Спосіб виявлення цитотоксичних лімфоцитів в гістологічних препаратах

Спосіб виявлення цитотоксичних лімфоцитів в гістологічних препаратах шляхом підготовки гістологічних препаратів, блокування ендогенної пероксидази, виявлення комплексу рецептор-ліганд, виявлення пероксидази хрону діамінбензидином, дегідратації, заключення препарату і мікроскопії, який відрізняється тим, що виявлення комплексу рецептор-ліганд проводять кон'югацією лектину з пероксидазою хрону з використанням лектину Vicia sativa (Віка посівна). (19) (21) u200904890 (22) 18.05.2009 (24) 12.10.2009 (46) 12.10.2009, Бюл.№ 19, 2009 р. (72) ВОЛОШИН МИКОЛА АНАТОЛІЙОВИЧ, КУЩ ОКСАНА ГЕОРГІЇВНА (73) ЗАПОРІЗЬКИЙ ДЕРЖАВНИЙ МЕДИЧНИЙ УНІВЕРСИТЕТ, ВОЛОШИН МИКОЛА АНАТОЛІЙОВИЧ, КУЩ ОКСАНА ГЕОРГІЇВНА 3 44725 4 Причинно-наслідковий зв'язок між сукупністю логічних препаратах і більш досконало вивчати ознак, що заявляються, та технічним результатом будову лімфоїдної тканини. полягає у такому. Спосіб здійснюють таким чином. Як ми доводимо, достовірність методу підтвеДля лектингістохімічного дослідження тканину рджується внаслідок застосування комбінованого фіксують в розчині Буєна. Шматочки зневоднюють (імуногістохімічного і лектингістохімічного методів в висхідній батареї спиртів, починаючи з 40%. по виявленню єдиного рецептору на поверхні циОтримують парафінові зрізи товщиною 5мкм. Гітоплазматичної мембрани цитотоксичних лімфостохімічне визначення рецепторів до лектину Vicia цитів з використанням різних систем візуалізації. sativa проводять з використанням прямої реакції з Візуалізація результатів комбінованої реакції відкон'югатом - лектин і пероксидаза хрону. Рецептобувається по приєднанню бензидина до кон'югату ри до лектину виявляють по відкладенню часточок свідин-біотин-перксидазний комплекс і метилового бензидину на поверхні цитоплазматичної мембразеленого до кон'югату лектину з пероксидазою). ни клітин. Морфометричний підрахунок клітин, які Перехрещення відкладень бензидинових часточок, мають на своїй поверхні бензидинову мітку, кон'ющо вказують на наявність СД8+-рецептрів і метиговану з лектином Vicia sativa, проводять за дополензеленових часточок, що вказують на наявність могою окулярної сітки при імерсійному збільшенні рецепторів до лектину Vicia sativa на поверхні цимікроскопу. топлазматичної мембрани цитотоксичних лімфоПриклад. Після фіксації шматочків децидуальцитів підтверджує складну за хімічним складом ної тканини матки в рідині Буєна, їх зневоднюють у структуру рецепторного апарату цих клітин, але висхідній батареї спиртів, отримують парафінові об'єднуючу функцію білкового і вуглеводного комзрізи товщиною 5мкм та виготовляють гістологічні поненту єдиного рецептору цитотоксичних лімфопрепарати. Лектингістохімічне визначення рецепцитів. торів до лектину Vicia sativa проводять з викорисПостановка лектингістохімічної реакції з лектанням прямої реакції з кон'югатом лектина Vicia тином Vicia sativa для виявлення цитотоксичних sativa і пероксидази хрону. Рецептори до лектину лімфоцитів в гістологічних препаратах дозволить виявляють по відкладанню часточок бензидину на зменшити помилки при підрахунку цих клітин в поверхні цитоплазматичної мембрани. Вуглеводні гістологічних препаратах, тому що лектин Vicia залишки, які є рецепторами до лектину Vicia sativa sativa є більш високоспецифічним маркером для і є перехресно реагуючими з моноклональними рецепторів цитотоксичних лімфоцитів, так як виантитілами до CD8+-рецепторів цитотоксичних являються білкові і олігосахаридні залишки антилімфоцитів, розташовані на цитоплазматичній генних детермінант, на відмінну виявлення лише мембрані цитотоксичних лімфоцитів децидуальної білкових детермінант, які виявляються імуногістотканини матки. Цитотоксичні лімфоцити діаметром хімічним методом по виявленню СД8+-рецепторів 8-9мкм (малого діаметру) і лімфоцити 9-12мкм на поверхні цитоплазматичної мембрани цитоток(середнього діаметру) локалізуються переважно в сичних лімфоцитів. спонгіозному шарі децидуальної тканини матки, Запропонований спосіб дозволяє високоспенавколо мезометральних залоз і судин. На цитоцифічно диференціювати цитотоксичні лімфоцити плазматичній мембрані клітин колір часточок бенв гістологічних препаратах. зидину від світло-коричневого до чорного, що вкаТаким чином, сукупність вищезазначених позує на щільність рецепторів. Інтенсивність зитивних моментів дозволить підвищити ефективбензидинових відкладень на поверхні цитоплазманість виявлення цитотоксичних лімфоцитів в гістотичної мембрани вказує на функціональний стан цитотоксичних лімфоцитів. Комп’ютерна верстка В. Мацело Підписне Тираж 28 прим. Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601