Штам вірусу кліщового енцефаліту для виготовлення діагностичних препаратів

Корисна модель належить до медичної вірусологи і може бути використана у виробництві препаратів для лабораторної діагностики захворювань, що спричиняються вірусом кліщового енцефаліту. Для виготовлення діагностичних та лікувально-профілактичних препаратів використовувались штами вірусу кліщового енцефаліту „Соф'їн", „Абсеттаров", „Пан", № 205 та інші [1], що мають певну географічну належність. Це обумовлює діагностичну та профілактичну ефективність препаратів, виготовлених з штамів, поширених на території, де циркулює даний збудник. Так, штам „Соф'їн" циркулює на Далекому Сході, „Пан" - у Сибірі, „Абсеттаров" - у Європі. При серологічному обстеженні хворих з діагнозами менінгіт, менінгоенцефаліт і здорових людей на наявність антитіл до вірусу кліщового енцефаліту в м. Одесі та Одеській області було виявлено циркуляцію цього збудника в регіоні і показало, що вірус кліщового енцефаліту є етіологічним чинником захворювань людей. Штами, що циркулюють в природних осередках кліщового енцефаліту в Україні і викликають спорадичні випадки і спалахи захворювання серед людей, мають антигенні відмінності від вище наведених аналогів [2, 3]. А тому застосування препаратів, виготовлених з використанням „сибірських" та „європейського" штамів не є доцільним, тому що веде до зниження специфічності та чутливості імунобіологічних препаратів, що негативно відображується на результатах лабораторної діагностики та профілактики. Найближчим аналогом (прототипом) є штам № 2288, якого було ізольовано в 1977 році в Закарпатській області і запропоновано для виробництва імуноглобулінових препаратів [3]. Виявлення нових штамів кліщового енцефаліту в інших ландшафтно-географічних регіонах України, що відрізняються низкою біологічних показників, може сприяти підвищенню якості діагностики та виявлення збудника. В даний час промислове виготовлення вітчизняних діагностичних та профілактичних препаратів із місцевих штамів не налагоджене. Задачею корисної моделі є заявления нового штаму вірусу кліщового енцефаліту (етіологічного чинника захворювань людей в Україні) для приготування вітчизняних діагностичних препаратів (РНІФ, ІФА). Задача вирішується використанням штаму Саврань 160 вірусу кліщового енцефаліту, ізольованого від кліщів Ixodes ricinus, зібраних в природному осередку цього вірусу у лісі Савранського району Одеської області в 1989 році, для виробництва діагностичних тест-систем. Даний штам депоновано за реєстраційним номером ІЕІХ-№ 24ПЧІ від 25.10.2007 в Депозитарії Інституту епідеміології та інфекційних хвороб ім. Л.В. Громашевського АМН України на базі музею патогенних для людини мікроорганізмів. Штам Саврань 160 відноситься до родини Flaviviridae, роду Flavivirus, комплексу кліщового енцефаліту і характеризується наступними ознаками. Вірус високопатогенний для безпородних дорослих, молодих та новонароджених білих мишей при різних шляхах зараження. Інкубаційний період у новонароджених білих мишей після інтрацеребрального зараження вірусвмісткою суспензією в розведенні 1:10-3 доби. Максимальний титр 12,5 lg LD50/0,02мл. Штам Саврань 160 інтенсивно репродукується в перещеплюваній культурі клітин Vero E6 і Vero В4, викликаючи деструкцію клітин тільки в перших 2-х пасажах. При подальшому пасажуванні процес носить латентний характер і через 72 години після інокуляції штам Саврань 160 інфікує більше ніж 60% клітин моношару. Штам не має гемаглютинуючих властивостей з гусячими еритроцитами при рН 5,4 - 6,8. Імунна сироватка до штаму Саврань 160, отримана в результаті імунізації дорослих мишей, має титри гемаглютинуючих антитіл 1:320 і комплементзв'язуючих антитіл 1:32. Вірус кліщового енцефаліту Саврань 160 інактивується прогріванням при температурі 60°С протягом 30 хвилин та дією ультрафіолетового випромінювання на відстані 20см від бактерицидного випромінювача протягом години. Вірус дуже чутливий до обробки ефіром - індекс інактивації 9. В інфікованому мозку при первинному заморожуванні в рідкому азоті і подальшому зберіганні при температурі -25°С вірус зберігає свою активність впродовж 8 років. Накопичення біомаси штаму Саврань 160 кліщового енцефаліту здійснюється шляхом пасажування вірусвмісного матеріалу в організмі лабораторних мишей. Виробництво специфічних та високочутливих тест-систем із застосуванням місцевого штаму вірусу кліщового енцефаліту Саврань 160 підвищить якість лабораторної діагностики, здійснення епідеміологічного моніторингу кліщового енцефаліту в Україні та вчасного проведення профілактичних заходів. Приклад. Новонароджених безпородних білих мишей-сисунців заражають інтрацеребрально по 0,02мл вірусовмісної суспензії штаму Саврань 160. Через 3 доби при появі виражених паралічів мишей забивають за правилами евтаназії, стерильно добувають мозок і готують його 10% суспензію, розтираючи мозок у стерильній фарфоровій ступці з додаванням середовища 199. Отриманий гомогенат мозкової тканини центрифугують при 3000об/хв.. 20 хвилин, відбирають рідину над осадом і використовують її для зараження мишей, інфікований мозок котрих використовують для приготування діагностичних препаратів. Таким чином, штам Саврань 160 вірусу кліщового енцефаліту, що циркулює на півдні України і викликає захворювання серед людей, відрізняється від промислово-комерційних аналогів за фізико-хімічними та біологічними показниками, проявляючи при цьому високу антигенну, імуногенну та репродуктивну активність, зберігаючи високий інфекційний титр при довготривалому зберіганні (Табл.1). Таблиця 1 Порівняння біологічних та фізико-хімічних властивостей штамів вірусу кліщового енцефаліту Саврань 160, № 2288 та „Соф'ін" Ознаки, за якими проводилось порівняння Інкубаційний період для мишей-сисунців (в днях) Нейровірулентність при внурішньомозковому введенні (в lg LD 50/0,02мл) Індекс інактивації ефіром Цитопатогенна дія на культурі клітин Vero, CHEB Імуногенність в РЗК Гемаглютинуюча активність Саврань 160 3 № 2288 3-5 „Соф'ін" 3-4 12,50 8,52 8,50 9 тільки в 2-х пасажах 1:32 2,8 3,5 + + 1:37,7 + 1:28,8 + Використання цього штаму для виготовлення діагностичних препаратів дозволить підвищити рівень діагностики та ефективність профілактики і епіднагляду. Використані посилання 1. Арбовирусы и арбовирусные инфекции / Д.К. Львов, СМ. Клименко, С.Я. Гайдамович и др. - М.: Медицина, 1989. - 336 с. 2. Могілевська 3.1., Могілевський Л.Я., Бощенко Ю.А. та ін. До питання з крайової інфекційної патології: кліщовий енцефаліт в Одеській області // Одеський медичний журнал. -2005.-№4. -С. 78-82. 3. Пат. 63096 А Україна, МПК C12N7/00. Штам вірусу кліщового енцефаліту Flavivirus encephlitidem ixodicum № 2288 для виготовлення специфічних імунобіологічних препаратів: Пат. 63096 А Україна, МПК C12N7/00 І.М. Лозинський та ін. (Україна); Львівський НДІ епідеміології та гігієни МОЗ України. -№ 2002119388; Заявл. 26.11.02; Опубл. 15.01.04, Бюл. № 1/2004.