Вакцинний штам escherichia coli “м-131/152″

Штам Escherichia coli "M-131/152", який використовується для виробництва полівалентної вакцини "Колісан"(проти ешерихіозів тварин), асоційованих інактивованих вакцин "Вельшікол" (проти ешерихіозів, набрякової хвороби та анаеробної ентеротоксимії), "Вельшіколісальм"( проти ешерихіозів, набрякової хвороби, анаеробної ентеротоксимії та сальмонельозу), "Сердосан" (проти ешеріхіозу, сальмонельозу, анаеробної ентеротоксимії та пастирельозу тварин та "Пневмомастисан" (проти маститів і пневмоентеритів тварин), а також для виготовлення антигену для імунологічних реакцій. [4] Винахід відноситься до ветеринарної мікробіології і імунології, зокрема до виготовлення вакцин та антигенів. Метою винаходу є штам Escherichia coli" М-131/152", який володіє добре вираженими імуногенними властивостями, які проявляються в синтезі специфічних антитіл в організмі щеплених тварин. Штам виділений від поросяти з клінічними ознаками набрякової хвороби. Особливістю штаму є висока патогенність, продукування гемолізину, серогрупова специфічність, висока потенція росту, яка сприяє отриманню великої кількості біомаси для виготовлення вакцини, що визначає рентабельне її виробництво. Вакцинний штам Escherichia coli "М-131/152" селекційований в IBM УААН і задепонований в колекції патогенних мікроорганізмів Державного науково-контрольного інституту біоте хнології штамів мікроорганізмів під №152. Вакцинний штам Escherichia coli "М-131/152" характеризується наступними ознаками: Морфологічні ознаки: бактерії Escherichia coli "М-131/152" в мікроскопічних препаратах із добової бульйонної культури, пофарбованих за Грамом - грамнегативні, короткі товсті палички, злегка заокругленні на кінцях, розташовані поодиноко або попарно. Спор не утворюють. [3] Культуральні ознаки: На МПБ при 37°С рН6,8-7,2 спостерігається рівномірне помутніння середовища, на МП А утворює округлі гладенькі блискучі сіро-білі колонії (S-форми). На диференційному середовищі Ендо утворює колонії темно-червоного кольору з металевим блиском, а на середовищі Левіна характерні колонії фіолетового кольору. Колір середовища КОДА змінює з синього на зелений. [2] Ферментативні властивості: активно розщеплює сахара, особливо глюкозу Слабше - мальтозу, маніт - з утворенням кислоти й газу. Не відновлює нітрати. Утворює індол. [2,3] Патогенні властивості: патогенний для білих мишей при внутрішньочеревному введенні суспензії добової агарової культури у фізрозчині, в об'ємі 0,5см 3 та концентрації 500млн. мікробних клітин, що становить DL100. Загибель тварин відмічається протягом 5-ти діб. Серологічні властивості: стабільність остаточної вірулентності встановлено шляхом 3-х кратних пасажів через організм білих мишей. За допомогою ешерихіозних антиадгезивних сироваток визначили, що даний штам має адгезивні антигени К99, 987Р, F41, K88ad, К88ас, відповідно штам Escherichia coli "М-131/152" є високопатогенним.[1] Імуногенні властивості: парентеральне щеплення білих мишей анакультурою даного штаму в об'ємі 0,5см 3 захищає 80-90% мишей при контрольному зараженні вірулентною культурою Escherichia coli "М-131/152". Винахід ілюструється наступними прикладами. Приклад 1. Білих мишей масою 16-18г імунізували анакультурою штаму Escherichia coli "М-131/152" в кількості 10 голів підшкірно та 10 голів внутрішньом'язово в об'ємі 0,5см 3. Щеплення проводили двічі з інтервалом 10 діб. На 12-ту добу після другого щеплення проводили гостре зараження вірулентною культурою штаму Escherichia coli "М-131/152"в дозі 500млн. мікробних тіл. В якості контролю були не імунізовані білі миші, в кількості 10 голів. Було встановлено, що коефіцієнт імунологічної ефективності імунізованих тварин склав 90% при 100% загибелі контрольних (таблиця 1). Приклад 2. 