Спосіб визначення продуктів перекисного окислення ліпідів

Изобретение относится к медицине и биологии, в частности, к биохимии. Известен "Способ определения продуктов перекисного окисления липидов в тромбоцитах" (Гаврилов В.Б., Мишкорудная М.И., 1983, с.68 - 69), заключающийся в том, что набранную кровь с цитратом центрифугируют 15мин. при 1500об/ммн, в осадке остаются эритроциты, плазма содержит тромбоциты. Отобранную плазму переносят в другую пробирку и центрифугируют 30 минут при 3000об/мин. Получают осадок, к 0,2мл которого добавляют 1,5мл изопропил-гептана. Перемешивают осадок палочкой и переливают в гомогенизатор. Оставляют на 15 минут. Затем переливают в полиэтиленовые пробирки, закрывают резиновыми пробками и центрифугируют 10 минут при 4000об. в минуту. Недостаточную жидкость переносят в градуированную пробирку. Добавляют дистиллированной воды в количестве 0,1 от имеющегося объема надосадочной жидкости. Встряхивают жидкость до разделения фаз. Отбирают гептановую фазу. Остается нижняя фаза, к 0,5мл которой добавляют 2,5мл этилового спирта. Контроль ставят со смесью изопропил-гептана - 0,5мл и 2,5мл этилового спирта. Измеряют оптическую плотность раствора на спектрофотометре при длине волны 232нм. Однако данному способу присущи следующие недостатки: во-первых, он травматичный, т.к. забор крови для исследований производится из вены; во-вторых, требует затрат дорогостоящих реактивовантикоагулянтов, спирта и т.д., что снижает возможность его применения в широкой медицинской практике. Кроме того, способ длительный, так как на одно исследование необходимо затратить не менее двух часов. Наиболее близким по технической сущности предложенного является "Способ определения продуктов перекисного окисления липидов в плазме крови" (Гаврилов В.Б., Мишкорудная М.И., 1983), заключающийся в том, что кровь берут из вены натощак с ЭДТА (1мг/кг), встряхивают, добавляют 4мл гептанизопропилового спирта, затем 15 минут центрифугируют, затем добавляют 1мл хлористоводородной кислоты и 2мл гептана. Пробирку встряхивают в течение 15 минут. Через 20 - 30 минут после отстаивания и расслоения отбирают верхний гептановый слой, в котором измеряют оптическую плотность раствора при длине волны 232нм. В качестве контроля берут образец, содержащий вместо плазмы 0,2мл воды. Расчет в относительных единицах умножается на 20. У здоровых людей показатели составляют: 1,59 ± 0,50 единиц. Однако и данному способу присущи следующие недостатки: во-первых, он травматичный, так как забор крови для исследования производится из вены; во-вторых, он длительный, так как на одно исследование необходимо затратить не менее двух часов. В основу изобретений поставлена задача усовершенствования способа определения продуктов перекисного окисления липидов, в котором в качестве биологического материала используют слюну, что позволяет снизить травматичность способа и сократить время проведения исследований, а тем самым увеличить возможность обследования большего количества больных. Способ поясняется следующим образом. Для характеристики липидного обмена по продуктам перекисного окисления липидов берут натощак 1мл слюны. Отбирают 0,2мл слюны и добавляют 4мл гептан-изопропилового спирта (1 : 1), встряхивают 15 минут, затем добавляют 1мл хлористоводородной кислоты, 2мл гептана, пробирку интенсивно встряхивают. Через 20 - 30 минут после отстаивания и расслоения отбирают верхний гептановый слой, в котором измеряют оптическую плотность при длине волны 232нм. В качестве контроля берут образец, содержащий вместо слюны - 0,2мл дистиллированной воды. Расчет производится в относительных единицах экстинции умноженной на 20. У здоровых людей показатели составляют: 1,59 ± 0,50 единиц. По сравнению с прототипом, предложенный способ позволяет устранить травматичность и сократить сроки его проведения до 1,5 часа, а тем самым увеличить возможность обследования большего количества больных.