Спосіб лікування болю введенням антитіла проти фактора росту нервів і нестероїдного протизапального засобу і композиція, що їх містить

Спосіб лікування болю у індивідуума, що включає введення індивідууму ефективної кількості антитіла проти фактора росту нервів (NGF) і НСПЗЗ, при якому антитіло проти (NGF) і НСПЗЗ у поєднанні забезпечуть ефективне полегшення болю. 1. Спосіб за п. 1, в якому НСПЗЗ вибраний з групи, що складається з ібупрофену, напроксену, напросину, диклофенаку, кетопрофену, толметину, суліндаку, мефенамової кислоти, меклофенамової кислоти, дифлунізалу, флуфенізалу, піроксикаму, судоксикаму, ізоксикаму, целекоксибу, рофекоксибу, DUP-697, флозуліду, мелоксикаму, 6-метокси-2нафтилоцтової кислоти, МК-966, набуметону, німезуліду, NS-398, SC-5766, SC-58215, Т-614. 2. Спосіб за п. 1, в якому НСПЗЗ являє собою ібупрофен. 3. Спосіб за пп. 1, 2 або 3, в якому антитіло проти NGF зв'язує людський NGF. 17. C2 2 (19) 1 3 81299 4 Винахід відноситься до способів і композицій Наприклад, TrkA був виявлений на моноцитах, Т- і для профілактики або лікування болю у пацієнта В-лімфоцитах і тучних клітинах людини. введенням комбінації антагоніста фактора росту Зв'язок між підвищеними рівнями NGF і нервів і НСПЗЗ. різними запальними станами спостерігався у В даний час для полегшення болю пацієнтів, а також в декількох експериментальних рекомендується ряд способів лікування, що моделях на тваринах. Ці запальні стани передбачають введення нестероїдних включають системний червоний вовчак [Вrассіпротизапальних засобів (НСПЗЗ). Було показано, Laudiero, et al., Neuroreport 4:563-565 (1993)], що введення НСПЗЗ виявляє властивості розсіяний склероз [Bracci-Laudiero, et al., Neurisci. полегшення болю. Однак відомі недоліки Lett. 147:9-12 (1992)], псоріаз [Raychaudhuri, et al., лікування НСПЗЗ, що включають небажані побічні Acta Derm. L'enereol. 78:84-86 (1998)], артрит ефекти, такі як подразнення шлунково-кишкового [Falcimi, et al., Ann. Rheum. Dis. 55:745-748 (1996)], тракту і нирок і токсична дія на печінку. Більш того, інтерстиціальний цистит [Okragly, et al., J. Urology НСПЗЗ не можуть досягнути адекватного 161:438-441 (1999)] і астму [Braun, et al., Eur. J полегшення болю навіть в їх максимальних Immunol. 28:3240-3251 (1998)]. терапевтично допустимих дозах при деяких Отже підвищений рівень NGF в периферичних хворобливих станах. тканинах пов'язаний з гіперальгезією і запаленням, Фактор росту нервів (NGF) був першим і він спостерігався при ряді форм артриту. ідентифікованим нейротропіном, і його роль в Синовіальна оболонка пацієнтів, уражених розвитку і виживанні і периферичних, і ревматоїдним артритом, експресує високі рівні центральних нейронів була досить NGF в той час, як повідомлялося, що в охарактеризована. Було показано, що NGF являє незапаленій синовіальній оболонці NGF не собою вирішальний фактор виживання і підтримки виявляється [Aloe, et al., Arch. Rheum. 35:351-355 при розвитку периферичних симпатичних і (1992)]. Аналогічні результати спостерігалися у ембріональних сенсорних нейронів і холінергічних щурів з експериментально викликаним нейронів основи переднього мозку [Smeyne, et al., ревматоїдним артритом [Aloe, еt аl., Clin. Exp. Nature 368:246-249 (1994); Creowley, et al., Cell Rgeumatol. 10:203-204 (1992)]. Повідомлялося про 76:1001-1011 (1994)]. NGF здійснює стимулюючу підвищені рівні NGF у трансгенних мишей з регуляцію на експресію нейропептидів в сенсорних артритом нарівні із збільшенням кількості тучних нейронах [Lindsay, et al., Nature 337:362-364 кліток [Aloe, et al., Int. J. Tissue Reactions-Exp. Clin. (1989)], і його активність опосередкована через 2 Aspects 15:139-143 (1993)]. різних рецептори, зв'язаних з мембраною, Існують 2 загальні категорії медикаментозної рецептор TrkA тирозинкінази і рецептор р75, який терапії для лікування болю, причому кожна діє за структурно зв'язаний з іншими членами сімейства допомогою різних механізмів і чинить різні ефекти, рецепторів фактора некрозу пухлин [Chao, et al., і вони обидві мають недоліки. Перша категорія Science 232:518-521 (1986)]. включає нестероідні протизапальні засоби У доповнення до його впливів на нервову (НСПЗЗ), які використовуються для лікування систему, NGF все більше залучався до процесів незначного болю, але терапевтичне застосування поза нервовою системою. Наприклад, було яких обмежене небажаними впливами на показано, що екзогенно введений NGF посилює шлунково-кишковий тракт, такими як ерозія проникність судин [Otten, et al, Eur.J.Pharmacol. слизової оболонки шлунка, утворення пептичної 106:199-201 (1984)], посилює Τ- і В-клітинні імунні виразки або запалення 12-палої кишки і товстої відповіді [Otten, et al., Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. кишки і токсична дія на нирки при тривалому 86:10059-10063 (1989)], викликає застосуванні. Друга категорія включає опіоїдні диференціювання лімфоцитів і проліферацію анальгетики, такі як морфін, які застосовуються тучних клітин і спричиняє вивільнення розчинних для лікування болю від помірного до сильного, але біологічних сигналів з тучних клітин [Matsuda, et терапевтичне застосування яких обмежене в al., Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 85:6508-6512 зв'язку з небажаними ефектами, такими як закреп, (1988); Pearce, et al., J.Physiol 372:379-393 (1986); нудота і блювота, пригнічення дихання, психічні Bischoff, et al., Blood 79:2662-2669 (1992); порушення, ниркова коліка, стійкість до тривалого Horigome, et al., J. Blol Chem. 268:14881-14887 застосування і ризик розвитку залежності. (1993)]. NGF продукується рядом типів клітин, Очевидно, що існує необхідність в включаючи тучні клітини [Leon, et al., Proc. Natl. поліпшеному лікуванні болю, яке забезпечує Acad. Sci. U.S.A. 91:3739-3743 (1994)], Вполіпшену терапевтичну вигоду (наприклад, лімфоцити [Torcia, et al., Cell 85:345-356 (1996), знижену силу і/або частоту болю) і/або знижує кератиноцити (Di Macro, et al., J. Biol. Chem. частоту виникнення небажаних побічних ефектів, 268:22838-22846)), гладком'язеві клітини (Ueyama, викликаних багатьма сучасними схемами et al., J. Hypertens. 11:1061-1065 (1993)], лікування. фібробласти [Lindholm, et al., Eur. J. Neurosci. Всі наведені в даному описі посилання, 2:795-801 (1990)], бронхіальні епітеліальні клітини включаючи патентні заявки і публікації, повністю [Kassel, et al., Clin. Exp. Allergy 31:1432-40 (2001)], включені як посилання. ниркові мезангіальні клітини [Steiner, et al., Am. J. Даний винахід заснований на відкритті того, Physiol. 261:F792-798 (1991)] і трубочки скелетних що антагоністи NGF ефективні при лікуванні болю м'язів [Schwartz, et al., J. Photochem. Photobiol. У в поєднанні з НСПЗЗ. Така терапія приводить до 66:195-200 (2002)]. Рецептори NGF були виявлені несподівано посиленого лікування болю. Крім того, на різних типах клітин поза нервовою системою. така терапія загалом забезпечує можливість 5 81299 6 застосування зниженого дозування НСПЗЗ для Способи винаходу прийнятні для лікування отримання такої ж кількості зменшення болю і/або або профілактики будь-якого болю будь-якої інших форм посилення лікування болю НСПЗЗ. етіології, включаючи біль, при якому загалом У першому аспекті даний винахід характеризує призначається застосування НСПЗЗ. У деяких спосіб лікування (або в інших варіантах здійснення варіантах здійснення біль являє собою профілактики) болю, що включає введення деякої післяопераційний біль. У деяких варіантах кількості антагоніста фактора росту нервів і деякої здійснення біль являє собою біль, пов'язаний з кількості НСПЗЗ так, що в поєднанні вони опіком. В інших варіантах здійснення біль являє забезпечують ефективне полегшення болю. собою біль, пов'язаний з ревматоїдним артритом. Відносні кількості і співвідношення антагоніста В інших варіантах здійснення біль являє собою NGF і НСПЗЗ можуть варіюватися. У деяких біль, пов'язаний з остеоартритом. варіантах здійснення вводиться кількість Антагоніст NGF, прийнятний для застосування антагоніста NGF, достатня для того, щоб в способах винаходу, являє собою будь-який забезпечити можливість зниження звичайної дози засіб, який може прямо або опосередковано НСПЗЗ, необхідної для отримання такого ж привести до зниженої біологічної активності NGF. ступеня ефекту полегшення болю. У деяких У деяких варіантах здійснення антагоніст MGF варіантах здійснення вводиться кількість зв'язує (фізично взаємодіє