Спосіб препарування гонад самиць перетинчастокрилих ентомофагів

Корисна модель відноситься до сільського господарства, зокрема до галузі фізіології комах і може бути використана для прогнозування рівня життєздатності ентомофагів. Відомо, що стан розвитку статевої системи може слугувати критерієм для визначення віку та статевої зрілості особин. Особливості будови статевої системи (гонад) є найважливішою ознакою для ідентифікації видів, родів та інших систематичних груп і широко використовуються в сучасній систематиці. Крім того, статева система самиць комах, зокрема перетинчастокрилих, є найбільш інформативним органом для оцінки рівня їх життєздатності та потенційної продуктивності [Бей-Биенко Г.Я. Общая энтомология. М., Высшая школа, 1966, с.168]. Відомий спосіб препарування гонад самиць ентомофагів шляхом механічного розтину черевця, з використанням різноманітних пристосувань - голок, скальпелів та ножиць [Тыщенко В.П. Основы физиологии насекомых. Ч. 2. Физиология информационных систем. ЛГУ, Ленинград, 1977, с.218-261]. Проте, зважаючи на незначні лінійні розміри дорослих особин перетинчастокрилих ентомофагів, часто менше 1мм, проводити цю операцію досить важко, а часто і неможливо. Оптичні пристосування не спрощують реалізацію цього способу. Відомий спосіб препарування гонад перетинчастокрилих ентомофагів, який є найбільш близьким технічними рішенням до способу, що пропонується і обраний як найближчий аналог [Лившиц И.З., Митрофанов В.И. Перепончатокрылые паразиты яиц вредителей плодовых. Защита растений, Москва, Агропромиздат, 1986 №9, с.46-47]. Спосіб викладений в найближчому аналозі полягає у тому, що препарування гонад самиць здійснюють шляхом витримування дорослих особин у 40% молочній кислоті, потім підігрівають на спиртівці або у термостаті до температури повного просвічування їх. Далі їх промивають у дистильованій воді і розташовують у краплю рідини Фора-Берлезе, накривають покривним склом. Спосіб дозволяє отримувати гонади самців і розглядати їх під мікроскопом. Проте, відомий спосіб має такі недоліки: невстановлена можливість препарування та оцінки гoнад самиць паразитичних комах; досить висока температура підігріву гонад у 40%-ній молочній кислоті призводить до порушення загальної структури гонад. В основу корисної моделі поставлене завдання експериментально обгрунтувати спосіб препарування гонад самиць найбільш поширених та важливих в господарському відношенні представників перетинчастокрилих ентомофагів, зокрема, видів роду Trichogramma. Ставилось завдання отримати повну картину гонад самиць ентомофагів, зі збереженими структурами та органами, без видимих ознак механічного травмування, не порушуючи при цьому цілісність гонад, для забезпечення наступної оцінки складових частин гонад: гермарію, вітеллярію та оваріол. Поставлене корисною моделлю завдання досягається тим, що у способі препарування гонад самиць перетинчастокрилих ентомофагів, що включає витримування самиць у водних розчинах різноманітних сполук, згідно корисній моделі самиць впродовж 10-12 хвилин витримують у 2,0-3,0%-ному водному розчині льодової оцтової кислоти, вилучають гонади із черевця самиць через генітальний отвір, обробляють їх 3...5%-ним розчином лугу КОН, крім того, після вилучення гонад їх обробляють водним розчином органічного барвника - нейтрального червоного у концентрації 0,001...0,0015%. Суттєві елементи, у складі способу сприяють пом'якшенню твердого хітинового покриву черевця, відокремлення гонад самиць від внутрішніх структур, де кріпляться гонади і, за допомогою тоненької стальної голки препарують та вилучають із черевця назовні у повному складі усіх складових частин гонад, а саме: гермарію - органу, де відбувається мітотичний поділ та диференціація клітин, з яких утворюються ооцити; наступний орган гонад вітеллярію, саме тут ростуть ооцити, дозрівають у яйцевих камерах; ооцити, що дозріли переходять у оваріальну камеру та статеві шляхи, де перетворюються у яйця. Запропонований спосіб дозволяє препарувати гонади, без порушення їх структур, зі збереженням усіх органів. Суть запропонованого способу полягає утому, що шляхом послідовних дій, з використанням суттєвих елементів препаруються (вилучаються) із черевця самиць статеві оргaни - гонади. Хімічні сполуки - складові частини способу, сприяють максимальному пом'якшенню жорстких хітинових структур черевця самиць, відділенню від усіх кріплень гонад і її препаруванню та виділення назовні із черевця самиць без слідів механічних та інших пошкоджень. Приклад. Типова біолабораторія, де вирощують згідно відомих технологій популяції трихограми Trichogramma pintoi Voeg. Експериментальне обґрунтовували спосіб препарування (виділення) із черевця самиць сформованих гонад трихограми. Трихограма, серед усіх паразитичних комах - паразита яєць багатьох лускокрилих шкідливих комах, займає провідне місце у біолабораторіях світу. Аналіз рівня життєздатності самиць здійснюється на основі аналізу картини гонад. Для обгрунтування способу відбирали на менше 75 самиць одного віку. Далі із кожною особиною здійснювали певні прийоми - суттєві елементи способу: витримували самиць впродовж 10... 12 хвилин у водному розчині льодової оцтової кислоти. Потім обробляли комахи 3...5%-ним розчином лугу - КОН. Наступний елемент передбачав видалення гонад із черевця самиць, за допомогою тоненької стальної голки. Використання водного розчину органічного барвника - нейтрального червоного, здійснюється після виділення гонад з черевця самиць. Позитивний результат способу оцінювали шляхом порівняння показників тестового характеру у запропонованому способі та способу-прототипу. Результати обґрунтування способу наведено у таблиці. Таблиця. Експериментальне обгрунтування способу препарування гонад самиць трихограми Способи, що Самиць Кількість Інформативність способів Позитивний ре порівнюються паразитів вдалих Потенційна яєць в у досліді, проб з які- плодючість cтруктура структура оваріолах, екз. сними гені- самиць, гермарію вітеллярію екз. таліями екз. Видалення гонад через генітальний отвір; Використання Характерна оцтової кисБез ознак для виду, лоти; гравмуван75 87,6 52,4 виражена 40,1 Обробка розня, виражеструктура чином КОН 3на структура 5%; оогоніїв Нейтральний червоний 0,001% (спосіб, що пропонуються) Спосіб – найближчий аналог НІР05 75 65,4 41,7 7,3 5,7 Нечітко виражена структура оогоніїв 29,8 Ознаки травмування, порушена функція 5,3 зультат Високий ступінь інформативності способу. Відпрепаровані гонади неушкоджені, збережені усі морфологічні структури. Спосіб використовується для потреб прогнозу Незначна інформативність способу. Порушені морфологічні структури. Значне травмування гонад Встановлено, що ефективність способу, за оцінкою кількості вдалих проб вилучення гонад, значно перевищувала цей показник за найближчим аналогом. Високий рівень інформативності способу, за показниками потенційної плодючості самиць, оцінки структури складових частин гонад - гермарію та вітеллярію. Відпрепаровані згідно запропонованого способу гонади самиць трихограми неушкоджені механічно, зберігають усі морфологічні структури. Таким чином, експериментально обґрунтовано ефективний спосіб препарування гонад самиць перетинчастокрилих паразитичних комах.