Вакцинний штам escherichia coli б-375/151 для виготовлення вакцин проти ешерихіозів сільськогосподарських тварин

Винахід відноситься до ветеринарної мікробіології і імунології, зокрема до вакцинного штаму Escherichia coli Б-375/151, який пропонується для виробництва асоційованих інактивованих вакцин, а саме "Сердосан" - вакцина проти колібактеріозу, набрякової хвороби, пастерельозу, анаеробної ентеротоксемії, "Вельшікол" - вакцина проти анаеробної ентеротоксемії і колібактеріозу тварин, "Вельшіколісальм" - вакцина проти анаеробної ентеротоксемії, колібактеріозу та сальмонельозу тварин, "Пневмомастисан" - вакцина проти пневмоентеритів і маститів тварин та полівалентної вакцини проти ешерихіозів "Колісан". Метою винаходу є штам Escherichia coli Б-375/151, який відзначається добре вираженими імуногенними властивостями, які проявляються синтезом специфічних антитіл в організмі щеплених тварин. Штам виділений від поросяти з клінічними ознаками набрякової хвороби. Особливістю штаму є висока стабільність, серогрупова специфічність, висока потенція росту, яка сприяє отриманню великої кількості біомаси для виготовлення вакцини, що визначає рентабельне її виробництво. Вакцинний штам Escherichia coli Б-375/151 селекційований в лабораторії анаеробних інфекцій IBM У ААН і задепонований в колекції патогенних мікроорганізмів Державного науково-контрольного інституту біоте хнології і штамів мікроорганізмів під №151. Вакцинний штам Escherichia coli Б-375/151 характеризується наступними ознаками. Морфологічні ознаки: бактерії Escherichia coli Б-375/151 в мазках із добової бульйонної культури, пофарбованих за Грамом представлені грамнегативними короткими рухливими паличками, злегка заокруглені на кінцях, в мазках розташовані поодиноко або попарно. Культуральні ознаки: на МПБ при 37°C рН6,8-7,2 спостерігається рівномірне помутніння середовища з утворенням пристінкового кільця; на МЛА утворює округлі гладенькі блискучі сіро-білі колонії (S-форми). На живильному середовищі Ендо утворює колонії темно-червоного кольору без металевого блиску, а на середовищі Левіна характерні колонії фіолетового кольору. Ферментативні властивості: штам ферментує лактозу, глюкозу, маніт, сахарозу з утворенням кислоти й газу. Не відновлює нітрати. Патогенні властивості: патогенний для білих мишей: при внутрішньочеревному введенні суспензії агарової культури у фізрозчині, в об'ємі 0,5см 3 та концентрації 500млн. мікробних клітин в см 3. Загибель тварин відмічається протягом 3-х діб. Стабільність остаточної вірулентності встановлено шляхом 5-тикратних пасажів через організм білих мишей. Імуногенні властивості: двохразове парентеральне щеплення білих мишей анакультурою даного штаму в об'ємі 0,5см 3 захищає від контрольного зараження вірулентною культурою Escherichia coli Б-375/151 в 90% випадків. Винахід ілюструється наступними прикладами. Приклад 1 Білих мишей масою 18-20г імунізували анакультурою штаму Escherichia coli Б-375/151 в кількості 10 голів підшкірно та 10 голів внутрішньом'язево в об'ємі 0,5см 3. Щеплення проводили двічі з інтервалом 10 діб. На 10-12ту добу після другого щеплення проводили гостре зараження вірулентною культурою штаму Escherichia coli Б375/151 в дозі 500млн. мікробних тіл. В якості контролю були неімунізовані білі миші, в кількості 10 голів, яких теж було заражено вірулентною культурою штаму Escherichia coli Б-375/151. Таблиця 1 Результати контрольного інфікування білих мишей щеплених анакультурокз Escherichia