Спосіб визначення швидкості індукованого перекисного окислення ліпідів

Спосіб визначення швидкості індукованого перекисного окислення ліпідів на підставі швидко 3 38106 4 перекисного окислення ліпідів, при якому, викоривідбирають 0,5мл проби та вміщують в іншу пробістовуючи продукти перекисного окислення ліпідів, рку з 2,5мл етанолу, після чого реєструють оптичможна було б оцінити активність перекисного окину щільність на спектрофотометрі при f=233нм. слення ліпідів на ранніх етапах розвитку процесу. Концентрацію дієнових кон'югатів розраховують за Дана задача може бути вирішена шляхом вимолярним коефіцієнтом скстинції користання такого продукту перекисного окислен(e=2,2-105 М-1 см -1). ня ліпідів, як дієнові кон'югати. Дієнові кон'югати є Приклад. Піддослідну тварину декапітують. початковими продуктами перекисного окислення Розтинають грудну клітину, швидко витягають селіпідів, які надалі метаболізуються в ТБК-реактивні рце, виділяють міокард лівого шлуночка та негайречовини, наприклад, малоновий диальдегід. но уміщують у рідкий азот. Суть способу заключається в тому, що свіжо 0,5г замороженої в рідкому азоті проби міокарда приготовані 10% гомогенати міокарда лівого шлугомогенізують в охолодженому на льодяній бані ночка, які вміщують 2-4 мг білка, вносять до реакскляному гомогенізаторі Поттера-Ельвегейма з ційної суміші з 0,1М Трис-хлоридного буфера (ph 5мл суміші гептона з ізопропіловим алкоголем 7,4), 0,0008М аскорбіновою кислотою та (1:1). Пробу витримують протягом 15 хвилин при 0,0000012М солі Мора (кінцеві концентрації). Про12°С, періодично перемішуючи. Після цього до неї би інтенсивно струшують та інкубують при +37°С. додають 0,5мл дистильованої води та проводять Через 3, 10, 20, 30, 40 та 60 хвилин експозиції центрифугування при 3000об/хв протягом 15 хвипроводять відбір аліквот реакційної суміші, в яких лин для розподілу фаз. Верхню гептанову фазу далі вимірюють концентрацію дієнових кон'югатів. далі використовують для визначення концентрації В ході перекисного окислення на стадії стводієнових кон'югатів. рення вільних радикалів в молекулах поліненасиЗ цією метою вимірюють оптичну щільність гечених вищи х жирних кислот виникають сполучені птанової фази екстракту міокарда при 233нм на подвійні зв'язки, що супроводжується появою носпектрофотометрі СФ-46. Розрахунок концентрації вого максимуму в спектрі поглинання. проводять з урахуванням величини коефіцієнту Визначення дієнових кон'югатів здійснюють за молярної екстинції, відповідної 2,2-105 М-1 см -1. методикою: до 0,5мл сироватки додають 4,5мл Вміст дієнових кон'югатів виражають у нмоль/г суміші: гептан-ізопропанол (1:1), струшують 10-15 тканини (сира вага). хвилин на струшувальнику. Потім додають 0,5мл дистильованої води, знову стр ушують і після розшарування суміші із верхньої, гептанової фази Комп’ютерна в ерстка А. Крижанівський Підписне Тираж 28 прим. Міністерство осв іт и і науки України Держав ний департамент інтелектуальної в ласності, вул. Урицького, 45, м. Київ , МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислов ої в ласності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601