Спосіб поверхневої обробки виробів з чавуну

Даний винахід стосується нових похідних ехінокандинів, способу їх одержання і їх застосування в якості протигрибкових засобів.

Більш конкретно, об'єктом винаходу є сполука формули (І):

у всіх можливих ізомерних формах, а також у вигляді їх сумішей, в якій:

або R1 і R2, однакові або відмінні один від іншого, означають атом водню, гідроксил; лінійний, розгалужений або циклічний алкільний, алкенільний або алкінільний радикал, що містить до 8 атомів вуглецю, що можливо переривається атомом кисню, можливо заміщений атомом галогену, гідроксилом, радикалом

де

а і b, однакові або відмінні один від іншого, означають атом водню або алкільний, алкенільний або алкінільний радикал, що містить до 8 атомів вуглецю, причому а і b можуть разом з атомом азоту утворювати гетероцикл, що можливо включає один або декілька додаткових гетероатомів;

aбo R1 з ендоциклічним атомом вуглецю, несучим радикал,

утворює подвійний зв'язок і або R2 означає радикал XRa,

Де

X означає атом кисню або радикал NH або N-алкіл, алкеніл або алкініл, що містить до 8 атомів вуглецю; і

Ra означає атом водню; лінійний, розгалужений або циклічний алкільний, алкенільний або алкінільний радикал, що містить до 8 атомів вуглецю, можливо заміщений одним або декількома атомами галогену, одним або декількома радикалами ОН,

СО2Н, СО2алк, радикалом,

де

а' і b’ означають атом водню, алкільний, алкенільний або алкінільний радикал, що містить до 8 атомів вуглецю, причому а’ і b' можуть утворювати гетероцикл, який може включати один або декілька додаткових гетероатомів;

і/або гетероциклом, що включає один або декілька гетероатомов;

або R2 означає радикал

в якому

d, e, f i g означають атом водню або алкільний, алкенільний або алкінільний радикал, що містить до 8 атомів вуглецю, причому f і g, крім того, можуть означати ацильний радикал, що містить до 8 атомів вуглецю; e і f також можуть утворювати цикл, який може включати один або декілька гетероатомів;

R3 означає атом водню, метил або гідроксил;

R4 означає атом водню або гідроксил;

R означає лінійний, розгалужений або циклічний ланцюг, що містить до 30 атомів вуглецю, що можливо включає один або декілька гетероатомів, один або декілька гетероциклів; або лінійний, розгалужений або циклічний ацильний радикал, що містить до 30 атомів вуглецю, що можливо включає один або декілька гетероатомів і/або один, або декілька гетероциклів;

Τ означає атом водню, метил, радикал CH2CONH2, CH2CºN, радикал (CH2)2NH2 або (CH2)2Naлк+X-, причому X означає атом галогену і алк означає алкільний, алкенільний або алкінільний радикал, що містить до 8 атомів вуглецю;

Υ означає атом водню, гідроксил або атом галогену, або радикал OSO3H, або одну з солей цього радикала;

W означає атом водню або радикал ОН;

Ζ означає атом водню або метил; а також солі приєднання кислот сполук формули (І).

З солей приєднання кислот можна назвати солі, що утворюються з неорганічними кислотами, такими як соляна, бромоводнева, сірчана або фосфорна кислоти; або з органічними кислотами, такими як мурашина, оцтова, трифтороцтова, пропіонова, бензойна, малеїнова, фумарова, бурштинова, винна, лимонна, щавлева, гліоксилова, аспарагінова кислоти, алкансульфокислоти, такі як метан- або етансульфокислоти, арилсульфокислоти, такі як бензол- або п-толуолсульфокислоти.

У визначенні заступників:

- алкільний., алкенільний або алкінільний радикал являє собою переважно метил, етил, пропіл, ізопропіл, н-бутил, ізобутил, трет-бутил, децил або додецил, вініл, аліл, етиніл, пропініл, циклобутил, циклопентил або циклогексил;

- галогеном є переважно фтор або хлор, або бром;

- арильний радикал являє собою переважно феніл;

- гетероциклічний радикал являє собою переважно піроліл, піролідиніл, піридил, піразиніл, піримідил, піперидиніл, піперазиніл, хинуклідиніл, оксазоліл, ізоксазоліл, морфолініл, індоліл, імідазоліл, бензімідазоліл, тріазоліл, тіазоліл, азетидиніл, азиридиніл.

В якості солі радикала SO3H можна назвати солі натрію, калію або солі амінів.

