Мас-спектрометричний спосіб прогнозування ефективності фунгіцидів щодо хвороб картоплі

Mac-спектрометричний спосіб прогнозування ефективності фунгіцидів щодо хвороб картоплі, який відрізняється тим, що для прогнозування ефективності фунгіцидів щодо хвороб картоплі використовується м'якоюнізаційна часо-прольотна плазмено-десорбційна мас-спектрометрія Винахід відноситься до області аналггичної хімії, а конкретніше, до аналггичної біохімії продуктів рослинного походження в аспекті використання новітньої м'якоюнізаційної мас-спектрометричної апаратури для експрес-реєстрацм і ідентифікації зазначених продуктів в модельному середовищі, або в умовах закритого грунту, що значно підвищує вартість одного тестування, При аналізі існуючих технологічних і технічних рішень у даній області техніки не виявлені об'єкти, які володіють сукупністю ознак і рівень технологічності запропонованого способу Це дозволяє стверджувати, що запропонований спосіб є новим і володіє винахідницьким рівнем В основу винаходу поставлено завдання розробити такий спосіб для визначення ефективності фунгіцидів щодо захворювань картоплі, у якому використання модельної системи та ВІДПОВІДНОГО аналггичного приладу для експрес-контролю и складових, дозволило б проводити достовірне прогнозування ефективності зазначених фунгіцидів щодо захворювань картоплі в польових умовах, що значно здешевшує процедуру тестування Поставлена мета досягається тим, що у пропонуємому способі використовується м'якоюнізаційна часо-прольотна плазмено-десорбційна масспектрометрія (біохімічний мас-спектрометр «МСБХ», ВАТ SELMI, Суми, Україна), яка дозволяє з великою чутливістю визначати глікоалкалоїди картоплі та продукти їх деструкції Спосіб полягає в мас-спектрометричному дослідженні впливу окремих фунгіцидів на швидкість деструкції глікоалкалоїдів картоплі під дією власних ферментних систем та ВІДПОВІДНИХ систем збудників захворювань Паростки бульб картоплі (діаметр бульб 4-5 см) отримують, пророщуючи бульби на протязі 3-4 тижнів при 15-18°С, при СВІТЛІ люмінесцентної лампи Модельна система для визначення динаміки деструкції глікоалкалоїдів складається з 500 мг та відстеження їх КІЛЬКІСНИХ І ЯКІСНИХ ЗМІН В часі під впливом чинників навколишнього середовища штучного і природнього походження, зокрема засобів захисту рослин (фунгіцидів) та збудників хвороб картоплі Метою винаходу є розробка інструментального способу для встановлення корелятивних зв'язків прогностичного характеру між ступенем ефективності фунгіцидів щодо хвороб картоплі та напрямками і швидкістю деструкції глікоалкалоїдів картоплі в модельному середовищі інкубації за умов присутності в ньому збудників хвороб ВІДОМІ способи для визначення ефективності фунгіцидів щодо захворювань картоплі пов'язані з дорогими, довготривалими та працевмісткими польовими експериментами [Manzer F Е , Fry W Е , Wemgartner D Р , Rowe R С , Lona R Field Testing Foliar Fungicides for Potato Late Blight Control // Methods for Evaluating Pesticides for Control of Plant Pathogens /Ed by К D Hickey - The American Phytopathological Society, 1986 - P 197-201 Методические рекомендации по проведению исследований с картофелем / Украинский НИИ картофельного хозяйства Киев, 1983 - С 44-50] Зазначеним способам притаманні такі суттєві недоліки тестування фунгіцидів на ефективність щодо захворювань картоплі можна проводити лише протягом вегетаційного сезону, що є малопродуктивним, вш (О 00 ^ со 43486 тканини паростків бульб картоплі гомогенізованої в 5 мл середовища інкубації (0,17% розчині оцтової кислоти (рН 5,4-5,5), доповненої змішаною польовою культурою грибів Phytophthora infestans D В та Fusanum oxysporum spp та 20 мкл 0,02 М водних розчинів/емульсій фунгіцидів та протруювачів За контроль править гомогенізована тканина бульб в стерильному середовищі інкубації без домішок Інкубують модельні системи при 37°С в термостаті, відбираючи зразки (100 мкл) на початку інкубації і в подальшому через 1, 2, 3, 4, 5 та 6 діб Одержані зразки центрифугують, відбирають аліквоти рідкої фази об'ємом 20 мкл, які наносять на позолочений зразконесучий диск приладу "МСБХ" і підсушують в струмені теплого повітря Проводять зйомку мас-спектрів в режимі автоматичного згладжування фонів (КІЛЬКІСТЬ ВІДЛІКІВ 40000-200000, прискорююча напруга +10 кВ) Аналіз одержаних мас-спектрів проводять за допомогою сервісної програми статистичної і математичної обробки спектрів "МСБХ-4", яка входить до комплекту програмного забезпечення приладу "МСБХ" В масспектрах ідентифікують піки квазимолекулярних ІОНІВ (КМІ) типу [М+Н]+, де М - молекулярна маса аналізуємої речовини (глікоалкалоїду) в атомних одиницях маси, а Н - протон Зокрема, а-чаконшу з молекулярною масою 851,0 відповідав пік КМІ з молекулярною масою 852,0 Для кожного зразка проводять потри вимірювання з наступним усеред ненням результатів за допомогою зазначеної сервісної програми Вимірюють інтенсивність ПІКІВ КМІ а-чаконіну та його продукту гідролітичної деструкції р-чаконіну Виходячи із зазначених величин, встановлюють ступінь інгібуючого впливу фунгіциду на інтенсивність гідролітичної ферментативної деструкції глікоалкалоїдів картоплі, яка залежить від хімічної природи фунгіциду та сорту картоплі Доведено, що інтенсивність піку КМІ р-чаконіну за умов введення до середовища інкубації фунгіцидів, безпосередньо корелює зі ступенем їх активності щодо збудників захворювань Найсильніше інгібують гідролітичну деструкцію глікоалкалоїдів найбільш ефективні щодо захворювань картоплі фунгіциди (на основі Нд + і Си2+) - в цьому випадку інтенсивність ПІКІВ КМІ а-чаконіну в зразку не відрізняється від контрольних значень, а пік КМІ, що відповідає р-чаконіну, не зареєстрований Фунгіциди, які є неактивними щодо збудників захворювань, достовірно не впливають на швидкість гідролітичної деструкції глікоалкалоїдів Запропонований спосіб для визначення активності фунгіцидів щодо збудників захворювань картоплі в модельних умовах за допомогою м'якоюнізаційної часо-прольотної плазмено-десорбційної мас-спектрометри значно здешевшує процедуру тестування фунгіцидної активності зазначених сполук в порівнянні з класичними польовими методами Тираж 50 екз Відкрите акціонерне товариство «Патент» Україна, 88000, м Ужгород, вул Гагаріна, 101 (03122) 3 - 7 2 - 8 9 (03122) 2 - 5 7 - 0 3