Спосіб визначення активності креатинфосфокінази в крові

Изобретение относится к спосо бам ранней диагностики инфаркта миокарда. Цель - повышение точности, чувствительности и упрощение способа достигается за счет инкубации сыво-ротки крови в присутствии креатина, АТФ, унитиола и буферного раствора, обработки смеси последовательно раствором молибдата аммония в серной кислоте, раствором аскорбиновой кислоты в соляной кислоте, растворения полученного осадка щелочью и колориметрии при 625 нм. Чувствительность способа 70 мкмоль/л, ошибка способа 1,6 %. 1 Изобретение относится к биохимнчес 4 ким исследованиям в медицине и может • быть использовано в клинической практике как основной биохимический тест в диагностике инфаркта миокарда в ранние сроки. Целью изобретения является повышение точности и чувствительности и упрощение способа. Цель достигается путем проведения реакции сыворотки крови с реагентом, включающим креатин, АТФ, буферный раствор и унитиол, остановки реакции раствором молибдата аммония в серной кислоте, проявления фосфора раствором аскорбиновой кислоты в соляной кислоте, растворения денатурированного белка добавлением гидрата о-кисн натрия. Способ осуществляется следующим образом. В две пробирки (опытную и контрольную) вносят по 0,05 мл сыворотки или плазмы. Добавляют в каждую по 0,2 мл раствора свежеприготовленной субстратной смеси, включающей 8,35мМ АТФ и 5,3 мМ унитнола в 0,15 М трисоксиметиламинометана, содержащего ' її",З мМ магния ацетата. Ставят на водяную баню с температурой 37 С. Через 3 мин в опытную пробирку вносят 0,1 мл 86,3 мМ раствора креатина. Продолжают инкубацию в течение 30мин. Реакцию останавливают добавлением в обе пробирки по 1 мл 0,6%-ного молибдата аммония в 0,4 М серной кислоте, после чего в контрольную пробирку вносят 0,1 мл 86,3 мМ раствора креатина. Последующие операции проводят при комнатной температуре, Через 15 мин s обе пробирки вносят по 1 мл свежеприготовленного 1^-ного раствора аскорбиновой кислоты в 0,1 М соляной кислоте. Ровно через 15 мин, соблюдая ту же последовательность, в пробирки вносят по 2 мл 1 М раствора гидрата окиси натрия. Пробирки встряхивают ДО'растворения денатурированного белка. Через 15 мин прозрачные однородные растворы подвергают пооче (53) 612,015 (088.8) (56) Лабораторное дело, 1973, № 4, с. 229-231. 1462204 редкой колориметрии. Применяя фотоной предлагаемым способом, на 37% электроколориметр с красным световыше показателей, определенных изфильтром или спектрофотометр при вестным способом. Следовательно, длине полны в 625 нм, в односаитимет- , чувствительность предлагаемого споровых кюветах определяют степень погсоба выше. лощения светового луча в растворах* Определяют разницу показаний между Показатель воспроизводимости споопытным и контрольным растворами. По собов определяется при анализе "разбкалибровочному графику, представляю- (О роса цифровых значений отдельных щему собой зависимость степени погопределений в обоих способах отнолощения светового луча заданной длисительно их средних значений. Поканы волны от количества фосфора в растзатель воспроизводимости результаворах различных концентраций однозатов предлагаемого способа составляет мещенного фосфата натрия, определяют 15 1,6%, известного 11,4%. количественное содержание фосфора, образовавшегося из синтезированного Формула и з о б р е т е н и я креатинфосфокиназной креатинфосфата в проведенной реакции. Активность Способ определения активности креатинфосфокинаэы выражают в микро- 20 креатинфосфокиназы в крови путем молях фосфора в*1 л сыворотки или инкубации сыворотки крови в щелочной плазмы за 1 мин, учитывая количестсреде, содержащей трис-HCl буффер, венные соотношения. креатин, АТФ, сульфат магния и донор сульфгидрильных групп, остановки Для подтверждения более высокой эффективности предлагаемого способа 25 реакции образования креатинфосфата, гидролиза его в кислой среде, прояв- * в сравнении с известным было проведеления фосфора восстановителем и опрено исследование одной пробы крови деления фосфора, о т л и ч а ю щ и й больного К.; с целью исключения ошис я тем, что, с целью повышения бок в анализе проведено по 10 определений калодым способом. 30 точности и чувствительности способа, в качестве донора сульфгидрильных Активность креатинфосфокиназы, групп используют унитиол, остановку определенная предлагаемым способом реакции и гидролиз креатинфосфата составила 98; 96; 95; 98; 94; 98; проводят одновременно добавлением 100; 97; 96; 95; т.е. в среднем 96 мкмоль/л в 1 мин. 35 0,6% молибдата аммония в 0,4 М серной кислоте, фосфор проявляют растАктивность креатинфосфокиназы, вором аскорбиновой кислоты в соляной 'определенная известным способом соскислоте, затем через 15 мин после тавила 67; 80; 56; 69; 78; VS: 79; развития цветовой реакции растворя67; 51; 78, в среднем 70 мкмоль/л в 1 мин. 40 ют денатурированный белок добавлен няем 1N гидрата окиси натрия с посСредние цифровые показатели актив-' ледующим определением фосфора. ности креатинфосфокиназы, определен Составитель Редактор Л.Веселовская В.Галкина Техред И.Верес t Корректор М.Пожо Заказ 1811 Тираж 790 Подписное В И П Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ CCCV' НИИ 113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д . 4/5 Производственно-издательский комбинат "Патент", г.Ужгород, ул. Гагарина,101