З переважних сполук відповідно до винаходу можна особливо назвати:

сполуки формули (І), в яких Τ означає атом водню;

сполуки формули (І), в яких Υ означає атом водню;

сполуки формули (І), в яких W означає атом водню;

сполуки формули (І), в яких Ζ означає метил;

сполуки формули (І), в яких R3 означає метил;

сполуки формули (І), в яких R4 означає гідроксил;

сполуки формули (І), в яких R означає радикал:

і особливо такі, в яких R означає ланцюг:

або такі, в яких R означає ланцюг:

- сполуки формули (І), в яких R1 разом із ендоциклічним атомом вуглецю, що несе радикал NR1R2, утворить подвійний зв'язок, і особливо такі, в яких R2 означає радикал

O(CH2)nNY'2,

в якому n означає ціле число від, 1 до 8, і особливо такі, в яких η означає число 2, і Υ’ означає атом водню або алкільний радикал, що містить до 8 атомів вуглецю, і такі, в яких R2 означає радикал

Об'єктом, винаходу також є сполуки формули (І), в яких R2 означає радикал

(CH2)pNY",

в якому Y'" означає атом водню або алкільний радикал, що містить до 8 атомів вуглецю, і p означає ціле число, що змінюється від 1 до 8, і особливо сполуки, в яких p означає число 2.

Особливо об'єктом винаходу є сполуки, в яких R1 означає атом водню.

З переважних сполук відповідно до винаходу можна назвати продукти прикладів 8, 9, 11, 13 і 14.

Сполуки формули (І) володіють цінними протигрибковими властивостями; вони особливо активні стосовно Candida albicans і інших Candida, таких як Candida glabrata, krusei, tropicalis, pseudotropicalis, parapsilosis і Aspergillus fumigatus, Aspergillus flavus, Cryptococcus neoformans.

Сполуки формули (І) можуть бути використані в якості лікарських засобів як для людини, так і для тварини в боротьбі, зокрема, із стравоварильними, сечовими, піхвовими або шкірними кандидозами, криптококозами, наприклад, із нейроменінгеальними, легеневими або шкірними криптококозами, бронхіальним і легеневим аспергільозом і інвазивними іммунодепресійними аспергільозами.

Сполуки відповідно до винаходу також можуть бути використані для профілактики мікотичних поразок у суб'єктів з уродженим або надбаним ослабленим імунітетом.

Сполуки відповідно до винаходу не обмежені застосуванням у фармацевтиці, їх також можна використовувати в якості фунгіцидів в інших областях, ніж фармацевтичні.

Отже, об'єктом винаходу є сполуки формули (І), а також їхні солі приєднання кислот, в якості протигрибкових сполук.

Об'єктом винаходу також є сполуки формули (І) в якості лікарських засобів.

Об'єктом винаходу є фармацевтичні композиції, що включають в якості чинного початку принаймні одну сполуку формули (І) або одну з її солей приєднання фармацевтично прийнятних кислот.

Ці композиції можна вводити перорально, ректально, парентерально або локально шляхом місцевого нанесення на шкіру і слизуваті оболонки, але переважним шляхом введення є пероральний.

Вони можуть бути твердими або рідкими і знаходитися у фармацевтичних формах, звичайновикористовуваних у медицині людини, як, наприклад, прості або дражовані таблетки, желатинові капсули, гранули, супозиторії, препарати для ін'єкцій, мазі, креми, гелі; їх одержують звичайними засобами. Чинний початок або чинні початки можуть бути включені туди ексципієнтами, звичайно використовуваними в цих фармацевтичних композиціях, такими як тальк, гуміарабік, лактоза, крохмаль, стеарат магнію, масло какао, водяні або ні розчинники, жири тваринного або рослинного походження, парафінові похідні, гліколі, різноманітні зволожувачі, диспергатори або емульгатори, консерванти.

Ці композиції також можуть знаходитися у формі порошку, призначеного для розчинення в момент вжитку у відповідному розчиннику, наприклад, у стерильній апірогенній воді.

Доза, що вводиться, змінюється в залежності відхворобливого стана, який потрібно лікувати, конкретного суб'єкта, шляху введення і конкретної сполуки. Вона може складати, наприклад, від 50мг до 300мг на день при введенні перорально дорослому для продуктів прикладів 8, 9, 11, 13 і 14.

Об'єктом винаходу також є засіб одержання сполук формули (І), що полягає в тому, що сполуки формули (II):

в якої R, R3, R4, Τ, W, Υ і Ζ мають вищевказані значення, піддають впливу аміну або похідного аміну, спроможного вводити радикал

в якому R1 і R2 мають вищевказані значення, і, при бажанні, впливу відновлювача, і/або агента функціоналізації аміну, і/або кислоти для утворення солі отриманого продукту, і/або агента для поділу різноманітних отриманих ізомерів, і в такий спосіб отримують цільову сполуку формули (І):

в якої R1, R2, Τ, W, Υ, R і Ζ мають вищевказані значення, у всіх її можливих ізомерних формах, а також у виді їхніх сумішей, і/або у формі солей із кислотами.

Використовувані в якості вихідних сполук у способі відповідно до винаходу сполуки формули (II) являють собою нові продукти і самі по собі є об'єктом даного винаходу; їхнє одержання, зазначене в експериментальній частині, може бути схематично подане в такий спосіб:

Можна використовувати ISi-(CH3)3 або будь-яку іншу кислоту Л'юїса.

В експериментальній частині приведений докладний приклад одержання сполуки формули (II), і особливо нової хімічної сполуки 1-[4-оксо-N2-(12-метил-1-оксотетрадецил)-L-орнітин]-4-[4-(4-гідроксифеніл)-L-треонін]-5-L-серин-ехіно-кандину В.

