Спосіб селекції злакових культур на стійкість до збудників хвороб

Предлагаемый способ селекции злаковых культур на устойчивость к факультативным патогенам типа Fusarium, Ophioboius, Helminthosporium, а также фитогенным бактериям, может быть использован в сельском хозяйстве, на ранних этапах отбора устойчивых генотипов. Прототипом может служить способ Гирко B.C. [Методы клеточной селекции в селекционных программах зерновых культур. Вестник сельскохозяйственной науки. 7-12, 1992, стр.85-88], в котором в качестве селективной используют среду с добавлением 25%-ной культуральной жидкости гриба. В качестве объекта исследования предложены незрелые зародыши. Инфекционный фон осуществляется контактом каллуса с культуральной жидкостью грибных токсинов в течение всего периода культивирования. Недостатком способа является то, что отбор "устойчивых" генотипов растений на средах с добавлением культуральных жидкостей грибов или их токсинов, ведет лишь в отбору генотипов, устойчивых к стрессам вообще, но не к конкретному возбудителю заболевания. В основу изобретения поставлена задача в способе селекции злаковых культур на устойчивость к возбудителям болезней путем ужесточения инфекционного фона и замены экспланта (объекта исследования обеспечить отбор in vitro генотипов злаковых растений с генетически детерминированной устойчивостью к патогенам. Поставленная задача решается в способе селекции злаковых культур на устойчивость к возбудителям болезней, включающем выращивание растений из зародышей зерновок на уровне культуры тканей, создание инфекционного фона и отбор выживших генотипов, согласно изобретению в качестве зародышей зерновок берут зрелые зародыши зерновок, сначала создают инфекционный фон путем прямого контакта последних с грибной суспензией в течение 12-24 часов, а затем уже выращивают растения на уровне культуры ткани. Способ осуществляется следующим образом. Работа выполняется на зерновках различных по устойчивости к патогенам сортов сельскохозяйственных растений, т.к. зародыш наиболее чувствительный к заражению орган растения во время формирования или прорастания. Операции до и после инфицирования проводят по общепринятой методике, как в прототипе, так и в заявляемом способе. Образцы 20 мин дезинфицируют 0,5% раствором марганцевокислого калия с последующей многократной промывкой стерильной водой. Зерновки раскладывают в стерильные чашки Петри на фильтровальную бумагу, смоченную суспензией патогена в концентрации 2-2,5 χ 10 микроконидий/мл среды. После 12-24 часов контакта с патогеном, набухшие и наклюнувшиеся в жидкой суспензии грибов семена 20 мин выдерживают в насыщенном растворе гипохлорита кальция, 10 мин в соляной кислоте, затем не менее 5 раз промывают стерильной дистиллированной водой. Полученные инфицированные зародыши в стерильных условиях отделяют от эндосперма и переносят в пробирки с питательной средой. Состав среды зависит от вида растения, чьи зародыши служат эксплантом. Культивируют 10-15 дней при температуре 25-28°С на свету. Выжившие поело инфицирования проростки выращивают в оранжерее до получения семян. Количество устойчивых растений, выделившихся на инфекционном фоне, уменьшается от отбора к отбору (табл. 1). Однако, каждый раз они представлены более устойчивыми генотипами, чем исходные родительские сорта. Три цикла отборов позволили увеличить устойчивость растений в 1.6-3,2 раза, в зависимости от генотипа сорта (табл, 2). Отобранные после третьего цикла растения прошли 2-х летние полевые испытания и продемонстрировали стабильность полученного уровня устойчивости. Отклонения от стандарта были в пределах ошибки опыта.