50 голів поросят у віці 2місяці імунізували анакультурою штаму Escherichia coli "М-131/152" в об’ємі 3,0см 3 двічі з інтервалом 14 діб. Контролем для імунізації були використані 10 голів підшкірно в ділянці шиї не імунізованих поросят -аналогів. До щеплення, на 14-ту добу після І та II щеплення відбирали проби крові від поросят обох груп і досліджували сироватки на рівень титрів антитіл в реакції аглютинації. Титри антитіл до штаму Escherichia coli "М-131/152 " представлені в таблиці 1. Приклад 3. 10 свиноматок імунізували двічі анакультурою штаму Escherichia coli "М-131/152" в об'ємі 5,0см 3 та 10,0см 3 з інтервалом 14 діб підшкірно в ділянці шиї. Контроль - 5 голів не щеплених тварин. До щеплення, на 14ту добу після І та II щеплення відбирали проби крові від тварин обох гр уп і досліджували на рівень накопичення аглютинінів. Титри антитіл до штаму Escherichia coli "М-131/152" представлені в таблиці 2. Таблиця 1 Результати імунізації білих мишей анакультурою штаму Escherichia coli "М-131/152" № п/п 1 2 3 І гр упа II гр упа ІІІ група Метод введення анакультури підшкірно Внутрішньочеревинно — Об'єм 0,5см 3 0,5см 3 0,5см 3 Кількість голів 10 10 10 Загинуло голів % 1 10 1 10 10 100 Залишилось живих голів % 9 90 9 90 0 0 Таблиця 2 Титри антитіл в сироватці крові щеплених анакультурою штаму Escherichia coli "М-131/152" поросят і свиноматок № п/п Групи тварин Кількі сть голів Доза Титри антитіл Через 14діб після До щеплення щеплення 1-го ІІ-го 1. 2 Поросята віком 2міс.: імунізовані контроль Свиноматки: імунізовані контроль 50 10 10 5 3,0см 3 3,0см 3 5,0-10,0см 3 5,0-10,0см 3 1:80 1:80 1:80 1:80 1:160 1:80 1:160 1:320 1:3201:640 1:3201:640 Як видно з таблиці 2, при імунізації анакультурою штаму Escherichia coli "М-131/152", титри антитіл в сироватці крові свиноматок і поросят групи 2міс. становили в межах 1:320-1:640. Отже, отримані результати, що наведені в таблицях 1 і 2 свідчать про те, що імунізація білих мишей і свиней анакультурою штаму Escherichia coli "М-131/152" захищає білих мишей від інфікування вірулентною культурою даного штаму та сприяє синтезу специфічних антитіл і формуванню імунітету у поросят та свиноматок. Особливістю штаму Escherichia coli "М-131/152" є продукування гемолізину, наявність металевого блиску колоній, має адгезивні антигени К99, 987Р, F41, K88ad, K88ac, володіє добре вираженими морфологічними, культуральними, біохімічними, патогенними властивостями, характерними для роду Escherichia. Проведені дослідження показали, що штам Escherichia coli "М-131/152" володіє добре вираженою імуногенною активністю, що дозволяє рекомендувати його для виготовлення вакцинних препаратів в боротьбі з ешеріхіозами тварин. Список використаної літератури 1 .Головко А.Н., Гнатенко Г.В. Фимбриальные адгезины Escherichia coli и их роль в патогенезе колибактериоза сельскохозяйственных животных и птиц / Профилактика и меры борьбы с болезнями молодняка с.-х. ж.-х: Тез.докл./ Респ.рауч. - практ.конф. - Минск, 1990 - С.38. 2. Настанова з лабораторної діагностики ешерихіозу (колібактеріозу ) тварин /А.М.Головко, В.О.Ушкалов, П.П.Фукс та інші // Київ, 1995-20с. 3. Определитель бактерий Берджи в 2-х томах. T.I Пер.с англ. / Под ред. Дж.Хоулта, Н. Крига, П.Снита, Дж. Стейли, С.Уильямса. - М.: Мир, 1997. - 432с. 4. Риженко В.П., Риженко Г.Ф., Акименко Л.І., Риженко І.В., Дементьева С.А., Бєлік С.М., Риженко В.В., Галка І.В., Безименний М.В., Марченко О.М., Черніков О.О. На укове обгрунтування розробки та ефективності застосування асоційованих вакцин // Науковий вісник НАУ, 2001. - №36. - С.43-49.