з) NGF (наприклад, антагоніста NGF, достатня для того, щоб антитіло), зв'язується з рецептором NGF (таким як забезпечити можливість зниження звичайної дози рецептор trkA і/або р75) і/або знижує (гальмує НСПЗЗ, необхідної для отримання такого ж і/або блокує) низхідну передачу сигналів від ступеня ефекту полегшення болю, щонайменше, рецепторів NGF (наприклад, інгібітори передачі приблизно на 5%, щонайменше, приблизно на сигналів кінази або іншої низхідної передачі 10%, щонайменше, приблизно на 20%, сигналів, викликаної NGF, в клітині-мішені). В щонайменше, приблизно на 30%, щонайменше, інших варіантах здійснення антагоніст NGF інгібує приблизно на 40%, щонайменше, приблизно на (знижує) синтез і/або вивільнення NGF. В інших 50%, щонайменше, приблизно на 60%, варіантах здійснення антагоніст NGF зменшує щонайменше, приблизно на 70%, щонайменше, експресію або функцію рецепторів NGF TrkA і/або приблизно на 80%, або, щонайменше, приблизно р75. В іншому варіанті здійснення антагоніст NGF на 90%, або більше. Це зменшення може являє собою антагоніст NGF, який не є відбуватися з точки зору кількості, введеної в дане імуноадгезином TrkA (тобто відрізняється від введення, і/або кількості, введеної протягом імуноадгезину TrkA). У деяких варіантах даного періоду часу (знижена частота). здійснення антагоніст NGF вибраний з будь-якого В іншому аспекті винахід характеризує одного або більше з наступних: антитіло проти способи посилення лікування болю НСПЗЗ, що NGF, антисмислова молекула, направлена на передбачають введення ефективної кількості нуклеїнову кислоту, що кодує NGF (включаючи НСПЗЗ в поєднанні з ефективною кількістю антисмислову молекулу, направлену на антагоніста NGF. Використовуваний в даному нуклеїнову кислоту, що кодує NGF), антисмислова описі термін «введення в поєднанні» включає молекула, направлена на рецептори NGF (такі як одночасне введення і/або введення в різний час. TrkA і/або р75), речовину, що інгібує NGF, Введення в поєднанні також охоплює введення у структурний аналог NGF, домінантно-негативна вигляді спільної композиції (тобто антагоніст NGF і мутація рецептора TrkA і/або р75, яка зв'язує NGF, НСПЗЗ присутні (комбінуються) в одній і тій самій антитіло проти TrkA, антитіло проти р75 і інгібітор композиції) і/або введення у вигляді окремих кінази. У деяких варіантах здійснення антагоніст композицій. Використовуваний в даному описі NGF (такий як антитіло проти NGF) зв'язує NGF термін «введення в поєднанні» охоплює будь-яку (такий як hNGF) і значно не зв'язується із обставину, при якій НСПЗЗ і антагоніст NGF спорідненими нейротропінами, такими як NT-3, вводяться в ефективній кількості індивідууму. Як NT-4/5 і/або BDNF. В іншому варіанті здійснення далі обговорюється в даному описі, зрозуміло, що антагоніст NGF являє собою антитіло проти NGF. антагоніст NGF і НСПЗЗ можуть вводитися з У ще одних варіантах здійснення антитіло проти різною частотою і/або інтервалами введення. NGF специфічно зв'язується з NGF. У ще одних Наприклад, антитіло проти NGF можна вводити 1 варіантах здійснення антитіло проти ΝΟί розпізнає раз/тиждень, тоді як НСПЗЗ можна вводити людський NGF. У ще одних варіантах здійснення частіше. Зрозуміло, що антагоніст NGF і НСПЗЗ антитіло проти NGF специфічно зв'язує людський можуть вводитися одним і тим самим шляхом NGF. У ще одних варіантах здійснення антитіло введення або різними шляхами введення, і що специфічно зв'язує той самий епітоп 6 NGF, що і різні схеми введення можуть змінюватися антитіло, вибране з одного або більше з протягом ходу введення (введень). Введення наступних: Mab 911, Mab 912 і Mab 938 [див. може відбуватися перед початком болю. Hongo, et al., Hybridoma 19:215-227 (2000)]. У ще В іншому аспекті винахід забезпечує способи одних варіантах здійснення антитіло проти NGF зниження частоти виникнення болю, полегшення гуманізоване (включаючи гуманізоване Mab 911, болю, зменшення болю і/або затримки розвитку таке як антитіло Е3, описане в даному описі). У ще або прогресування болю у індивідуума, причому одних варіантах здійснення антитіло проти NGF вказані способи передбачають введення являє собою антитіло Е3 (як описано в даному ефективної кількості антагоніста NGF в поєднанні описі). В інших варіантах здійснення антитіло з ефективною кількістю НСПЗЗ. проти NGF включає один або більше CDR антитіла Е3 (наприклад, 1, 2, 3, 4, 5 або, в деяких варіантах 7 81299 8 здійснення, всі 6 CRD з Е3). В інших варіантах приблизно 10нМ, приблизно 1нМ, приблизно здійснення антитіло проти NGF є людським. У ще 500пкМ, приблизно 100пкМ або приблизно 50пкМ. одних варіантах здійснення антитіло проти NGF У ще одних варіантах здійснення афінітет включає амінокислотну послідовність варіабельної зв'язування становить приблизно 2пкМ, приблизно області важкого ланцюга, показану в таблиці 1 5пкМ, приблизно 10пкМ, приблизно 15пкМ, (SEQ ID NO:1), і амінокислотну послідовність приблизно 20пкМ, приблизно 40пкМ або більше за варіабельної області легкого ланцюга, показану в приблизно 40пкМ. Як добре відомо в даній галузі, таблиці 2 (SEQ ID NO:2). У ще одних варіантах афінітет зв'язування може бути виражений у здійснення антитіло проти NGF включає вигляді KD або константи дисоціації, і збільшений ° амінокислотну послідовність варіабельної області KD афінітет зв'язування відповідає зниженій . важкого ланцюга, показану в таблиці 1 (SEQ ID Афінітет зв'язування мишачого моноклонального NO:1). У ще одних варіантах здійснення антитіло антитіла 911 проти NGF [Hongo et al., Hybridoma проти NGF включає амінокислотну послідовність 19:215-227 (2000)] з людським NGF становить варіабельної області легкого ланцюга, показану в приблизно 10нМ, а афінітет зв'язування таблиці 2 (SEQ ID NO:2). У ще одних варіантах гуманізованого антитіла проти NGF Е3 (описаного здійснення антитіло включає модифіковану в даному описі) з людським NGF становить константну область, таку як константна область, приблизно 0,07нМ. яка є імунологічно інертною, наприклад, не У випадках, коли антагоніст NGF являє собою запускає лізис, опосередкований комплементом, антитіло, антитіло може являти собою фрагмент або не стимулює антитілозалежну антитіла, включаючи фрагмент антитіла, вибраний клітинноопосередковану цитотоксичність (ADCC). з групи, що складається з фрагментів Fab, Fab', В інших варіантах здійснення константна область F(ab')2, Fv, діатіл, одноланцюгових молекул модифікована, як описано в [Eur. J. Immunol. антитіла і мультиспецифічних антитіл, утворених з (1999) 29:2613-2624; заявці РСТ фрагментів антитіла, і одноланцюгової молкули Fv №PCT/GB99/01441; і/або в заявці на патент (scFv). Великобританії №9809951.8]. НСПЗЗ може являти собою будь-яку У деяких варіантах здійснення антагоніст NGF нестероїдну протизапальну сполуку. НСПЗЗ зв'язується з молекулою NGF. У ще одних класифікуються за їх здатністю інгібувати варіантах здійснення антагоніст NGF являє собою циклооксигеназу. Циклооксигеназа 1 і антитіло, яке специфічно зв'язується з NGF. Однак циклооксигеназа 2 являють собою 2 основні антагоніст NGF може альтернативно зв'язуватися ізоформи циклооксигенази, а найстандартніші з рецептором TrkA. Антагоніст NGF може являти НСПЗЗ являють собою змішані інгібітори обох собою моноклональне антитіло проти людського ізоформ. Найстандартніші НСПЗЗ відносяться до NGF (анти-hNGF), яке здатне зв'язувати hNGF і однієї з наступних п'яти структурних категорій: (1) ефективно інгібувати зв'язування hNGF з похідні пропіонової кислоти, такі як ібупрофен, людським TrkA (hTrkA). напроксен, напросин, диклофенак і кетопрофен; Афінітет зв'язування антитіла проти NGF з (2) похідні оцтової кислоти, такі як толметин і NGF (таким як hNGF) може складати від сліндак; (3) похідні фенамової кислоти, такі як приблизно 0,10нМ до приблизно 0,75нМ, від мефенамова кислота і меклофенамова кислота; приблизно 0,15нМ до приблизно 0,75нМ і від (4) похідні біфенілкарбонової кислоти, такі як приблизно 0,18нМ до приблизно 0,72нМ. В одному дифлунізал і флуфенізал; і (5) оксиками, такі як варіанті здійснення афінітет зв'язування становить піроксим, судоксикам і ізоксикам. приблизно 2 пкМ і 22 пкМ. У деяких варіантах Був описаний інший клас НСПЗЗ, які вибірково здійснення афінітет зв'язування становить інгібують циклооксигеназу 2. Інгибітори Сох-2 були приблизно 10нМ. В інших варіантах здійснення описані, наприклад, в [патентах США №№ афінітет зв'язування складає менш, ніж приблизно 5616601; 5604260; 5593994; 5550142; 5536752; 10нМ. В інших варіантах здійснення афінітет 5521213; 5475995; 5639780; 5604253; 5552422; зв'язування становить приблизно 0,1нМ або 5510368; 5436265; 5409944 і 5130311], які всі приблизно 0,07нМ. В інших варіантах здійснення включені в даний опис як посилання. Певні афінітет зв'язування складає менше за приблизно ілюстративні інгібітори СОХ-2 включають 0,1нМ або менше за приблизно 0,07нМ. В інших целекоксиб (SC-58635), рофекоксиб, DUP-697, варіантах здійснення афінітет зв'язування флозулід (CGP-28238), мелоксикам, 6-метокси-2становить приблизно 100нМ, приблизно 50нМ, нафтилоцтову кислоту (6-MNA), МК-966, приблизно 10нМ, приблизно 1нМ, приблизно набуметон (проліки для 6-MNA), нимезулід, NS500пкМ, приблизно 100пкМ або приблизно від 398, SC-5766, SC-58215, Т-614; або їх комбінації. 