Сполука формули (IV), що відповідає вихідній сполуці препаративного прикладу 1, являє собою відомий продукт, описаний і заявлений у європейському патенті 438813.

Наступні приклади ілюструють винахід, проте, не обмежують його обсягу.

Об'єктом винаходу є також спосіб одержання, який полягає в тому, що сполуки формули (III):

в якої різноманітні заступники мають вищевказані значення, піддають впливу агента, спроможного заміняти NH2 на NHR, де R має вищевказане значення, для одержання сполуки формули (IV):

в якої різноманітні заступники мають вищевказані значення, що піддають впливу триметилсилілйодиду для одержання сполуки формули (II).

Сполуки формули, (III), використовувані в якості вихідного продукту, являють собою нові сполуки і самі по собі є об'єктом даного винаходу. Приклад одержання сполуки формули (III) приводиться нижче в експериментальній частині.

Особливо об'єктом винаходу є «ядро» дезоксимулундокандину, сполука формули (III), одержання якої вказується нижче в експериментальній частині.

Сполуки формули (IV), вказані вище, за винятком мулундокандину і дезоксимулундокандину, являють собою нові сполуки і самі по собі є об'єктом даного винаходу.

Особливо об'єктом винаходу є сполуки формули (IV), одержання яких вказується нижче в експериментальній частині.

Ці нижченаведені приклади ілюструють винахід, проте, не обмежують його обсягу.

Препаративний приклад 1

1-[N2-(12-Метил-1-оксотетрадецил)-4-оксо-L-орнітин]-4-[4-(4-гідроксифеніл)-L-треонін]-5-L-серин-ехінокандин В

При перемішуванні за допомогою магнітної мішалки й в атмосфері азоту, у 25мл ацетонітрилу вводять 1г 1-[(4R,5R)-4,5-дигідрокси-N2-(12-метил-1-оксотетрадецил)-L-орнітин]-4-[4-(4-гідроксифеніл)-L-треонін]-5-L-серин-ехінокандину В. Додають 455мкл триметилсилілйодиду. Нагрівають при температурі 55°С протягом 40хв. Гідролізують за допомогою 3%-ого розчину тіосульфату натрію. Після перемішування протягом 10хвилин доводять до сухого стана при зниженому тиску й очищають шляхом хроматографії на діоксиді кремнію. Одержують 62% цільового продукту.

ТСХ: Rf=0,25 (елюент: СН2Сl2-СН3ОН-Н2О=86-13-1).

Приклад 1

1-[4-Аміно-N2-(12-метил-1-оксотетрадецил)-L-орнітин]-4-[4-(4-гідроксифеніл)-L-треонін]-5-серин-ехінокандин В-трифторацетат (ізомер В)

Вводять 50мг отриманого в препаративному прикладі 1 продукту в 2,5мл метанолу в присутності активованого силіпориту 4Å. При температурі 20°С добавляють 158мг ацетату амонію. Отриманий розчин нагрівають до температури 50°С і добавляють 5,5мг NaBH3CN. Перемішують протягом 3 годин 15хв. Добавляють 1мл демінералізованої води і розчин концентрують до суху. Одержують 166мг продукту, що очищають шляхом ВЕРХ (С18), елююючи сумішшю CH3CN-H2O-ТФУ (50-50-0,02). Одержують 17мг цільового продукту.

МН+=975.

Приклад 2

1-[4-[[2-Диметиламіноетиламіно-N2-(12-метил-1-оксотетрадецил)-L-орнітин]-4-[4-(4-гідроксифеніл)-L-треонін]-5-L-серин-ехінокандин В-трифторацетат (ізомери А і В)

При температурі 20°С 80мг отриманого в препаративному прикладі 1 продукту вводять у розчин, що містить 1мл метанолу, 160мкл 2-диметиламіноетиламіну, 8мл 1Μ розчину хлороводню в метанолі, в присутності силіпориту 4Å. Вводять 35мг цианоборгідриду натрію і перемішують протягом 20 годин при температурі 20°С. Відфільтровують, промивають метанолом і концентрують до суху. Одержують 325мг продукту, що очищають шляхом ВЕРХ (С18) (елюент: CH3CN-H2O-TФУ=45-55-0,02, потім CH3CN-H2О-TФУ=42-58-0,02). Одержують 8,1мг ізомера А цільового продукту і 9,4мг ізомера В цільового продукту.

Мас-спектр: МН+=1046; MNa+=1068.

Приклад 3

1-[4-[(3-Амінопропіл)аміно]-N2-(12-метил-1-оксотетрадецил)-L-орнітин]-4-[4-(4-гідроксифеніл)-L-треонін]-5-L-серин-ехінокандин-В-трифторацетат (ізомери А и В)

При температурі 0°С 30см3 1Μ розчину хлороводню в метанолі добавляють у розчин, що містить 200мг отриманого в препаративному прикладі 1 продукту, 2мл метанолу і 300мкл діамінопропану. Перемішують протягом 15хвилин при температурі 0°С і добавляють 84мг 95%-ого цианоборгідриду натрію. Перемішують протягом 6 годин при кімнатній температурі і доводять до сухого стана при зниженому тиску. Отриманий залишок опрацьовують ацетонітрилом, відфільтровують у вакуумі і сушать при зниженому тиску. Одержують 312мг продукту, що очищають шляхом ВЕРХ (С18) (елюент: СН3СН-Н2О-ТФУ=45-55-0,02) і одержують 15мг ізомера А и 10мг ізомера В.

