Спосіб клонального мікророзмноження хмелю (humulus lupulus l.) ароматичних сортів

In vitro технологія оздоровлення, культивування, розмноження та адаптації до умов in vivo рослин хмелю (Humulus lupulus L) ароматичних сортів, що включає введення в культуру in vitro, оздоровлення методом хіміотерапії та термотерапії, тонування в умовах in vitro, адаптацію рослин до умов in vivo, яка відрізняється тим, що, для введення в культуру in vitro рослинних експлантів їх стерилізують від фітопатогенів (бактерій, грибів, вірусів) 70% етанолом протягом ЗО с, 50% розчином відбілювача протягом 7хв , після кожної стадії промивають рослинний матеріал у стерильній дистильованій воді протягом 1 хв , протягом 48 годин при температурі +38°С проводять термотерапію рослинних зразків, пасують рослинні експланти на штучних поживних середовищах у стерильних умовах, культивують, клонують на базовому середовищі Мурасіге та Скуга (МС) з додаванням (для регенерації меристем) фітогормону 6бензиламшопурину (БАП) в концентрації 0,2мг/л, для пагоноутворення до МС середовища додають індолілоцтову кислоту (ЮК) в концентрації 0,5мг/л та пберелову кислоту (ГК) 0,5мг/л, для коренеутворення застосовують ЮК - 0,5мг/л, нафтилоцтову кислоту (НОК) - 0,03мг/л, ГК - 0,5мг/л, використовують як носій субстанцій торфомасау, керамзит чи перліт фракцією 3-5мм Винахід відноситься до сільського господарства, зокрема до рослинництва, клітинної біологи та біотехнологм рослин і може використовуватись при цілорічному і сезонному культивуванні, розмноженні та адаптації високопродуктивних та оздоровлених живців хмелю, після стерильного культивування на живильних середовищах до умов закритого та відкритого ґрунту in vivo Відома класична методика культивування рослин in vitro, яка вперше була запропонована і опублікована в 1962 році (Murashiget, Scoog F А revised medium for rapid growth and bioassays with tobacco tissue culture // Physiol Plant - 1962 - 15, №3 - P 473-497) на прикладі для прискореного вирощування тютюну в стерильних штучних умовах Відома також порівняльна робота із гіркими сортами хмелю (Мельничук М Д , Клюваденко А А Давиденко О А Отримання безвірусного посадкового матеріалу хмелю (Humulus lupulus L) в умовах in vitro // Науковий вісник Національного аграрного університету - К , 2000, - №29 - С 47 - 52) де показано можливості та переваги технології по оздоровленню, розмноженню рослин для отримання суперелітних рослин хмелю ароматичних сортів методом бютехнолопчного тонування в стерильних умовах in vitro Недоліком відомих методів являється порушення єдиного технологічного процесу оздоровлення та стерилізації і недосконалість концентрацій фітогормонів в поживних середовищах Винаходом ставиться завдання створити технологію по оздоровленню, культивуванню, розмноженню та адаптації до природних умов маточних рослин отримати підвищеної якості рослинну супереліту хмелю ароматичних сортів, яка використовується в пивоварінні, парфумерній та хлібопекарській промисловості Поставлене винаходом завдання досягається тим, що у in vitro технології оздоровлення, культивування, розмноження та адаптації до умов in vivo рослин хмелю (Humulus lupulus L) ароматичних сортів, що включає введення в культуру in vitro, оздоровлення методом хіміотерапії та термотерапії, тонування в умовах in vitro, адаптацію рослин до умов in vivo, згідно винаходу, для введення в культуру in vitro рослинних експлантів їх стерилізують від фітопатогенів (бактерій, грибів, вірусів) 70% етанолом протягом 30с, 50% розчином відбілювача протягом 7хв, після кожної стадії проми CO Ю 59131 вають рослинний матеріал у стерильній дистильованій воді протягом 1хв, протягом 48 годин при температурі +38°С проводять термотерапію рослинних зразків, переводять (пасують) рослинні експланти на штучних поживних середовищах у стерильних умовах, культивують, клонують на базовому середовищі Мурасіге та Скуга (МС) з додаванням (для регенерації меристем) фітогормону 6бензіламшопурину (БАП) в концентрації 0,2мг/л, для пагоноутворення до МС середовища додають індолилоцтову кислоту (ІОК) в концентрації 0,5мг/л та пбереллову кислоту (ГК) 0,5мг/л, для коренеутворення застосовують ЮК-0,5мг/л, нафтилоцтову кислоту (НОК) - 0,03мг/л, ГК - 0,5мг/л, використовують в якості носія субстанцій була торфомасау, керамзит чи перліт фракцією 3-5мм Специфіка технології полягає у поєднанні відомих раніше незалежних процесів по введенню в культуру in vitro, оздоровленню методом хіміотерапії та термотерапії, тонуванню в умовах in vitro та адаптації рослин до умов in vivo рослин Запропонована технологія по оздоровленню, культивуванню, розмноженню та адаптації до природних умов маточних рослин хмелю ароматичних сортів дозволяє отримати підвищеної якості рослинну супереліту живців Вона передбачає стерилізацію від фітопатогенів (бактерій, грибів, вірусів тощо) рослинних експлантів, що вводяться в культуру in vitro ХІМІЧНИМИ агентами (речовинами) Звільнені від листків молоді пагони обробляли послідовно 70% етанолом протягом ЗО секунд, 50% розчином відбілювача протягом 7 хвилин Після кожної стадії промивали рослинний матеріал у стерильній дистильованій воді протягом 1 хвили Комп'ютерна верстка О Воробей ни Для зимуючих бруньок застосовували обробку 20% розчином перекису водню протягом 5 хвилин Також робили промивку стерильною дистильованою водою протягом 1 хвилини Термотерапію (оздоровлення) рослинних експлантів проводили в кліматичній камері (типу RUMED, ТС-80) протягом 48 годин при температурі +38°С Переведення (пасаж) рослинних експлантів на штучні поживні середовища у стерильних умовах, подальше їх культивування, тонування (розмноження) проводили із використанням базового середовища Мурасіге та Скуга (МС) та добавками певної концентрації фітогормонів Для регенерації меристем застосовували базове середовище МС та фітогормон 6-бензіламшопурин (БАП) в концентрації 0,2мг/д Для пагоноутворення додавали до МС середовища індолилоцтову кислоту (ІОК) в концентрації 0,5мг/л та пбереллову кислоту (ГК) 0,5мг/л Для коренеутворення у хмелю використовували ІОК - 0,5мг/л, нафтилоцтову кислоту (НОК) 0,03мг/л, ГК - 0,5мг/л Носієм субстанцій була торфомаса, керамзит чи перліт (фракція 3-5мм) Запропонована технологія може бути використана при проведенні тонування отриманих в штучних умовах (in vitro) рослин хмелю для подальшої адаптації до умов закритого і відкритого грунту для господарств та агропромислових компаній, що культивують цю культуру в різних типах агроценозів України Технологія тонування та оздоровлення дозволяє отримати значні покращення вихідної якості рослинницької сировини та підвищення врожайності культури хмелю ароматичних сортів, яка використовується в пивоварінні, парфумерній та хлібопекарській промисловості Підписано до друку 05 09 2003 Тираж39 прим Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, Львівська площа, 8, м Київ, МСП, 04655, Україна ТОВ "Міжнародний науковий комітет", вул Артема, 77, м Київ, 04050, Україна