Спосіб визначення прихованої крові

Изобретение относится к области медицины, а именно к способам обнаружения скрытых следов крови и предназначено для контроля качества предстерилизациониой очистки. Наиболее близким по технической сущности и достигаемому результату является способ обнаружения следов крови на изделиях медицинского назначения с использованием комбинированного реактива - азопирама, который содержит 10% амидопирина, 0,10 - 0,15% солянокислого анилина, остальное - этиловый спирт. Непосредственно перед проверкой качества очистки изделий готовят рабочий раствор, смешивая равные объемные количества азопирама и 3% пероксида водорода. Рабочим раствором обрабатывают исследуемые изделия: протирают тампонами, смоченными реактивом или наносят несколько капель реактива на исследуемые изделия с помощью пипетки. При наличии с ледов крови не позднее, чем через 1 минуту после контакта реактива с загрязненным участком, появляется фиолетовое окрашивание, переходящее в течение нескольких секунд в розово-сиреневое. Окрашивание, наступившее позже, чем через 1 минуту, после обработки исследуемых предметов. не учитывается [1]. Недостатками данного способа являются: малая чувствительность, т.к. характерное окрашивание реактива возникает при содержании крови в воде при разведении не более 1 : 100000, что соответствует наличию около 50 эритроцитов в 1мл; низкая избирательность, обуславливающая недостаточную надежность получаемых результатов, т.к. наличие на инструментарии оксидной пленки, пятен ржавчины, стирального порошка с отбеливателем, хромовой смеси для обработки посуды, а также остатков дезинфицирующих средств - хлорамина и хлорной извести приводит к ложно-положительным результатам; недостаточная стабильность реактива при хранении; готовый раствор азопирама может храниться в плотно закрытом флаконе в темноте не более 1 месяца; рабочий же раствор (азопирам и пероксид водорода) должен быть использован в течение 30 - 60мин после приготовления; применение в качестве реактива амидопирина - вещества высокотоксичного, что создает вредные условия труда и опасность для здоровья людей, а также вызывает загрязнение окружающей среды; по выше указанной, причине в настоящее время в нашей стране производство амидопирина резко сокращено. Для решения технической задачи - повышения чувствительности и избирательности определения, увеличения стабильности реактива при хранении последний в качестве хромогена содержит гидразид 3аминофталевой кис лоты, а в качестве растворителя - щелочь. Предложенное техническое решение является новым, т.к. оно не известно из уровня техники, что подтверждают патентные исследования, проведенные по фондам ПФ УкрНИИНТИ и ПФ медицинской библиотеки. Для повышения чувствительности и избирательности определения .используется явление повышенной каталитической активности следов сухой крови в хемилюминесцентной системе гидразид 3-аминофталевой кислоты - пероксид водорода - щелочь, взятых в определенных соотношениях. Это обстоятельство является неочевидным и для специалиста, явным образом не следует из уровня техники, что свидетельствует об изобретательском уровне технического решения. Способ осуществляют обработкой исследуемого предмета или материала гидразидом 3-аминофталевой кислоты с пероксидом водорода в среде щелочи с последующим наблюдением изменения цвета реактива. Для приготовления раствора гидразида 3-аминофталевой кислоты 0,354г гидразида 3-аминофталевой кислоты растворяют в 62,5мл 0,4моль/л едкого натра и объем доводят до 500мл дистиллированной водой. Для получения 0,4моль/л раствора едкого натрия 8г твердого гидроксида натрия растворяют в 500мл воды. Приготовляют 0,175моль/л раствор пероксида водорода к 10мл 30% - ного пероксида водорода добавляют 490мл воды. Эти растворы 3года сохраняются без изменений. При необходимости их использования к 140мл воды добавляют по 20мл каждого из трех концентрированных растворов и перемешивают. Таким образом получают реактив на основе гидразида 3-аминофталевой кислоты, который может быть использован в течение 3 - 4 дней. В присутствии следов крови на исследуемых изделиях реактив приобретает интенсивно голубую окраску, причем выраженное голубое окрашивание возникает уже при содержании крови в воде при разведении 1 : 100000, что соответствует наличию нескольких эритроцитов в 1мл. С увеличением концентрации крови в исследуемой жидкости интенсивность голубой окраски реактива. Пример 1. 