Мас-спектр: МН+=1032.

Приклад 4

(Z+Е)-1-[4-[(4,5-Дигідро-1H-імідазол-2-ил)гідразоно]-N2-(12-метил-1-оксотетрадецил)-L-орнітин]-4-[4-(4-гідроксифеніл)-L-треонін]-5-L-серин-ехінокандин В-трифторацетат

Протягом двох годин при перемішуванні кип'ятять із зворотним холодильником 350мг отриманого в препаративному прикладі 1 продукту, 12мл метанолу і 130мг 2-гідразино-2-імідазолінгідроброміду. Після випарювання до суху одержують 510мг продукту, що очищають шляхом хроматографії на диоксиді кремнію, елююючи сумішшю СН3Сl2-СН3ОН-Н2О (86-13-1), потім за допомогою напівпрепаративної ВЕРХ (С18), елююючи сумішшю ΟΗ3ΟΝ-Η2O-ΤΦΥ (55-45-0,02). У такий спосіб одержують 133мг цільового продукту.

Мас-спектр: МН+=1056; MNa+=1078.

Приклад 5

(Z)-1-[4-[(2-Гідроксиетокси)іміно]-N2-(12-метил-1-оксотетрадецил)-L-орнітин]-4-[4-(4-гідроксифеніл)-L-треонін]-5-L-серин-ехінокандин В і відповідний ізомер Е.

Протягом 4 годин кип'ятять із зворотним холодильником суміш 36мг О-(2-гідроксиетил)гідроксиламіну, 5мл етанолу, 12мкл піридину, 4мкл чистої оцтової кислоти і 150мг отриманого в препаративному прикладі 1 продукту. Одержують 205мг продукту, що очищають шляхом хроматографії на диоксиді кремнію, елююючи сумішшю дихлорметан-метанол-вода (86-13-1). Виділяють 2 продукти з Rf=0,2 і 0,25 (ізомер Ζ і ізомер Е).

Мас-спектр: МН+=1033; MNa+=1055.

Приклад 6

(Е)-1-[4-(Гідроксиіміно)-N2-(12-метил-1-оксотетрадецил)-L-орнітин]-4-[4-(4-гідроксифеніл)-L-треонін]-5-L-серин-ехінокандин В і відповідний ізомер Ζ

Протягом 1 години при перемішуванні кип'ятять із зворотним холодильником суміш, що містить 200мг отриманого в препаративному прикладі 1 продукту, 8мл етанолу, 36мг гідроксиламінгідрохлориду. Доводять до сухого стана й очищають шляхом ВЕРХ (С18) (елюент: CH3CN-H2O=60-40). Одержують 72мг ізомера Ζ і 60мг ізомера Е.

Мас-спектр: МН+=989; MNa+=1011.

Приклад 7

1-[4-(Гідроксиаміно)-N2-(12-метил-1-оксотетрадецил)-L-орнітин]-4-[4-(4-гідроксифеніл)-L-треонін]-5-L-серин-ехінокандин В-трифторацетат (ізомер А і ізомер В)

Протягом трьох годин перемішують 70мг суміші оксимів E+Z, отриманої в попередньому прикладі, 1см3 трифтороцтової кислоти, 12мг 95%-ого цианоборгідриду натрію. Доводять до сухого стана при зниженому тиску. Очищають шляхом ВЕРХ (С18). Одержують цільові продукти.

Мас-спектр: МН+=991; MNa+=1013.

Приклад 8

(Z)-1-[(S)-N2-(12-Метил-1-оксотетрадецил)-4-[[(3-піперидиніл)окси]іміно]-L-орнітин]-4-[4-(4-гідроксифеніл)-L-треонін]-5-L-серин-ехінокандин В-гідрохлорид

Стадія А

Добавляють 146мг отриманого в препаративному прикладі 1 продукту і 60мкл оцтової кислоти в розчин, що містить 45мг фенілметилового ефіру R-3-(аміноокси)-1-піперидинкарбонової кислоти і 2мл метанолу. Перемішують протягом двох годин при кімнатній температурі. Концентрують, очищають шляхом хроматографії на диоксиді кремнію, елююючи сумішшю дихлорметан-метанол=98-2. У такий спосіб одержують цільовий продукт.

Мас-спектр: МН+=1206; MNa+=1228.

Стадія В

Витримують в атмосфері водню і при інтенсивному перемішуванні протягом 5 годин суміш, що включає 61мг отриманого на стадії А продукту, 20мг паладію-на-вугіллі і 1мл оцтової кислоти. Відфільтровують і концентрують. Одержують 65% цільового продукту.

Мас-спектр: МН+=1072.