50пкМ до будь-якого з приблизно 2пкМ, приблизно У деяких варіантах реалізації винахід надає 5пкМ, приблизно 10пкМ, приблизно 15пкМ, способи, в яких аспірин/або ацетомінофен приблизно 20пкМ, приблизно 40пкМ або застосовуються в поєднанні з антагоністом NGF приблизно 50пкМ. У деяких варіантах здійснення (таким як антитіло проти NGF). афінітет зв'язування складає будь-яку величину з Антагоніст NGF і/або НСПЗЗ можуть приблизно 100нМ, приблизно 50нМ, приблизно вводитися індивідууму будь-яким прийнятним 10нМ, приблизно 1нМ, приблизно 500пкМ, шляхом. Наприклад, їх можна вводити разом або приблизно 100пкМ або приблизно 50пкМ або окремо і/або одночасно, і/або послідовно, менше за приблизно 50пкМ. У деяких варіантах перорально, внутрішньовенно, сублінгвально, здійснення афінітет зв'язування складає менше, підшкірно, внутрішньоартеріально, ректально, в ніж будь-яка величина з 100нМ, приблизно 50нМ, 9 81299 10 спинний мозок, інтраторакально, антитіла проти NGF і НСПЗЗ і фармацевтично внутрішньоочеревинно, в шлуночки головного прийнятний носій. мозку, сублінгвально, трансдермально або У деяких варіантах здійснення винахід надає шляхом інгаляції. Введення може бути системним, набір для лікування болю, що включає антитіло тобто внутрішньовенним або локалізованим. проти NGF, НСПЗЗ і інструкції по введенню У другому аспекті даний винахід характеризує антитіла проти NGF в поєднанні з НСПЗЗ для композиції, що включають антагоніст фактора лікування болю. росту нервів і НСПЗЗ. Антагоніст фактора росту Фіг.1 демонструє, що кумулятивна оцінка болю нервів і НСПЗЗ можуть бути присутніми разом з в балах знижена у тварин, що отримували одним або більше фармацевтично прийнятними лікування S[+]ібупрофеном в дозі 10 або 30мг/кг в носіями або ексципієнтами, або можуть бути комбінації з антагоністом NGF (антагоністом проти присутніми в окремих композиціях. В іншому NGF Mab 911; [див. Kongo, et al., Hybridoma аспекті даний винахід надає синергічну 19:215-227 (2000)]). Тварини були розділені на дві композицію антагоніста NGF і НСПЗЗ. групи (контрольна і яка отримувала лікування У третьому аспекті даний винахід антитілами). Антагоніст NGF вводили за 15 годин характеризує набір для застосування в будь-якому перед операцією, внутрішньоочеревинно (час = з способів, розкритих в даному описі, причому 15 годин) в дозі 1мг/кг. Операцію виконували, як вказаний набір передбачає антагоніст NGF і описано у час 0. Біль у спокої оцінювали через 24 НСПЗЗ. Набір може, крім того, включати інструкції години після операції («0» на графіку). Потім всіх для будь-якого з описаних в даному описі тварин лікували ібупрофеном (300мг/мл в 45% способів. Інструкції можуть включати введення рідині бета-циклодекстрину) в концентрації 10мг/кг антагоніста NGF (такого як антитіло проти NGF) в або 30мг/кг маси тіла. Тварин, що не отримували поєднанні з НСПЗЗ (тобто одночасне введення лікування антитілом, також лікували ібупрофеном і/або введення в різний час). У деяких варіантах в дозі 10мг/кг, 30мг/кг, 100мг/кг і 300мг/кг. здійснення антагоніст NGF і НСПЗЗ упаковані Ібупрофен вводили підшкірно в задню частину разом, але вони можуть бути або можуть не бути в шиї. Через 1 годину після введення дози одному і тому самому контейнері. Так, в деяких ібупрофену оцінювали біль у спокої. Лікування варіантах здійснення набір включає антагоніст антагоністом проти NGF плюс ібупрофеном більш NGF і НСПЗЗ, присутні в одному і тому самому ефективне в зменшенні болю, ніж лікування або контейнері, і інструкції по застосуванню в будьодним ібупрофеном, або одним антитілом проти якому з описаних в даному описі способів. В інших антагоніста NGF. варіантах здійснення набір включає антагоніст Фіг.2 являє собою графік, що показує NGF і НСПЗЗ, що знаходяться в окремих кумулятивну оцінку болю в балах у тварин, що контейнерах. отримували лікування диклофенаком в дозі 5мг/кг, В інших варіантах здійснення винахід надає в комбінації з антагоністом NGF (антитіло Mab 911 спосіб лікування болю у індивідуума, що проти антагоніста NGF; [див. Kongo, et al., передбачає введення індивідууму ефективної Hybridoma 19:215-227 (2000)]). Тварини були кількості антитіла проти фактора росту нервів розділені на дві групи (контрольна і що (NGF) і НСПЗЗ. В інших варіантах здійснення отримувала лікування антитілами). Антагоніст NGF НСПЗЗ вибраний з групи, що складається з вводили за 15 годин перед операцією, ібупрофену, напроксену, напросину, диклофенака, внутрішньоочеревинно (час = -15 годин) в дозі кетопрофену, толметину, сліндака, мефенамової 1мг/кг. Операцію виконували, як описано у час 0. кислоти, меклофенамової кислоти, дифлунізала, Біль у спокої оцінювали через 24 години після флуфенізала, піроксиму, судоксикаму, ізоксикаму, операції («0» на графіку). Потім всіх тварин целекоксибу, рофекоксибу, DUP-697, флозуліду, лікували диклофенаком в дозі 5мг/кг маси тіла. мелоксикаму, 6-метокси-2-нафтилоцтової кислоти, Тварин, що не отримували лікування антитілом, МК-966, набуметону, німезуліду, NS-398, SC-5766, також лікували диклофенаком в дозі 5мг/кг. SC-58215, Т-614. У деяких варіантах здійснення Диклофенак вводили підшкірно в задню частину НСПЗЗ є ібупрофеном. У деяких варіантах шиї. здійснення антитіло проти NGF зв'язує людський Через 1 годину після введення диклофенака NGF. У деяких варіантах здійснення антитіло оцінювали біль у спокої. проти NGF зв'язує людський NGF з афінітетом Заявники виявили, що біль можна попередити зв'язування приблизно 10нМ або менш ніж або лікувати введенням ефективної кількості приблизно 10нМ. У деяких варіантах здійснення антагоніста NGF (такого як антитіло проти NGF) в антитіло проти NGF являє собою людське поєднанні з НСПЗЗ. Способи і композиції даного антитіло. У деяких варіантах здійснення антитіло винаходу можна використовувати для лікування проти NGF являє собою гуманізоване антитіло. У або профілактики болю, включаючи будь-який деяких варіантах здійснення гуманізоване антитіло біль, при якому загалом призначається являє собою антитіло, що включає варіабельну застосування НСПЗЗ. Застосуванням антагоніста область важкого ланцюга, показану в SEQ ID NO:1 фактора росту нервів І НСПЗЗ в поєднанні, і варіабельну область легкого ланцюга, показану в відповідно до даного винаходу, тепер можна SEQ ID NO:2. У деяких варіантах здійснення біль лікувати біль меншою дозою НСПЗЗ, знижуючи, за являє собою післяопераційний біль. допомогою цього, імовірність побічних ефектів, У деяких варіантах здійснення винахід пов'язаних з лікуванням НСПЗЗ. В деяких забезпечує фармацевтичну композицію для варіантах здійснення вводиться кількість лікування болю, що включає ефективну кількість антагоніста NGF, достатня для того, щоб 11 81299 12 забезпечити можливість зниження звичайної дози інгібують циклооксигеназу 2. Інгибітори Сох-2 були НСПЗЗ, необхідної для отримання такого ж описані, наприклад, в [патентах США №№ ступеня ефекту полегшення болю, щонайменше, 5616601; 5604260; 5593994; 5550142; 5536752; приблизно на 5%, щонайменше, приблизно на 5521213; 5475995; 5639780; 5604253; 5552422; 10%, щонайменше, приблизно на 20%, 5510368; 5436265; 5409944 і 5130311], які всі щонайменше, приблизно на 30%, щонайменше, включені в даний опис як посилання. Певні приблизно на 50%, щонайменше, приблизно на ілюстративні інгібітори СОХ-2 включають 60%, щонайменше, приблизно на 70%, целекоксиб (SC-58635), рофекоксиб, DUP-697, щонайменше, приблизно на 90%, або більше. флозулід (CGP-28238), мелоксикам, 6-метокси-2Лікування болю НСПЗЗ можна також нафтилоцтову кислоту (6-MNA), МК-966, посилити, як описано в даному описі, введенням