Спосіб отримання гаммаглобуліну

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ГАММА-ГЛОБУЛИНА путем выделения его из крови человека, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью повышения специфической активности иммуноглобулина к вирусу гепатита А, целевой продукт получают из сыворотки доноров, переболевших гепатитом А, не содержащий НВе-антиген, при этом забор крови осуществляют через 4-5 мес после выздоровления. с 00 1128913 Изобретение относится к медицине, гепатита А, прпхопил тщательное клиа именно к методам профилактики гепанико-лабораторное обследование для тит?- А. определения его состояния здоровья и Известен способ получения гаммаустановления пригодности его сыворотглобулина путем выделения его из 5 ки для конструирования специфического крови человека П 1 . человеческого иммуноглобулина. Причем Однако этот способ не позволяет сыворотки крови не должны содержать получить достаточно специфический НВ_-антиген (маркер гепатита В ) , а иммуноглобулин к вирусу гепатита А. наличие прямого билирубина должно Целью изобретения является повыше- 10 быть нормальным. ние специфической активности иммуноОстальные биохимические показаглобулина к вирусу гепатита А. тели, при которых функция печени Указанная цель достигается тем, считается восстановленной, не должны что в способе получения гамма-глобупревышать верхней границы нормы: лина путем выделения его из крови 15 содержание сахара в крови не более человека, целевой продукт получают 120 мг£, уровень общего билирубина из сыворотки доноров, переболевших 1,1 мг%, тимоловая проба ~ 2-3 ед, гепатитом А, не содержащий ИВ^-антибета-липопротеидов - 10 ед, активген, при этом забор крови осуществляность аланинтрансферазы - 0,7 мкмоль ют через 4-5 мес. после выздоровле- 20 с учетом нормальных показателей кроння. ви и мочи. Только такого донора сыворотка крови пригодна для полуСпособ выполняется следующим обрачения иммуноглобулина против вируса зом. гепатита А. Гамма-глобулиновая фракция выделяВ полуфабрикате до розлива препается методом Кона из крови специ- 25 рата проверяли: рН - потенциометриально отобранных доноров - лиц, чески, содержание белка - рефрактопереболевших гепатитом А (данное метрически. В готовом препарате сырье ранее не использовалось) и не определяли: физические свойства, имеющих Н В 5 ^антигена по данным высокочувствительных методов (РИА, 30 стерильность, безвредность, пирогенность, наличие белка и НВц-антигена РОПГА). и специфическую активность, которые Гипериммунный человеческий специпроводили общепринятыми методами фический иммуноглобулин с высоким исследования (паспорт на препарат). титром антител против вируса гепаП р и м е р 1. Специфический тита А получен из венозной крови 35 гамма-глобулин с высоким титром антидоноров, ранее переболевших этой тел против вируса гепатита А был получен инфекцией, но не ранее, чем через следующим образом: Больной С , 18лет 180-200 дней с момента клинического находился в инфекционном стационаре проявления болезни. Сыворотка была по поводу гепатита А. Диагноз был свободна от НВл-антигена. Уровень 40 поставлен на основании клинико-эписпецифических антител против вируса демиологических и специфических лагепатита А 1:1 500, определяемых бораторных исследований. Через 5 мес. радиоиммунным методомпосле выписки из стационара у него Япинципиальная схема получения препарата: подбор доноров, переболев-45 была получена кровь в количестве ших гепатитом А, и лабораторное обсле- 250 мл для конструирования специфического гамма-глобуллыа против гедование их на наличие HBg-антигена патита А. Специально проведенные (РОПГА, Р И А ) ; заготовка плазмы крови лабораторные исследования показали, для получения препарата и его производство (метод Кона); контроль физи- 50 что в исходном сырье (плазма крови) отсутствовал поверхностный антиген ко-химических свойств препарата и вируса гепатита Б - НВ^-антиген определение его специфической актив(РОПГА, РИА), а титр антител к вирусу гености; определение реактогенности патита А был равен 1:1 600 (РИА) . и безвредности препарата на добровольцах. 