Агоністичний dr5-зв’язувальний поліпептид

Реферат: Винахід належить до виділеного поліпептиду, що містить щонайменше один мономер одиничного варіабельного домену, який специфічно зв'язується з DR5. UA 106900 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 Передумови створення винаходу Пов'язаний з фактором некрозу пухлин (TNF) індукуючий апоптоз ліганд (TRAIL) індукує апоптоз у широкій різноманітності онкогенних і трансформованих клітинних ліній, виявляючи при цьому незначний вплив або взагалі не виявляючи впливу на здоровіші клітини. Ідентифіковано щонайменше п'ять рецепторів TRAIL, з яких два, а саме DR4 (рецептор смерті 4, TRAIL-R1) і DR5 (рецептор смерті 5, TRAIL-R2; KILLER або TRICK 2), мають здатність трансдуціювати сигнал апоптозу, а три інші (TRAIL-R3, TRAIL-R4 і розчинний OPG) служать як рецептори-«пастки", що блокують опосередковуваний TRAIL апоптоз (див., наприклад, Ozoren і El-Deiry, Sem. Cancer Biol, 13, 2003, с. 135; Yagita та ін., Cancer Sci., 95(10), 2004, с. 777). Встановлено, що TRAIL або Apo2L являє собою цитотоксичний ліганд, що складається з 281 амінокислоти, інтегрований у цитоплазматичну мембрану, C-кінець якого перебуває на позаклітинній поверхні (ліганд типу II) клітин. Встановлено, що в невеликих кількостях може бути присутнім також розчинний ліганд TRAIL. TRAIL утворює гомотримерну молекулу, яка зв'язується з відповідними рецепторами, ініціюючи каскад сигналів. Зв'язування ліганда TRAIL з рецепторами DR4 або DR5 ініціює шлях загибелі клітин, який викликається зовнішніми сигналами, що призводить до утворення сигнальних комплексів, що індукують загибель (DISВ), які містять адаптор FADD (Fas-активуючий DD (домен смерті)) і прокаспазу 8 або прокаспазу 10. Взаємодії з DISC і активація каскаду, що лежить нижче, аналогічні FAS, вони приводять до активації шляхів NFκB і Jun-N-кінцевої кінази (JNK) (див., наприклад, Mongkolsapaya та ін., Nat. Struct. Biol., 6(11), 1999, с. 1048; Cha та ін., J. Biol. Chem., 275(40), 2000, с. 31171). Зв'язування TRAIL з DR4 або DR5 приводить також до розщеплення BID (білок, що взаємодіє з Bcl-2 (В-клітинна лімфома-2)) (за допомогою каспази 8 або 10), активації мітохондрій і, як наслідок, активації внутрішнього шляху апоптозу. Здатність ліганда TRAIL індукувати апоптоз головним чином пухлинних клітин, виявляючи незначний вплив на здоровіші клітини, робить його потенційно цінним кандидатом для застосування в протираковій терапії. Однак встановлено, що розчинний TRAIL індукує апоптоз здоровіших людських гепатоцитів in vitro, що висуває на перший план проблеми, пов'язані з потенційною токсичністю (див., наприклад, Jo та ін., Nat Med., 6(5), 2000, с. 564). Найбільш перспективною мішенню протиракової терапії є DR5. Оскільки у випадку DR5 для індукції апоптозу здорових гепатоцитів потрібно кілька рецепторів, то створення агоністів конкретного DR5, відповідального за індукцію апоптозу, очевидно, може дозволити уникнути зазначеної токсичності відносно здорових клітин зі збереженням здатності знищувати пухлинні клітини. Агоністи DR5, що представляють собою пептиди і антитіла, застосовували для індукції апоптозу клітин, що експресують DR5 (див., наприклад, Li та ін., J. Mol. Biol., 361, 2006, сс. 522536; Kajiwara та ін., Biochim. Biophys. Acta, 1699, 2004, сс. 131-137; Yang та ін., Cancer Cell, 5, 2004, сс. 501-512). Агоністи DR5 мають потенціал, що дозволяє застосовувати їх у протираковій терапії відносно широкого спектра видів раку. Наприклад, лексатумумаб, моноклональне антитіло до DR5, індукує експресію DR5 і підсилює апоптоз на мишачій моделі нирковоклітинної карциноми (Zhang та ін., Cancer Lett. 251(1), 2007, сс. 146-157). Описані також інші агоністичні моноклональні антитіла до DR5 або одноланцюговий Fv-фрагмент до DR5, і їх тумороцидна активність (див., наприклад, Takeda та ін., Journal Exp. Medicine, 199, 2004, сс. 437-448; Guo та ін., J. Biol. Chem., 280, 2005, сс. 41940-41952; Motoki та ін., Clin. Cancer Res., 11(8), 2005, сс. 3126-3135 і Ichikawa та ін., Nature Medicine, 7, 2001, сс. 954-960, Chuntharapai та ін., J. Immunol., 166(8), 2001, сс. 4891-4898, Shi та ін., Cancer Res., 66(24), 2006, сс. 11946-11953). Створені різні специфічні у відношенні DR5 антитіла, призначені для застосування в клінічних умовах, але жодне з них поки не схвалене. Імовірно, для активації DR5 потрібні антитіла, що мають безліч перехресних зв'язків, і при цьому зберігається проблема, пов'язана із введенням цих антитіл у місце дії для досягнення терапевтичних впливів, що відтворюються. Таким чином, існує потреба в поліпшених специфічних агоністів DR5 для лікування відповідних захворювань. Короткий виклад суті винаходу Цей винахід відноситься до одного або декількох "NB-агентів (NB – скорочене позначення продукту фірми Ablynx NV Nanobody™)», що містять амінокислотні послідовності, мішенню яких є рецептор смерті 5 (позначений у цьому описі як "DR5"), представлених у цьому описі, а також до специфічних сполук або конструкцій і насамперед білків і поліпептидів, які містять або практично складаються з однієї або декількох зазначених амінокислотних послідовностей (позначені також як "сполуки" і "поліпептиди" відповідно), і їхніх фрагментів, а також нуклеїнових кислот, які кодують зазначені конструкції. У цьому описі представлені мономерні та мультимерні варіанти специфічних у відношенні DR5 конструкцій, запропонованих у винаході. Представлені також гуманізовані та гумановані варіанти NB-агентів. Відповідно до одного з варіантів 1 UA 106900 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 здійснення винаходу фармацевтично прийнятні NB-агенти, запропоновані у винаході, діють як агоністи, що зв'язуються з TRAIL рецепторів DR5. Під обсяг винаходу підпадають також нуклеїнові кислоти, що кодують зазначені амінокислотні послідовності та поліпептиди; способи одержання зазначених амінокислотних послідовностей і поліпептидів; клітини-хазяї, що експресують або що мають здатність експресувати зазначені амінокислотні послідовності або поліпептиди; композиції, і насамперед фармацевтичні композиції, які містять зазначені амінокислотні послідовності, поліпептиди, нуклеїнові кислоти і/або клітини-хазяї; і варіанти застосування зазначених амінокислотних послідовностей або поліпептидів, нуклеїнових кислот, клітин-хазяїв і/або композицій, зокрема, для профілактичних, терапевтичних або діагностичних цілей, наприклад для зазначених у цьому описі цілей. Агоністи, що зв'язуються з TRAIL рецепторів DR5, які позначені в цьому описі як NB-агенти, можуть знайти застосування в терапії широкого спектра захворювань, асоційованих з DR5. Таким чином, запропоновані у винаході NB-агенти можна застосовувати для лікування проліферативних захворювань, включаючи, наприклад, різні види раку, такі як щільні пухлини, первинні та метастатичні види раку, такі, наприклад, як нирковоклітинна карцинома та різні види раку легені (наприклад, дрібноклітинний рак легені "SCLC" і недрібноклітинний рак легені "NSCLC"), підшлункової залози, гематопоетичні злоякісні пухлини, гліома, астроцитома, мезотеліома, різні види колоректального раку, рак передміхурової залози, остеосаркома, меланома, лімфома ((включаючи, але не обмежуючись тільки нею) лімфому Беркітта), рак молочної залози, рак ендометрію, рак печінки, рак шлунку, рак шкіри, рак яєчника і різні види плоскоклітинного раку будь-якого органа ((включаючи, але не обмежуючись тільки ними) плоскоклітинний рак легені, голови і шиї, молочної залози, щитовидної залози, шийки матки, шкіри і/або стравоходу); а також рідинні пухлини, такі, наприклад, як лейкози (див., наприклад, Uno та ін., Nature, Medicine, 12(6), 2006, сс. 693-698), включаючи насамперед Т-клітинний лейкоз, такий як гострий Т-клітинний лейкоз (T-ALL), гострий B-клітинний лейкоз (B-ALL), хронічний мієлогенний лейкоз (CML), гострий мієлогенний лейкоз (AML), мієлома з плазматичних клітин і множинна мієлома (MM). Зазначені NB-агенти, запропоновані у винаході, можна застосовувати також для лікування не пов'язаних з раком показань, включаючи запальне і аутоімуне захворювання, таке як системний червоний вовчак, хвороба Хашімото, ревматоїдний артрит, реакція "трансплантат- проти-хазяїна", синдром Шегрена, перніциозна анемія, хвороба Адісона, склеродерма, синдром Гудпасчера, хвороба Крона, аутоімуна гемолітична анемія, стерильність, важка псевдопаралітична міастенія, розсіяний склероз, Базедова хвороба, тромботична тромбоцитопенія, тромбоцитопенічна пурпура, інсулінозалежний цукровий діабет, алергія; астма, атопічне захворювання; атеросклероз; міокардит; кардіоміопатія; гломерулонефрит і гіпопластична анемія. Мішенню амінокислотних послідовностей і поліпептидів, представлених у цьому описі, може бути кожний з DR5, або вони можуть мати специфічність у відношенні кожного з DR5. Відповідно до одного з об'єктів винаходу, що не обмежують його обсяг, мішенню амінокислотних послідовностей і поліпептидів, представлених у цьому описі, є DR5. В одному з варіантів здійснення винаходу NB-агент специфічно зв'язується з позаклітинним доменом DR5. Поліпептиди та композиції, запропоновані в цьому винаході, як правило, можна застосовувати для модуляції DR5. Відповідно до одного з варіантів здійснення винаходу NBагент може запускати, активувати і/або підвищувати або підсилювати передачу сигналів, опосередковувану DR5. Відповідно до одного з варіантів здійснення винаходу агоністичний вплив NB-агента на DR5 може модулювати і, зокрема, запускати або підсилювати біологічні механізми, відповіді та впливи, асоційовані з DR5, з передачею сигналів і/або шляхами, у яких бере участь DR5. Відповідно до одного з варіантів здійснення винаходу сполуки, поліпептиди і композиції, представлені в цьому описі, індукують, запускають, підвищують або підсилюють апоптоз певних клітин або в певних тканинах. Відповідно до одного з варіантів здійснення винаходу сполуки, поліпептиди і композиції, представлені в цьому описі, мають здатність зв'язуватися з DR5 на клітинній поверхні і, зокрема, зв'язуватися з DR5 таким чином, що передача сигналів, опосередковувана DR5, індукується, запускається, підвищується або підсилюється. Відповідно до одного з варіантів здійснення винаходу поліпептиди і композиції, представлені в цьому описі, можуть представляти собою такі поліпептиди і композиції, які мають здатність зв'язуватися з DR5 таким чином, що в клітині, у якій присутній DR5, запускається або індукується апоптоз. Відповідно до одного з варіантів здійснення винаходу NB-сполуки, (одновалентні або багатовалентні) поліпептиди і композиції, представлені в цьому описі, можуть зв'язуватися із сайтом зв'язування TRAIL на DR5. Відповідно до одного з варіантів здійснення винаходу NB 2 UA 106900 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 агенти конкурують з TRAIL за зв'язування з DR5. Відповідно до одного з варіантів здійснення винаходу зв'язування зазначених сполук і поліпептидів з DR5 індукує, запускає, збільшує або підсилює передачу сигналів, опосередковувану DR5, і, зокрема, запускає або індукує апоптоз клітин, на яких присутній DR5. Інші об'єкти, варіанти здійснення винаходу, переваги і шляхи прикладення винаходу повинні стати очевидними з представленого нижче докладного опису винаходу. Короткий опис креслень На кресленнях показано: на фіг. 1 – графічне зображення результатів експерименту, проведеного методом ELISA, що демонструє зв'язування багатовалентних анти-DR5 NB-агентів з представниками сімейства TNF-рецепторів; на фіг. 2 – графічне зображення результатів дослідження фармакодинамічних характеристик (ФД) чотиривалентних анти-DR5 NB-агентів у пухлинній тканині (активація каспази 3/7); на фіг. 3 – графічне зображення даних про ефективність in vivo чотиривалентних і п'ятивалентних анти-DR5 NB-агентів на моделі пухлин Colo205; на фіг. 4A і 4Б - графічні зображення інгібуючої протипухлинної активності тетрамера 11H6 на моделі пухлини підшлункової залози MiaPaCa, вирощеної в NSG-хазяях (тобто хазяях з дефіцитом макрофагів/Nk-клітин) або за відсутності (фіг. 4A) або в присутності (фіг. 4Б) інгібітора CSF-1R; на фіг. 5 – дані, що демонструють здатність тетрамера 11H6 викликати регрес отриманої з організму пацієнта пухлини підшлункової залози TPAN1-IFA, нечутливої до LCR211, тобто до мишачого антитіла, специфічного у відношенні DR5; на фіг. 6A, 6Б и 6В - графічні зображення, що демонструють, що збільшення кількості субодиниць в NB-конструкції корелює з підвищеною ефективністю і активністю (силою дії) (фіг. 6A) тримерів, тетрамерів і пентамерів 11H6 при вивченні на клітинах лінії Colo205; (фіг. 6Б) тетрамерів і пентамерів 4E6 і 11H6 при вивченні на клітинах лінії Colo205; і (фіг. 6В) тетрамерів і пентамерів 4E6 і 11H6 при вивченні на клітинах лінії H226. Докладний опис винаходу NB-агенти, представлені в цьому описі, а саме, сполуки, поліпептиди (одновалентні або багатовалентні) і композиції, зв'язуються з рецептором смерті 5 ("DR5"). Відповідно до одного з варіантів здійснення винаходу зв'язування зазначених сполук і поліпептидів з DR5 індукує, запускає, збільшує або підсилює передачу сигналів, опосередковувану DR5, і, зокрема, запускає або індукує апоптоз клітин, на яких присутній DR5. У контексті цього опису поняття "NB-агент", запропонований у винаході, відноситься до поліпептиду, який містить щонайменше одну послідовність CDR3, що специфічно зв'язується в поліпептидом DR5, де зазначене зв'язування виявляє агоністичну дію на активність DR5, або нуклеотиду, що кодує зазначений поліпептид. Відповідно до одного з варіантів здійснення винаходу NB-агенти, запропоновані у винаході, являють собою поліпептиди, які мають загальну структуру, характерну для VH-домена. Відповідно до одного з варіантів здійснення винаходу NBагенти, запропоновані у винаході, являють собою поліпептиди, які мають загальну структуру, характерну для VHH-домена. Відповідно до одного з варіантів здійснення винаходу NB-агенти, запропоновані у винаході, являють собою поліпептиди, які мають загальну структуру, характерну для VL-домена. Відповідно до одного з варіантів здійснення винаходу NB-агенти, запропоновані у винаході, містять крім послідовності CDR3 щонайменше одну послідовність CDR1 і щонайменше одну послідовність CDR2. Відповідно до одного з варіантів здійснення винаходу NB-агенти, запропоновані у винаході, містять щонайменше один одновалентний поліпептид, що має структуру FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4, як зазначено нижче у формулі 1. Відповідно до одного з варіантів здійснення винаходу NB-агенти, запропоновані у винаході, являють собою мономерні композиції. Відповідно до одного з варіантів здійснення винаходу NB-агенти, запропоновані у винаході, являють собою мультимерні композиції. Відповідно до одного з варіантів здійснення винаходу NB-агенти, запропоновані у винаході, являють собою одновалентні композиції. Відповідно до одного з варіантів здійснення винаходу NB-агенти, запропоновані у винаході, являють собою багатовалентні композиції. Відповідно до одного з варіантів здійснення винаходу каркасні ділянки містять залишки, які забезпечують оптимізацію послідовності з метою застосування на людях. Інші особливості NB-агентів, запропонованих у винаході, описані нижче. У той час як поняття "NB-агент" застосовують у широкому значенні, тобто воно охоплює усі композиції, запропоновані у винаході, поняття "послідовність NB" або в іншому варіанті "NBконструкція" у контексті цього опису відносяться до конкретних варіантів поліпептидів, 3 UA 106900 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 послідовності яких представлені в цьому описі в SEQ ID NO: 1-72, 87-88 і 103-104, і до нуклеотидів, які їх кодують, включаючи представлені в цьому описі конкретно в SEQ ID NO: 9699 і ті послідовності, які кодують ті ж поліпептидні послідовності, що й нуклеотиди, представлені в SEQ ID NO: 96-99, але які відрізняються від них у результаті виродженості генетичного коду. NB-агенти, запропоновані у винаході Відповідно до одного з варіантів здійснення винаходу NB-агент вибирають із групи, що включає 11D1, 11H6, 10F1, 7A12 і 4E6 або їх варіанти. Відповідно до одного з варіантів здійснення винаходу NB-агент являє собою варіант, послідовність якого оптимізована з метою застосування на людях, наприклад, гуманізована. Відповідно до одного з варіантів здійснення винаходу гуманізовані NB-агенти включають (але не обмежуючись тільки ними) групу, що включає 4E6hu і 11H6hu. Відповідно до одного з варіантів здійснення винаходу NB-агенти являють собою мономерний варіант зазначеної групи або його варіант. Відповідно до одного з варіантів здійснення винаходу NB-агент являє собою мультимерний варіант зазначеної групи або його варіант. Відповідно до одного з варіантів здійснення винаходу мультимерний варіант зазначеної групи є моноспецифічним або являє собою його варіант. Відповідно до одного з варіантів здійснення винаходу мультимерний варіант зазначеної групи є мультиспецифічним або являє собою його варіант. Відповідно до одного з варіантів здійснення винаходу декілька епітопів, що розпізнаються мультиспецифічним NB-агентом, являють собою різні епітопи DR5мішені або їх варіант. Відповідно до одного з варіантів здійснення винаходу декілька епітопів, що розпізнаються мультиспецифічним NB-агентом, являють собою щонайменше один епітоп DR5-мішені і щонайменше один епітоп мішені, відмінної від поліпептиду DR5, або його варіант. Відповідно до одного з варіантів здійснення винаходу NB-агент являє собою NB-агент, послідовність якого обрано з однієї або декількох послідовностей, представлених в SEQ ID NO: 1-22, 26-40, 87-88 і 103-104 або SEQ ID NO: 96-99, або його варіант. Конкретні приклади NBагентів 11D1, 11H6, 10F1, 7A12 і 4E6 або їх варіантів описані нижче і представлені в таблицях 14. Прикладами NB-агентів, запропонованих у винаході, є наступні конструкції поліпептидів NB і їх варіантів. Сімейство 4E6 Відповідно до одного з варіантів здійснення винаходу NB-агент являє собою 4E6конструкцію або її варіант. Відповідно до одного з варіантів здійснення винаходу 4E6конструкція являє собою мономер, який має послідовність, представлену в SEQ ID NO: 1, або її варіант. Відповідно до одного з варіантів здійснення винаходу 4E6-конструкція являє собою мономер, який має послідовність, представлену в SEQ ID NO: 26, або її варіант. Відповідно до одного з варіантів здійснення винаходу 4E6-конструкція являє собою мультимер, що містить два або більшу кількість функціонально зв'язаних мономерів, які мають послідовність, представлену в SEQ ID NO: 1, або її варіант. Відповідно до одного з варіантів здійснення винаходу 4E6конструкція являє собою мультимер, що містить два або більшу кількість функціонально зв'язаних мономерів, які мають послідовність, представлену в SEQ ID NO: 26, або її варіант. Відповідно до одного з варіантів здійснення винаходу 4E6-конструкція являє собою мультимер, що містить два або більшу кількість функціонально зв'язаних мономерів, які мають послідовності, представлені як в SEQ ID NO: 1, так і в SEQ ID NO: 26, або їх варіанти, де мономери можуть бути зв'язані в будь-якому порядку. Відповідно до одного з варіантів здійснення винаходу мультимерна 4E6-конструкція являє собою тример, тетрамер або пентамер, що складається з мономерів, які мають послідовність, представлену в SEQ ID NO: 1, або її варіант. Відповідно до одного з варіантів здійснення винаходу мультимерна 4E6-конструкція являє собою тример, тетрамер або пентамер, що складається з мономерів, які мають послідовність, представлену в SEQ ID NO: 26, або її варіант. Відповідно до одного з варіантів здійснення винаходу мультимерна 4E6-конструкція являє собою тример, тетрамер або пентамер, що включає комбінацію мономерів, які мають послідовності, представлені як в SEQ ID NO: 1, так і в SEQ ID NO: 26, або їх варіанти, де мономери можуть бути зв'язані в будь-якому порядку. Відповідно до одного з варіантів здійснення винаходу 4E6-конструкція являє собою мультимер, який має послідовність, представлену в одній або декількох з SEQ ID NO: 6-8 і 27-29, або її варіант. Під обсяг винаходу підпадають також мультимери більш високого порядку, наприклад, мультимери, що містять 6 – 10 субодиниць. Відповідно до одного з варіантів здійснення винаходу 4E6-конструкція містить послідовність, представлену в SEQ ID NO: 64, або її варіант. Відповідно до одного з варіантів здійснення винаходу 4E6-конструкція містить послідовність, представлену в SEQ ID NO: 65, або її варіант. Відповідно до одного з варіантів здійснення винаходу 4E6-конструкція містить послідовність 4 UA 106900 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 CDR1, представлену в SEQ ID NO: 42, послідовність CDR2, представлену в SEQ ID NO: 52, і послідовність CDR3, представлену в одній або декількох з SEQ ID NO: 64 і/або SEQ ID NO: 65, або їх варіанти. Відповідно до одного з варіантів здійснення винаходу 4E6-конструкція являє собою гуманізовану або гумановану послідовність або її варіант. Відповідно до одного з варіантів здійснення винаходу 4E6-конструкція має послідовність, представлену в SEQ ID NO: 28, або її варіант. Відповідно до одного з варіантів здійснення винаходу 4E6-конструкція має послідовність, представлену в SEQ ID NO: 29, або її варіант. Відповідно до одного з варіантів здійснення винаходу 4E6-конструкція містить послідовність, представлену в SEQ ID NO: 35, 42, 46, 52, 57, 64 і 70 відповідно, або її варіант. Відповідно до одного з варіантів здійснення винаходу 4E6-конструкція містить послідовність, представлену в SEQ ID NO: 36, 42, 47, 52, 58, 65 і 71 відповідно, або її варіант. Відповідно до одного з варіантів здійснення винаходу NB-конструкція являє собою нуклеїнову кислоту, що кодує поліпептид 4E6, який має послідовність, представлену в SEQ ID NO: 1, або її варіанти, мультимери або фрагменти. Відповідно до одного з варіантів здійснення винаходу NB-конструкція являє собою нуклеїнову кислоту, що кодує поліпептид 4E6Hu, який має послідовність, представлену в SEQ ID NO: 26, або її варіанти, мультимери або фрагменти. Відповідно до одного з варіантів здійснення винаходу NB-конструкція являє собою нуклеїнову кислоту, яка кодує одну або декілька CDR-ділянок поліпептиду 4E6Hu, а саме SEQ ID NO: 42, 52 і 64 або їх варіанти. Відповідно до одного з варіантів здійснення винаходу NB-конструкція являє собою нуклеїнову кислоту, яка кодує одну або декілька CDR-ділянок поліпептиду 4E6, а саме SEQ ID NO: 42, 52 і 65 або їх варіанти. Відповідно до одного з варіантів здійснення винаходу NB-конструкція являє собою нуклеїнову кислоту, що кодує CDR3-ділянку, яка має послідовність, представлену в SEQ ID NO: 64, або її варіанти. Відповідно до одного з варіантів здійснення винаходу NB-конструкція являє собою нуклеїнову кислоту, що кодує CDR3-ділянку, яка має послідовність, представлену в SEQ ID NO: 65, або її варіанти. Сімейство 7A12 Відповідно до одного з варіантів здійснення винаходу NB-агент являє собою 7A12конструкцію або її варіант. Відповідно до одного з варіантів здійснення винаходу 7A12конструкція являє собою мономер, який має послідовність, представлену в SEQ ID NO: 2, або її варіант. Відповідно до одного з варіантів здійснення винаходу 7A12-конструкція являє собою мультимер, що містить два або більшу кількість функціонально зв'язаних мономерів, які мають послідовність, представлену в SEQ ID NO: 2, або її варіант. Відповідно до одного з варіантів здійснення винаходу мультимерна 7A12-конструкція являє собою тример, тетрамер або пентамер, що складається з мономерів, які мають послідовність, представлену в SEQ ID NO: 2, або її варіант. Відповідно до одного з варіантів здійснення винаходу 7A12-конструкція являє собою мультимер, послідовність якого представлена в будь-якій одній або декількох з SEQ ID NO: 9-11, або її варіант. Відповідно до одного з варіантів здійснення винаходу 7A12-конструкція містить послідовність, представлену в SEQ ID NO: 63. Відповідно до одного з варіантів здійснення винаходу 7A12-конструкція містить послідовність CDR1, представлену в SEQ ID NO: 41, послідовність CDR2, представлену в SEQ ID NO: 51, і послідовність CDR3, представлену в SEQ ID NO: 63, або їх варіанти. Відповідно до одного з варіантів здійснення винаходу 7A12конструкція являє собою гуманізовану або гумановану послідовність або її варіант. Відповідно до одного з варіантів здійснення винаходу 7A12- конструкція має послідовність, представлену в SEQ ID NO: 10, або її варіант. Відповідно до одного з варіантів здійснення винаходу 7A12конструкція має послідовність, представлену в SEQ ID NO: 11, або її варіант. Відповідно до одного з варіантів здійснення винаходу 7A12-конструкція містить послідовність, представлену в SEQ ID NO: 34, 41, 45, 51, 56, 63 і 69 відповідно, або її варіант. Під обсяг винаходу підпадають також мультимери більш високого порядку, наприклад, мультимери, що містять 6 – 10 субодиниць. Відповідно до одного з варіантів здійснення винаходу NB-конструкція являє собою нуклеїнову кислоту, що кодує поліпептид 7A12, який має послідовність, представлену в SEQ ID NO: 2, або її варіанти, мультимери або фрагменти. Відповідно до одного з варіантів здійснення винаходу NB-конструкція являє собою нуклеїнову кислоту, що кодує одну або декілька CDRділянок, які мають послідовності, представлені в SEQ ID NO: 41, 51 і 63, або їх варіанти. Відповідно до одного з варіантів здійснення винаходу NB-конструкція являє собою нуклеїнову кислоту, що кодує CDR3-ділянку, послідовність якої представлена в SEQ ID NO: 63, або її варіанти. Сімейство 10F1 Відповідно до одного з варіантів здійснення винаходу NB-агент являє собою 10F1конструкцію або її варіант. Відповідно до одного з варіантів здійснення винаходу 