Приклад 9

1-[4-[(2-Аміноетил)аміно]-N2-(12-метил-1-оксотетрадецил)-L-орнітин]-4-[4-(4-гідроксифеніл)-L-треонін]-5-L-серин-ехінокандин В-трифторацетат (ізомер А і ізомер В)

До розчину 300мг отриманого в препаративному прикладі 1 продукту в 6мл метанолу при 375мкл етилендиаміну добавляють 63мл 1Μ розчину хлороводню в метанолі. Після перемішування протягом 15хвилин добавляють 126мг цианоборгідриду натрію (NaBH3CN). Реакційне середовище перемішують протягом 5 годин. Відфільтровують і доводять до сухого стана, причому продукти очищають шляхом ВЕРХ (С18), елююючи сумішшю CH3CN-H2O-TФУ (40-60-0,02). У такий спосіб одержують цільові продукти.

Мас-спектр: МН+=1018; MNa+=1040.

Приклад 10

(Е)-1-[4-[(2-Брометокси)іміно]-N2-(12-метил-1-оксотетрадецил)-L-орнітин]-4-[4-(4-гідроксифеніл)-L-треонін]-5-L-серин-ехінокандин В і відповідний ізомер Z.

Добавляють 402мг 2-брометоксиамінгідроброміду в розчин, що містить 710мг отриманого в препаративному прикладі 1 продукту і 28мл абсолютного етанолу. Суміш кип'ятять із зворотним холодильником протягом 55хв. Концентрують при зниженому тиску. Отриманий продукт очищають шляхом флеш-хроматографії на диоксиді кремнію, елююючи сумішшю дихлорметан-метанол (9-1). Одержують цільові продукти: ізомер A: Rf=0,54; ізомер В: Rf=0,47.

Мас-спектр: МН+=1095; MNa+=117

Приклад 11

(±)-1-[4-[(Аміноімінометил)гідразоно]-N2-(12-метил-1-оксотетрадецил)-L-орнітин]-4-[4-(4-гідроксифеніл)-L-треонін]-5-L-серин-ехінокандин В-трифторацетат.

Добавляють 162мг аміногуанідингідрохлориду в розчин, що містить 260мг отриманого в препаративному прикладі 1 продукту і 10мл н-бутанолу. Реакційне середовище кип'ятять з зворотним холодильником протягом 2 годин 30хв. Концентрують при зниженому тиску. Отриманий продукт очищають шляхом напівпрепаративної ВЕРХ. Одержують 225мг продукту у вигляді суміші ізомерів 50/50.

Мас-спектр: МН+=1030; MNa+=1052.

Приклад 12

(Z)-1-[4-[[-2-(Диметиламіно)етоксиіміно]-N2-(12-метил-1-оксотетрадецил)-L-орнітин]-4-[4-(4-гідроксифеніл)-L-треонін]-5-L-серин-ехінокандин В-трифторацетаті відповідний ізомер Ε

Вводять 80,5мг продукту прикладу 10 у 32мл етанольного розчину диметиламіну. Реакційну суміш кип'ятять з зворотним холодильником протягом 45хв. Концентрують. Отриманий продукт очищають шляхом ВЕРХ (С18) (CH3CN-Н2О-ТФУ=60-40-0,02). У такий спосіб одержують цільові продукти.

Мас-спектр: МН+=1060.

Приклад 13

(Е)-1-[4-[(2-Аміноетокси)іміно]-N2-(12-метил-1-оксотетрадецил)-L-орнітин]-4-[4-(4-гідроксифеніл)-L-треонін]-5-L-серин-ехинокаидин В-трифторацетаті відповідний ізомер Ζ.

Вводять 50мг продукту прикладу 10 в аміак. Перемішують під тиском протягом 16 годин при поверненні температури до кімнатної. Реакційне середовище опрацьовують сумішшю CH3CN-H2O (45-55) для очищення за допомогою ВЕРХ (С18). Одержують цільові продукти.

Мас-спектр: МН+=1032.

Препаративний приклад 2

«Ядро» дезоксимулундокандину

Розчиняють 2p дезоксимулундокандину в 20мл диметилсульфоксиду. Цей розчин виливають у суспензію, що містить 120p Actinoplanes utahensis FH2264 у 870мл буфера КН2РО4, К2НРО4 (рН=6,8). Реакційну суміш перемішують протягом 70 годин при температурі 30°С. Відфільтровують. Міцелій промивають фосфатним буфером (рН=6,8) Промивні рідини і фільтрат об'єднують. Отриманий продукт хроматографують на смолі DIAION HP 20 і одержують продукт, що використовують далі таким, який є.

Приклад 14

1-[4-[(2-Аміноетил)аміно]-N2-[[4'-(октилокси)-[1,1'-біфеніл]-4-ил]карбоніл]-L-орнітин]-4-[4-(4-гідроксифеніл)-L-треонін]-5-1]-серин-ехінокандин В-трифторацетат (ізомер А)

Стадія А

1-[(4R,5R)-4,5-Дигідрокси-N2-[[4'-(октилокси)-[1,1'-бифеніл]-4-ил]карботл]-L-орнітин]-4-[4-(4-гідроксифеніл)-L-треонін]-5-L-серин-ехінокандин В.

