Спосіб визначення індивідуальної чутливості дітей з вторинними імунодефіцитними станами до імуномодулятора тимусу

Винахід відноситься до медицини, а саме до педіатрії та клінічної імунології, і може бути використаний при відборі дітей з вторинними імунодефіцитними станами для лікування імуномодуляторами тимусу за імунологічними показниками. Загальноприйнятими показаннями до призначення імуномодуляторів тимусу є дефіцит комплексу імунологічних показників, що характеризують Т-клІтинну ланку імунітету (Ε-РУК загальні, Е-РУК-активні, РБТЛ з ФГА). Але аналіз лише імунного статусу не дозволяє визначити, чи дійсно є доцільним призначення препарату в конкретному випадку, оскільки у частини дітей з вторинними імунодефіцитними станами під впливом імуномодуляторів тимусу не відмічається покращення Імунологічних показників. Це пояснюється різними ефектами впливу цих препаратів на лімфоцити, відсутністю чутливості останніх до імунокоректора. Тому визначення in vitro чутливості лімфоцитів до імуномодуляторів має важливе практичне значення. Найбільш близьким до винаходу є спосіб оцінки ефективності імуномодулюючих препаратів в реакції' бластної трансформації. Лімфоцити пацієнта інкубують з імуномодулятором, після чого досліджують зміни проліферативної активності за включенням ЗН-тимідину на сцинтиляційному лічильнику [Int. techn. biol. 1989, ν. 2, Ν 1, ρ. 33-38]. Спосіб вважається достатньо Інформативним. До недоліків відноситься його складність, що не дозволяє користуватися ним в усі х лабораторіях клінічної Імунології (потребує спеціального оснащення), тривала інкубація (до 96 годин при дослідженні ефективності імуномодуляторів), використання ЗН-тимідину. Задача винаходу полягає в розробці простого, точного способу визначення індивідуальної чутливості дітей з вторинними імунодефіцитними станами до імуномодуляторів тимусу, що дасть можливість його широкого використання і дозволить досягнути повного ефекту від Імунотерапії шляхом доцільного призначення препарату. Спосіб здійснюється слідуючим чином. Тест спонтанного Е-розеткоутворення проводиться за I.F. Bach et al. На градієнті густини фіколлверографін виділяються лімфоцити. Лімфоцити та еритроцити в співвідношенні 1:30 інкубують на протязі 30 хвилин при 37°С, центрифугують 5 хвилин при 1000 об/хв І залишають при 4°С на 18-20 годин. В камері Горяєва підраховують кількість розеткоутворюючих клітин з трьома і більше еритроцитами барана на 200-300 клітин, що виражається в процентах. Реакція виконується у дво х варіантах: контрольна (Е-РУК-контроль), при якій лімфоцити до сполучення з еритроцитами барана інкубуються 30 хвилин при 37°С; дослідна (Е-РУК-дослід), де лімфоцити на протязі 30 хвилин при 37°С до сполучення з еритроцитами барана інкубують з Імуномодулятором тимусу тималіном (0,1 мг), в концентрації 1 мг/мл. Визначається різниця між показниками дослідної та контрольної реакцій: А = (Е-РУК-дослід) - (Е-РУК-контроль), Де А - індекс стимуляції чи показник впливу Імуномодуляторів на лімфоцити дитини; Е-РУК-дослід - кількість Е-розеткоутворюючих клітин в реакції з додаванням імуномодулятора, %; Е-РУК-контроль - кількість Е-розеткоутворюючих клітин в реакції без додавання імуномодулятора, %. При Додатних значеннях А рекомендується призначати імуномодулятор, при від'ємних та нульових значеннях призначення препарату недоцільне. Приклад 1. Хворий К., 3 місяці, знаходився налікуванні в реанімаційному та інфекційно-боксованому відділеннях Тернопільської обласної дитячої клінічної лікарні з привоу Імунодефіцитного стану, переважно з пошкодженням Т-клІтинної ланки імунітету. Сепсис, септикопіємія (гнійний отит, гнійний парапроктит, гостра лівобічна бронхопневмонія з абсцедуванням). Гіпотрофія Ш ступеня змішаного генезу. При проведенні описаних досліджень Е-РУК-контроль становила 26,0%, Е-РУК-дослід - 34,0%. Індекс стимуляції А » 34,0% 26,0% - 8,0%. Хворому був призначений тималін в дозі 0,2 мг/кг маси (1 мг), вн утрішньом'язево, 1 раз в день, 5 Ін'єкцій на курс. Після закінчення лікування відносна кількість Ε-РУК загальних та Ε-РУК активних периферійної крові збільшилась відповідно з 26,0% до 36,0% та з 16,0% до 23,0%. Отже, в даному випадку мала місце стимуляція функціональної активності Т-лімфоцитів. Приклад 2. Хворий Т., 3 роки, знаходився на стаціонарному лікуванні в Тернопільській обласній дитячій клінічній лікарні з діагнозом: Вторинний імунодефіцитний стан, переважно з пошкодженням Т-клітинноїланки Імунітету. Рецидивуючий герпетичний кератоірідоцикліт правого ока. Е-РУК-контроль становила 39,0%, Е-РУКдослід - 59,0%, індекс стимуляції - 20,0%. В комплексі лікування був призначений курс тималіну - 0,2 мг/кг маси (2,5 мг), внутрішньом'язево, 1 раз в день, 5 ін'єкцій на курс. Після закінчення лікування відносна кількість ΕРУК загальних та Е-РУК активних периферійної крові збільшилась відповідно з 39,0% до 55,0% та з 17,0% до 26,0%. В даному випадку тималін справив виражений імуностимулюючий ефект. Приклад 3. Хворий Б., 2 роки, лікувався в Ін фекційно-боксованому відділенні Тернопільської обласної дитячої клінічної лікарні з приводу Імунодефіцитного стану комбінованого характеру. Дизбактеріоз слизової ротової порожнини, глотки, гортані, кишківника з трансформацією в септичний процес, викликаний умовнопато-генною флорою. Е-РУК-контроль становила 40,0%, Е-РУК-дослід - 39,0%, індекс стимуляції 1,0%. Після курсу лікування тималіном в дозі 0,2 мг/кг маси кількість Е-РУК загальних та Е-РУК активних периферійної крові практично не змінилась. Тобто в даному випадку лімфоцити дитини були нечутливими до тималіну. Це можна пояснити тим, що поломка в імунній відповіді не локалізується на рівні впливу імуномодулятора тимусу. Таким способом було обстежено 36 дітей з різними клінічними проявами вторинного імунодефіциту. В ЗО з них у відповідності з методом, що пропонується, Індекс стимуляції (А) перевищував н ульове значення. їм було призначено імунокоригуючу терапію, після чого відмічалось покращання показників Т-клітинної ланки Імунітету, а в середньому по групі їх величина достовірно зросла (табл. 1). Отже, всім дітям з позитивним індексом стимуляції було показано призначення імуномодулятора. При від'ємному індексі Імуностимуляції (А