10F1 5 UA 106900 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 конструкція являє собою мономер, який має послідовність, представлену в SEQ ID NO: 3, або її варіант. Відповідно до одного з варіантів здійснення винаходу 10F1-конструкція являє собою мультимер, що містить два або більшу кількість функціонально зв'язаних мономерів, які мають послідовність, представлену в SEQ ID NO: 3, або її варіант. Відповідно до одного з варіантів здійснення винаходу мультимерна 10F1-конструкція являє собою тример, тетрамер або пентамер, що складається з мономерів, які мають послідовність, представлену в SEQ ID NO: 3, або її варіант. Відповідно до одного з варіантів здійснення винаходу 10F1-конструкція являє собою мультимер, послідовність якого представлена в будь-якій одній або декількох з SEQ ID NO: 12-16, або її варіант. Відповідно до одного з варіантів здійснення винаходу 10F1конструкція містить послідовність, представлену в SEQ ID NO: 68, або її варіант. Відповідно до одного з варіантів здійснення винаходу 10F1- конструкція містить послідовність CDR1, представлену в SEQ ID NO: 44, послідовність CDR2, представлену в SEQ ID NO: 55, і послідовність CDR3, представлену в SEQ ID NO: 68, або їх варіанти. Відповідно до одного з варіантів здійснення винаходу 10F1-конструкція являє собою гуманізовану або гумановану послідовність або її варіант. Відповідно до одного з варіантів здійснення винаходу 10F1конструкція містить послідовність, представлену в SEQ ID NO: 15, або її варіант. Відповідно до одного з варіантів здійснення винаходу 10F1-конструкція містить послідовність, представлену в SEQ ID NO: 16, або її варіант. Відповідно до одного з варіантів здійснення винаходу 10F1конструкція містить послідовність, представлену в SEQ ID NO: 34, 41, 45, 51, 56, 63 і 69 відповідно, або її варіант. Під обсяг винаходу підпадають також мультимери більш високого порядку, наприклад, мультимери, що містять 6 – 10 субодиниць. Відповідно до одного з варіантів здійснення винаходу NB-конструкція являє собою нуклеїнову кислоту, що кодує поліпептид 10F1, який має послідовність, представлену в SEQ ID NO: 3, або її варіанти, мультимери або фрагменти. Відповідно до одного з варіантів здійснення винаходу NB-конструкція являє собою нуклеїнову кислоту, що кодує одну або декілька CDRділянок, які мають послідовності, представлені в SEQ ID NO: 44, 55 і 68, або їх варіанти. Відповідно до одного з варіантів здійснення винаходу NB-конструкція являє собою нуклеїнову кислоту, що кодує CDR3-ділянку, послідовність якої представлена в SEQ ID NO: 68, або її варіанти. Сімейство 11D1 Відповідно до одного з варіантів здійснення винаходу NB-агент являє собою 11D1конструкцію або її варіант. Відповідно до одного з варіантів здійснення винаходу 11D1конструкція являє собою мономер, який має послідовність, представлену в SEQ ID NO: 4, або її варіант. Відповідно до одного з варіантів здійснення винаходу 11D1-конструкція являє собою мультимер, що містить два або більшу кількість функціонально зв'язаних мономерів, які мають послідовність, представлену в SEQ ID NO: 4, або її варіант. Відповідно до одного з варіантів здійснення винаходу мультимерна 11D1-конструкція являє собою тример, тетрамер або пентамер, що складається з мономерів, які мають послідовність, представлену в SEQ ID NO: 4, або її варіант. Відповідно до одного з варіантів здійснення винаходу 11D1-конструкція являє собою мультимер, послідовність якого представлена в будь-якій одній або декількох з SEQ ID NO: 17-19, або її варіант. Відповідно до одного з варіантів здійснення винаходу 11D1конструкція містить послідовність, представлену в SEQ ID NO: 67 або її варіант. Відповідно до одного з варіантів здійснення винаходу 11D1-конструкція містить послідовність CDR1, представлену в SEQ ID NO: 43, послідовність CDR2, представлену в SEQ ID NO: 54, і послідовність CDR3, представлену в SEQ ID NO: 67, або їх варіанти. Відповідно до одного з варіантів здійснення винаходу 11D1-конструкція являє собою гуманізовану або гумановану послідовність або її варіант. Відповідно до одного з варіантів здійснення винаходу 11D1конструкція містить послідовність, представлену в SEQ ID NO: 18, або її варіант. Відповідно до одного з варіантів здійснення винаходу 11D1-конструкція містить послідовність, представлену в SEQ ID NO: 19, або її варіант. Відповідно до одного з варіантів здійснення винаходу 11D1конструкція містить SEQ ID NO: 39, 43, 49, 54, 61, 67 і 71 відповідно або її варіант. Під обсяг винаходу підпадають також мультимери більш високого порядку, наприклад, мультимери, що містять 6 – 10 субодиниць. Відповідно до одного з варіантів здійснення винаходу NB-конструкція являє собою нуклеїнову кислоту, що кодує поліпептид 11D1, який має послідовність, представлену в SEQ ID NO: 4, або її варіанти, мультимери або фрагменти. Відповідно до одного з варіантів здійснення винаходу NB-конструкція являє собою нуклеїнову кислоту, що кодує одну або декілька CDRділянок, які мають послідовності, представлені в SEQ ID NO: 43, 54 і 67, або їх варіанти. Відповідно до одного з варіантів здійснення винаходу NB-конструкція являє собою нуклеїнову кислоту, що кодує CDR3-ділянку, послідовність якої представлена в SEQ ID NO: 67, або її 6 UA 106900 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 варіанти. Сімейство 11H6 Відповідно до одного з варіантів здійснення винаходу NB-агент являє собою 11H6конструкцію або її варіант. Відповідно до одного з варіантів здійснення винаходу 11H6конструкція являє собою мономер, який має послідовність, представлену в SEQ ID NO: 5, або її варіант. Відповідно до одного з варіантів здійснення винаходу 11H6-конструкція являє собою мономер, який має послідовність, представлену в SEQ ID NO: 30, або її варіант. Відповідно до одного з варіантів здійснення винаходу 11H6-конструкція являє собою мультимер, що містить два або більшу кількість функціонально зв'язаних мономерів, які мають послідовність, представлену в SEQ ID NO: 5, або її варіант. Відповідно до одного з варіантів здійснення винаходу 11H6-конструкція являє собою мультимер, що містить два або більшу кількість функціонально зв'язаних мономерів, які мають послідовність, представлену в SEQ ID NO: 30, або її варіант. Відповідно до одного з варіантів здійснення винаходу 11H6-конструкція являє собою мультимер, що містить два або більшу кількість функціонально зв'язаних мономерів, які мають послідовності, представлені як в SEQ ID NO: 5, так і в SEQ ID NO: 30, або її варіант (наприклад, SEQ ID NO: 88), де мономери можуть розташовуватися в будь-якому порядку. Під обсяг винаходу підпадають також мультимери більш високого порядку, наприклад, мультимери, що містять 6 – 10 субодиниць. Відповідно до одного з варіантів здійснення винаходу мультимерна 11H6-конструкція являє собою тример, тетрамер або пентамер, що складається з мономерів, які мають послідовність SEQ ID NO: 5, або її варіант. Відповідно до одного з варіантів здійснення винаходу мультимерна 11H6-конструкція являє собою тример, тетрамер або пентамер, що складається з мономерів, які мають послідовність SEQ ID NO: 30, або її варіант. Відповідно до одного з варіантів здійснення винаходу мультимерна 11H6-конструкція являє собою тример, тетрамер або пентамер, що складається з комбінації обох послідовностей SEQ ID NO: 5 і SEQ ID NO: 30, або її варіант, де мономери можуть розташовуватися в будь-якому порядку. Відповідно до одного з варіантів здійснення винаходу 11H6-конструкція являє собою мультимер, послідовність якого представлено в одній або декількох з SEQ ID NO: 20-22 і 31-33, або її варіант. Відповідно до одного з варіантів здійснення винаходу 11H 6-містить послідовність, представлену в SEQ ID NO: 66 або 83 або її варіант. Відповідно до одного з варіантів здійснення винаходу 11H6-конструкція містить послідовність CDR1, представлену в SEQ ID NO: 43, послідовність CDR2, представлену в SEQ ID NO: 53, і послідовність CDR3, представлену в SEQ ID NO: 66, або їх варіанти. Відповідно до одного з варіантів здійснення винаходу 11H6конструкція являє собою гуманізовану або гумановану послідовність або її варіант. Відповідно до одного з варіантів здійснення винаходу 11H6-конструкція має послідовність, представлену в SEQ ID NO: 31, або її варіант. Відповідно до одного з варіантів здійснення винаходу 11H6конструкція має послідовність, представлену в SEQ ID NO: 32, або її варіант. Відповідно до одного з варіантів здійснення винаходу 11H6-конструкція має послідовність, представлену в SEQ ID NO: 33, або її варіант. Відповідно до одного з варіантів здійснення винаходу 11H6конструкція містить SEQ ID NO: 37, 43, 48, 53, 59, 66 і 70 відповідно або її варіант. Відповідно до одного з варіантів здійснення винаходу 11H6-конструкція містить SEQ ID NO: 38, 43, 48, 53, 60, 66 і 71 відповідно або її варіант. Відповідно до одного з варіантів здійснення винаходу NB-конструкція являє собою нуклеїнову кислоту, що кодує поліпептид 11H6, який має послідовність, представлену в SEQ ID NO: 5, або її варіанти, мультимери або фрагменти. Відповідно до одного з варіантів здійснення винаходу NB-конструкція являє собою нуклеїнову кислоту, що кодує поліпептид 11H6Hu, який має послідовність, представлену в SEQ ID NO: 30, або її варіанти, мультимери або фрагменти. Відповідно до одного з варіантів здійснення винаходу NB-конструкція являє собою нуклеїнову кислоту, що кодує одну або декілька CDR-ділянок, які мають послідовності, представлені в SEQ ID NO: 43, 53 і 66, або їх варіанти. Відповідно до одного з варіантів здійснення винаходу NBконструкція представляє нуклеїнову кислоту, що кодує CDR3-ділянку, послідовність якої представлена в SEQ ID NO: 66, або її варіанти. Інші варіанти NB-агентів, що підпадають під обсяг винаходу, Відповідно до одного з варіантів здійснення винаходу NB-агент являє собою мультимерну конструкцію, яка містить щонайменше дві різні субодиниці, обрані із групи, що включає 11D1, 11H6, 10F1, 7A12 і 4E6, або її варіант. В одному із зазначених варіантів здійснення винаходу конкретна структура мультимерних конструкцій складається з субодиниць, що чергуються. Приклад конструкції представлений в SEQ ID NO: 84. Під обсяг винаходу підпадають також інші розташування субодиниць у мультимерній NB-конструкції. Фахівець у цій галузі легко може визначати і вибирати прийнятні заміни, делеції або інсерції або їх прийнятні комбінації на основі 7 UA 106900 C2 5 10 15 20 представленого опису і необов'язково після обмежених рутинних експериментів, які можуть включати, наприклад, інтродукцію обмеженої кількості можливих замін і визначення їх впливу на властивості отриманих NB-конструкцій. Крім представлених у цьому описі як приклади конструкцій поліпептидів NB, винахід відноситься також до нуклеотидів, які кодують будь-який NB-агент, запропонований у цьому винаході, включаючи (але не обмежуючись тільки ними): послідовності ДНК і РНК або їх варіанти у виділеному стані або в рекомбінантних векторах або т.