Спосіб одержання протигрипозного імуноглобуліну людини

Изобретение относится к медицине и может быть использовано для профилактики и лечения эпидемического гриппа. Известен способ получения противогриппозного донорского иммуноглобулина путем иммунизации доноров коммерчески гриппозными вакцинами отечественного производства с последующим отбором иммунной плазмы методом простого либо двойного плазмафереза и фракционирования плазмы [1]. Коммерческая вакцина не позволяет получать высокие уровни антител, требует частой замены вакцинных штаммов в связи с изменчивостью вирусов гриппа. Ежегодное получение новых вакцинных штаммов, необходимо для того, чтобы вакцины антигенно соответствовали вирусам, возникающим в эпидемическом процессе, требует больших затрат, так же, как и повторная иммунизация доноров. В основу изобретения поставлена задача усовершенствовать способ получения противогриппозного иммуноглобулина, позволяющий повысить специфическую активность и расширить спектр его действия. Поставленная задача решается тем, что в способе получения противогриппозного иммуноглобулина человека, включающем иммунизацию доноров гриппозной вакциной с последующим отбором иммунной плазмы методом плазмофореза и фракционирования ее, согласно изобретению, иммунизацию проводят гриппозной вакциной, полученной из штамма-варианта 4/1-А (Хабаровск) 74/77. Для иммунизации используют вакцины из экспериментально полученных, согласно авторскому свидетельству Ms 66101У, вариантов вируса гриппа с повышенной иммуногенной активностью и признаками антигенного опережения. При этом в сыворотках крови доноров повышаются титры и расширяется спектр антигемагглютинирующих и вируснейтрализующих антител, проявляется способность нейтрализовать вирусы "будущих" эпидемий, что способствует повышению качества конечного продукта. Способ осуществляется следующим образом: иммунизацию доноров проводят гриппозной вакциной А (H1N1), производства Ленинградского НИИВС и экспериментальной серией, полученной на Уфимском предприятии по производству бакпрепаратов из штамм-варианта 4/1-A (Хабаровск) 74/77 (Н1N1) (авторское свидетельство № 661.18). Иммунизацию проводят двукратно с интервалом 1 мес. дозы введения те же, что и при иммунизации коммерческой вакциной. Фракционирование плазмы проводят согласно МРТУ 42 14.238-81 на "Иммуноглобулин человеческой противогриппозный". Уровень антител к вирусам гриппа исследуют в сыворотках крови доноров до и после иммунизации гриппозными вакцинами, а также в сериях иммуноглобулинов, полученных после иммунизации доноров гриппозной коммерческой и экспериментальной вакцинами, с помощью реакции торможения гемагглютинации (РТГА) и реакции нейтрализации (РН). Изобретение иллюстрируется следующими примерами. Пример 1. Исследуются сыворотки доноров 2-кратно иммунизированных гриппозной коммерческой и вакциной из варианта 4/1 (Хабаровск) 74/77. Сыворотки крови исследуют до вакцинации, через 1 месяц после I и II вакцинаций. Антитела определяют в РТГА с эталонным штаммов, входящим в состав гриппозной коммерческой вакцины - А (Хабаровск) 74/77 (Н1N1)и экспериментально полученным вариантом 4/1-А (Хабаровск) 74/77 (H1N1). Результаты изучения сывороток крови доноров в РТГА приведены в табл. 1 и 2, Как видно из представленных о табл. 1 данных, 4-кратная сероконверсия при иммунизации экспериментальной серией гриппозной вакцины (вариант 4/I-A (Хабаровск) 74/77) к гомологичному антигену наблюдается в 75% после 1 иммунизации и дополнительно в 25% после второй, т.е. в 100% случаев, При иммунизации гриппозной коммерческой вакциной 4-кратная сероконверсия отмечена только в 50% после 2-х иммунизации. При сопоставлении средней титров ан-тигемагглютининов в сыворотках доноров, вакцинированных коммерческой и экспериментальной вакцинами (табл.2), существенная разница в титра х отмечается уже после I вакцинации к обоим антигенам (р < 0,01; р < 0,001). Пример 2. Из плазмы, взятой у вакцинированных доноров были получены 2 серии иммуноглобулина: 1) серия 703 - из плазмы, взятой у доноров при иммунизации экспериментальной вакциной и 2) серия 1606 - из плазмы доноров, вакцинированных коммерческой вакциной. В табл. 3 и 4 представлены титры антигемагглютининов и вируснейтрэлизующих антител при исследовании этих 2-х серий иммуноглобулина. При постановке РТГА в качестве антигенов используют вирусы, которые входят в состав вакцин - А (Хабаровск) 74/77 и вариант 4/1 (Хабаровск) 74/77, а также диагностический штамм А (Москва) 1023/77 и вирус-родоначальник сероподтипа А (Н1N1) - A/FM 1 /47. Во всех случаях ти тры иммуноглобулинов, полученных при иммунизации доноров экспериментальной вакциной в 2 раза выше, а к штамму A/FM 1/7- в 2,8 раза, чем титры иммуноглобулина, полученного при иммунизации коммерческой вакциной, Реакция нейтрализации ставится с вирусами, входящими в состав вакцин, а также с местным штаммом А (Одесса) 385/88, относящимся к Тайваньской разновидности (Н1N1), выделенным через 11 лет после вируса А (Хабаровск) 74/77. Титры вируснейтрализующи х антител в экспериментальной серии к вирусам Хабаровской разновидности в 2 раза выше, а к более позднему штамму А (Одесса) 385/88 - в 4 раза, что представляет особый интерес, поскольку свидетельствует о возможности получения иммуноглобулина к "новым" вирусам за несколько лет до их выделения от людей. Таким образом, как видно из представленных данных, донорский противогриппозный иммуноглобулин, полученный при иммунизации доноров вакциной, приготовленной из экспериментально селекционированного варианта вируса гриппа 4/1-А (Хабаровск) 74/77 (Н1№1), обладает более высокой специфической активностью, чем иммуноглобулин. полученный при иммунизации коммерческой вакциной, приготовленной из штамма А (Хабаровск) 74/77 (Н1№1). Полезность изобретения заключается в возможности повышения качества противогриппозного донорского иммуноглобулина и более широкого спектра его действия, в том числе против возбудителей будущих эпидемий в пределах пандемического цикла.