Вакцинний штам escherichia coli “дон 910/149″, який використовується для виготовлення вакцин проти ешерихіозів сільськогосподарських тварин

Винахід відноситься до ветеринарної мікробіології і імунології, зокрема до виготовлення вакцин та антигенів. Штам Escherichia coli "Дон 910/149", який використовується для виробництва полівалентної вакцини "Колісан" та асоційованих інактивованих вакцин "Вельшикол", "'Вельшиколісальм", "Сердосан" проти ешеріхіозу, сальмонельозу, анаеробної ентеротоксемії та пастерельозу тварин та "Пневмомастисан" проти пневмоентеритів і маститів тварин, а також для виготовлення антигену для імунологічних реакцій. Метою винаходу є штам Escherichia coli "Дон 910/149". Він володіє добре вираженими імуногенними властивостями, які проявляються в синтезі специфічних антитіл в організмі щеплених тварин. Штам виділений від поросяти з клінічними ознаками набрякової хвороби. Особливістю штаму є висока стабільність, продукування гемолізину, серогрупова специфічність, висока потенція росту, яка сприяє отриманню великої кількості біомаси для виготовлення вакцини, що визначає рентабельне її виробництво. Вакцинний штам Escherichia coli "Дон 910/149" селекційований в IBM УААН і депонований в колекції мікроорганізмів Державного науково-контрольного інституту біотехнології і штамів мікроорганізмів за №149. Вакцинний штам Escherichia coli "Дон 910/149" характеризується наступними ознаками: Морфологічні ознаки: бактерії Escherichia coli штаму " Дон 910/149" в мікроскопічних препаратах із добової бульйонної культури , пофарбованих за Грамом - грамнегативні товсті палички, розташовані поодиноко або парами із заокругленими кінцями. Спор не утворює. [1, 2, 3]. Культуральні ознаки: На МПБ при З7°С рН6,8-7,2 спостерігається рівномірне помутніння середовища, на МЛА утворює округлі гладенькі блискучі сіро-білі колонії (S-форми). На диференційному середовищі Ендо росте у вигляді колоній червоного кольору з металевим відтінком. Колір середовища КОДА змінює з синього на зелений [1, 2, 4]. Ферментативні властивості: бактерії Escherichia coli "Дон 910/149" активно розщеплюють сахара, особливо маніт. Слабіше глюкозу, мальтозу і лактозу - з утворенням кислоти й газу. Утворює індол. Патогенні властивості ; патогенний для білих мишей при внутрішньочеревному введенні суспензії добової агарової культури у фізрозчині, в об'ємі 0,5см3 та концентрації 400млн. мікробних клітин, що становить LD100. Загибель тварин відмічається протягом 5-ти діб. Імуногенні властивості: дворазове парентеральне щеплення білих мишей анакультурою даного штаму в об'ємі 0,5см3 захищає від контрольного зараження вірулентною культурою Escherichia coli в 85% випадків. [5] Винахід ілюструється наступними прикладами. Приклад 1. Білих мишей масою 16-18г імунізували анакультурою штаму Escherichia coli "Дон 910/149" в кількості 10 голів підшкірне та 10 голів внутрішньом'язово в об'ємі 0,5см3. Щеплення проводили двічі з інтервалом 10-12 діб. На 12-ту добу після другого щеплення проводили зараження мишей вірулентною культурою штаму Escherichia coli " Дон 910/149" в дозі 400млн. мікробних тіл. В якості контролю були неімунізовані білі миші, в кількості 10 голів. Встановлено, що коефіцієнт імунологічної ефективності імунізованих тварин склав 85% при 100% загибелі контрольних (таблиця 1). Приклад 2. 15 голів поросят у віці 3,5 місяців імунізували "Дон 910/149" в об'ємі 3,0см3 двічі з інтервалом 12 діб. Контролем для імунізації були використані 10 голів підшкірне в ділянці шиї культурою штаму Escherichia coli неімунізованих поросят -аналогів. Перед щепленням, на 7-му, 14-ту добу відбирали проби крові від поросят обох груп і досліджували сироватку крові на наявність антитіл в реакції аглютинації. Титри антитіл до штаму Escherichia coli" Дон 910/149" представлені в таблиці 2. Таблиця 1 Результати контролю інфікування білих мишей щеплених анакультурою штаму Escherichia coli "Дон 910/149" № п/п 1. 2. 3. І група ІІ група ІІІ група Метод введення анакультури підшкірно Вн./м'язово Об'єм Кількість голів 0,5см3 0,5см3 0,5см3 10 10 10 Загинуло голів % 1 10 2 20 10 100 Залишилось живих голів % 9 85 8 0 0 Таблиця 2 Титри антитіл в сироватці крові поросят, щеплених анакультурою штаму Escherichia coli " Дон910/149" № п/п Групи тварин 1. Поросята віком 3,5міс.: імунізовані контроль Кількість голів 15 10 Доза 3,0 см3 3,0 см3 Титри антитіл 1:320-1:640 Як видно з таблиці 2, при імунізації анакультурою штаму Escherichia coli "Дон 910Л49", титри антитіл в сироватці крові поросят групи 3,5 міс становили 1:320-1:640. Отже, отримані результати, що наведені в таблицях 1 і 2 свідчать про те, що імунізація тварин анакультурою штаму Escherichia coli "Дон 910/149" захищає білих мишей від інфікування вірулентною культурою даного штаму та сприяє синтезу специфічних антитіл і формуванню імунітету у поросят. Особливістю штаму Escherichia coli "Дон 910/149" є продукування гемолізину, наявність металевого блиску колоній, він володіє добре вираженими морфологічними, культуральними, біохімічними, патогенними властивостями, характерними для роду Escherichia. Проведені дослідження показали, що штам Escherichia coli " Дон 910/149" володіє добре вираженою імуногенною активністю, що дозволяє рекомендувати його для виготовлення вакцинних препаратів проти ешеріхіозів тварин. Джерела інформації: 1. Определитель бактерий Берджи (под ред. Дж. Хоута, Н. Крита, П.Снита и др.). Перевод с английского акад. РАН Г.А. Заварзина. 9-е изд в 2-х томах-1997-432с. 2. Ветеринарная микробиология под редакцией Я.Е.Колякова, засл. деятеля науки РСФСР проф. Московской ветеринарной академии. 3-е издание. Москва 1965г. 3. Головко А.Н., Гнатенко Г.В. Фимбриальные адгезины Escherichia coli и их роль в патогенезе колибактериоза сельскохозяйственных животных и птиц // Профилактика и меры борьбы с болезнями молодняка с.-х. ж.-х: Тез.докл. / Респ.рауч.-практ.конф.- Минск, 1990 - С.38. 4. Настанова з лабораторної діагностики ешерихіозу (колібактеріозу) тварин /А.М.Головко, В.О.Ушкалов, П.П.Фукс та інші // Київ, 1995-20с. 5. Риженко В.П., Риженко Г.Ф., Акименко Л.І., Риженко І.В., Дементьева С.А., Бєлік С.М., Риженко В.В., Галка І.В., Безименний М.В., Марченко О.М., Черніков О.О. Наукове обґрунтування розробки та ефективності застосування асоційованих вакцин // Науковий вісник НАУ, 2001. - №36. - С.43-49.