Спосіб прогнозування виникнення метастазів у хворих на рак гортані

Корисна модель відноситься до медицини, а саме до ЛОР-онкології і може бути використана для прогнозу виникненння метастазів у хворих на рак гортані. Відомі способи прогнозування виникнення метастазів раку легенів, молочної, підшлункової залоз, кишечника за допомогою біохімічних показників -рівня цистеїнових протеїназ (ЦП) або їх інгібіторів, які визначались імунохімічними методами [1-5]. Недоліком цих досліджень є використання для прогнозування виникнення метастазів або рецидивів онкозахворювань окремих компонентів системи цих протеїназ, вміст самих цистеїнових ферментів або їх інгібіторів. Крім того, в роботах застосовували імуноферментні методи аналізу, які дозволяють визначати лише рівень білка-антигену ЦП, який не завжди відповідає його ензиматичній активності. Найбільш близьким до корисної моделі, що заявляється, є вибраний за прототип спосіб прогнозування виникнення метастазів, який описаний Strojan P. et al [6]. Суть цього способу полягає в аналізі зв'язку між вмістом інгібітора цистеїнових протеїназ - цистатину С і прогнозом захворювання на рак голови і пой. Низький рівень цього білка виявляли в біоптатах ракових пухлин хворих з поганим прогнозом (виникненням метастазів, скороченням терміну виживаємості) і навпаки більш високі величини цього показника були у хворих, у котрих спостерігали ремісію захворювання. Недоліком даного способу є те, що за рівнем тільки одного біохімічного інгредієнга (інгібітора) не можна судити про протеолітичний потенціал системи цистеїнові протеїнази - інгібітори в ракових клітинах, який відіграє важливу роль у виникненні метастазів і рецидивів захворювання. В основі корисної моделі поставлене завдання: за рахунок визначення додаткових біохімічних показників підвищити інформативність способу, що дозволить виявити групи ризику хворих, у яких у віддаленому післяопераційному періоді можуть виникнути метастази, що важливо для вибору оптимальної тактики лікування. Поставлене завдання вирішується тим, що в способі прогнозування виникнення метастазів у хворих на рак гортані шляхом визначення вмісту інгібіторів цистеїнових протеїназ (ІЦП) в первинних пухлинах згідно корисної моделі, додатково визначається активність цистеїнових протеїназ (ЦП) при цьому розраховується коефіцієнт співвідношення (КС) між активністю ЦП та вмістом їх інгібіторів, і при значенні КС=26ум.од і вище судять про можливість виникнення метастазів у хворих на рак гортані. Спосіб здійснюється таким чином. Об'єктом дослідження були ракові тканини гортані, які одержували під час операції, відмивали від крові 0,9%-им розчином хлориду нагрію, зважували, подрібнювали і розтирали у фарфоровій ступці до гомогенної маси, поступово додаючи 0,25%-ий розчин тритону Х-100 у 0,9%-ому розчині хлориду натрію із розрахунку 1:9 (маса гомогенату / розчин). Одержані гомогенати заморожували в поліетиленових пробірках, втримували в холодильнику 18 годин при -10°С, після розморожування при температурі 37°С їх центрифугували протягом 20хв при 6000об/хв. Надосадову рідину використовували для біохімічних досліджень. Активність цистеїнових протеїназ (ЦП) визначали за методом [7] з використанням хромогенного субстрату: Suc-Gl y-Leu-Cys(Benz)-p-nitroanilide і виражали в нмоль пара-нітроаніліну в розрахунку на 1мг білка ракової тканини за 1год. Білок визначали за методом Lowry і співр. [8]. Вміст інгібіторів цистеїнових протеїназ (ІЦП) в ракових пухлинах визначали за їх здатністю гальмувати активність папаїну і виражали в мкг інактивованого папаїну 1мг білка тканини. Розраховували коефіцієнт співвідношення (КС) між активністю ЦП та вмістом їх інгібіторів. У хворих на рак гортані, у яких він дорівнював або перевищував величину 26ум.од. через 1-2 роки виникали метастази. При значенні коефіцієнта КС=7,7ум.од. і нижче у хворих клінічно визначали ремісію захворювання. Наводимо приклади біохімічних величин при різному прогнозі перебігу захворювання на рак гортані. 1-ий приклад: Хворий Пількевич С.В. 68р., історія хвороби №2821. Поступив в ЛОР-відділ Інституту отоларингології 08.07.2003р. діагностований рак гортані, IV стадії (T4N0 Mo)-. плоскоклітинний нероговіючий. Активність цистеїнових протеїназ та їх інгібіторів в первинній раковій пухлині дорівнювали відповідно 15,8нмоль/годмг білка і 0,6мкг/мг білка. Коефіцієнт ЦП/інгібітори становив 26,3ум.од. Через 1 рік після оперативного видалення ракової пухлини відмічали виникнення метастазів. 2-ий приклад: Хворий Клімчук П.А., історія хвороби №1846. Поступив в стаціонар Інституту отоларингології ім.проф. О.С. Коломійченка АМН України 14.04.2003р. Діагностований рак гортані серединно-вестибулярної локалізації, ІІІ-я стадія захворювання (T3N0M0), плоскоклітинний роговіючий. Прооперований 17.04.2003., взяті зразки ракової пухлини для біохімічних досліджень ЦП і їх інгібіторів. Активність цистеїнових протеїназ становила 3,9нмоль пара-нітроаніліну/годмг білка; вміст інгібіторів - 1,0мкг/мг білка. Коефіцієнт ЦП інгібітори дорівнював 3,9ум.од. при післяопераційному обстеженні хворого через 1 рік спостерігали ремісію захворювання. Таким чином, запропонований спосіб дозволяє прогнозувати виникнення метастазів і має важливе значення для визначення тактики лікування хворих в післяопераційному періоді. Література. 1. Thomssen С, Schmitt M, Goretzki L. et al. Prognostic value of cysteine proteases cathepsin В and cathepsin L in human breast cancer // Clin. Cancer Res.- 1995. - Vol.1, №7. - P.741-746 2. Ebert E., Werle B, Julke B. et al. Expression of cysteine protease inhibitors stefin A, stefin B and cystatic С in human lung tumour tissue // Ad v. Exp. Med. Biol. - 1997. - Vol.421. - P.259-265 3. Lahl Т.Т., Kos J. Cysteine proteinases in cancer progression and their clinical relevance of prognosis // J. Blol. Chem - 1998. - Vol.378, №2. - P.125-130. 4. Werle B, Lotterle H, Schanzenbacher U, Lah T.T et al. Immunochemical analysis of cathepsin B in lung tumours: and independent prognostic factor for squamous cell carcinoma patients // Br. J. Cancer. - 1999. Vol.81, №3. - P.510-519. 5. Podgorski I. and Sloane B.F. Cathepsin B and its role(s) in cancer progression // Biochem. Soc. Symp. 2003. - Vol.70. - P.263-276. 6. Strojen P., Oblack I., Svetic B et al. Cysteine proteinase inhibitor cystatin С in squamous cell cancinoma of the head and neck: relation to prognosis // Brit. J. Cancer.- 2004. - Vol.90, №10. - P.1961-1968. 7. Fucal L, Kasafirek E. Sensitive assay of cysteine proteanases using new peptide p-nirtoanilides // Biotechnol. Appl. Biochem. - 1988. - Vol.10. - P.473-475. 8. Lowry O.V, Rosebrough N.J. -, Farr A.Z., Randall K. Protein measurement with Folin phenol reagent // J. Biol. Chem. - 1951, - Vol.193, №1. - P.265-276.