1 - Одержання складного ефіру

До 1г 4'-октилокси-[1,1’-бифеніл]-4-карбонової кислоти в 22мл тетрагідрофурану добавляють 632г 2,3,4,5,6-пентафторфенолу в 695мг Ν,Ν'-дициклогексилкарбодиіміду, перемішують протягом 22 годин при кімнатній температурі, відфільтровують, видаляють розчинники при зниженому тиску, залишок опрацьовують діетиловим ефіром, перемішують при температурі приблизно 35°С, відфільтровують, розчинник випарюють, сушать і виділяють 1,46г цільового продукту, використовуваного таким, який є.

2 - Сполучення

У 16мл диметилформаміду вводять 677мг "ядра" дезоксимулундокандину, отриманого в препаративному прикладі 2. Отриманий розчин перемішують протягом 5хвилин і добавляють 793мг отриманого вище пентафторфенілового ефіру 4’-(октилокси)-[1,1'-бифеніл]-4-карбонової кислоти.

Реакційну суміш витримують при перемішуванні й в атмосфері азоту протягом 24 годин. Відфільтровують і концентрують. Залишок опрацьовують діетиловим ефіром, порошкують, перемішують протягом 25хв, відфільтровують у вакуумі, промивають діетиловим ефіром, хроматографують на диоксиді кремнію, елююючи сумішшю дихлорметан-метанол-вода (86/13/1), потім (80/20/1). У такий спосіб одержують цільовий продукт. Вихід складає 73%.

Стадія В

1-[N2-[[4'-(Октилокси)-[1,1’-бифеніл]-4-ил]карбоніл]-4-оксо-L-орнітин]-4-[4-(4-гідроксифеніл)-1-треонін]-5-L-серин-ехінокандин В.

Добавляють 311мкл триметилсилілйодиду в суспензію, що містить 809мг продукту стадії А и 19мл ацетонітрилу. Реакційну суміш перемішують протягом 15 хвилин при температурі 60°С і в атмосфері азоту. Суміш виливають у насичений розчин тіосульфату натрію. Випарюють і отриманий залишок хроматографують на диоксиді кремнію, елююючи сумішшю дихлорметан-метанол-вода=86/13/1. Одержують цільовий продукт. Вихід складає 55%.

Стадія С

1-[4-[(2-Аміноетил)аміно]-N2-[[4'-(октилокси)-[1,1'-бифеніл]-4-ил]карбоніл]-L-орнітин]-4-[4-(4-гідроксифеніл)-L-треонін]-5-L-серин-ехинокандин В-трифторацетат (ізомер А)

У розчин, що містить 900мг отриманого на попередній стадії продукту, 16мл метанолу і 250мкл етилендіаміну, добавляють 560мкл оцтової кислоти. Перемішують протягом 15хвилин і добавляють 64мг цианоборгідриду натрію. Перемішують протягом 18 годин. Відфільтровують і концентрують. Залишок опрацьовують мінімальною кількістю води, порошкують, відфільтровують у вакуумі й очищають шляхом препаративної ВЕРХ, елююючи сумішшю CH3CN/H2O/TФУ (55-45-0,02). Одержують цільовий продукт. Вихід складає 26%.

ЯМР-спектр (CDCl3) d у м.д.: 9,07 (уш. м, 1H); 8,48 (д, J=8, Ш); 8,00 (д, J=8, 2Н); 7,96 (д, J=8,5, 2H); 7,71 (д, J=8,5, 2H); 7,64 (д, J=8,5, 2H); 7,60 (д, J=9, 1H); 7,37 (д, J=9,5, 1H); 7,02 (д, J=8,5, 2Н); 6,97 (д, J=8,5, 2Н); 6,65 (д, J=8,5, 2Н); 4,90 (м, 1Н); 4,77 (м, 1H); 4,66 (м, 1H); 4,45 (м, 1H); 4,42 (м, 1H); 4,39 (м, 1H); 4,34 (із, 1H); 4,26 (м, 1H); 4,22 (м, 1H); 4,08 (м, 1H); 4,01 (т, J=6,5, 2Н); 3,88 (м, 3Н); 3,70 (м, 2Н); 3,51 (м, 2Н); 3,48 (м, 1H); 3,31 (м, 2Н); 3,28 (м, 1H); 3,16 (м, 2Н); 2, 53 (дд, J=6 і 13,5, 1H); 2,44 (дд, J=7,5 і 13,5, 1H); 2,27 (м, 1H); 2,25 (м, 1H); 2,15 (м, 2Н); 1,94 (м, 1H); 1,74 (м, 2Н); 1,44 (м, 2Н); 1,22-1,40 (м, 8Н); 1,13 (д, J=6, 3Н); 0,99 (д, J=6,5, 3Н); 0,88 (т, J=7, 3Н).