п., і/або у вигляді областей, що кодують, або фрагментів, включаючи насамперед фрагменти, які кодують CDR3-ділянку NBконструкцій, що заявляються. Відповідно до одного з варіантів здійснення винаходу NB-агент являє собою нуклеїнову кислоту, що кодує NB-конструкцію, яка має будь-яку з послідовностей, представлених у таблицях 1-4. Відповідно до одного з варіантів здійснення винаходу NB-агент являє собою нуклеїнову кислоту, що кодує 4E6-конструкцію, яка має будь-яку з послідовностей, представлених в SEQ ID NO: 1-5, 2, 3, 4, 5, 26, 30 і 87. Відповідно до одного з варіантів здійснення винаходу NB-агент являє собою нуклеїнову кислоту, що кодує будь-яку з послідовностей, представлених в SEQ ID NO: 41-44, 51-55 і 63-68. Відповідно до одного з варіантів здійснення винаходу NB-агент являє собою нуклеїнову кислоту, що кодує будь-яку з послідовностей, представлених в SEQ ID NO: 41-44, 51-55 і 63-68. Приклади послідовностей, запропонованих у винаході, представлені нижче в таблицях 1-4. Позначення "ID", зазначене в заголовку, відноситься до ідентифікатора SEQ ID NO, що розглядається. Кращі комбінації послідовностей FR і CDR для кожної NB-конструкції застосовують в описі взаємозамінно. Таблиця 1: Поліпептидні послідовності одновалентних/мономерних DR5-зв'язувальних компонентів, виділених після початкового скринінгу, із зазначенням SEQ ID NO 25 8 UA 106900 C2 9 UA 106900 C2 10 UA 106900 C2 11 UA 106900 C2 12 UA 106900 C2 13 UA 106900 C2 14 UA 106900 C2 15 UA 106900 C2 5 10 15 20 25 30 Нижче представлені інші варіанти NB-агентів, запропонованих у винаході. Сполуки, (одновалентні або багатовалентні) поліпептиди і композиції, представлені в цьому описі, можуть мати здатність зв'язуватися з DR5, але не з сайтом зв'язування TRAIL на DR5, і/або можуть не конкурувати з TRAIL за зв'язування з DR5. Зазначені сполуки і поліпептиди можуть представляти собою такі сполуки і поліпептиди, що їх зв'язування з DR5 індукує, запускає, підвищує або підсилює передачу сигналів, опосередковувану DR5, і насамперед запускає або індукує апоптоз клітин, на яких присутній DR5. Зазначені сполуки і поліпептиди можуть представляти собою також такі сполуки і поліпептиди, які підвищують або підсилюють передачу сигналів, опосередковувану TRAIL і DR5, при зв'язуванні TRAIL з його рецептором. Відповідно до одного з об'єктів винаходу зв'язування як TRAIL, так і сполук/поліпептидів, представлених у цьому описі, з тим самим рецептором може приводити до синергетичного впливу на зазначену передачу сигналів. Відповідно до одного конкретного об'єкту винаходу сполуки і поліпептиди, зазначені в цьому описі, являють собою мультимерні сполуки і поліпептиди (зазначені в цьому описі), мішенню яких є DR5. Зокрема, сполуки і поліпептиди, зазначені в цьому описі, можуть представляти собою мультимерні поліпептиди, які мають здатність мультимеризувати DR5 на клітинній мембрані і у результаті мають здатність індукувати, запускати, підвищувати або підсилювати передачу сигналів, опосередковувану DR5, і більш конкретно запускати або індукувати апоптоз клітин, на яких присутній DR5. Відповідно до одного з варіантів здійснення винаходу зазначені мономерні або мультимерні сполуки або поліпептиди, зазначені в цьому описі, можуть зв'язуватися з DR5 у сайті зв'язування TRAIL на DR5 або поблизу його і/або можуть конкурувати з TRAIL за зв'язування з DR5. Відповідно до одного з варіантів здійснення винаходу вони не зв'язуються з сайтом зв'язування TRAIL на DR5, практично не заважають або не перешкоджають зв'язуванню TRAIL з DR5, і/або не конкурують з TRAIL за зв'язування з DR5, і навіть вони можуть підвищувати або підсилювати передачу сигналів, опосередковувану TRAIL і DR5 при зв'язуванні TRAIL з його рецептором (що також може приводити до синергетичного впливу на передачу сигналів, опосередковувану DR5). Відповідно до одного з варіантів здійснення винаходу амінокислотна послідовність містить ділянку, виведену з ліганда TRAIL, що зустрічається в природних умовах, тобто вона містить сегмент, що складається з поліпептиду ліганда TRAIL, що зустрічається в природних умовах, або будь-якого фрагмента зазначеного 16 UA 106900 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 ліганда TRAIL, що зв'язує TRAIL-рецептор. А) Поліпептиди і композиції, запропоновані в цьому винаході, можна застосовувати для попередження і лікування захворювань і порушень, асоційованих з DR5. Зокрема, "захворювання і порушення, асоційовані з DR5" являють собою такі захворювання і порушення, які можна попереджати і/або лікувати відповідно шляхом відповідної обробки індивідуума, який потребує цього (тобто який має захворювання або порушення, або щонайменше один з їхніх симптомів, і/або має ризик чутливості до захворювання або порушення або ризик їх розвитку), або поліпептидом або композицією, запропонованим/запропонованою у винаході (і насамперед у фармацевтично активній кількості), і/або відомою діючою речовиною, спрямованою на DR5 або біологічний шлях або механізм, у якому бере участь DR5 (і насамперед у фармацевтично активній кількості), що приводить до модуляції, наприклад, агоністичного або антагоністичного впливу, на опосередковувану DR5 передачу сигналів. Як зазначено нижче, захворювання і порушення, які можна лікувати шляхом індукції апоптозу клітин або в тканині, уражених/ураженої захворюванням, представляють собою насамперед асоційовані з DR5 захворювання і порушення. Б) Захворювання і порушення, асоційовані з DR5, можуть, зокрема, представляти собою захворювання і порушення, які можна лікувати, запускаючи, ініціюючи, підвищуючи або підсилюючи передачу сигналів, механізми, відповіді і впливи, у яких бере участь DR5 (інакше кажучи, шляхом агоністичного впливу на DR5 або опосередковувану DR5 передачу сигналів). Більш конкретно захворювання і порушення, асоційовані з DR5, можуть представляти собою захворювання і порушення, які можна лікувати, запускаючи, ініціюючи, підвищуючи або підсилюючи клітинний апоптоз однієї або декількох клітин або в одній або декількох типах тканин індивідуума, що підлягає лікуванню. В) Відповідно до одного з варіантів здійснення винаходу NB-агенти, запропоновані у винаході, є агоністами рецепторів DR5, що зв'язуються з TRAIL, які можна застосовувати в терапії широко спектра захворювань, асоційованих з DR5. Приклади захворювань і порушень, асоційованих з DR5, повинні стати очевидні фахівцеві у цій галузі після ознайомлення з представленим описом. Відповідно до одного з варіантів здійснення винаходу запропоновані у винаході NB-агенти можуть знайти застосування при лікуванні проліферативних захворювань, що включають, наприклад, види раку, такі як щільні пухлини, первинні та метастатичні види раку, такі, наприклад, як нирковоклітинна карцинома та різні види раку легені (наприклад, дрібноклітинний рак легені "SCLC" і недрібноклітинний рак легені "NSCLC"), підшлункової залози, гематопоетичні злоякісні пухлини, гліома, астроцитома, мезотеліома, різні виду колоректального раку, рак передміхурової залози, остеосаркома, меланома, лімфома ((включаючи, але не обмежуючись тільки нею) лімфому Беркітта), рак молочної залози, рак ендометрію, рак печінки, рак шлунка, рак шкіри, рак яєчника та різні види плоскоклітинного раку будь-якого походження (наприклад, легені, голови і шиї, молочної залози, щитовидної залози, шийки матки, шкіри, стравоходу і т.д.); а також рідинні пухлини, такі, наприклад, як лейкози, включаючи насамперед Т-клітинний лейкоз, такий як гострий Т-клітинний лейкоз (T-ALL), гострий B-клітинний лейкоз (B-ALL), хронічний мієлогенний лейкоз (CML), гострий мієлогенний лейкоз (AML), мієлома з плазматичних клітин і множинна мієлома (MM). Відповідно до одного з варіантів здійснення винаходу запропоновані у винаході NB-агенти можуть знайти застосування для лікування не пов'язаних з раком показань, наприклад, запальних і аутоімунних захворювань, таких як системний червоний вовчак, хвороба Хашімото, ревматоїдний артрит, реакція « трансплантат-проти-хазяїна", синдром Шегрена, перніциозна анемія, хвороба Адісона, склеродерма, синдром Гудпасчера, хвороба Крона, аутоімуна гемолітична анемія, стерильність, важка псевдопаралітична міастенія, розсіяний склероз, Базедова хвороба, тромботична тромбоцитопенія, тромбоцитопенічна пурпура, інсулінозалежний цукровий діабет, алергія; астма, атопічне захворювання; атеросклероз; міокардит; кардіоміопатія; гломерулонефрит і гіпопластична анемія. Таким чином, амінокислотні послідовності та поліпептиди, запропоновані у винаході, можна застосовувати (але не обмежуючись тільки зазначеним), наприклад, для попередження і/або лікування всіх захворювань і порушень, які в цей час попереджають або лікують за допомогою діючих речовин, які можуть модулювати опосередковувану DR5 передачу сигналів, наприклад, згаданих у цьому описі, і зазначених у процитованих посиланнях. Відповідно до одного з варіантів здійснення винаходу поліпептиди, запропоновані у винаході, можна застосовувати для попередження і/або лікування всіх захворювань і порушень, при яких лікування за допомогою зазначених діючих речовин у цей час розробляється, запропоноване або буде запропоновано або буде розроблятися в майбутньому. Відповідно до одного з варіантів здійснення винаходу це питання розглядається, оскільки завдяки їхнім важливим властивостям, які представлені нижче 17 UA 106900 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 в цьому описі, поліпептиди, зазначені в цьому описі, можна застосовувати для попередження і лікування інших захворювань і порушень, відмінних від тих, для яких зазначені відомі діючі речовини використовуються або будуть запропоновані або будуть розроблятися; і/або поліпептиди, запропоновані в цьому винаході, можуть знайти застосування в нових методах і схемах лікування захворювань і порушень, зазначених у цьому описі. Інші шляхи прикладення і варіанти застосування амінокислотних послідовностей та поліпептидів, запропонованих у винаході, стануть очевидними фахівцеві у цій галузі після ознайомлення з представленим нижче описом. Одним з варіантів здійснення винаходу є фармакологічно активні агенти, а також композиції, що їх містять (або повнорозмірні поліпептиди, представлені в цьому описі, і/або фрагменти, і/або мультимерні варіанти зазначених поліпептидів або фрагментів, які всі позначені в цьому описі в широкому значенні як "запропоновані у винаході композиції"), які можна застосовувати для діагностики, попередження і/або лікування захворювань і порушень, асоційованих з DR5, та інших захворювань і порушень, згаданих у цьому описі; і запропоновані способи діагностування, попередження і/або лікування зазначених захворювань і порушень і/або шляхи введення і/або варіанти застосування зазначених агентів і композицій. Одним з варіантів здійснення винаходу є зазначені фармакологічні діючі речовини, композиції і/або способи, що відрізняються певними перевагами у порівнянні з агентами, композиціями і/або способами, які застосовують у цей час і/або які відомі в цій галузі. Ці переваги повинні стати очевидними з представленого нижче опису. Одним з варіантів здійснення винаходу є амінокислотні послідовності, мішенню яких є DR5, зокрема, DR5 теплокровної тварини, ще краще DR5 ссавця і насамперед DR5 людини; і білки та поліпептиди, які містять або практично складаються із щонайменше з однієї такої амінокислотної послідовності. Одним з варіантів здійснення винаходу є зазначені амінокислотні послідовності та зазначені білки і/або поліпептиди, які можна застосовувати в профілактичних, терапевтичних і/або діагностичних цілях на теплокровній тварині і краще ссавці та найкраще людині. Одним з варіантів здійснення винаходу є зазначені амінокислотні послідовності і зазначені білки і/або поліпептиди, які можна застосовувати для попередження, лікування, полегшення і/або діагностування одного або декількох захворювань, порушень або станів, асоційованих з DR5 і/або опосередковуваних DR5 (таких як захворювання, порушення і стани, згадані в цьому описі) у теплокровної тварини, краще ссавця та найкраще людини. Одним з варіантів здійснення винаходу є зазначені запропоновані у винаході композиції, які можна застосовувати для приготування фармацевтичних або ветеринарних композицій, призначених для попередження і/або лікування одного або декількох захворювань, порушень або станів, асоційованих з DR5 і/або опосередковуваних DR5 (таких як захворювання, порушення і стани, згадані в цьому описі) у теплокровної тварину, краще ссавця та найкраще людини. Одним з варіантів здійснення винаходу є запропоновані у винаході композиції, мішенню яких є DR5 і/або які мають здатність специфічно зв'язуватися з DR5; а також сполуки і конструкції, і насамперед білки або поліпептиди, які містять щонайменше одну із зазначених амінокислотних послідовностей. Більш конкретний винахід відноситься до амінокислотних послідовностей, які можуть специфічно зв'язуватися з розташованим на клітинній поверхні рецептором DR5, який, наприклад, перебуває під реєстраційним номером "BAA33723", наприклад, у базі даних білків NCBI. Зокрема, винахід відноситься до амінокислотних послідовностей, які можуть специфічно зв'язуватися з розташованим на клітинній поверхні рецептором DR5, який, наприклад, перебуває під реєстраційним номером "BAA33723", наприклад, у базі даних білків NCBI, і які не зв'язуються щонайменше з іншим TRAIL-рецептором, таким як TRAIL-R3 і TRAIL-R4. Відома також укорочена форма сплайсингового варіанта людського DR5 (GenBank, реєстраційний номер NP_671716). Одним з варіантів здійснення винаходу є амінокислотні послідовності, які можуть зв'язуватися з DR5 з високою афіністю (яку можна оцінювати і/або виражати у вигляді значення KD (істинного або уявного), значення KA (істинного або уявного), швидкості реакції асоціації (kon) і/або швидкості реакції дисоціації (koff)) або в альтернативному варіанті у вигляді значень IC50, які повинні перебувати у фармацевтично прийнятному діапазоні, представленому в цьому описі); а також сполуки і конструкції та насамперед білки і поліпептиди, які містять щонайменше одну зазначену амінокислотну послідовність. Відповідно до одного з варіантів здійснення винаходу запропоновані у винаході композиції відрізняються тим, що: a) їх зв'язування з DR5 характеризується значенням константи дисоціації (K D), що складає 18 UA 106900 C2 -5 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 -12 -7 -12 -8 від 10 до 10 моль/л або менше, і краще від 10 до 10 моль/л або менше і ще краще від 10 -12 5 12 до 10 моль/л або менше (тобто значенням константи асоціації (K A), що складає від 10 до 10 7 12 8 12 л/моль або більше, і ще краще від 10 до 10 л/моль або більше і найкраще від 10 до 10 л/моль); і/або 2 7 б) їх зв'язування з DR5 характеризується