанола в 25 объемном соотношении 2:І и смесь п е ремешивают. Водно-метанольный слой отделяют и объединяют с двумя ранее полученными водно-метанольными слоями. Полученную водно-метанольную_фазу, со- 3 0 держащую ганглиозиды, подвергают хроматографии на сорбенте, содержащем j тетраалкиламмониевые группы (Диасорб і ТА-500 или QAE-Сефадекс А-25). Размер колонки 5x30 см. После нанесения мате-щ риала колонку последовательно промывают 2,5 л смеси хлороформа, метанола і и вода в объемных соотношениях 30:60: : 8 , затем 1,5 л метанола. Ганглиозиды элюируют 3 л 0,05 М раствора бикарбо- 40 'ічата аммония з метаноле, содержащем 5X дистиллированной воды. Полученный Раствор ганглиозидов в водном метаноле Показатель 4 пропускают через колонку с 500 мл к а тионита КУ-2-8 СН^-форме. Обессоленный раствор ганглиозидов упаривают на роторном испарителе до объема 80 100 мл при температуре, не превышающей 37 С. Полученный раствор ганглиозидов подвергают лиофильному высушиванию. Выход ганглиозидовсоставляет 1,33 г . Содержание N-ацетил нейрамнновой кислоты 23,6%. Препарат представляет собой белый порошок, легко растворимый в воде. Преимущества данного способа по сравнению с прототипом приведены в таблице. Приведенные данные демонстрируют высокий выход ганглиозидов, полученных по предлагаемому способу (увеличение выхода ганглиозидов в 2,5-3 раза по сравнению с прототипом). Ф о р м у л а и з о б р е т е н и я Способ получения ганглиозидов путем гомогенизации мозговой ткани животных, двукратной экстракции і гомогената смесью хлороформа и метанола, фильтрации, инкубации, упаривания, хроматографии с последующей элюцией целевого продукта, о т л и ч а ю щ и й с я тем, ч т о , с целью повышения выхода целевого продукта и интенсификации способа, к осадку ткани после фильтрации добавляют смесь 70%-ного изопропилового спирта и гексана в объемных соотношениях ( 3 , 8 - 4 , 2 ) : ( 0 , 9 1s1), хроматографируют на сорбенте, содержащем тетраалкиламмониевые группы, а элюцию целевого продукта проводят 0,05-0,2 М раствором бикарбоната аммония в водном метаноле. Способ г* предлагаемый прототип Выход ганглиозидов с 1 кг мозговой ткани 1 ,2-1,4 0,38-0,43 Примеси, % 2,6-3,3 8,6-10,0 Длительность технологического процесса, сут 7-9 14-16 647960 Редактор Л.Волкова Составитель Л.Конюхова Техред А,Кравчук Корректор И, Эрдейи Заказ 1653/ДСП Тираж 308 Подписное В И П Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР НИИ 113035, Москва, Ж-35, Раушская н а б . , д . 4/5 Производственно-издательский комбинат "Патент", г, Ужгород, ул. Гагарина, 101 f, г > 1 ,' І