Приклад 15

1-[4-[(Аміноімінометил)гідразоно]-N2-[[4-[4-[4-(пентилокси)феніл]-1-піперазиніл]феніл]карбоніл]-L-орнітин]-4-[4-(4-гідроксифеніл)-L-треонін]-5-L-серин-ехінокандин В.

Стадія А

1-[(4R,5R)-4,5-Дигідрокси-N2-[[4-[4-[4-(пентилокси)феніл]-1-піперазиніл]феніл]карбоніл]-L-орнітин]-4-[4-(4-гідроксифеніл)-L-треонін]-5-L-серин-ехінокандин В

1 - Одержання складного ефіру

Добавляють 55мг пентафторфенолу і 61мг Ν,Ν'-дициклогексилкарбодиіміду в суміш 100мг [4-[4-[4-(пентилокси)феніл]-1-піперазиніл]феніл]карбонової кислоти і 3мл тетрагідрофурану. Реакційну суміш перемішують при температурі 20°С протягом 16 годин, відфільтровують, промивають тетрагідрофураном і концентрують до суху. Опрацьовують діетиловим ефіром, відфільтровують, промивають і концентрують. Одержують 71мг продукту.

2 - Сполучення

Протягом ночі при температурі 20°С перемішують суспензію, що містить 71мг отриманого вище складного ефіру, 70мг "ядра" дезоксимулундокандину, отриманого як зазначено в препаративному прикладі 2, 2,5мл диметилформаміду в присутності активованого силіпориту 4Å. Концентрують, отриманий продукт опрацьовують діетиловим ефіром і відфільтровують. Одержують продукт, який хроматографують на диоксиді кремнію, елююючи сумішшю ацетонітрил/вода/трифтороцтова кислота (60-40-0,02). У такий спосіб одержують 30мг цільового продукту.

Стадія В

1-[N2-[[4-[4-[4-(Пентилокси)феніл]-1-піперазиніл]феніл]карбоніл]-4-оксо-L-орнітин]-4-[4-(4-гідроксифеніл)-L-треонін]-5-L-серин-ехінокандин В

1 - Одержання складного ефіру

Нагрівають до температури 55°С суміш 1г продукту, отриманого на стадії А, 25мл ацетонітрилу, в присутності активованого силіпориту 4Å. Добавляють 430мл триметилсилілйодиду. Перемішують протягом 45хв., потім добавляють 150мкл 30%-ого водяного розчину тіосульфату натрію. Перемішують протягом 40 хвилин при температурі 20°С і концентрують. Сухий екстракт опрацьовують водою, перемішують протягом 1 години при температурі 20°С, відфільтровують у вакуумі і промивають. Одержують продукт, що хроматографують на диоксиді кремнію, елююючи сумішшю дихлорметан-метанол-вода (86/13/1). Одержують 497мг цільового продукту. Вихід складає 42%.

Стадія С

1-[4-[(Аміноімінометил)гідразоно]-N2-[[4-[4-[4-(пентилокси)феніл]-1-піперазиніл]феніл]карбоніл)-L-орнітин]-4-[4-(4-гідроксифеніл)-L-треонін]-5-L-серин-ехінокандин В

Протягом трьох годин при температурі 130°С нагрівають суспензію, що містить 400мг продукту, отриманого на стадії В, 4,8мл н-бутанолу і 221мг аміногуанідингідрохлориду. Концентрують і одержують 705мг продукту, який хроматографують на диоксиді кремнію, елююючи сумішшю дихлорметану з метанолом у співвідношенні 85/15, потім шляхом напівпрепаративної ВЕРХ (Кромасил С18) за допомогою суміші ацетонітрил/вода/трифтороцтова кислота (40-60-0,02). У такий спосіб одержують 64мг цільового продукту.

ЯМР-спектр (CDCl3) d у м.д.: 10,75 (із, 0,66Н); 10,45 (із, 0,33Н); 8,39 (д, J=8, 0,33Н); 8,34 (м, 1H); 8,10 (д, J=7,5, 0,66Н); 8,08; (д, J=8, 0,33Н); 7,99 (д, J=8,5 0,66Н); 7,74 (д, J=8,5, 1,33Н); 7,71 (д, J=8,5, 0,66Н); 7,60 (д, J=8,5, 0,66Н); 7,50 (м, 1, 33Н); 7,00 (м, 6Н); 6,86 (д, J=8,5, 2Н); 6,65 (д, J=8, 2Н); 5,08 (дт, J=2 і 11,5, 0,66Н); 4,94 (м, 1Н); 4,88 (м, 0,33Н); 4,75 (дм, J=8, 0,33Н); 4,67 (дд, J=3 і 7,5, 0,66Н); 4,43 (м, 1H); 4,38 (м, 1,66Н); 4,33 (м, 0,66Н); 4,26-4,20 (масив, 2,33Н); 4,12 (д, J=9, 0,66Н); 4,00-3,68 (масив, 7,33Н); 3,90 (т, J=7, 2Н); 3,62 (д, J=12, 0,33Н); 3,43 (уш. с, 2Н); 3,30-3,20 (м, 1H); 3,20 (уш. с, 2Н); 2,91 (д, J=14, 0,66Н); 2,86 (м, 0,33 Н); 2,76 (м, 0,33Н); 2,63 (дд, J=14 і 12,5, 0,66Н); 2,52 (дт, J=6 і 13, 1H); 2, 44 (дд, J=8 і 13, 1H); 2,35 (м, 0,33Н); 2,25 (м, 1,66Н); 1,93 (уш. т, J=13, 1H); 1,69 (м, 2Н); 1,42-1,30 (масив, 4Н); 1,15 (д, J=6, 1,98Н); 1,10 (..., J=6, 0,99Н); 0,98 (д, J=6,5, 3Н); 0,90 (т, J=7, 3Н).