швидкістю kon, що складає від 10 до приблизно 10 -1 -1 3 7 -1 -1 4 7 -1 -1 5 7 -1 -1 M с , краще від 10 до 10 M с , найкраще від 10 до 10 M с , наприклад, від 10 до 10 M с ; і/або -1 в) їх зв'язування з DR5 характеризується швидкістю k off, що складає від 1 с (t1/2=0,69 с) до -6 -1 10 с (що свідчить про присутність практично необоротного комплексу, для якого t 1/2 становить -2 -6 -1 -3 -6 -1 -4 -6 -1 кілька днів), краще від 10 до 10 с , ще краще від 10 до 10 с , наприклад, від 10 до 10 с . Відповідно до одного з варіантів здійснення винаходу афінність зв'язування з DR5 запропонованою у винаході композиції, як одновалентної, так і багатовалентної, становить менш ніж 100нМ і/або менш ніж 10нм, і/або менш ніж 1нM, наприклад, менш ніж 500пМ. Відповідно до одного з варіантів здійснення винаходу запропонована у винаході композиція являє собою чотиривалентну композицію. Відповідно до одного з варіантів здійснення винаходу запропонована у винаході композиція являє собою п'ятивалентну композицію. Відповідно до одного з варіантів здійснення винаходу запропонована у винаході композиція, як одновалентна, так і багатовалентна, повинна мати здатність специфічно індукувати апоптоз різних типів ракових клітин (наприклад, щонайменше одного типу), що характеризується значенням IC50, що становить менш ніж 100нМ, краще менш ніж 10нМ, ще краще менш ніж 1нМ, наприклад, менш ніж 500пМ. Відповідно до одного з варіантів здійснення винаходу багатовалентна амінокислотна послідовність, запропонована у винаході, має щонайменше в 10 разів більш високу ефективність відносно пухлинної лінії клітин, ніж у відношенні здоровішої (непухлинної) лінії клітин, або щонайменше в 100 разів більш високу ефективність відносно пухлинної лінії клітин, ніж у відношенні здоровішої (непухлинної) лінії клітин, що оцінюють, наприклад, з використанням непухлинних ліній клітин, зазначених в експериментальному розділі, наприклад, Huvec, IMR-90 і ARPE-19 (див. приклади і таблицю 13). Запропонована у винаході композиція, як правило, для здійснення зв'язування з DR5 містить усередині амінокислотної послідовності один або кілька амінокислотних залишків або одну або кілька ділянок, що складаються з амінокислотних залишків (тобто в кожній "ділянці" міститься два або більша кількість амінокислотних залишків, які примикають один до одного або перебувають у безпосередній близькості один до одного, тобто в первинній (лінійній) або третинній (конформаційній) структурі амінокислотної послідовності), за допомогою яких амінокислотна послідовність, запропонована у винаході, може зв'язуватися з DR5, при цьому амінокислотні залишки або ділянки амінокислотних залишків утворюють "сайт" зв'язування з DR5 (який у контексті цього опису позначають також як "антигензв'язувальний сайт" або "епітоп"). Експерименти по епітопному картируванню представлені в розділу "Приклади". Відповідно до одного з варіантів здійснення винаходу представлені в цьому описі композиції перебувають у практично виділеній формі або включають частину білка або поліпептиду, запропонованого у винаході, яка може містити або практично складатися з однієї або декількох амінокислотних послідовностей, зазначених у цьому описі. Відповідно до одного з варіантів здійснення винаходу запропоновані у винаході композиції можуть містити також одну або кілька додаткових амінокислотних послідовностей. Відповідно до одного з варіантів здійснення винаходу зазначені додаткові послідовності зв'язані за допомогою одного або декількох прийнятних лінкерів. Запропоновані у винаході композиції можна застосовувати (але не обмежуючись тільки зазначеним) у вигляді зв'язувальної одиниці в зазначеному білку або поліпептиді. Зазначені запропоновані у винаході композиції можуть містити одну або кілька додаткових амінокислотних послідовностей, які можуть служити як додаткова зв'язувальна одиниця (тобто мішенню якої може(можуть) служити один або декілька інших агентів, відмінних від DR5), що приводить до утворення одновалентного, багатовалентного або мультиспецифічного поліпептиду, запропонованого у винаході, відповідно. Зазначений білок або поліпептид може перебувати також практично у виділеній формі. Відповідно до одного з варіантів здійснення винаходу запропоновані у винаході композиції практично складаються з індивідуального амінокислотного ланцюга, не пов'язаного за допомогою дисульфідних містків з якою-небудь іншою амінокислотною послідовністю або ланцюгом (але яка може містити один або декілька внутрішнмолекулярних дисульфідних містків або не містити їх) або з фармацевтично прийнятною композицією. Як приклад внутрішнмолекулярного дисульфідного містка можна привести відомі конструкції верблюжих VHH, які іноді можуть містити дисульфідний місток між CDR3 і CDR1 або FR2. Відповідно до одного з варіантів здійснення винаходу запропоновані у винаході композиції можуть бути 19 UA 106900 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 зв'язані один з одним і/або з іншими амінокислотними послідовностями (наприклад, через дисульфідні містки) з утворенням альтернативних пептидних конструкцій (наприклад, Fab’фрагментів, F(ab")2-фрагментів, ScFv-конструкцій, димерних антитіл ("диабоди") та інших багатовалентних і/або мультиспецифічних конструкцій (див огляд Holliger і Hudson, Nat Biotechnol., 23(9), вересень 2005 р., сс 1126-1136). Приклади фармацевтично прийнятних композицій включають лікарські засоби, призначені для лікування захворювання, або композиції, які подовжують час напівжиття, що забезпечують перенесення у специфічні тканини і/або знищують клітини-мішені. Відповідно до одного з варіантів здійснення винаходу запропоновані у винаході композиції практично складаються з одиничного амінокислотного ланцюга, зв'язаного за допомогою щонайменше одного внутрішнмолекулярного дисульфідного містка з іншою амінокислотною послідовністю або ланцюгом (кожний з яких може містити один або декілька внутрішнмолекулярних дисульфідних містків або не містити їх) або з фармацевтично прийнятною композицією. Відповідно до одного з варіантів здійснення винаходу, коли композиція, призначена для введення індивідуумові (наприклад, для терапевтичних і/або діагностичних цілей, зазначених у цьому описі), вона являє собою або амінокислотну послідовність, яка не зустрічається в природних умовах в організмі зазначеного індивідуума, або, коли вона зустрічається в природних умовах в організмі зазначеного пацієнта, вона перебуває практично у виділеній формі. Відповідно до одного з варіантів здійснення винаходу для фармацевтичного застосування мішенню описаних амінокислотних послідовностей, запропонованих у винаході (а також сполук, конструкцій і поліпептидів, що містять їх) є людський DR5. Відповідно до одного з варіантів здійснення винаходу для застосування у ветеринарних цілях мішенню зазначених композицій є DR5 з видів, що підлягають лікуванню. Відповідно до одного з варіантів здійснення винаходу для застосування у ветеринарних цілях зазначені композиції повинні давати перехресну реакцію з DR5 з видів, що підлягають лікуванню. Відповідно до одного з варіантів здійснення винаходу запропонована у винаході амінокислотна послідовність містить щонайменше один сайт зв'язування, призначений для зв'язування з DR5, і може містити один або кілька додаткових сайтів зв'язування, призначених для зв'язування з іншими епітопуми, антигенами, білками або мішенями. Ефективність амінокислотних послідовностей і поліпептидів, запропонованих у винаході, і композицій, що їх містять, можна оцінювати з використанням будь-якого прийнятного аналізу in vitro, заснованого на застосуванні клітин аналізу, аналізу in vivo і/або добре відомої в цій галузі створеної на тварині моделі або за допомогою їх комбінацій залежно від конкретного захворювання або порушення. Вони можуть представляти собою, наприклад, аналізи або моделі, призначені для оцінки впливу амінокислотних послідовностей або сполук, зазначених у цьому описі, на апоптоз, на проліферацію пухлинних клітин і/або ріст пухлин на створеній на тварині моделі зазначеної пухлини. Прийнятні аналізи і створені на тваринах моделі повинні бути очевидні фахівцеві в цій галузі, і вони включають, наприклад, аналізи і створені на тваринах моделі, які застосовували в описаному нижче експериментальному розділі, і які описані в наведених в цьому описі посиланнях, що характеризують відомий рівень техніки. Прикладами є аналізи зв'язування, такі як ELISA, FACS або поверхневий плазмонний резонанс; функціональні аналізи in vitro, такі як аналіз виживання клітин in vitro, для здійснення якого використовують панель пухлинних і здорових клітинних ліній, аналіз ефективності in vitro з використанням оцінки виживання клітин лінії Jurkat; функціональні аналізи in vivo, такі як дослідження in vivo з використанням однієї дози, що здійснюється з визначенням активації каспази 3/7, яке дозволяє одержувати різні характеристики ефективності, дані про ФК (фармакокінетика) і ФД (фармакодинаміка). Відповідно до одного з варіантів здійснення винаходу амінокислотні послідовності та поліпептиди, мішенню яких є DR5 з першого виду теплокровної тварини, можуть давати перехресну реакцію з DR5 з одного або декількох видів інших теплокровних тварин, але можуть і не давати зазначену перехресну реакцію. Наприклад, амінокислотні послідовності та поліпептиди, мішенню яких є людський DR5, можуть давати перехресну реакцію з DR5 з одного або декількох інших видів приматів (таких як (але не обмежуючись тільки ними) мавпи роду Macaca (такі, наприклад, як яванський макак-крабоїд (циномолгус) (Macaca fascicularis, позначений як "цино") і/або макак резус (Macaca mulatta)) і павіан (Papio ursinus)) і/або з DR5 з одного або декількох інших видів тварин, які часто застосовують як тваринні моделі захворювань (наприклад, миша, пацюк, кролик, свиня або собака), і насамперед на тваринних моделях захворювань і порушень, асоційованих з DR5 (таких як види і тваринні моделі, згадані 20 UA 106900 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 в цьому описі), але можуть і не давати такої перехресної реакції. У цьому зв'язку фахівцеві в цій галузі повинно бути очевидно, що перехресна реактивність, якщо вона має місце, може бути цінною властивістю з позиції розробки лікарських засобів, оскільки дозволяє вивчати амінокислотні послідовності та поліпептиди, мішенню яких є DR5, на зазначених моделях захворювань. Різні запропоновані у винаході конструкції мають специфічну перехресну реактивність з DR5 мавп циномолгус. Відповідно до одного з варіантів здійснення винаходу амінокислотні послідовності та поліпептиди, запропоновані у винаході, які дають перехресну реакцію з DR5 з декількох видів ссавців, як правило, доцільно використовувати у ветеринарній практиці, оскільки ті самі амінокислотні послідовності або поліпептиди можна застосовувати для декількох видів. Так, відповідно до одного з варіантів здійснення винаходу амінокислотні послідовності та поліпептиди, мішенню яких є DR5 з одного з видів тварин (наприклад, амінокислотні послідовності та поліпептиди, мішенню яких є людський DR5), можна застосовувати для лікування інших видів тварин, якщо амінокислотні послідовності і/або поліпептиди, забезпечують необхідну дію у відношенні видів, що підлягають лікуванню. Цей винахід у його найбільш широкому значенні не обмежений або не відноситься також до конкретної антигенної детермінанти, епітопу, ділянки, домену, субодиниці або конформації (коли це застосовне) DR5, який є мішенню амінокислотних послідовностей і поліпептидів. Однак відповідно до одного з варіантів здійснення винаходу мішенню амінокислотних послідовностей і поліпептидів є позаклітинний домен DR5. Інший об'єкт винаходу, що не обмежує його обсяг, відноситься також до амінокислотних послідовностей і поліпептидів, запропонованих у винаході, мішенню яких є DR5-єднальний домен DR5. Відповідно до одного з варіантів здійснення винаходу одновалентні і багатовалентні амінокислотні послідовності та поліпептиди, запропоновані у винаході, конкурують з лігандом DR5, що зустрічається в природних умовах, при оцінці за допомогою аналізу конкурентного зв'язування, який описаний в експериментальному розділі. Відповідно до одного з варіантів здійснення одновалентні та багатовалентні амінокислотні послідовності та поліпептиди, запропоновані у винаході, синергетично зв'язуються з лігандом DR5, що зустрічається в природних умовах, при оцінці за допомогою аналізу конкурентного зв'язування. Відповідно до одного з варіантів здійснення винаходу, якщо це застосовне, амінокислотна послідовність, запропонована у винаході, може зв'язуватися з двома або більшою кількістю антигенних детермінант, епітопів, ділянок, доменів, субодиниць або конформацій DR5. У зазначеному випадку антигенні детермінанти, епітопи, ділянки, домени, субодиниці DR5, з якими зв'язуються