набуметон (проліки для 6-MNA), німезулід, NS-398, НСПЗЗ в поєднанні з антагоністом NGF. SC-5766, SC-58215, Т-614; або їх комбінації. У В одному аспекті винахід надає способи деяких варіантах здійснення аспірин і/або лікування або профілактики болю у індивідуума ацетомінофен застосовуються в поєднанні з (такого як ссавець, і людина, і не людина), що антагоністом NGF (таким як антитіло проти NGF). передбачають введення ефективної кількості Способи і композиції даного винаходу можна антагоніста NGF в поєднанні з ефективною застосовувати для лікування болю будь-якої кількістю НСПЗЗ. В іншому аспекті винахід надає етіології, включаючи гострий і хронічний біль, способи посилення лікування або профілактики будь-який біль із запальним компонентом і біль, NSAD болю у індивідуума, що передбачають при якому звичайно призначаються НСПЗЗ. введення ефективної кількості антагоніста NGF Приклади болю включають післяопераційний біль, (такого як антитіло проти NGF) в поєднанні з біль після хірургічних втручань (включаючи зубний ефективною кількістю НСПЗЗ. В іншому аспекті біль), мігрень, головний біль і невралгію винахід надає способи профілактики, полегшення трійчастого нерва, біль, пов'язаний з опіком, і/або профілактики розвитку або прогресування раною або нирковим каменем, біль, пов'язаний з болю. травмою (включаючи травматичне пошкодження У деяких варіантах здійснення антитіло проти голови), нейропатичний біль, біль, пов'язаний з NGF здатне зв'язувати NGF і ефективно інгібувати м'язово-скелетними розладами, такими як зв'язування NGF з його рецептором ТrkсА або р75 ревматоїдний артрит, остеоартрит, вісцеральний in vivo, або ефективно інгібувати активацію NGF біль, коліт, панкреатит, гастрит, анкілозуючий його рецептора ТrkА або р75. У деяких варіантах спондиліт, серо-негативні (неревматоїдні) здійснення афінітет зв'язування антитіла проти артропатії, не суглобовий ревматизм і NGF складає від приблизно 0,01 до приблизно навколосуглобові розлади і біль, пов'язаний з 1,00нМ або від приблизно 0,05нМ до приблизно раком (включаючи «нападоподібний біль» і біль, 0,25нМ. В інших варіантах здійснення афінітет пов'язаний з термінальними стадіями раку), зв'язування становить приблизно 1пкМ, периферичну нейропатію, постгерпетичну приблизної 2пкМ, приблизно 5пкМ, приблизно невралгію і біль, пов'язаний з 10пкМ, приблизно 15пкМ, приблизно 20пкМ, серповидноклітинним кризом. Приклади болю із приблизно 50пкМ, приблизно 100пкМ, або більше. запальним компонентом (в доповнення до деяких В одному варіанті здійснення афінітет зв'язування з видів болю, описаних вище) включають становить приблизно 2пкМ і 22пкМ. У деяких ревматичний біль, біль, пов'язаний з мукозитом, і варіантах здійснення антитіло зв'язує по суті той дисменорею. В деяких варіантах здійснення самий епітоп 6 NGF, що і антитіло, вибране з способи і композиції даного винаходу одного або більше з наступних: Mab 911, Mab 912 і використовуються для лікування або профілактики Mab 938 [див. Hongo, et al., Hybridoma 19:215-227 післяопераційного болю і/або ракового болю. В (2000)]. інших варіантах здійснення біль являє собою Антитіло може також являти собою фрагмент больове показання, з приводу якого НСПЗЗ антитіла, такий як фрагмент антитіла, вибраний з загалом не призначаються, такий як одного або більше з наступних фрагментів: Fab, нейропатичний біль. В інших варіантах здійснення Fab', F(ab')2, Fv, діатіл, одноланцюгових молекул способи і композиції, описані в даному описі, антитіла і мультиспецифічних антитіл, утворених з використовуються для лікування і/або фрагментів антитіла, і одноланцюгової молекули профілактики болю, пов'язаного з опіком. В інших Fv (scFv). Антитіло може також бути химерним, і варіантах здійснення способи і композиції, описані воно може бути гуманізованим або людським. в даному описі, використовуються для лікування Антитіло може також бути біспецифічним. і/або профілактики болю, пов'язаного з Ілюстративні НСПЗЗ, які можна застосовувати ревматоїдним артритом. В інших варіантах в даному винаході, включають, але не здійснення способи і композиції, описані в даному обмежуються, (1) похідні пропіонової кислоти, такі описі, використовуються для лікування і/або як ібупрофен, напроксен, напросин, диклофенак і профілактики болю, пов'язаного з остеоартритом. кетопрофен; (2) похідні оцтової кислоти, такі як В іншому аспекті винахід забезпечує толметин і сліндак; (3) похідні фенамової кислоти, композиції і набори для лікування болю, що такі як мефенамова кислота і меклофенамова включають антагоніст NGF (такий як антитіло кислота; (4) похідні біфенілкарбонової кислоти, проти NGF) і НСПЗЗ, прийнятні для застосування такі як дифлунізал і флуфенізал; і (5) оксиками, в будь-якому з способів, описаних в даному описі. такі як піроксим, судоксикам і ізоксикам. Був При відсутності інших вказівок, в практиці описаний інший клас НСПЗЗ, які вибірково даного винаходу повинні використовуватися 13 81299 14 звичайні методики молекулярної біології IgA2. Константі домени важкого ланцюга, які (включаючи рекомбінантні методики), відповідають різним класам імуноглобулінів, мікробіології, клітинної біології, біохімії і імунології, називаються відповідно альфа, дельта, епсилон, які знаходяться в межах можливостей фахівців в гамма і мю. Структури субодиниць і тримірні даній галузі. Такі методики повністю пояснені в конфігурації різних класів імуноглобулінів добре літературі, такій як [Molekular cloning: A Laboratory відомі. Manual, second edition (Sambrook et al., 1989) Cold «Моноклональне антитіло» відноситься до Spring Harbor Press; Oligonucleotide Synthesis (M.J. гомогенної популяції антитіл, в якій Gait, ed., 1984); Methods in Molecular Biology, моноклональне антитіло складається з Humana Press; Cell Biology: A Laboratory Notebook амінокислот (що природно зустрічаються і що (E. Cellis, ed., 1998) Academic Press; Animal Cell зустрічаються штучно), які беруть участь у Culture (R.I. Freshney, ed., 1987); Introduction to Cell вибірковому зв'язуванні антигену. Моноклональні and Tissue Culture (J.P. Mather and P.E. Roberts, антитіла високо специфічні, причому вони 1998) Plenum Press; Cell and Tissue Culture: направлені проти одного антигенного сайта. Laboratory Procedures (A. Doyle, J.B. Griffiths, and Термін «моноклональне антитіло» охоплює не D.G. Newell, eds., 1993-8) J. Wiley and Sons; тільки інтактні моноклональні антитіла і Methods in Enzymology (Academic Press, Inc.); моноклональні антитіла повної довжини, але також Handbook of Experimental Immunology (D.M. Weir їх фрагменти (такі як Fab, Fab', F(ab')2, Fv,) and C.C. Blackwell, eds.); Gene Transfer Vectors for одноланцюговий (ScFv), їх мутанти, гібридні білки, Mammalian Cells (J.M. Miller and M.P. Calos, eds., що включають антитільну частину, гуманізовані 1987); Current Protocols in Molecular Biology (F.M. моноклональні антитіла, химерні моноклональні Ausubel et al., eds., 1987); PCR: The Polymerase антитіла і будь-яку іншу модифіковану Chain Reaction, (Mullis et al., eds., 1994); Current конфігурацію молекули імуноглобуліну, яка Protocols in Immunology (J.E. Coligan et al., eds., включає сайт розпізнавання антигену необхідної 1991); Short Protocols in Molecular Biology (Wiley специфічності і здатності зв'язуватися з and Sons, 1999); Immunobiology (C.A. Janeway and антигеном. Немає наміру обмежуватися відносно P. Travers, 1997); Antibodies (P. Finch, 1997); джерела антитіла або способу, яким воно Antibodies: a practical approach (D. Catty., ed., IRL отримане (наприклад, гібридомою, фаговою Press, 1988-1989); Monoclonal antibodies: a practical селекцією, рекомбінантною експресією, approach (P. Shepherd and С Dean, eds., Oxford трансгенними тваринами і т.д.). University Press, 2000); Using antibodies: a «Гуманізовані» антитіла відносяться до laboratoiy manual (E. Harlow and D. Lane (Cold молекули, що має сайт зв'язування антигену, який Spring Harbor Laboratoiy Press, 1999); The по суті позбавлений імуноглобуліну з нелюдських Antibodies (M. Zanetti and J.D. Capra, eds., Harwood видів, і іншу структуру імуноглобуліну молекули, Academic Publishers, 1995)]. засновану на структурі і/або послідовності Визначення людського імуноглобуліну. Сайт зв'язування «Антитіло» (що взаємозамінно антигену може включати або повні варіабельні використовується у множинній формі) являє собою домени, злиті на константні домени, або тільки молекулу імуноглобуліну, здатну специфічно області, що визначають комплементарність (CDR), зв'язуватися з мішенню, такою як вуглеводень, трансплантовані на відповідні каркасні регіони у полінуклеотид, ліпід, поліпептид і т.