Приклад 16

1-[4-[(2-Аміноетил)аміно]-N2-[4-[4"-(пентилокси)[1,1’:4'.1"-терфеніл]-4-ил]карбоніл]-L-орнітин]-4-[4-(4-гідроксифеніл)-L-треонін]-5-L-серин-ехінокандин В (ізомер А і ізомер В).

Слідуючи попередній методиці, з "ядра" дезоксимулундокандину, отриманого як зазначено в препаративному прикладі 2, одержуючи в якості проміжного продукту 1-[(4R,5R)-4,5-дигідрокси-N2-[[4"-(пентилокси)[1,1’:4',1"-терфеніл]-4-ил]карбоніл]-L-орнітин]-4-[4-(4-гідроксифеніл)-L-треонін]-5-L-серин-ехинокандии В і відповідне 4-оксо-похідне, одержують цільовий продукт.

ЯМР-спектр (CDCl3) d у м.д.: 9,00 (широка, 1H); 8,37 (д, J=8,5, 1H); 8,28 (м, 1Н); 8,10 (д, J=6,1Н); 8,02 (д, J=8, 2Н); 7,82 (м, 4Н); 7,73 (д, J=8, 2H); 7,66 (д, J=8, 2H); 7,38 (д, 3=9, 1H); 7,32 (д, J=9, 1H); 7,03 (д, J=8,5, 2H); 6,96 (д, J=8, 2H); 6,66 (д, J=8, 2H); 5,03 (м, 1H); 4,84 (м, 1H); 4,67 (м, 1H); 4,45 (м, 2Н); 4,36 (дд, J=7,5 і 10,5, 1H); 4,23 (м, 2Н); 4,18 (із, 1H); 4,04 (м, 1H); 4,02 (т, J=6,5, 2Н); 4,00 (м, 1H); 3,87 (д, J=9,5, 1H); 3,76 (м, 1H); 3,72 (м, 2Н); 3,55 (м, 1H); 3,44 (м, 1H); 3,35 (м, 2Н); 3,30 (м, 1Н); 3,19 (м, 2Н); 3,12 (м, 1H); 2,53 (м, 1H); 2,45 (м, 1H); 2,12-2,30 (м, 3Н); 1,90-2,05 (м, 2Н); 1,74 (м, 2Н); 1,30-1,55 (м, 4Н); 1,20 (д, J=5,5, 3Н); 0,96 (д, J=6,5, 3Н); 0,91 (т, 1=1, 3Н).

Приклад

Фармацевтична композиція:

Готують таблетки, що містять:

продукт прикладу 14

150мг

ексципієнт достатня кількість до

1p

(перелік ексципієнтів: крохмаль, тальк, стеарат магнію)

Фармакологічне дослідження

А - Інгібування глюкансинтази Candida albicans

Мембрани Candida albicans очищали за способом, описаним Tang і ін., Antimicrob. Agents Chemother., 35, 99-103, 1991. 22,5мкг мембранних протеїнів інкубували в суміші 2ммоль 14С-уридиндифосфатглюкози (питома активність=0,34мКи/ммоль), 50мкг a-амілази, 1ммоль дитіотреітолу (DTT), 1ммоль етилендіамінтетроцтової кислоти (EDTA), 100ммоль NaF, 7мкмоль гуанозин-5’-трифосфат-g-S (GTP-g-S), 1моль сахарози і 50ммоль DE Трис-НСІ (pΗ=7,8) в обсязі 100мкл. Середовище інкубували при температурі 25°С протягом 1 години і реакцію припиняли шляхом додавання трихлороцтової кислоти з кінцевою концентрацією 5%.

Реакційну суміш переносили на попередньо зволожений фільтр із скловолокна. Фільтр промивали, сушили і підраховували його радіоактивність.

Мулундокандин використовували в якості позитивного контролю.

Контроль розчинника здійснювали з однаковою кількістю 1%-ого диметилсульфоксиду.

Отримані результати показують, що продукти відповідно до винаходу виявляють у цьому тесті гарну активність, особливо продукти прикладів 9, 11 і 14.

В - Активність стосовно ферменту, Aspergillus fumigatus

Фермент одержували за способом Beaulieu і ін. (Antimicrob. Agents Chemother., 38, 937-944, 1994). Використовуваний протокол експерименту ідентичний протоколу, описаному вище для ферменту Candida albicans, за винятком того, що не використовують дитіотреітол у реакційній суміші.

У цьому тесті продукти виявляють гарну активність.