амінокислотні послідовності і/або поліпептиди, запропоновані у винаході, можуть бути практично однаковими (наприклад, якщо DR5 містить повторювані структурні мотиви або перебуває в мультимерній формі) або можуть бути різними (і в останньому випадку амінокислотні послідовності та поліпептиди, запропоновані у винаході, можуть зв'язуватися із зазначеними різними антигенними детермінантами, епітопуми, ділянками, доменами, субодиницями DR5 з афінністю і/або специфічністю, які можуть бути однаковими або різними). Крім того, наприклад, коли DR5 присутній в активованій конформації і у неактивній конформації, то амінокислотні послідовності та поліпептиди, запропоновані у винаході, можуть зв'язуватися або з однією із цих конформацій або можуть зв'язуватися з обома зазначеними конформаціями (тобто з афінністю і/або специфічністю, які можуть бути однаковими або різними). Крім того, наприклад, амінокислотні послідовності та поліпептиди, запропоновані у винаході, можуть зв'язуватися з конформацією DR5, у якій він зв'язується з відповідним лігандом, можуть зв'язуватися з конформацією DR5, у якій він не зв'язується з відповідним лігандом, або можуть зв'язуватися з обома зазначеними конформаціями (і в цьому випадку з афінністю і/або специфічністю, які можуть бути однаковими або різними). Передбачається також, що амінокислотні послідовності та поліпептиди, запропоновані у винаході, повинні, як правило, зв'язуватися з усіма, що зустрічаються в природних умовах, або синтетичними аналогами, варіантами, мутантами, алелями, ділянками і фрагментами DR5;або щонайменше з тими аналогами, варіантами, мутантами, алелями, ділянками і фрагментами DR5, які містять одну або декілька антигенних детермінант або один або декілька епітопів, які є практично однаковими з антигенною(ими) детермінантою(ами) або епітопом(ами), з якими амінокислотні послідовності та поліпептиди, запропоновані у винаході, зв'язуються в DR5 (наприклад, в DR5 дикого типу). І в цьому випадку також амінокислотні послідовності та поліпептиди, запропоновані у винаході, можуть зв'язуватися із зазначеними аналогами, варіантами, мутантами, алелями, ділянками і фрагментами з афінністю і/або специфічністю, які є однаковими або іншими (тобто більш високими або більш низькими) у порівнянні з афінністю і специфічністю, з якими запропоновані у винаході амінокислотні послідовності зв'язуються з DR5 21 UA 106900 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 (дикого типу). Під обсяг винаходу підпадають також амінокислотні послідовності та поліпептиди, запропоновані у винаході, які зв'язуються з певними, але не зв'язуються з іншими аналогами, варіантами, мутантами, алелями, ділянками і фрагментами DR5. У цілому, коли DR5 присутній у мономерной формі та в одній або декількох мультимерних формах, під обсяг винаходу підпадають амінокислотні послідовності та поліпептиди, запропоновані у винаході, які зв'язуються тільки з DR5 у мономерній формі, які зв'язуються тільки з DR5 у мультимерній формі, або які зв'язуються як з мономерною, так і з мультимерною формою. І в цьому випадку амінокислотні послідовності та поліпептиди, запропоновані у винаході, можуть зв'язуватися з мономерною формою з афінністю і/або специфічністю, які є однаковими або іншими (тобто більш високими або більш низькими) у порівнянні з афінністю і специфічністю, з якими запропоновані у винаході амінокислотні послідовності зв'язуються з мультимерною формою. Крім того, коли DR5 може вступати в асоціацію з іншими білками або поліпептидами з утворенням білкових комплексів (наприклад, з мультимерними субодиницями), то під обсяг цього винаходу підпадають амінокислотні послідовності та поліпептиди, запропоновані у винаході, які зв'язуються з DR5 у його неасоційованому стані, зв'язуються з DR5 у його асоційованому стані, або зв'язуються з обома станами. У всіх зазначених випадках амінокислотні послідовності та поліпептиди, запропоновані у винаході, можуть зв'язуватися із зазначеними мультимерами або асоційованими білковими комплексами з афінністю і/або специфічністю, які є однаковими або іншими (тобто більш високими або більш низькими) у порівнянні з афінністю і специфічністю, з якими запропоновані у винаході амінокислотні послідовності та поліпептиди зв'язуються з DR5 у його мономерному та неасоційованому стані. Відповідно до одного з варіантів здійснення винаходу, як повинно бути очевидно фахівцеві в цій галузі, запропоновані у винаході композиції, які містять дві або більшу кількість амінокислотних послідовностей, мішенню яких є DR5, можуть зв'язуватися з DR5 з більш високою авідністю, ніж відповідна(і) мономерна(і) амінокислотна(і) послідовність(і). Наприклад (але не обмежуючись тільки ними), білки або поліпептиди, які містять дві, три, чотири, п'ять, шість, вісім, десять або більшу кількість функціонально зв'язаних мономерних одиниць амінокислотних послідовностей, мішенню яких є ті самі або різні епітопи DR5 можуть (і, як правило, повинні) зв'язуватися з більш високою авідністю, ніж кожний з різних мономерів, і білки або поліпептиди, які містять дві, три, чотири або більшу кількість амінокислотних послідовностей, мішенню яких є DR5, можуть (і, як правило, повинні) також зв'язуватися з більш високою авідністю з мультимером DR5. Відповідно до одного з варіантів здійснення винаходу запропонована у винаході композиція являє собою індивідуальний пептидний ланцюг, що складається з чотирьох мономерів, мішенню яких є DR5, з'єднаних амінокислотними лінкерами. Відповідно до одного з варіантів здійснення винаходу запропонована у винаході композиція являє собою одиничний пептидний ланцюг, що складається з п'яти мономерів, мішенню яких є DR5, з'єднаних амінокислотними лінкерами. Як правило, амінокислотні послідовності та поліпептиди, запропоновані у винаході, повинні зв'язуватися щонайменше з тими формами DR5 (включаючи мономерні, мультимерні та асоційовані форми), які є найбільш прийнятними з біологічної і/або терапевтичної точок зору, що повинно бути очевидно фахівцеві в цій галузі. Під обсяг винаходу підпадає застосування композицій, які містять ділянки, фрагменти, аналоги, мутанти, варіанти, алели і/або похідні амінокислотних послідовностей і поліпептидів, запропонованих у винаході, і/або застосування білків або поліпептидів, які містять або практично складаються з однієї або декількох зазначених композицій, якщо вони можуть знайти зазначене в цьому описі застосування. Відповідно до одного з варіантів здійснення винаходу зазначені композиції повинні містити (щонайменше частково) функціональний антигензв'язувальний сайт, який зв'язується з DR5. Відповідно до одного з варіантів здійснення винаходу зазначені композиції повинні мати здатність специфічно зв'язуватися з DR5. Відповідно до одного з варіантів здійснення винаходу зазначені композиції повинні мати здатність зв'язуватися з DR5 з афінністю (яку можна оцінювати і/або виражати у вигляді значення KD (істинного або уявного), значення KA (істинного або уявного), швидкості k on і/або швидкості koff) або в альтернативному варіанті у вигляді значень IC50, які представлені в цьому описі), яка зазначена в цьому описі. Деякі приклади зазначених композицій, що не обмежують обсяг винаходу, повинні стати очевидними після ознайомлення з описом винаходу. Додаткові фрагменти або поліпептиди, запропоновані у винаході, можна одержувати також шляхом об'єднання (тобто шляхом зв'язування або генетичного злиття) однієї або декількох (меншого розміру) композицій, представлених у цьому описі. Відповідно до одного з об'єктів винаходу, що не обмежують його обсяг, аналоги, мутанти, 22 UA 106900 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 варіанти, алели і/або похідні поліпептидів, запропонованих у винаході, можуть подовжувати час напівжиття в сироватці (що буде описано далі) у порівнянні з амінокислотними послідовностями, з яких вони виведені. Наприклад, амінокислотну послідовність, запропоновану у винаході, можна зв'язувати (хімічно або іншим способом) з однією або декількома групами або фрагментами, які подовжують час напівжиття (таким як ПЕГ), одержуючи тим самим похідне амінокислотної послідовності, запропонованої у винаході, з подовженим часом напівжиття. Відповідно до одного з конкретних об'єктів винаходу, що не обмежують його обсяг, амінокислотна послідовність, запропонована у винаході, може представляти собою амінокислотну послідовність, яка має характерну для імуноглобуліну укладку, або може представляти собою амінокислотну послідовність, яка у відповідних умовах (таких як фізіологічні умови) має здатність формувати характерну для імуноглобуліну укладку (тобто шляхом фолдінга). Як посилання серед іншого слід згадати огляд Halaby та ін., J. Protein Eng. 12, 1991, сс. 563-571. Відповідно до одного з варіантів здійснення винаходу при правильному укладанні, що приводить до утворення характерної для імуноглобуліну укладки, зазначена амінокислотна послідовність має здатність специфічно зв'язуватися з DR5. В одному з додаткових варіантів здійснення винаходу зазначена конструкція має здатність зв'язуватися з DR5 з афінністю (яку можна оцінювати і/або виражати у вигляді значення K D (істинного або уявного), значення KA (істинного або уявного), швидкості k on і/або швидкості koff) або в альтернативному варіанті у вигляді значень IC50, які представлені в цьому описі), яка зазначена в цьому описі. Відповідно до одного з варіантів здійснення винаходу ділянки, фрагменти, аналоги, мутанти, варіанти, алели і/або похідні зазначених амінокислотних послідовностей відрізняються тим, що вони мають характерну для імуноглобуліну укладку або мають здатність утворювати в прийнятних умовах характерну для імуноглобуліну укладку. Зокрема, амінокислотні послідовності, запропоновані у винаході, можуть представляти собою (але не обмежуючись тільки ними) амінокислотні послідовності, які практично складаються з чотирьох каркасних ділянок (FR1, FR2, FR3 і FR4 відповідно) і трьох розташованих між ними гіперваріабельних ділянок (CDR1, CDR2 і CDR3 відповідно); або будьякий прийнятний фрагмент зазначеної амінокислотної послідовності (який, як правило, повинен містити принаймні деякі амінокислотні залишки, які утворюють щонайменше один з CDR, що буде додатково описане нижче). Відповідно до одного з варіантів здійснення винаходу розташування цих ділянок презентовано у формулі I: FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4 (формула I) Амінокислотні послідовності, запропоновані у винаході, можуть представляти собою, зокрема, послідовність імуноглобуліну або її прийнятний фрагмент, і ще краще можуть представляти собою послідовність варіабельної області імуноглобуліну, таку як послідовність варіабельної області легкого ланцюга імуноглобуліну (наприклад, послідовність VL)або її прийнятний фрагмент; або послідовність варіабельної області важкого ланцюга імуноглобуліну (наприклад, послідовність VН) або її прийнятний фрагмент. Коли амінокислотна послідовність, запропонована у винаході, являє собою послідовність варіабельної області важкого ланцюга, вона може представляти собою послідовність варіабельної області важкого ланцюга, виведену з канонічного антитіла, що складається з чотирьох ланцюгів (наприклад (але не обмежуючись тільки нею), послідовність VH, виведену з людського антитіла), або представляти собою так звану VHH-послідовність, виведену з так званого "що складається (тільки) з важкого ланцюга антитіла". Слід зазначити, що антитіло не обмежене походженням амінокислотної послідовності, запропонованої у винаході (або нуклеотидної послідовності, запропонованої у винаході, що застосовується для її експресії), ні шляхом, за допомогою якого створюють або одержують (або за допомогою якого вони були отримані) амінокислотну послідовність або нуклеотидну послідовність, запропоновану у винаході. Таким чином, амінокислотні послідовності, запропоновані у винаході, можуть містити амінокислотні послідовності, що зустрічаються в природних умовах (з будь-яких прийнятних видів) або синтетичні або напівсинтетичні амінокислотні послідовності. У конкретному об'єкті винаходу, що не обмежує його обсяг, амінокислотна послідовність являє собою послідовність імуноглобуліну (з будь-якого прийнятного виду), що зустрічається в природних умовах, або синтетичну або напівсинтетичну послідовність імуноглобуліну, включаючи (але не обмежуючись тільки ними) "гуманізовані" послідовності імуноглобуліну (наприклад, частково або повністю гуманізовані послідовності імуноглобуліну мишей, кроликів або мавп (або послідовності імуноглобуліну будь-яких інших видів ссавців, відомих фахівцеві в цій галузі) і частково або повністю гуманізовані верблюжі VHHпослідовності або їх фрагменти, "камелізовані" послідовності імуноглобулінів, а також послідовності імуноглобулінів, отримані такими методами, як дозрівання афінності (наприклад, з 23 UA 106900 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 використанням як вихідних послідовностей синтетичних, довільних або послідовностей імуноглобуліну, що зустрічаються в природних умовах), трансплантація CDR, "облицювання", об'єднання фрагментів, виведених з різних послідовностей імуноглобулінів, ПЦР-складання з використанням праймерів, що перекриваються, і аналогічні методи конструювання послідовностей імуноглобуліну, добре відомі фахівцеві в цій галузі; або будь-яка прийнятна комбінація кожного із зазначених вище методів. Як посилання можна розглядати, наприклад, стандартні керівництва, а також наведений нижче опис і представлені в ньому посилання, що характеризують відомий рівень техніки. Аналогічно вищевказаним нуклеотидні послідовності, запропоновані у винаході, можуть представляти собою нуклеотидні послідовності, що зустрічаються в природних умовах, або синтетичні або напівсинтетичні послідовності та можуть представляти собою, наприклад, послідовності, виділені за допомогою ПЦР з відповідної матриці, що зустрічається в природних умовах (наприклад, ДНК або РНК, виділеної з клітини), нуклеотидні послідовності, виділені з бібліотеки (і, зокрема, з експресійної бібліотеки), нуклеотидні послідовності, отримані шляхом інтродукції мутацій в нуклеотидну послідовність, що зустрічається в природних умовах (з використанням будь-якого прийнятного добре відомого методу, такого як місматч-ПЦР (ПЦР на основі структурних невідповідностей), нуклеотидну послідовність, отриману за допомогою ПЦР з праймерами, що перекриваються, або нуклеотидні послідовності, отримані за допомогою відомих у цій галузі методів синтезу ДНК. Амінокислотна послідовність, запропонована у винаході, може представляти собою, зокрема, доменне антитіло (або амінокислотну послідовність, яку можна застосовувати як доменне антитіло), однодоменне антитіло (або амінокислотну послідовність, яку можна застосовувати як однодоменне антитіло), "dAb" (або амінокислотну послідовність, яку можна застосовувати як dAb) або верблюже антитіло (і включаючи (але не обмежуючись тільки ними) VHH-послідовність або її варіанти); інші індивідуальні варіабельні домени або будь-які прийнятні фрагменти кожного з них. Загальний опис (одно)доменних антитіл представлений також у процитованих вище посиланнях, що характеризують відомий рівень техніки, а також в EP 0368684. Поняття "dAb" описане, наприклад, в Ward та ін., Nature, 341 (6242), 12 жовтня 1989 р., сс. 544-546; в Holt та ін., Trends Biotechnol., 21(11), 2003, сс. 484-490; а також, наприклад, в WO 06/030220, WO 06/003388 та інших опублікованих заявках на патент на ім'я фірми Domantis Ltd. Відповідно до одного з варіантів здійснення винаходу однодоменні антитіла або одиничні варіабельні домени можна одержувати з певних видів акул (наприклад, так звані "IgNARдомени", див., наприклад, WO 05/18629). Зокрема, амінокислотна послідовність, запропонована у винаході, може представляти собою конструкцію, основою якої є варіабельний домен важкого ланцюга верблюжого антитіла (наприклад, VHH або її варіації, включаючи варіації, оптимізовані для застосування в терапії людини, наприклад, описані, наприклад в WO 2008/020079), або їх прийнятний фрагмент або варіант. Відповідно до одного з варіантів здійснення винаходу амінокислотна послідовність (R) являє собою NANOBODY або конструкцію на основі цього антитіла. Слід зазначити, що NANOBODY™, NANOBODIES™ і NANOCLONE™ представляють собою зареєстровані товарні знаки фірми Ablynx N.V. Специфічні конструкції на основі варіабельного домена важкого ланцюга, "гуманізовані" чи ні, або змінені, або оптимізовані іншим способом чи ні, мішенню яких є DR5, позначені в контексті цього опису як "NB-послідовність", запропонована у винаході. У контексті цього опису фраза "оптимізована послідовність" або в іншому варіанті послідовності, які "змінені або оптимізовані" відноситься до заміни залишків в NB-агенті, насамперед у каркасній ділянці, для зниження виникнення імуногенної відповіді на NB-агент у індивідуума, якому його вводять. У випадку, коли індивідуум являє собою людину, фраза передбачає застосування будь-якого відомого в цій галузі методу для гуманізації послідовності. Відповідно до одного з варіантів здійснення винаходу NB-агенти відносяться до так званого "VH3-класу" (тобто NB-конструкція, послідовність якої має високий ступінь гомології з послідовностями людської зародкової лінії VH3-класу, такими як DP-47, DP-51 або DP-29). Відповідно до одного з варіантів здійснення винаходу, що відносяться до цього VH3-касу NBконструкції містять каркасні ділянки, запропоновані в цьому винаході. Однак винахід у його найбільш широкому значенні відноситься до NB-агентів будь-якого типу, мішенню яких є DR5. Наприклад, відповідно до одного з варіантів здійснення винаходу винахід відноситься також до NB-конструкцій, які належать до так званого "VH4-класу" (тобто NB-конструкції, послідовність яких має високий ступінь гомології з послідовностями людської зародкової лінії VH4-класу, таким як DP-78) (див., наприклад, WO 07/118670). Відповідно до одного з варіантів здійснення винаходу NB- конструкції (зокрема, повністю гуманізовані та частково гуманізовані конструкції) відрізняються наявністю одного або декількох 24 UA 106900 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 "характеристичних (Hallmark) залишків" в одній або декількох каркасних послідовностях. Відповідно до одного з варіантів здійснення винаходу каркасні послідовності, що присутні в NBконструкціях, запропонованих у винаході, можуть мати амінокислотну послідовність, що являє собою варіант VHH-конструкції верблюжого антитіла. Деякі приклади (але не обмежуючись тільки ними) (у тому числі комбінацій) зазначених каркасних послідовностей і альтернативних Hallmark-залишків наведені, наприклад, в WO 2008/020079, сс. 65-98, зазначені сторінки повністю включені в цей опис як посилання. Під обсяг цього винаходу підпадають також інші гуманізовані або частково гуманізовані залишки. Як правило, VH- або VHH-кострукції можна визначати як амінокислотну послідовність, що має (загальну) структуру, представлену у формулі I, у якій FR1-FR4 позначають каркасні ділянки 1-4 відповідно, і в якій CDR1-CDR3 позначають гіперваріабельні ділянки 1-3 відповідно. Відповідно до одного з варіантів здійснення винаходу запропонована у винаході композиція може представляти собою NB-конструкцію, яка містить амінокислотну послідовність, що має (загальну) структуру, представлену у формулі I, у якій один або кілька амінокислотних залишків у положеннях 11, 37, 44, 45, 47, 83, 84, 103, 104 і 108 згідно з нумерацією за Кеботом обрані з Hallmark-залишків, зазначених у таблиці A-3 в WO 2008/020079, і де амінокислотна послідовність ідентична щонайменше на 80 %, 85 %, 90 %, 95 %, 98 %, 99 % або 100 % амінокислотній послідовності щонайменше однієї з каркасних ділянок, амінокислотні послідовності яких представлені в SEQ ID NO: 1-22 в WO 2008/020079, при цьому при визначенні ступеня ідентичності амінокислотних послідовностей амінокислотні залишки, які утворюють CDR-послідовності (позначені як X у послідовностях), не приймаються в розрахунок. В NB-агентах, запропонованих у винаході, включаючи (але не обмежуючись тільки ними) різні формати або каркаси, присутні CDR-послідовності, представлені в цілому в таблицях 1-3, і насамперед позначені як SEQ ID NO: у таблиці 4. Зокрема, CDR1 може мати будь-яку одну з SEQ ID NO: 41-44; CDR2 може мати будь-яку одну з SEQ ID NO: 51-55 і CDR3 може мати будьяку одну з SEQ ID NO: 63-68. Таким чином, відповідно до одного з варіантів здійснення винаходу винахід відноситься до таких VH-конструкціям, які можуть зв'язуватися з DR5, і/або мішенню яких є DR5, до їх прийнятних фрагментів, а також до поліпептидів, які містять або практично складаються з однієї або декількох зазначених VH-конструкцій і/або прийнятних фрагментів. У цілому, в SEQ ID NO: 1-22, 26 – 40, 87-88 і 103-104 представлені амінокислотні послідовності ряду NB-агентів, мішенню яких є DR5 (див. таблиці 1-4). В SEQ ID NO: 96-99 представлені конкретні нуклеотидні послідовності, які кодують конкретні NB-агенти, представлені в цьому описі. У деяких варіантах здійснення винаходу запропоновані у винаході композиції представляють собою NB-агенти, наприклад, представлені в таблицях 1-4, які можуть зв'язуватися з DR5, і/або мішенню яких є DR5, і амінокислотні послідовності яких ідентичні щонайменше на 90 % щонайменше одній з амінокислотних послідовностей, представлених в SEQ ID NO: 1-22, 26-40, 87-88 і 103-104, при цьому при визначенні ступеня ідентичності амінокислотних послідовностей амінокислотні залишки, які утворюють CDR-послідовності, не приймаються в розрахунок, і в яких один або кілька амінокислотних залишків у положеннях 11, 37, 44, 45, 47, 83, 84, 103, 104 і 108 згідно з нумерацією за Кеботом представляють собою характеристичні залишки. У різних варіантах здійснення винаходу і як презентовано в таблиці 4 NB-конструкції містять каркасну ділянку 1, послідовності якої представлені в SEQ ID NO: 34-40, каркасна ділянка 2, послідовності якої представлені в SEQ ID NO: 45-50, каркасна ділянка 3, послідовності якої представлені в SEQ ID NO: 56-62, і каркасна ділянка 4, послідовності якої представлені в SEQ ID NO: 69-72. Відповідно до одного з варіантів здійснення винаходу амінокислотний залишки в положеннях 1-4 і 27-30 послідовностей каркасної ділянки 1 NB-конструкцій, що мають послідовність SEQ ID NO: 1-22, 26-40, 87-88 і 103-104, не приймаються в розрахунок при визначенні ступеня ідентичності амінокислотних послідовностей. Відповідно до одного з варіантів здійснення винаходу запропоновані у винаході NB-агенти і композиції можна одержувати будь-яким прийнятним методом і з будь-якого прийнятного джерела, і вони можуть, наприклад, представляти собою VHH-послідовності, що зустрічаються в природних умовах (тобто з будь-якого прийнятного виду сімейства Верблюдових), або синтетичні або напівсинтетичні амінокислотні послідовності, включаючи (але не обмежуючись тільки ними) "гуманізовані" NB-агенти, "камелізовані" послідовності імуноглобулінів (і, зокрема, камелізовані послідовності варіабельних доменів важкого ланцюга), а також NB-агенти, отримані за допомогою таких методів, як дозрівання афінності (наприклад, з використанням як вихідних послідовностей синтетичних, довільних або послідовностей імуноглобуліну, що 25 UA 106900 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 зустрічаються в природних умовах), трансплантація CDR, "облицювання", об'єднання фрагментів, виведених з різних послідовностей імуноглобулінів, ПЦР-складання з використанням праймерів, що перекриваються, і аналогічні методи конструювання послідовностей імуноглобуліну, добре відомі фахівцеві в цій галузі; або будь-яка прийнятна комбінація кожного із зазначених вище методів, які будуть додатково описані нижче. Крім того, коли запропонована у винаході композиція містить VHH-послідовність, то така композиція може бути відповідним чином гуманізована згідно з представленим у цьому описі методом з одержанням однієї або декількох додаткових (частково або повністю) гуманізованих композицій, запропонованих у винаході. Відповідно до одного з варіантів здійснення винаходу, коли запропонована у винаході композиція містить синтетичну або напівсинтетичну послідовність (таку як частково гуманізована послідовність), то зазначена композиція може необов'язково бути додатково відповідним чином гуманізована, і в цьому випадку або повністю, або частково гуманізована. Відповідно до одного з варіантів здійснення винаходу гуманізовані композиції мають амінокислотні послідовності, у яких присутній щонайменше один амінокислотний залишок (і зокрема, щонайменше один із залишків каркасної ділянки) який являє собою і/або який відповідає заміні, що приводить до гуманізації. У зазначеному варіанті здійснення винаходу, який не обмежує його обсяг заміни, що приводять до гуманізації (і їх прийнятні комбінації) повинні бути очевидні фахівцеві в цій галузі після ознайомлення із представленим описом винаходу. Відповідно до одного з варіантів здійснення винаходу потенційно придатні заміни, що приводять до гуманізації, можна визначати шляхом порівняння послідовності каркасних ділянок в VHH-послідовності, що зустрічається в природних умовах, з відповідною послідовністю каркасної ділянки однієї або декількох близькоспоріднених людських VH-послідовностей, після чого одну або декілька встановлених в такий спосіб потенційно прийнятних замін, що приводять до гуманізації (або їх комбінації) можна інтродукувати добре відомим методом у зазначену VHHпослідовність. Відповідно до одного з варіантів здійснення винаходу отримані в результаті гуманізовані VHH-послідовності оцінюють у відношенні афінності до мішені, відносно стабільності, простоти здійснення