д., за варіабельних доменах. Сайти зв'язування допомогою, щонайменше, однієї ділянки антигену можуть бути дикого типу або розпізнавання антигену, розташованого у модифіковані одним або більше заміщеннями варіабельній області молекули імуноглобуліну. амінокислот, наприклад, модифіковані для того, Використовуваний в даному описі термін охоплює щоб ближче нагадувати людський імуноглобулін. не тільки інтактні поліклональні або моноклональні Деякі форми гуманізованих антитіл зберігають всі антитіла, але також їх фрагменти (такі як Fab, Fab', послідовності CDR (наприклад, гуманізоване F(ab')2, Fv, одноланцюговий (ScFv), їх мутанти, мишаче антитіло, яке містить всі 6 CDR з мишачих гібридні білки, що включають антитільну частину, антитіл). Інші форми гуманізованих антитіл мають гуманізовані антитіла, химерні антитіла, діатіла, одну або більше CDR (1, 2, 3, 4, 5, 6), які змінені лінійні антитіла, одноланцюгові антитіла, відносно вихідного антитіла. У деяких випадках мультиспецифічні антитіла (наприклад, залишки каркасної області (FR) або інші залишки біспецифічні антитіла) і будь-яку іншу людського імуноглобуліну, заміщені відповідними модифіковану конфігурацію молекули нелюдськими залишками. Крім того, гуманізовані імуноглобуліну, яка включає сайт розпізнавання антитіла можуть включати залишки, які не антигену необхідної специфічності. Антитіло виявляються в антитілі реципієнта або в антитілі включає антитіло будь-якого класу, таке як IgG, донора. IgA або IgM (або його підклас), і антитіло не Використовуваний в даному описі термін повинно бути з якого-небудь конкретного класу. В «фактор росту нервів» і «NGF» відноситься до залежності від амінокислотної послідовності фактора росту нервів і його варіантів (включаючи, антитіла константного домену його важких наприклад, сплайсингові варіанти і варіанти ланцюгів, імуноглобуліни можуть бути віднесені до білкової переробки), які мають, щонайменше, різних класів. Існує 5 основних класів частину активності NGF. Термін "NGF", що імуноглобулінів: IgA, IgD, IgE, IgG i IgM, і декілька з використовується в даному описі, включає всі них можливо, крім того, розділені на підкласи види нативної послідовності NGF ссавців, (ізотипи), наприклад, IgGl, IgG2, IgG3, IgG4, IgAl і 15 81299 16 включаючи людей, нелюдиноподібних мавп, собак, здатне зв'язуватися з NGF і інгібувати біологічну кішок, коней або корів. активність NGF і/або низхідний шлях (шляхи), «Рецептор NGF» відноситься до поліпептиду, опосередкований передачею сигналів NGF. який зв'язаний з NGF або активований ним. «Імуноадгезин ТrkА» відноситься до розчинної Рецептори NGF включають рецептор TrkA і химерної молекули, що включає фрагмент рецептор р75 будь-якого виду ссавців, включаючи, рецептора TrkА, наприклад, позаклітинний домен але не обмежуючись, людей, собак, кішок, коней, рецептора TrkА і послідовність імуноглобуліну, яка приматів або корів. зберігає специфічність зв'язування рецептора «Антагоніст NGF» відноситься до будь-якої TrkА. молекули, яка блокує, пригнічує або знижує «Біологічна активність» NGF загалом (включаючи значно) біологічну активність NGF, відноситься до здатності зв'язувати рецептори включаючи низхідні шляхи, опосередковані NGF і/або активувати шляхи передачі сигналів передачею сигналів NGF, такі як зв'язування з рецепторів NGF. Без обмеження біологічна рецепторами і/або викликана клітинна реакція на активність включає будь-яку одну або більше з NGF. Термін «антагоніст» не має на увазі якогонаступних: здатність зв'язувати рецептори NGF небудь специфічного механізму біологічної дії, і (такі як р75 і/або TrkА); здатність сприяти вважається, що він явно включає і охоплює всі димеризації і/або аутофосфорилюванню можливі фармакологічні, фізіологічні і біохімічні рецепторів TrkА; здатність активувати шляхи взаємодії з NGF, і прямі, і опосередковані, або які передачі сигналів рецепторів NGF; здатність взаємодіють з NGF, його рецептором, або за сприяти клітинному диференціюванню, допомогою іншого механізму, і його наслідки, які проліферації, виживанню, росту та іншим змінам можуть бути досягнуті різними і хімічно клітинної фізіології, включаючи (у разі нейронів, різнорідними композиціями. Ілюстративні включаючи периферичні і центральні нейрони) антагоністи NGF включають, але не обмежуються, зміну морфології нейронів, синаптогенез, антитіло проти NGF, антисмислову молекулу, синаптичну функцію, вивільнення нейромедіаторів направлену на NGF (включаючи антисмислову і/або нейропептидів і регенерацію після молекулу, направлену на нуклеїнову кислоту, що пошкодження і здатність опосередковувати біль. кодує NGF), сполуку, що інгібує NGF, структурний Термін «епітоп» використовується для аналог NGF, домінантно-негативну мутацію позначення сайтів зв'язування для рецептора TrkA, яка зв'язує NGF, і імуноадгезин (моноклональних або поліклональних) антитіл на TrkA, антитіло проти р75, антисмислову молекулу, антигенах, таких як білкові антигени. направлену на будь-який або обидва з рецепторів Термін «лікування», що використовується в TrkA і/або р75 (включаючи, антисмислову даному описі, являє собою підхід для отримання молекулу, направлену на нуклеїнову кислоту, що сприятливих або бажаних клінічних результатів. кодує ТrkА або р75) і інгібітор кінази. Для мети Для цілей даного винаходу сприятливі або бажані даного винаходу потрібно ясно розуміти, що клінічні результати включають, але не термін «антагоніст» охоплює всі раніше обмежуються, один або більше з наступних: ідентифіковані терміни і функціональні стани і ослаблення або полегшення будь-якого аспекту характеристики, за допомогою яких сам NGF, болю, включаючи гострий, хронічний, запальний, біологічна активність NGF (включаючи, але не нейропатичний або післяопераційний біль. Для обмежуючи його здатність опосередковувати будьцілей даного винаходу сприятливі або бажані який аспект болю) або послідовності біологічної клінічні результати включають, але не активності по суті анулюються, зменшуються або обмежуються, один або більше з наступних: нейтралізуються будь-якою значною мірою. У включаючи зменшення тяжкості, полегшення деяких варіантах здійснення антагоніст NGF одного або більше симптомів, пов'язаних з болем, зв'язує (фізично взаємодіє) з NGF (наприклад, включаючи будь-який аспект болю (такий як антитіло), зв'язується з рецептором NGF (таким як зменшення тривалості болю і/або зменшення рецептор ТrkА або рецептор р75) знижує (гальмує больової чутливості або больового відчуття). і/або блокує) низхідну передачу сигналів «Зниження частоти виникнення» болю означає рецептора NGF, і/або інгібує (знижує) синтез, будь-яке зниження тяжкості (що може включати продукцію або вивільнення NGF. У деяких зниження необхідності і/або кількості (наприклад, варіантах здійснення антагоніст NGF зв'язує впливу) інших засобів і/або способів лікування, що (фізично взаємодіє) з NGF (наприклад, антитіло), загалом використовуються з приводу цих станів, зв'язується з рецептором NGF (таким як рецептор тривалості і/або частоти (включаючи, наприклад, ТrkА або рецептор р75) і/або знижує (гальмує і/або затримку або збільшення часу до виникнення блокує) низхідну передачу сигналів рецептора болю у індивідуума). Як зрозуміло фахівцям в NGF. В іншому варіанті здійснення антагоніст NGF даній галузі, індивідууми можуть варіюватися з зв'язується з NGF і запобігає димеризації точки зору їх реакції на лікування, і також, рецептора ТrkА і/або аутофосфорилюванню ТrkА. наприклад, «спосіб зниження частоти виникнення В інших варіантах антагоніст NGF інгібує або болю у індивідуума» відображає введення знижує синтез NGF. В інших варіантах здійснення антагоніста NGF, описаного в даному описі, в антагоніст NGF інгібує або знижує синтез і/або поєднанні з НСПЗЗ, як описано в даному описі, на продукцію (вивільнення). Приклади типів основі доцільного очікування, що таке введення антагоністів NGF надані в даному описі. може, ймовірно, спричинити таке зменшення Використовуваний в даному описі термін частоти виникнення у цього конкретного «антитіло проти NGF» відноситься до антитіла, яке індивідуума. 