55 Из данной плазмы крови с помощью стандартного метода Кона при низких Каждый донор, у которого провотемпературах была получена гаммадился забор крови для получения высоглобулиновая фракция (2 фракция) коиммунного препарата против вируса З 1128913 4 в количестве 4,5 мл 10%-ного раствоПолученный гамма-глобулин в опытах ра с титром антител против вируса на добровольцах показал себя как гепатита А 1:16 000 (РИА). ареактогенный и безвредный препарат. Аналитический паспорт на гипериммунный человеческий специальный иммуноглобулин против вируса гепатита А: Показатели Физические свойства (прозначность, цвет) Прозрачный, бесцветный Величина рН 7,26 Электрофоретическая чистота 97,8% Стерильность Стерильный Пирогенность Апирогенен Стабильность Стабилен Безвредность Безвреден Токсичность Не токсичен Количество содержание белка 10% Титр специфических антител против вируса гепатита А, определяемых радиоиммунным методом 1:16 000 Наличие НВс-антигена Не содержит Таким образом» полученный вперные По возрасту и полу обе группы были гипериммунньїй человеческий специфиидентичны (мужчины, 18-22 лет). ческий иммуноглобулин против вируса 45 Техника введения гипериммунного гепатита А согласно проведенным человеческого иммуноглобулина и исследованиям отвечает требованиям контрольного препарата была следуюМРТУ-42. щей. Убедившись в том, что полученный иммуноглобулин отвечает требованиям 50 Перед введением препарата каждую МРТУ-42 и свободен от НВ3-антигена, ампулу тщательно просматривали. При изучили впервые его реактогенность наличии трещин, посторонних включеи безвредность на добровольцах согний, неразбивающихся хлопьев, сильласно приказу МЗ СССР I 616 от f ной мутности препарат не применялся. 27 августа 1971 г. (20 человек). 55 Препараты после хранения в холодильКонтролем служили 50 лиц, которым нике в течение 120 мин выдерживались по единой методике был введен компри комнатной температуре. Затем мерческий нормальный гамма-глобулин. ампулы вскрывались, предварительно і П28913 протирали их стерильной ватой, а затем через каждые 20 дней наблюсмоченной спиртом. дения в динамике проводился общий Перед основным опытом предварианализ крови и мочи. Кроме того, тельно у всех прививаемых была изупараллельно проводились биохимические чена чувствительность к вводимому исследования, используемые для опрепрепарату путем введения 0,1 мл деления функционального состояния 1%-ного водного раствора гиперимпечени: активность аланинаминотрансмунного человеческого иммуноглобуферазы, наличие билирубина в сыворотлина против вируса гепатита А внутрике крови и тимоловая проба. В испыкожно в область нижней 1/3 внутренней таниях принимали учагтие только поверхности предплечья. здоровые лица, не имеющие никаких Результаты этих испытаний показапротивопоказаний к применению гиперл и , что у лиц опытной и контрольной иммунного человеческого специфическогруппы через 30 мин наблюдения были го иммуноглобулина против вируса г е обнаружены папулы от 0,5 см без н а л и - ' 5 патита А. чия разлитой гиперемии кожи вокруг В результате проведенных исслеместа введения препарата и повышения дований установлено, что новый претемпературы, что свидетельствовало парат с высоким титром специфических 0 том, что все добровольцы не облаантител (1:16 000) к.вирусу гепатита А 20 не обладает реактогенными свойствами. дали повышенной чувствительностью на введение препарата. Наблюдениями, проведенными в перПосле этих испытаний через 30 мин вые 4 ч после введения данного превнутримышечно в верхний наружный парата, а затем ежедневно на протяквадрант Ягодины с соблюдением строжении 151 дня не выявлено каких-либо жайших мер асептики шприцами патологических явлений у иммунизироодноразового пользования производстванных лиц. ва Ленинградского завода медицинских Безвредность и реактогенность полимеров типа "Рекорд", вводили полученного гипериммуного человеческого специфического иммуноглобу1 мл испытуемого препарата, а лицам 30 лина изучена впервые и документироконтрольной группы - нормальный вана как специфическими лабораторнычеловеческий гамма-глобулин Киевского ми исследованиями на НВе-антиген, предприятия бакпрепаратрв МЗ СССР. так и различными биохимическими тесНа каждого наблюдаемого заводился тами (активность аланинаминотрасфеспециально разработанный "Дневник разы, наличие билирубина в сыворотке наблюдения". Учет реакций среди имму-зз крови, положительная тимоловая проба) низированных и контрольных лиц начиу всех наблюдаемых лиц, нали через 0,5,1,2,3,4 часа, а t затем ежедневно на протяжении 151 дня. Следовательно, полученные резульДанные1 испытаний обобщались путем таты характеризуют отечественный сопоставления результатов клиниче