Спосіб одержання препарату для профілактики сальмонельозу та інфекційного ринотрахеїту у телят

Спосіб одержання препарату для профілактики сальмонельозу та інфекційного ринотрахеїту у телят, що включає культивування виробничих штамів бактерій, виготовлення антигенів, їх інактивацію, який відрізняється тим, що як антигени використовують анатоксини та адгезини сальмонел, шактивовані антигени штаму Bacillus alvei 413 і гідрооксид алюмінію Специфічний захист обумовлений індукцією утворення Ід А, які попереджують адгезію і подальше розмноження патогенних мікроорганізмів на слизових оболонках Неспецифічний захист обумовлений стимуляцією функціональної активності макрофагів і підвищенням вмісту лізоциму в організмі Цей спосіб включає одержання антигенів бактерій, їх змішування у певній пропорції, їх інактивацію (мертиолят натрію - 12,5мг/100см3) Але за допомогою даного способу не можливо одержати препарат для профілактики сальмонельозу та інфекційного рінотрахеїту у телят В основу винаходу поставлено задачу розробити спосіб одержання препарату для профілактики сальмонельозу та інфекційного рінотрахеїту у телят, що включає культивування виробничих штамів бактерій, виготовлення антигенів, їх інактивацію, шляхом використання як антигенів анатоксинів та адгезинів сальмонел, шактивованих антигенів штаму Bacillus alvei 413 і гідрооксиду алюмінію, щоб забезпечити одержання препарату для профілактики сальмонельозу та інфекційного рінотрахеїту у телят Спосіб виконують таким чином Для виготовлення комплексного антигену використовують штами Salmonella typhimunum, Salmonella dublm, Salmonella ententidis, що утворюють екзотоксини і адгезивні антигени та штам Bacillus alvei 413 Введення в організм тварин антигенів Bacillus alvei 413 індукує утворення антитіл до вірусу ІРТ (Фукс П П Бактерії як своєрідні біотопи вірусів у природі 00 о о (О 60089 БІОЛОГІЯ тварин (науково-теоретичний журнал) — Львів —1999 —Т 1(2) — с 105-117) Виготовлення сальмонельозних антигенів Токсигенні штами бактерій культивують в пробірках з рідким живильним середовищем Хоттінгера при 37°С протягом 48 - 72 годин Отриманими матричними культурами засівають ємності з бульйоном Хоттінгера і культивують при 37°С протягом 72 - 86 годин Після чого бактеріальну масу відокремлюють за допомогою центрифугування або сепарацією, в супернатанти вносять 0,3 - 0,5% формаліну і витримують в термостаті при 37°С10-15діб Виробничі штами бактерій з адгезивними антигенами вирощують на агарі Хоттінгера при 37°С протягом 24 годин, після чого урожай бакмаси суспендують в 10М фосфатно-сечовинному буфері (рН - 7 0 - 7 2), концентрацію бакмаси доводять до 60 - 80 млрд мк кл в 1см3 і витримують на водяній бані (62 - 65°С) 20 - ЗО хвилин Після чого бакмасу відокремлюють, в супернатанти вносять 0,5% формаліну і витримують при 37°С 10-15 діб Препарати анатоксинів і адгезинів сальмонел об'єднують, у співвідношенні 1 1 Виготовлення антигену з Bacillus alvei 413 Штам Bacillus alvei 413 вирощують на МПБ з 1% глюкози та 5 - 10% сироватки коня протягом 2х діб при 37°С Концентрацію мікробних клітин доводять до 7 - 8 млрд мк в 1см В одержану суспензію вносять формалін (0,5%) Виготовлення комплексного антигену Одержані антигени об'єднують у співвідношенні 1 1 У одержану таким чином суміш антигенів вносять 30% за об'ємом стерильного гідроксиду алюмінію Приклад 1 Визначення стерильності та нешкідливості Стерильність антигенів визначали Комп'ютерна верстка А Крулевський за ГОСТ 28085-89, Нешкідливість - за ГСТУ 46 024-2002 Приклад 2 Визначення активності препарату Визначення активності по відношенню до сальмонел 20-ти білим мишам масою 18 - 20г підшкірно вводили препарат дворазово з інтервалом між ІН'ЄКЦІЯМИ 10 - 14 діб в об'ємі 0,5см3 Через 14 діб після останнього введення препарату дослідних тварин заражали штраперітонеально раніше визначеною летальною дозою штаму Salmonella dublm Спостереження за зараженими тваринами вели 10 діб Препарат вважали активним в тому разі, коли за термін спостереження загибель серед заражених тварин не перевищувала 30% Приклад 3 Визначення активності по відношенню до вірусу ІРТ 10-ти морським свинкам масою 300 - 400г або 5-ти кролям масою 3 - 4кг препарат вводили внутрішньом'язово ДВІЧІ з інтервалом 10 - 14 діб в дозах 1,0см3 (морським свинкам) і 1,5см3 (кролям) Через 14 діб після повторного введення препарату - у тварин відбирали проби крові, одержували сироватку і визначали рівень антитіл проти вірусу ІРТ в РИГА і РНБА Рівень антитіл у тварин, яким вводили досліджуваний препарат повинен знаходитись в межах 6 -12log2 Спосіб одержання препарату для профілактики сальмонельозу та інфекційного рінотрахеїту телят знайде застосування в біологічній промисловості при виготовленні препарату для профілактики захворювань телят, обумовлених збудниками сальмонельозу та інфекційного рино трахеїту, та знайде застосування в тваринницьких господарствах різних форм власності, які спеціалізуються на молочному та м'ясному скотарстві, неблагополучних щодо сальмонельозу та інфекційного рінотрахеїту телят Підписано до друку 06 10 2003 Тираж39 прим Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, Львівська площа, 8, м Київ, МСП, 04655, Україна ТОВ "Міжнародний науковий комітет", вул Артема, 77, м Київ, 04050, Україна