Спосіб одержання гастроентерологічного засобу

Изобретение относится к фармацевтической промышленности и касается способов получения препаратов для лечения гастроэнтерологических заболеваний, В настоящее время для лечения язвенных поражений желудочно-кишечного тракта, гастритов, регуляции функций печени имеется большое количество препаратов химической и биологической природы. Биопрепараты представлены главным образом средствами растительного и животного происхождения (Радбиль О.С. "Фармакотерапия в гастроэнтерологии", М., 1991. с. 126, 179-184). Известен способ получения лекарственного средства для лечения язвы из микроорганизмов рода триходерма (заявка Японии № 1-250324, опублик. 05.10.89). Известны способы получения препаратов на основе живых клеток микроорганизмов - симбионтов естественной микрофлоры желудочно-кишечного тракта человека и животных (пробиотики, нормоф-лоры). Такие препараты, как бактилсубтин, бифидумбактерин, колибактерин, лактобак-терин оказывают антагонистическое воздействие на патогенных микроорганизмов, применяются при различных желудочнокишечных заболеваниях ("Лекарственные средства", Справочник, Москва, 1993 г.). При получении этих препаратов приходится решать основную проблему - сохранение жизнеспособности клеток в процессах внедрения, консервации, хранения и реактивации, что усложняет и удорожает технологию, изготовление указанных препаратов (патент США №4518696, опублик. 21.05.95; патент США №4956295, опублик. 11.10.90; патент США Nk 4720460, опублик. 19.01.88). Прямыми аналогами заявляемого являются способы получения гастроэнтерологических средств из лактобацилл, в частности из Lactobacjllus*bulgaricus. Так, известен способ получения лекарственного средства путем выращивания лактобацилл на белковой среде с последующим высушиванием целевого продукта (Красин Л.Л., Усовершенствование производства колибактерина, Автореф. дис. к.б.н. Пермь. 1972, с.12-17). Препарат обладает только симптоматическим действием. Известен также способ получения лекарственного средства гастроэнтерологического и биостимулирующего средства п утем гомогенизации нативных клеток лактоба-циллус булгарикус, пектина и пчелиного молочка (авт.св. Болгария №46478, опублик. 15.01.90). Способ предполагает введение таких дефицитных и дорогих компонентов, как пектин и пчелиное молочко. Наиболее близким по технической сущности к заявляемому является способ получения препарата для лечения желудочно-кишечных заболеваний путем выращивания Lactobacillus bulgarlcus на соевой среде в анаэробных условиях с последующим высушиванием и изготовление лекарственной формы (авт.св. №619187, Бюл. №30, 1978). Отмечена эффективность препарата только в отношении гастрита и язвенной болезни желудка. Задача, которую решают авторы предполагаемого изобретения, состоит в разработке способа получения лекарственного гастроэнтерологического средства с дополнительными терапевтическими функциями ускорением регенерации клеток печени, заживления кожных ран, т.е. препарата с более широким спектром фармакологического действия. Поставленная задача решается тем, что в способе получения гастроэнтерологического средства, предусматривающем выращивание культуры Lactobacillus bulgaricus с последующим выделением биологически активного вещества. В качестве исходной культуры используют штамм Lactobacillus bilgaricus-86 (депонированный в коллекции ВКЛМ генетика под №ВПКМ-В-5788, ВНИ-Игенетика, 1991), а полученную в результате ферментации биомассу последовательно обрабатывают раствором лизоцима с концентрацией 0,2 мас.% и раствором трипсина с концентрацией 0,9 мас.% в известных условиях действия этих ферментов. Общими с прототипом признаками являются: - выращивание культуры, - выделение биологически активного вещества. Отличительными признаками являются: - использование в качестве исходной культуры нового штамма Lactobacillus bulgaricus-86; - обработка полученной в результате ферментации биомассы раствором лизоцима с концентрацией 0,2 мас.% и раствором трипсина концентрацией 0,9 мас.%. Решение поставленной задачи обусловлено совокупностью свойств нового штамма-продуцента и предложенным способом лизиса клеточного материала ферментами лизоцимом и трипсином в указанной последовательности и определенной концентрации. Именно эта совокупность признаков обеспечивает получение биологически активного вещества с расширенным спектром фармакологического действия. Полученное при реализации способа вещество активирует клетки мэкрофагальноготипа, стимулирует ретикуло-эндотелиальную систему и фагоцитарную активность моноцитов крови, усиливает регенеративные процессы в клетках. Усиление фагоцитоза in vivo в клиренстесте с красителем трипановым синим составляет не менее 30% по сравнению с контролем. Отмечается также ускорение регенерации клеток печени. Результаты иссле-дований представлены в таблице 1. Продемонстрированные свойства полученного вещества позволяют использовать его для приготовления эффективных гастроэнтерологических и гепатопротекторных препаратов. Вышеперечисленные и другие преимущества заявляемого способа будут видны и понятны из нижеприведенного подробного описания. Для реализации способа используют новый штамм Lactobacillus bulgaricus-86, выделенный из ассоциативной культуры при получении биопрепаратов на Ладыжинском биофармацевтическом объединении "Энзим". Штамм депонирован в коллекции ВКПМ под номером ВКПМ-В-5788. Дата депонирования 03.10.1991г. Штамм характеризуется следующими свойствами: Культурно-морфологические особенности штамма Выращенный на питательной среде MRS при температуре 40 + 1°С в течение 18-24 часов штамм образует однородную муть и слабый мелкодисперсный осадок, в полужидких средах - висячие каплеобразные колонии, в толщине агара - белесые дисковидные колонии-с неровными краями диаметром до 1 мм. На твердой агаризованной среде образует полупрозрачные белесоватые колонии, круглые с неровными краями и диаметром 1-3 мм. Морфология клетки Клетки грамположительные средней длины и толщины, края округлые, палочки ровные, размер колеблется от 0,5 до 3-8 мк. возможно расположение цепочками разной длины от 2 до 8 клеток. Физиологические характеристики штамма Штамм бактерий Lactobacillus bulgarlcus-86 факультативный анаэроб, неподвижный, каталазоотрицательный, нитраты в нитриты не восстанавливает, желатин не разжижает, слабо гидролизует желатин, не образует аммиак из аргинина. Молоко створаживает с образованием кислоты (1,27%). Молоко с лакмусом восстанавливает без образования газа, интенсивно восстанавливает молоко с метиленовой синью. На средах с повышенным содержанием хлористго натрия (> 4%) и рН 9,6 не растет. Не выдерживает прогревания при 63°С в течение 30 минут. Слизь не образует. На средах с желчью растет, крахмал слабо гидролизует. Из Сахаров сбраживает только глюкозу и сахарозу. Не сбраживает арабинозу, мальтозу, дульцит, ксилозу, раффинозу, инозит, рибозу, адонит, маннит, имулин, целлобио-зу, галактозу, эскулин, сорбозу, сорбит, рамнозу, амигдалин, трегалозу, маннозу, L-метил-б-глюкозид, глицерин. Культивирование штамма осуществляют в анаэробных условиях при температуре 40 +_10°С на сбалансированной питательной среде, содержащей: гидролизат казеина - 48,0-50,0% no NH2, гидролизат соевой муки - 20-25% по NH2, автолизат пекарских дрожжей - 15-20% по NH2, кукурузный экстракт - 7,5 + 2,5 по NH2, а также соли: К2НРО4 - 0,2-0,5%, MgO4 7Н2О - 0,02%, ΜnO4 * 4Н2О - 0,005%, источник углеводов сахар - 0,6-0,8%. После культивирования в течение 8-24 часов проводят сепарирование биомассы.