Спосіб деструкції ангіолітів

Спосіб деструкції ангіолітів шляхом проведення демінералізації ангіолітів, який відрізняється тим, що як засіб декальцинації використовують попередньо виділені із кісткової тканини остеокласти. редньо виділені із кісткової тканини остеокласти. Між сукупністю основних ознак способу і технічним результатом, який може бути досягнутий, проявляється наступний причинно-наслідковий зв'язок: використанням для деструкції' мінеральних структур остеокластів забезпечують деструкцію ангіолітів, причому використовуються остеокласта, які попередньо виділяють із кісткової тканини для взаємодії остеокластів з ангіолітами. Запропонований спосіб виконують наступним чином. Виділення ангіолітів здійснюють із аорти та артерій померлих людей. Ангіоліти відділяють від м'яких тканин судин, відмивають в проточній холодній воді, потім висушують. Виділення остеокластів здійснюють таким чином. Фрагменти губчастої речовини кістки, що виділені разом з червоним кістковим мозгом, піддають наступній обробці. Губчасту речовину кістки спільно з червоним кістковим мозком загальною масою 6-8 грам розтирають в порцеляновій ступці, культивують у живильному середовищі, для чого фрагменти, розмірами в середньому 5х5мм, поміщають в пластикові пробірки, куди вносять живильне середовище наступного складу: середовище RPMJ 1640+10мл декомплементованої сироватки людини АВ (IV), антибіотики - 1млн Од пеніциліну натрієвої солі +1г стрептоміцину, що розчинені в ЮОмл 0,15М стерильного розчину NaCI, а для відділення кісткової тканини від червого кісткового мозку в живильне середовище вносять фермент трипсин із розрахунку 1мг на Юмл 0,15М NaCI. Кісткові фрагменти інкубують в термостаті протягом 1 доби при t=37"C, потім надосад О CM ю со О) 7352 при t=37°C, потім надосад відкидувають центриральне середовище вищевказаного складу, з дофугуванням при 1500об/хвил (Юхвил). Процедуру данням 1% розчину кальцію хлориду. Контроль за повторюють тричі, кісткову тканину промивають в фактом переважання іонів кальцію виконують за 0,5М NaCI. допомогою рекальцифікації плазми - розчин ЕДТА рекальцифікацію плазми не виконує. Виділення остеокластів здійснюють наступним чином. Для ідентифікації остеокластів клітини забарвлювують 1% нейтральним червоним за РомановКісткові фрагменти культивувують в живильським-Гімзе. В майбутньому ангіоліти, розмірами в ному середовищі - RPMI, антибіотики, декомплесередньому ЗхЗмм культивують в пластиковому ментована сироватка людини з доданням 1 % розпосуду разом з остеокластам. Використовують чину ети-лендіємінтетраоцтової кислоти - ЕДТА. живильне середовище - RPMI. 1640 + декомплеПісля чого, пробірки з кістковими фрагментами ментована сироватка людини АВ IV, антибіотики. центрифугують в пластикових пробірках при Час інкубацій - ЗО діб. Періодично виконують заміЮООоб/хвил протягом 5 хвилин для осадження не ну середовища. Після вказаного часу, фрагменти розчинених дрібних кісткових фрагментів. Надосад анполітів витягувують, ретельно промивають в відбирають в окрему пробірку. Потім до осаду знодистильованій воді, висушують, зважувують на ву додають середовище, пробірки струшують і торсійних вагах. центрифугують, отримують надосад. Зібраний надосад переносять в сіліконовані Оскільки висушені ангіоліти зважували до їх або пластикові пробірки, клітини осаджують ценкультивування з остеокластами і після, то обчистрифугуванням. Процедуру повторюють тричі. люють відсоток втрати маси, речовини, який стаПотім, для нейтралізації дії розчину етилендіаминновив 35,6±4,5%