17 81299 18 «Полегшення» болю або одного або більше індивідуумами, що не отримували комбіновану симптомів болю означає зменшення або терапію. Ефективна кількість антагоніста NGF пом'якшення одного або більше симптомів болю, в також охоплює кількість антагоніста NGF, порівнянні з відсутністю введення антагоніста NGF достатню для посилення лікування болю НСПЗЗ в поєднанні з НСПЗЗ. «Полегшення» також (терапевтичного ефекту), як описано в даному включає покоротшання або зменшення тривалості описі, або для зниження дози НСПЗЗ, необхідної симптому. для лікування або профілактики болю, як описано «Пом'якшення» болю або одного або більше в даному описі. Відповідно до уявлень в даній симптомів болю означає зменшення ступеня галузі, ефективна кількість антагоніста NGF в одного або більше небажаних клінічних проявів поєднанні з НСПЗЗ може варіюватися, нарівні з болю у індивідуума або популяції індивідуумів, що іншими причинами, в залежності від типу болю (і отримували лікування антагоністом NGF в анамнезу пацієнта, а також інших чинників, таких поєднанні з НСПЗЗ відповідно до винаходу. як тип (і/або дозування) або використовуваного Використовуваний в даному описі термін антагоніста NGF і/або НСПЗЗ). Ефективна «затримка» розвитку болю означає відстрочення, кількість в контексті даного винаходу може також перешкоджання, сповільнення, затримку, являти собою таку кількість антагоніста NGF і стабілізацію і/або відкладене прогресування болю. НСПЗЗ, при якій досягається синергізм. Ця затримка може бути різної тривалості, в Ефективна кількість антагоніста в контексті даного залежності від анамнезу захворювання і/або винаходу загалом означає кількість, достатню для індивідуумів, що одержують лікування. Як того, щоб привести до посилення терапевтичного очевидно для фахівця в даній галузі, достатня або ефекту НСПЗЗ, що застосовується по підведенню значна затримка може насправді охоплювати болю (що, в свою чергу, означає, що знижена доза профілактику в тому, що у індивідуума не і/або спостерігається який-небудь інший розвивається біль. Спосіб, який «затримує» сприятливий ефект) і/або привести до розвиток симптому, являє собою спосіб, який сприятливого ефекту, в порівнянні з лікуванням знижує імовірність розвитку симптому в даній одним НСПЗЗ. «Ефективна кількість» антагоніста часовій рамці і/або знижує ступінь симптомів в NGF може також привести до синергіченого даній часовій рамці, в порівнянні з відсутністю ефекту, в порівнянні з введенням з одним застосування способу. Такі порівняння звичайно антагоністом NGF або НСПЗЗ. засновані на клінічних дослідженнях з «Індивідуум» є хребетним, переважно, використанням статистично значущої кількості ссавцем, переважніше, людиною. Ссавці індивідуумів. включають, але не обмежуються, «Розвиток» або «прогресування» болю сільськогосподарських тварин, спортивних тварин, означає вихідні прояви і/або наступне домашніх тварин, приматів, коней, корів, собак, прогресування розладу. Розвиток болю може бути мишей і щурів. виявлений і оцінений з використанням Термін «НСПЗЗ» відноситься до нестероїдної стандартних клінічних методик, які добре відомі в протизапальної сполуки. НСПЗЗ діляться на даній галузі. Однак розвиток також відноситься до категорії в залежності від їх здатності інгібувати прогресування, яке може бути таким, що не циклооксигеназу. Циклооксигеназа 1 і виявляється. З метою даного винаходу, розвиток циклооксигеназа 2 являють собою дві основні або прогресування відноситься до біологічного ізоформи циклооксигенази, і більшість перебігу симптомів. «Розвиток» включає стандартних НСПЗЗ являють собою змішані виникнення, рецидив і початок. Використовуваний інгібітори цих двох ізоформ. Більшість стандартних в даному описі термін «початок» або НСПЗЗ відносяться до однієї з наступних п'яти «виникнення» болю включає вихідний початок структурних категорій: (1) похідні пропіонової і/або рецидив. кислоти, такі як ібупрофен, напроксен, напросив, «Ефективна кількість» являє собою кількість, диклофенак і кетопрофен; (2) похідні оцтової достатню для отримання сприятливих або кислоти, такі як толметин і сліндак; (3) похідні бажаних клінічних результатів, включаючи фенамової кислоти, такі як мефенамова кислота і полегшення або зниження больового відчуття. Для меклофенамова кислота; (4) похідні цілей даного винаходу, ефективна кількість біфенілкарбонової кислоти, такі як дифлунізал і антагоніста NGF (такого як антитіло проти NGF) і флуфенізал; і (5) оксиками, такі як піроксим, НСПЗЗ включає кількість, достатню для лікування, судоксикам і ізоксикам. полегшення, зниження інтенсивності або Був описаний інший клас НСПЗЗ, які вибірково профілактики болю (включаючи сприйняття болю і інгібують циклооксигеназу 2. Інгибітори Сох-2 були відчуття болю) будь-якого типу, включаючи описані, наприклад, в [патентах США №№ гострий, хронічний, запальний, нейропатичний або 5616601; 5604260; 5593994; 5550142; 5536752; післяопераційний біль. У деяких варіантах 5521213; 5475995; 5639780; 5604253; 5552422; здійснення ефективну кількість НСПЗЗ і 5510368; 5436265; 5409944 і 5130311], які всі антагоніста NGF, здатну модулювати поріг включені в даний опис як посилання. Певні чутливості до зовнішніх стимулів до рівня, ілюстративні інгібітори СОХ-2 включають порівнянного з рівнем, що спостерігається у целекоксиб (SC-58635), рофекоксиб, DUP-697, здорових індивідуумів. В інших варіантах флозулід (CGP-28238), мелоксикам, 6-метокси-2здійснення цей рівень може не бути порівнянним з нафтилоцтову кислоту (6-MNA), МК-966, рівнем, що спостерігається у здорових набуметон (проліки для 6-MNA), нимезулід, NSіндивідуумів, але знижений, в порівнянні з 398, SC-5766, SC-58215, Т-614; або їх комбінації. 19 81299 20 У деяких варіантах здійснення аспірин і/або антагоніста NGF відносно ефективності НСПЗЗ у ацетомінофен застосовуються в поєднанні з відсутність антагоніста NGF. Як інший приклад, антагоністом NGF (таким як антитіло проти NGF). лікування або профілактика болю НСПЗЗ може Аспірин являє собою інший тип нестероїдної бути «посилена» застосуванням антагоніста NGF в протизапальної сполуки. поєднанні з НСПЗЗ, коли це застосування Використовуваний в даному описі термін «в забезпечує можливість кращого полегшення болю поєднанні» включає одночасне введення і/або (наприклад, коли застосовується доза НСПЗЗ, яка введення в різний час. Введення в поєднанні не забезпечує можливість ефективного лікування також охоплює введення у вигляді спільної або профілактики болю). композиції (тобто антагоніст NGF і НСПЗЗ присутні Відносно всіх способів, описаних в даному (комбінуються) в одній і тій самій композиції) і/або описі, посилання на антагоністи NGF і НСПЗЗ введення у вигляді окремих композицій. також включають композиції, що включають одне Використовуваний в даному описі термін або декілька цих засобів. Даний винахід можна «введення в поєднанні» призначений охоплювати застосовувати для лікування болю у індивідуумів, будь-яку обставину, при якій НСПЗЗ і антагоніст що включають всіх ссавців, і людини, і не людини. NGF вводяться в ефективній кількості індивідууму, В одному аспекті винахід надає способи яке може відбуватися одночасно і/або окремо. Як лікування болю у індивідуума, що включають далі обговорюється в даному описі, зрозуміло, що введення ефективної кількості антагоніста NGF антагоніст NGF і НСПЗЗ можуть вводитися з (такого як антитіло проти NGF) в поєднанні з різною частотою і/або інтервалами введення. ефективною кількістю НСПЗЗ. В деяких варіантах Наприклад, антитіло проти NGF можна вводить 1 здійснення вводиться кількість антагоніста NGF, раз/тиждень, тоді як НСПЗЗ можна вводити достатня для того, щоб забезпечити можливість частіше. Зрозуміло, що антагоніст NGF і НСПЗЗ зниження звичайної дози НСПЗЗ, необхідної для можуть вводитися одним і тим самим шляхом отримання такого ж ступеня ефекту полегшення введення або різними шляхами введення. болю, щонайменше, приблизно на 5%, «Післяопераційний біль» (що взаємозамінно щонайменше, приблизно на 10%, щонайменше, іменується «болем після розрізу» або приблизно на 20%, щонайменше, приблизно на «посттравматичним болем») відноситься до болю, 30%, щонайменше, приблизно на 50%, який виникає або походить від зовнішньої травми, щонайменше, приблизно на 60%, щонайменше, такої як поріз, прокол, розріз, розрив або рана приблизно на 70%, щонайменше, приблизно на тканини індивідуума (включаючи біль, який 80%, або, щонайменше, приблизно на 90%, або виникає внаслідок хірургічних процедур, більше. інвазивних, або не інвазивних). Термін В іншому аспекті винахід