100мг цельной крови человека растворяют в 100мл дистиллированной воды. Одну каплю полученного раствора наносят на поверхность хирургического скальпеля. После высушивания скальпеля место нанесения раствора крови обрабатывают 0,5мл реактива. Наблюдают выраженную голубую окраску раствора реактива, свидетельствующую о наличии крови на инструменте. Пример 2. Аналогично примеру 1, с тем отличием, что исследуемый раствор крови человека наносили на участки ржавчины, имеющиеся на скальпеле. Наблюдают голубую окраску раствора реактива, подтверждающую наличие крови на инструменте. При обработке реактивом пятна ржавчины без предварительного нанесения на него исследуемого раствора крови изменения цвета реактива не наблюдалось, что подтверждает отсутствие крови на инструментарии. Пример 3. Аналогично примеру 1, тем отличием, что раствор цельной крови наносили на медицинские иглы путем просасывания раствора с помощью шприца. После высыхания раствора через исследуемую иглу всасывали реактив с помощью туберкулинового стеклянного шприца, ранее не бывшего в употреблении. Наблюдали выраженное изменение цвета реактива внутри шприца. Пример 4. Аналогично примеру 1, с тем отличием, что раствор цельной крови наносили на скальпель, который предварительно был обработан 0,5% - ным раствором моющего средства с отбеливателем и затем промыт дистиллированной водой и высушен. При нанесении реактива на месте высохшего раствора крови наблюдали возникновение голубой окраски раствора. Нанесение реактива на другие участки поверхности не приводило к изменению цвета раствора и свидетельствовало об отсутствии крови на этих участках инструментария. При использовании в качестве реактива рабочего раствора азопирама для обработки инструментария в обоих случаях наблюдали изменение окраски реактива в течение 1 минуты. Результаты определения скрытой крови на медицинском инструментарии предлагаемым способом и способом прототипа (с помощью реактива азопирам) приведены в таблице. Предлагаемый способ позволяет выявлять скрытые количества крови при разведении 1 : 1000000, что на порядок ниже, чем в известном способе. Присутствие на инструментарии следов ржавчины, моющих средств с отбеливателем, хлорамина Б. хромовой смеси не приводит к ложноположительным результатам при анализе предлагаемым способом в отличие от способа прототипа (см. таблицу). Таким образом, из приведенных данных видно, что предлагаемый способ является более чувствительным и избирательным, чем известный. За счет исключения применения высокотоксичного вещества - амидопирина улучшены условия труда и предотвращена потенциальная опасность здоровью пациентов. Использование в качестве хромогена в предлагаемом способе гидразида 3-аминофталевой кислоты позволило увеличить стабильность реактива при хранении с 30 - 60мин до 4 суток, а для исходных растворов реактива - от 1 месяца до 3 - х лет. Предлагаемый способ ввиду его уникальной чувствительности, а также практически нетоксичности реактива в применяемых концентрациях, может быть использован для обнаружения следов скрытой крови на руках работников медицинских учреждений при проверке качества их очистки от остатков крови, а также в воде, на посуде, перевязочном материале, в соскобах и т.п. Предложенный способ выявления скрытых следов крови имеет первостепенное значение для профилактики внутрибольничного заражения людей через мединструментарий и шприцы инфекциями, которые передаются кровью, в том числе гепатитом В и СПИД. Проведение определения с использованием в качестве хромогена гидразида 3-аминофталевой кислоты в щелочной среде способствует повышению чувствительности и специфичности способа за счет достижения максимальной разницы между значениями полезного сигнала и фонового свечения, которое визуально не наблюдается вообще.