Спосіб отримання рабічного антигену для гіперімунізації тварин

Спосіб отримання рабічного антигену, що включає накопичення вірусу сказу в культурі клітин ВНК-21, концентрування вірусовмісної рідини, який відрізняється тим, що накопичують штам "Щелково 51С" на перещеплюваній культурі клітин сірійського хом'ячка ВНК-21 Clone 13/04, концентрують трикратним заморожуванням-відтаванням. (19) (21) u200606862 (22) 19.06.2006 (24) 15.12.2006 (46) 15.12.2006, Бюл. № 12, 2006 р. (72) Бабкін Михайло Валерійович, Стегній Борис Тимофійович, Ничик Сергій Анатолійович, Прохорятова Олена Валентинівна, Явніков Назар Валентинович, Білокінь Віктор Степанович 3 19419 Аналіз вітчизняної та закордонної літератури за матеріалами та результатами подібних досліджень дозволяє зробити висновок про відсутність ознак, що схожі із суттєвими відмінними ознаками способу, що заявляється. Приклад 1 Отримання культурального вірусу сказу Перещеплювану лінію культури клітин ВНК-21 Clone 13/04, яка є найбільш чутливої до вірусу сказу [Патент UA 60015U, 15.04.2005p. Бюл.№4, 2005], вирощували на живильних середовищах Ігла ДМЕМ, 199 в рівному співвідношенні з додаванням 10% сироватки крові великої рогатої худоби, яка очищена поліетиленгліколем. Посівна концентрація клітин складала 0,8х106-1,0х106кл/см. Клітинну завись розливали в 0,5 або 5,0л бутилі. Інкубували в ролерному приладі 24 години. З бутилів або флаконів, в яких моношар був сформований на 80-100 відсотків, зливали ростове середовище і вносили підтримуюче середовище: 199 50%, Ігла ДМЕМ - 50% без сироватки великої рогатої худоби. В підтримуюче середовище додавали культуральну суспензію вірусу сказу штам "Щелково 51С" з множинністю інфікування 0,65 МЛД 50/кл. Інкубували в ролерному приладі зі швидкістю обертання 1-2об/хв. при (37,0±0,5)°С протягом 96 годин. Бутлі або флакони заморожували при мінус 20°С протягом 24 годин, після відтаювання рідини відбирали поверхневий прозорий шар рідини, визначали в ній вміст білку, який контролювали на спектрофотометрі при довжині хвилі 280нм, або якісною реакцією, наприклад, реактивом Неслера. Використовували фракції з кількістю білка 0,8 Комп’ютерна верстка А. Рябко 4 1,0г/% і більше. Рідина, що не містить білок відкидалася. Інфекційну активність зібраної клітинної культуральної біомаси, визначали зараженням білих мишей вагою 10-12г внутришньомозково у дозі 0,03см3 за загально прийнятою методикою. Інфекційний титр вірусу сказу повинен бути 6,5lg МЛД 50/см3 і більше. Після титрування культуральну вірусну біомасу зливали в одну ємність і вносили інактивант - бета-пропіолактон до кінцевої концентрації 0,02-0,03%, Інкубували при 4-6°С протягом 2-4 годин. Приклад 2 Отримання культурального антигену вірусу сказу Після інактивації вірусну суспензію знову піддавали заморожуванню при мінус 20°С протягом 24 годин. При відтаюванні рідини із бутлю відбирали фракціонно тільки рідину, яка містить білок, що контролюється спектрофотометрично при довжині хвилі 280нм або якісною реакцією, як вказано в прикладі 1. Таку операцію повторювали дворазово. При цьому концентрація білка повинна збільшуватись від 0,8-1,0г/% до 7,0-8,0г/% у кінці процесу. Сконцентровану рідину для осадження великих клітинних структур піддавали центрифугуванню при 300g протягом 40 хвилин при температурі плюс 4°С. Надосадову рідину використовували, як імуноген вірусу сказу. Таким чином, використання способу дає можливість одержати висоякісний антиген вірусу сказу, технологія отримання якого адаптована до виробничих умов. Підписне Тираж 26 прим. Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601