надає способи «післяопераційний біль», що використовується в посилення лікування болю НСПЗЗ у індивідуума, даному описі, не включає біль, який виникає що передбачають введення ефективної кількості (з'являється або відбувається) без зовнішньої антагоніста NGF в поєднанні з ефективною фізичної травми. У деяких варіантах здійснення кількістю НСПЗЗ. післяопераційний біль є внутрішнім або зовнішнім У деяких варіантах здійснення біль включає (включаючи периферичний) болем, і рана, поріз, один або декілька з наступних: гострий і/або травма, розрив або розріз можуть виникнути хронічний біль, будь-який біль із запальним випадково (як при травматичній рані) або умисно компонентом, післяопераційний біль (включаючи (як при операційному розрізі). Використовуваний в зубний біль), мігрень, головний біль і невралгію даному описі термін «біль» включає сприйняття трійчастого нерва, біль, пов'язаний з опіком, болю І відчуття болю, і біль можна оцінювати раною або нирковим каменем, біль, пов'язаний з об'єктивно з використанням бальних оцінок болю травмою (включаючи травматичне пошкодження та інших способів, добре відомих в даній галузі. голови), нейропатичний біль, біль, пов'язаний з Використовуваний в даному описі термін серповидноклітинним кризом, біль, пов'язаний з «післяопераційний біль» включає алодинію (тобто дисменореєю або кишковою дисфункцією, і біль, підвищену реакцію (тобто сприйняття болю) у пов'язаний з раком (включаючи «нападоподібний відповідь на звичайно не больовий подразник) і біль» і біль, пов'язаний з термінальними стадіями гіпералгезію (тобто підвищену реакцію на раку). В інших варіантах здійснення біль являє звичайно больовий або неприємний подразник), собою біль, який звичайно лікують НСПЗЗ(таким які, в свою чергу, можуть бути термічними або як ібупрофен). В інших варіантах здійснення біль механічними (тактильними) за природою. В деяких пов'язаний з опіком. В інших варіантах здійснення варіантах здійснення біль характеризується біль пов'язаний з ревматоїдним артритом. В інших термічною чутливістю, механічною чутливістю варіантах здійснення біль пов'язаний з і/або болем в спокої. В деяких варіантах остеоартритом. здійснення післяопераційний біль включає В іншому аспекті винахід надає способи механічно викликаний біль або біль в спокої. В профілактики, полегшення і/або профілактики інших варіантах здійснення післяопераційний біль розвитку або прогресування болю. Так, в деяких включає біль в спокої. варіантах здійснення, антагоніст NGF, такий як Лікування болю НСПЗЗ «посилюється», коли антитіло проти NGF, і/або НСПЗЗ вводяться перед аспект лікування НСПЗЗ поліпшується (в болісною подією (такою як операція). Наприклад, порівнянні з введенням НСПЗЗ без введення антагоніст NGF можна ввести за 30 хвилин, за 1 антагоніста NGF). Наприклад, ефективність годину, за 5 годин, за 10 годин, за 15 годин, за 24 лікування НСПЗЗ можна збільшити в присутності години або навіть більше, наприклад, за 1 день, 21 81299 22 декілька днів або навіть 1 тиждень, 2 тижні, 3 тижні вибраних конкретних сполук або композицій, але або більше перед видами активності, які, також від шляху введення, природи стану, що ймовірно, приведуть або пов'язані з ризиком підлягає лікуванню, і віку і стану пацієнта, і, викликаного болю, такі як зовнішня травма або зрештою, буде вибиратися за розсудом лікуючого операція. лікаря. Лікування або профілактика болю оцінюється з Антагоністи NGF використанням способів, добре відомих в даній У способах винаходу використовується галузі. Оцінку можна виконувати на основі антагоніст NGF, який відноситься до будь-якої об'єктивного показника, такого як спостереження молекули, яка блокує, пригнічує або знижує поведінки, такої як реакція на подразники, вирази (включаючи значно) біологічну активність NGF, обличчя і тому подібні. Оцінка може бути також включаючи низхідні шляхи, опосередковані заснована на суб'єктивних показниках, таких як передачею сигналів NGF, такі як зв'язування з характеристика пацієнтом болю з використанням рецепторами і/або клітинна реакція, викликана різних шкал болю [див., наприклад, Katz et al., Surg NGF. Термін «антагоніст» не має на увазі Clin North Am. (1999) 79 (2):231-52; Caraceni et al. J специфічний механізм безвідносної біологічної дії, Pam Symtom Manage (2002) 23(3):239-55]. і вважається, що він явно включає і охоплює всі Діагностика і оцінка болю при ревматоїдному можливі фармакологічні, фізіологічні і біохімічні артриті добре встановлена в даній галузі. Оцінку взаємодії з NGF і їх наслідки, які можуть бути можна виконати на основі показників, відомих в досягнуті різноманітними різними і такими, що даній галузі, таких як характеристика пацієнтом хімічно відрізняються, композиціями. Ілюстративні болю з використанням різних шкал болю [див., антагоністи NGF включають, але не обмежуються, наприклад, Katz et al., Surg Clin North Am. (1999) антитіло проти NGF, поліпептид (включаючи 79 (2):231-52; Caraceni et al. J Pain Symtom Manage поліпептид, що включає домен, що зв'язує NGF, (2002) 23 (3): 239-55]. Існують також шкали отриманий з антитіла проти NGF, наприклад, вимірювання патологічного стану, що звичайно зв'язувальний домен, що включає області CDR, використовуються, такі як [the American College of достатні для зв'язування NGF), антисмислову Rheumatology (ACR) (Felson, et al., Arthritis and молекулу, направлену на NGF (включаючи Rheumatism (1993) 36 (6):) (729-740), the Health антисмислову молекулу, направлену на Assessment Questionnaire (HAQ) (Fries, et al., нуклеїнову кислоту, що кодує NGF), антисмислову (1982) J. Rhenmatol. 9:789-793), the Paulus Scale молекулу, направлену на обидва рецептори TrkA (Paulus, et al., Arthritis and Rheumatism (1990) 33: і/або р75 (включаючи антисмислові молекули, 477-484), and the Arthritis Impact Measure Scale направлені на молекулу нуклеїнової кислоти, що (AIMS) (Meenam, et al., Arthritis and Rheumatology кодує TrkA або р75), сполуку, яка інгібує NGF, (1982) 25)(1048-1053)]. структурний аналог NGF, домінантно-негативну Діагностика та оцінка болю при остеоартриті мутацію рецептора TrkA і/або р75, яка зв'язує добре встановлена в даній галузі. Оцінку можна NGF, антитіло проти TrkA, який зв'язує NGF, виконати на основі показників, відомих в даній імуноадгезин TrkA, антитіло проти TrkA, антитіло галузі, таких як характеристика пацієнтом болю з проти р75 і інгібітор кінази. Для мети даного використанням різних шкал болю [див., наприклад, винаходу потрібно чітко розуміти, що термін Katz et al., Surg Clin North Am. (1999) 79 (2):231-52; «антагоніст» охоплює раніше ідентифіковані Caraceni et al. J Pain Symtom Manage (2002) терміни, назви і функціональні стани і 23(3):239-55]. Наприклад, шкалу WOMAC болю характеристики, за допомогою яких сам NGF, при підйомі після операції (включаючи біль, біологічна активність NGF (включаючи, але не тугорухливість і фізичну функцію) і 100мм зорову обмежуючись, здатність опосередковувати будьаналогову шкалу (VAS) можна використати для який аспект болю) або наслідки біологічної оцінки болю і оцінки реакції на лікування. активності по суті анулюється, зменшується або Зрозуміло, що коли антагоніст NGF (такий як нейтралізується в будь-якій значній мірі. У деяких антитіло проти NGF) і НСПЗЗ вводяться в варіантах здійснення антагоніст NGF (наприклад, поєднанні, або у вигляді однієї, або окремої антитіло проти NGF) зв'язує (фізично взаємодіє з) композиції (композицій), антагоніст фактора росту NGF, зв'язується з рецептором NGF (таким як нервів і НСПЗЗ представлені у співвідношенні, яке рецептор TrkA і/або р75) і/або знижує і/або блокує) узгоджується з виявом бажаного ефекту. В деяких низхідну передачу сигналів рецептора NGF. варіантах здійснення співвідношення по масі між Відповідно, в деяких варіантах здійснення антагоністом фактора росту нервів і НСПЗЗ може антагоніст NGF зв'язує {фізично взаємодіє з) NGF. становити приблизно 1 до 1. В деяких варіантах В інших варіантах здійснення антагоніст NGF здійснення співвідношення може складати від зв'язується з рецептором NGF (таким як рецептор приблизно 0,001 до приблизно 1 і від приблизно TrkA і/або р75). 