coli Б-375/151 Метод введення анакультури № п/п 1 Результати інфікування Загинуло Залишилось живих голів % голів % 0 0 10 100 2 II гр упа 3 III група (контроль) Кількість голів підшкірно внутрішньочеревенно І гр упа Об'єм 0,5см 3 10 5 10 1 10 9 90 !0 10 100 0 0 0,5см Приклад 2 40 голів поросят у віці 4 місяці імунізували підшкірно в ділянці шиї анакультурою штаму Escherichia coli Б375/151 в об'ємі 3,0см 3 двічі з інтервалом 10-14 діб. Контролем для імунізації були використані 10 голів неімунізованих поросят-аналогів. На 14-ту добу відбирали проби сироватки крові від поросят обох гр уп і досліджували титри антитіл в реакції аглютинації. Титри антитіл до штаму Escherichia coli Б-375/151 представлені в таблиці 2. Таблиця 2 Титри антитіл в сироватці крові щеплених анакультурою штаму Escherichia coli Б-375/151 свиноматок і поросят № п/п 1 2 Групи тварин Поросята віком 2-4мс.: імунізовані контроль Свиноматки: Кількість голів Доза Титри антитіл 40 10 3,0см 3 3,0см 3 1:160-1:320 імунізовані контроль 10 5 5,0-10,0см 3 5,0-10,0см 3 1:320-1:640 Приклад 3 10 свиноматок імунізували двічі анакультурою штаму Escherichia coli Б-375/151 в об'ємі 5,0см 3 та 10,0см 3 з інтервалом 10-14 діб підшкірно в ділянці шиї. Контроль - 5 голів нещеплених тварин. На 14-ту добу відбирали проби сироватки крові від тварин обох груп і досліджували титри антитіл в реакції аглютинації. Титри антитіл до штаму Escherichia coli Б-375/151 представлені в таблиці 2. Як видно з таблиці 2, при щепленні анакультурою штаму Escherichia coli Б-375/151, найвищими титри антитіл в сироватці крові були виявлені у свиноматок, які знаходилися в межах 1:320-1:640. А у поросят віком 2-4міс. титри відповідно були 1:160-1:320 .Отже, отримані результати, що наведені в таблицях 1 і 2 свідчать про те, що імунізація анакультурою штаму Escherichia coli Б-375/151 захищає білих мишей від інфікування вірулентною культурою даного штаму та сприяє синтезу специфічних антитіл і формуванню імунітету у поросят та свиноматок. Було встановлено, що коефіцієнт імунологічної ефективності імунізованих тварин склав 85-90% при 100% загибелі контрольних (таблиця 2). Особливістю штаму Escherichia coli Б-375/151 є добре виражені та стабільні морфологічні, культуральні, біохімічні, патогенні властивості, характерні для роду Escherichia. Відмінністю даного штаму є відсутність гемолітичних властивостей. Проведені дослідження показали, що штам Escherichia coli Б-375/151 володіє добре вираженою імуногенною активністю, що дозволяє рекомендувати його для виготовлення вакцинних препаратів в боротьбі з колібактеріозом свиней. Список використаної літератури 1. Головко А.Н., Гнатенко Г.В. Фимбриальные адгезины Escherichia coli и их роль в патогенезе колибактериоза сельскохозяйственных животных и птиц // Профилактика и меры борьбы с болезнями молодняка с.-х. ж.-х: Тез. докл. / Респ. науч.-практ. конф. - Минск, 1990. -С.38. 2. Настанова з лабораторної діагностики ешерихіозу (колібактеріозу) тварин / А.М. Головко, В.О. Ушкалов, П.П. Фукс та інші // Київ, 1995. -20с. 3. Определитель бактерий Берджи в 2-х томах. T.1 Пер. с англ. / Под ред. Дж. Хоулта, Н. Крига, П.Снита, Дж. Стенли, С.Уильямса. -М.:Мир, 1997. -432с. 4. Риженко В.П., Риженко Г.Ф., Акименко Л.І., Риженко І.В., Дементьева С.А., Бєлік С.М., Риженко В.В., Галка І.В., Безименний М.В., Марченко О.М., Черніков О.О. Наукове обґрунтування розробки та ефективності застосування асоційованих вакцин // Науковий вісник НАУ, 2001. -№36. -C.43-49.