Штам бактерій pseudomonas fluorescens 211 для виробництва бактеріального добрива під нагідки лікарські

Винахід відноситься до мікробіологічних засобів підвищення урожаю небобових рослин і призначений для виготовлення бактеріального добрива під нагідки лікарські (Calendula officinalis L.). Метою винаходу є отримання нового штаму бактерій, що підвищує урожай суцвіть нагідок лікарських. Штам бактерій Pseudomonas fluorescens 211 виділений з ризосфери валеріани лікарської (Valeriana officinalis L.), що вирощувалися на дерново-слабопідзолистому супіщаному гр унті. Штам Pseudomonas fluorescens 211 зберігається в колекції корисних ґрунтових мікроорганізмів Інституту сільськогосподарської мікробіології УААН, якій, наказом Кабінету Міністрів України присвоєно статус національного надбання (розпорядження №472-Р від 19.08.2002р.). Штам бактерій Pseudomonas fluorescens 211 ідентифікований за визначником Берджі [1]. Культурально-морфологічні ознаки штаму Pseudomonas fluorescens 211. Штам Pseudomonas fluorescens 211 відрізняється широким спектром використання джерел вуглецю і росте на середовищі з гліцерином і глутаматом натрію, Доберейнер, Федорова-Калінінської, картопляному агарі, МП А. На твердих середовищах колонії округлі діаметром 3,0-6,0мм. Мають жовтуватий пігмент, поверхня гладка. На картопляному агарі з додаванням 2,5-2,0% янтарної кислоти, утворюють слиз полісахаридної природи. На діагностичному середовищі з гліцерином і глутаматом натрію виділяють жовто-зелений флуоресціюючий пігмент, що дифундує у середовище. Клітини мають форму прямих або злегка зігнутих паличок. Рухаються за рахунок декількох полярних джгутиків. Спор не утворюють. Розміри клітин 0,5-1,0х1,5-5,0мкм. Бактерії Pseudomonas fluorescens 211 грамнегативні. Фізіолого-біохімічні ознаки штаму Pseudomonas fluorescens 211. Аероби, але здатні рости в мікроаерофільних умовах на напіврідкому середовищі Доберейнер та рідкому Федорова-Калінінської. Можуть рости при +4°С, проте оптимальною є температура в межах +25...+30°С. Оптимум рН 6,0-7,5. Відношення до джерел вуглецю: добре засвоює глюкозу, цукрозу, маніт, трегалозу, 2-кетоглюконат, L-валін, В-аланін, L-аргінін. Крохмаль не гідролізує, желатину розріджує, молоко не згортає. Відношення до джерел азоту: використовує органічні і мінеральні форми азоту (нітрат). Фіксує атмосферний азот. Нітрогеназна активність на напіврідкому середовищі Доберейнер - 24нмоль/посудину/год. Зберігається культура при +2...+4°С на середовищі з гліцерином або картопляному агарі з 2,0% янтарної кислоти. Періодичність пересівів - 1 раз у 3-6 місяців. Ознаки штаму стійкі. Штам не патогенний. Приклади конкретного використання препарату на основі штаму Pseudomonas fluorescens 211. Приклад 1. В лабораторних умовах вивчали вплив бактерій на проростання насіння нагідок лікарських. Насіння замочували в культуральній рідині на 3-4 години і перекладали в чашки Петрі зі зволоженим фільтрувальним папером. Контролем слугувало насіння, зволожене такою ж кількістю води. Пророщували насіння протягом 8 діб при температурі 24°С. Визначали енергію проростання, схожість та масу проростків на восьму добу. Повторність досліду шестикратна. Як свідчать дані таблиці 1, при інокуляції насіння нагідок штамом Pseudomonas fluorescens 211 підвищувалася енергія проростання на 36%, схожість - на 26%, а маса проростків - на 11,3% в порівнянні з контролем. Таблиця 1 Вплив інокуляції на проростання насіння нагідок лікарських Варіант Енергія проростання, % Без інокуляції (контроль) Pseudomonas fluorescens 211 Схожість, % 19,5 25,6 63,3 75,0 Маса 100 проростків на 8 добу, г 2,93 3,26 Приклад 2. В умовах польового досліду визначали активність азотфіксації в кореневій зоні рослин нагідок у фазу цвітіння при інокуляції штамом Pseudomonas fluorescens 211. Передпосівну обробку насіння проводили з розрахунку 0,61,0млн бактеріальних клітин на одну насінину. Контролем слугували неінокульовані рослини. Одержані результати наведені в таблиці 2. Таблиця 2 Вплив інокуляції Pseudomonas fluorescens 211 на активність азотфіксації в кореневій зоні нагідок лікарських, нмоль С2Н4/кг грунту/год Варіант Без інокуляції (контроль) Pseudomonas fluorescens 211 Фаза цвітіння 1,84±0,28 2,25+0,31 Дані, представлені в таблиці 2, свідчать про підвищення активності фіксації атмосферного азоту в кореневій зоні нагідок лікарських, інокульованих штамом Pseudomonas fluorescens 211 на 22%. Приклад 3. В умовах польового досліду було вивчено вплив інокуляції штамом Pseudomonas fluorescens 211 на урожай суцвіть нагідок лікарських в порівнянні зі штамом Agrobacterium radiobacter 204 - біоагентом препарату діазофіту [2]. Суцвіття нагідок збирали 11 разів з інтервалом 4-5 днів. Найвищий пік урожаю відзначався при п'ятому збиранні квіткових корзинок, а достовірна прибавка сировини спостерігалася протягом 7 зборів (таблиця 3). Вплив інокуляції штамом Pseudomonas fluorescens 211 на урожай нагідок лікарських Таблиця 3 Маса суцвіть Варіант Контроль Agrobacterium radiobacter 204 Pseudomonas fluorescens 211 НІРо5 П'ятий збір 10,07 кг/га % 1007,6 100,0 1139,8 113,1 1240,6 123,1 145,7 За сім зборів 22.06-18.07 кг/га 3623,8 3912,5 4198,3 % 100,0 108,0 115,2 266,5 Всього за період збирання 22.06-8.08 кг/га % 5965,8 100,0 6043,6 101,3 6482,8 108,7 242,6 Одержані результати вказують на те, що штам Pseudomonas fluorescens 211 сприяє збільшенню урожаю суцвіть нагідок лікарських в цілому на 8,7%, проте більш інтенсивне утворення квіткових корзинок спостерігається на початкових етапах збирання лікарської сировини в порівнянні з варіантом без інокуляції. Отже новий штам Pseudomonas fluorescens 211 стимулює проростання насіння нагідок лікарських, сприяє активізації процесу азотфіксації в кореневій зоні та підвищує урожай суцвіть даної культури. Література: 1. Определитель бактерий Берджи. В 2-х т. T.1. Под ред. Дж. Хо улта, Н. Крига, П. Снита и др. - М.: Мир, 1997.-432с. 2. А.С. 1621433 СССР, МКИ С05F11/08, С 12 N1/20. Штамм бактерий Agrobacterium radiobacter 204 для производства бактериального удобрения под рис и пшеницу./Н.К. Шерстобоев, А.В. Хотянович, В.Ф. Патыка (СССР) - №4487281, - Заявлено 28.09.88. Зарегестриров. 15.09.90.