експресії і рівня експресії і/або у відношенні інших необхідних властивостей. Таким чином, за допомогою обмежених експериментів методом "проб і помилок" фахівець у цій галузі може визначати на основі представленого опису винаходу та інші прийнятні заміни, що приводять до гуманізації (або їх прийнятні комбінації). Крім того, на основі вищесказаного запропоновану у винаході композицію (каркасні ділянки) можна частково гуманізувати або повністю гуманізувати. Відповідно до одного з варіантів здійснення винаходу представлені в цьому описі гуманізовані композиції представляють собою гуманізовані варіанти композицій, послідовності яких представлені в SEQ ID NO: 1-22, 26-40, 87-88 і 103-104 і в SEQ ID NO: 96-99. Одним з варіантів здійснення винаходу є гуманізовані NB-конструкції, представлені в таблиці 3. Таким чином, деякі інші кращі композиції, запропоновані у винаході, представляють собою композиції, які мають здатність зв'язуватися (що буде додатково описане нижче) з DR5 і які (a) представляють собою гуманізований варіант однієї з амінокислотних послідовностей, представлених в SEQ ID NO: 1-22, 26-40, 87-88 і 103-104; і/або (б) мають амінокислотні послідовності, ідентичні щонайменше на 90 % принаймні одній з амінокислотних послідовностей, представлених в SEQ ID NO: 1-22, 26-40, 87-88 і 103-104. Відповідно до одного з варіантів здійснення винаходу при визначенні ступеня ідентичності амінокислотних послідовностей амінокислотні залишки, які утворюють CDR-послідовності, не приймаються в розрахунок. Відповідно до одного з варіантів здійснення винаходу один або кілька амінокислотних залишків у положеннях 11, 37, 44, 45, 47, 83, 84, 103, 104 і 108 згідно з нумерацією за Кеботом вибирають з Hallmark-залишків, зазначених у таблиці A-3 в WO 2008/020079. Одним з варіантів здійснення винаходу є цілий ряд ділянок, що складаються з амінокислотних залишків (тобто невеликих пептидів), які найбільш прийнятні для зв'язування з DR5. Ці ділянки, що складаються з амінокислотних залишків, можуть бути присутні і/або можуть бути включені в амінокислотну послідовність, запропоновану у винаході, зокрема, таким чином, щоб вони формували (у тому числі частково) антигензв'язувального сайту амінокислотної послідовності, запропонованої у винаході. Оскільки ці ділянки, що складаються з амінокислотних залишків, спочатку створюють як CDR-послідовності важких ланцюгів антитіл або VHH- послідовності, мішенню яких є DR5 (або їх основний можуть бути і/або вони можуть бути виведені із зазначених CDR-послідовностей, що буде додатково описано нижче), то їх можна позначати в цілому як "CDR-послідовності" (тобто як CDR1-послідовності, CDR2послідовності та CDR3-послідовності відповідно). Однак слід зазначити, що винахід у його 26 UA 106900 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 найбільш широкому значенні не обмежений конкретною структурною роллю або функцією, якою можуть відрізнятися ці ділянки, що складаються з амінокислотних залишків, в амінокислотній послідовності, запропонованій у винаході, якщо ці ділянки, що складаються з амінокислотних залишків, дозволяють амінокислотній послідовності, запропонованій у винаході, зв'язуватися з DR5. Таким чином, у цілому, винахід у його найбільш широкому значенні відноситься до будьякої амінокислотної послідовності, яка має здатність зв'язуватися з DR5 і яка містить одну або декілька CDR-послідовностей, представлених у цьому описі, і зокрема, прийнятну комбінацію двох або більшої кількості зазначених CDR-послідовностей, які можуть бути зв'язані одна з одною за допомогою однієї або декількох інших амінокислотних послідовностей, таким чином, що повна амінокислотна послідовність утворює зв'язувальний домен і/або зв'язувальну одиницю, який/яка має здатність зв'язуватися з DR5. Однак слід зазначити, що присутність навіть тільки однієї такої CDR-послідовності в амінокислотній послідовності, запропонованій у винаході, уже може бути достатньою для одержання амінокислотної послідовності, запропонованої у винаході, яка має здатність зв'язуватися з DR5; як посилання див., наприклад, так звані "фрагменти-експедитори (Expedite-фрагменти)», описані в WO 03/050531. Відповідно до одного з варіантів здійснення винаходу амінокислотна послідовність, запропонована у винаході, може представляти собою амінокислотну послідовність, яка містить щонайменше одну амінокислотну послідовність, обрану із групи, що включає CDR1послідовності, CDR2-послідовності і CDR3-послідовності, зазначені в цьому описі (або будь-яку прийнятну їх комбінацію). Зокрема, амінокислотна послідовність, запропонована у винаході, може представляти собою амінокислотну послідовність, яка містить щонайменше один антигензв'язувальний сайт, при цьому антигензв'язувальний сайт містить щонайменше одну амінокислотну послідовність, обрану із групи, що включає CDR1-послідовності, CDR2послідовності і CDR3-послідовності, зазначені в цьому описі (або будь-яку прийнятну їх комбінацію). Відповідно до одного з варіантів здійснення винаходу амінокислотна послідовність, запропонована у винаході, може представляти собою будь-яку амінокислотну послідовність, яка містить щонайменше одну ділянку, що складається з амінокислотних залишків, де зазначена ділянка, що складається з амінокислотних залишків, має амінокислотну послідовність, яка відповідає послідовності щонайменше однієї з CDR-послідовностей, зазначених у цьому описі. Зазначена амінокислотна послідовність може мати характерну для імуноглобуліну укладку або може не мати її. Наприклад, зазначена амінокислотна послідовність може представляти собою (але не обмежуючись тільки ним) прийнятний фрагмент послідовності імуноглобуліну, яка містить щонайменше одну таку CDR-послідовність, але розмір якої не є достатнім для формування (повної) характерної для імуноглобуліну укладки (як посилання і у цьому випадку можна привести, наприклад "фрагменти-експедитори", описані в WO 03/050531). В альтернативному варіанті зазначену амінокислотну послідовність можна застосовувати як прийнятний "білковий каркас", який містить щонайменше одну ділянку, що складається з амінокислотних залишків, яка відповідає зазначеній CDR-послідовності (тобто частина її антигензв'язувального сайту). Прийнятні призначені для презентації амінокислотних послідовностей каркаси повинні бути очевидні фахівцеві в цій галузі, і вони містять (але не обмежуючись тільки ними), наприклад, зв'язувальні каркаси на основі імуноглобулінів або виведені з імуноглобулінів (тобто відмінні від уже описаних послідовностей імуноглобулінів), білкові каркаси, виведені з доменів білка A (такі, наприклад, як AFFIBODIES™), тендамістат, фібронектин, включаючи домен фібронектина типу III, ліпокаїн, CTLA-4, T-клітинні рецептори, сконструйовані анкіринові повтори, авімери і PDZ-домени (Binz та ін., Nat. Biotech, т. 23, 2005, с. 1257), і зв'язувальні фрагменти на основі ДНК або РНК, включаючи (але не обмежуючись тільки ними) аптамери ДНК або РНК (Ulrich та ін., Comb Chem. High Throughput Screen, 9(8), 2006, сс. 619-632). Відповідно до одного з варіантів здійснення винаходу будь-яка амінокислотна послідовність, представлена в цьому описі, яка містить одну або декілька із зазначених CDR-послідовностей, може специфічно зв'язуватися з DR5. Відповідно до одного з варіантів здійснення винаходу вона може зв'язуватися з DR5 з афінністю (яку можна оцінювати і/або виражати у вигляді значення KD (істинного або уявного), значення KA (істинного або уявного), швидкості k on і/або швидкості koff) або в альтернативному варіанті у вигляді значень IC 50), яка зазначена в цьому описі. Відповідно до одного з варіантів здійснення винаходу запропонована у винаході композиція може мати будь-яку амінокислотну послідовність, яка містить щонайменше один антигензв'язувальний сайт, де антигензв'язувальний сайт містить щонайменше дві амінокислотні послідовності, обрані із групи, що включає CDR1-послідовності, представлені в 27 UA 106900 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 цьому описі, CDR2-послідовності, представлені в цьому описі, і CDR3-послідовності, представлені в цьому описі, при цьому: (1) коли першу амінокислотну послідовність вибирають з CDR1-послідовностей, представлених у цьому описі, то другу амінокислотну послідовність вибирають з CDR2-послідовностей, представлених у цьому описі, або CDR3-послідовностей, представлених у цьому описі; (2) коли першу амінокислотну послідовність вибирають з CDR2послідовностей, представлених у цьому описі, то другу амінокислотну послідовність вибирають з CDR1-послідовностей, представлених у цьому описі, або CDR3-послідовностей, представлених у цьому описі; або (3) коли першу амінокислотну послідовність вибирають з CDR3-послідовностей, представлених у цьому описі, то другу амінокислотну послідовність вибирають з CDR1-послідовностей, представлених у цьому описі, або CDR2-послідовностей, представлених у цьому описі. Відповідно до одного з варіантів здійснення винаходу композиція, запропонована у винаході, може мати амінокислотні послідовності, які містять щонайменше один антигензв'язувальний сайт, де антигензв'язувальний сайт містить щонайменше три амінокислотні послідовності, обрані із групи, що включає CDR1-послідовності, представлені в цьому описі, CDR2послідовності, представлені в цьому описі, і CDR3-послідовності, представлені в цьому описі, при цьому першу амінокислотну послідовність вибирають з CDR1-послідовностей, представлених у цьому описі, другу амінокислотну послідовність вибирають з CDR2послідовностей, представлених у цьому описі, і третю амінокислотну послідовність вибирають з CDR3-послідовностей, представлених у цьому описі. Кращі комбінації послідовностей CDR1, CDR2 і CDR3 повинні стати очевидними з представленого нижче опису. Як повинно бути очевидно фахівцеві в цій галузі, зазначена амінокислотна послідовність краще являє собою послідовність імуноглобуліну (додатково описану нижче), але може представляти собою також, наприклад, будь-яку іншу амінокислотну послідовність, яка містить каркас, прийнятний для презентації CDR-послідовностей. Одним з варіантів здійснення винаходу є композиція, запропонована у винаході, що містить амінокислотну послідовність, мішенню якої є DR5, і насамперед DR5, відомий з публічних баз даних, таких, наприклад, як база даних білків NCBI, під реєстраційним номером BAA33723, де амінокислотна послідовність містить одну або декілька ділянок, що складаються з амінокислотних залишків, обраних із групи, що включає: (a) амінокислотні послідовності, представлені в SEQ ID NO: 41-44; (б) амінокислотні послідовності, які щонайменше на 90 % ідентичні щонайменше одній з амінокислотних послідовностей, представлених в SEQ ID NO: 41-44; (в) амінокислотні послідовності, які відрізняються 3, 2 або 1 амінокислотою щонайменше від однієї з амінокислотних послідовностей, представлених в SEQ ID NO: 41-44; (г) амінокислотні послідовності, представлені в SEQ ID NO: 51-55; (д) амінокислотні послідовності, які щонайменше на 90 % ідентичні щонайменше одній з амінокислотних послідовностей, представлених в SEQ ID NO: 51-55; (е) амінокислотні послідовності, які відрізняються 3, 2 або 1 амінокислотою щонайменше від однієї з амінокислотних послідовностей, представлених в SEQ ID NO: 51-55; (ж) амінокислотні послідовності, представлені в SEQ ID NO: 63-68; (з) амінокислотні послідовності, які щонайменше на 90 % ідентичні щонайменше одній з амінокислотних послідовностей, представлених в SEQ ID NO: 63-68; (и) амінокислотні послідовності, які відрізняються 3, 2 або 1 амінокислотою щонайменше від однієї з амінокислотних послідовностей, представлених в SEQ ID NO: 63-68; або будь-які їхні комбінації. Коли амінокислотна послідовність, запропонована у винаході, містить одну або кілька амінокислотних послідовностей, зазначених у підпунктах б) і/або в), то: (1) будь-яка амінокислотна заміна в зазначеній амінокислотній послідовності, представленій в підпунктах б) і/або в), краще являє собою консервативну амінокислотну заміну у порівнянні з відповідною амінокислотною послідовністю, представленою в підпункті a); і/або (2) амінокислотна послідовність, представлена в підпунктах б) і/або в), краще містить тільки амінокислотні заміни і не містить амінокислотні делеції або інсерції у порівнянні з відповідною амінокислотною послідовністю, представленою в підпункті a); і/або (3) амінокислотна послідовність, представлена в підпунктах б) і/або в), може представляти собою амінокислотну послідовність, виведену з амінокислотної послідовності, представленої в підпункті a), шляхом дозрівання афінності з використанням одного або декількох добре відомих методів дозрівання афінності. Аналогічно цьому, коли амінокислотна послідовність, запропонована у винаході, містить одну або кілька амінокислотних послідовностей, представлених у підпунктах д) і/або е), то: 28