1000 до приблизно 1, від приблизно 0,01 до В інших варіантах здійснення антагоніст приблизно 1 і від приблизно 100 до приблизно 1, знижує (гальмує і/або блокує) низхідну передачу або від приблизно 0,1 до приблизно 1 і від сигналів рецептора NGF (наприклад, передачу приблизно 10 до приблизно 1. Передбачені інші сигналів інгібіторів кінази). В інших варіантах співвідношення. здійснення антагоніст інгібує (знижує) синтез і/або Потрібно розуміти, що кількість антагоніста вивільнення NGF. В іншому варіанті здійснення фактора росту нервів і НСПЗЗ, необхідна для антагоніст NGF являє собою імуноадгезин TrkA. В застосування при лікуванні або профілактиці іншому варіанті здійснення антагоніст NGF болю, буде варіюватися не тільки в залежності від відрізняється від антитіла проти NGF. В деяких 23 81299 24 варіантах здійснення антагоніст NGF зв'язує NGF або не стимулює антитілозалежну (такий як hNGF) і значно не зв'язується із клітинноопосередковану цитотоксичність (ADCC). спорідненими нейротропінами, такими як NT-3, В інших варіантах здійснення константна область NT-4/5 і/або BDNF. В деяких варіантах здійснення модифікована, як описано в [Eur. J. Immunol. антагоніст зв'язує людський NGF і значно не (1999) 29:2613-2624; заявці РСТ зв'язує NGF від інших видів хребетних (в деяких №PCT/GB99/01441; і/або в заявці на патент варіантах здійснення ссавців). В деяких варіантах Великобританії №9809951.8]. В інших варіантах здійснення антагоніст NGF зв'язує людський NGF, здійснення антитіло проти NGF являє собою будьа також один або декілька NGF від інших видів яке антитіло, описане в заявці на [патент США під хребетних (в деяких варіантах здійснення ссавців). серійним №10/745775]. В деяких варіантах здійснення антагоніст NGF У деяких варіантах здійснення антитіло проти зв'язує NGF, а також, щонайменше, один інший NGF являє собою гуманізоване мишаче нейротропін. В деяких варіантах здійснення моноклональне антитіло проти NGF, зване антагоніст NGF зв'язується з NGF видів ссавців, антитілом «Е3», яке включає константну область таких як кінь або собака, але значно не зв'язується важкого ланцюга людського IgG2a, що містить з NGF від інших видів ссавців. наступні мутації: від А330Р331 до S330S331 Антитіла проти NGF (нумерація амінокислот з посиланням на У деяких варіантах здійснення винаходу послідовність IgG2a дикого типу; [див. Eur. J. антагоніст NGF включає антитіло проти NGF. Immunol. (1999) 29:2613-2624]); капа константної Антитіло проти NGF повинно проявляти будь-яку області людського легкого ланцюга і варіабельних одну або декілька з наступних характеристик: (а) областей важкого і легкого ланцюгів, показані в зв'язування з NGF і інгібування біологічної таблиці 1 і 2. активності NGF і/або низхідного шляху (шляхів), опосередкованого функцією передачі сигналів NGF; (b) лікування або профілактика будь-якого аспекту болю, зокрема, в поєднанні з НСПЗЗ; (с) блокада або зменшення активації рецепторів NGF (включаючи димеризацію і/або аутофосфорилування рецепторів trkA); (d) збільшення виведення NGF; (є) посилення лікування болю НСПЗЗ. Антитіла проти NGF відомі в даній галузі [див., наприклад, заявки РСТ №№ WO 02096458; WO 01/78698, WO 01/64247, патенти США №№ 5844092, 5877016 і 6153189; Hongo et al., Hybridoma, 19:215-227 (2000); Cell. Molec. Biol. Наступні полінуклеотиди, що кодують 13:559-568 (1993); номери доступу GenBank варіабельну область важкого ланцюга E3 або U39608, U39609, L17078 або L17077]. легкого ланцюга Е3, були депоновані в АТСС 8 В деяких варіантах здійснення антитіло проти січня 2003p.: NGF специфічно зв'язується з NGF. У ще одних варіантах здійснення антитіло є гуманізованим Матеріал (таким як описане в даному описі антитіло E3). У Вектор Eb.911.3E варіабельна область легкого ланцюга Е3 деяких вариантах здійснення антитіло проти NGF являє собою антитіло Е3 (як описано в даному Вектор Eb.pur.911.3E варіабельна область легкого ланцюга Е3 описі). В інших варіантах здійснення антитіло Вектор Db.911.3E варіабельна область важкого ланцюга Е3 проти NGF включає один або більше CDR антитіла Е3 (наприклад, 1, 2, 3, 4, 5 або, в деяких варіантах Вектор Eb.911.3E являє собою полінуклеотид, здійснення, всі 6 CRD з Е3). В інших варіантах що кодує варіабельну область легкого ланцюга, здійснення антитіло проти NGF є людським. У ще показаного в таблиці 2; Вектор Eb.pur.911.3E одних варіантах здійснення антитіло проти NGF являє собою полінуклеотид, що кодує, включає амінокислотну послідовність варіабельної варіабельну область легкого ланцюга, показаного області важкого ланцюга, показану в таблиці 1 в таблиці 2, і Вектор Db.911.3E являє собою (SEQ ID NO:1), і амінокислотну послідовність полінуклеотид, що кодує варіабельну область варіабельної області легкого ланцюга, показану в важкого ланцюга, показаного в таблиці 1. Ці таблиці 2 (SEQ ID NO:2). У ще одних варіантах полінуклеотиди також кодують константні домени. здійснення антитіло проти NGF включає Існує, щонайменше, дві методики для амінокислотну послідовність варіабельної області визначення CDR: (1) підхід, заснований на важкого ланцюга, показану в таблиці 1 (SEQ ID перехресно-видовій мінливості послідовностей NO:1). У ще одних варіантах здійснення антитіло [(тобто Rabat et al. Sequences of Proteins of проти NGF включає амінокислотну послідовність Immunological Interest, (5th ed., 1991, National варіабельної області легкого ланцюга, показану в Insitutes of Health, Bethesda Md)]; і (2) підхід, таблиці 2 (SEQ ID NO:2). У ще одних варіантах заснований на кристалографічних дослідженнях здійснення антитіло включає модифіковану комплексів антиген-антитіло [Chothia et al. (1989) константну область, таку як константна область, Nature 342:877; Al-lazikani et al (1997) J. Molec. Biol. яка є імунологічно інертною, наприклад, не 273:927-948)]. Використовуваний в даному описі запускає лізис, опосередкований комплементом, термін «CDR» може відноситися до CDR, № РТ РТ РТ 25 81299 26 визначених будь-яким підходом або комбінацією приблизно 100нМ, приблизно 50нМ, приблизно обох підходів. 10нМ, приблизно 1нМ, приблизно 500пкМ, В іншому варіанті здійснення антитіло проти приблизно 100пкМ, приблизно 50пкМ, приблизно NGF включає один або декілька CDR антитіла Е3 10пкМ. У деяких варіантах здійснення афінітет (наприклад, 1, 2, 3, 4, 5 або в деяких варіантах зв'язування становить приблизно 10нМ. В інших здійснення всі 6 CDR з Е3). Визначення областей варіантах здійснення афінітет зв'язування складає CDR досить відоме в даній галузі. CDR можуть менше за приблизно 10нМ. В інших варіантах являти собою Kabat, Chothia або комбінацію Rabat здійснення афінітет зв'язування становить і Chothia. приблизно 0,1нМ або приблизно 0,07нМ. В інших Антитіла, які можна застосовувати в даному варіантах здійснення афінітет зв'язування складає винаході, можуть охоплювати моноклональні менше за приблизно 0,1нМ або менше за антитіла, поліклональні антитіла, фрагменти приблизно 0,07нМ. В інших варіантах здійснення антитіл (наприклад, Fab, Fab', F(ab')2, Fv, Fc і т.д.), афінітет зв'язування складає будь-який з від химерні антитіла, біспецифічні антитіла, приблизно 100нМ, приблизно 50нМ, приблизно гетерокон'югатні антитіла, одноланцюгові (ScFv), 10нМ, приблизно 1нМ, приблизно 500пкМ, їх мутанти, гібридні білки, що включають приблизно 100пкМ, приблизно 50пкМ до будьантитільну частину, гуманізовані антитіла і будьякого з приблизно 2пкМ, приблизно 5пкМ, яку модифіковану конфігурацію молекули приблизно 10пкМ, приблизно 15пкМ, приблизно імуноглобуліну, яка включає сайт розпізнавання 20пкМ або приблизно 40пкМ. У деяких варіантах антигену необхідної специфічності, включаючи здійснення афінітет зв'язування складає будь-який варіанти глікозилювання антитіл, варіанти з приблизно 100нМ, приблизно 50нМ, приблизно амінокислотної послідовності антитіл і ковалентно 10нМ, приблизно 1нМ, приблизно 500пкМ, модифіковані антитіла. Антитіла можуть бути приблизно 100пкМ або приблизно 50пкМ, або мишачими, щурячими, людськими або будь-якого менше за приблизно 50пкМ. У ще одних варіантах іншого походження (включаючи химерні і здійснення афінітет зв'язування становить гуманізовані антитіла). Для цілей даного винаходу приблизно 2пкМ, приблизно 5пкМ, приблизно антитіло взаємодіє з NGF таким чином, який 10пкМ, приблизно 15пкМ, приблизно 20пкМ, інгібує NGF і/або низхідні шляхи, опосередковані приблизно 40пкМ або більше за приблизно 40пкМ. функцією передачі сигналів NGF. В одному Одним способом визначення афінітету варіанті здійснення антитіло являє собою людське зв'язування антитіл з NGF є вимірювання антитіло, яке розпізнає один або декілька епітопів афінітету монофункціональних фрагментів Fab на людському NGF. В іншому варіанті здійснення антитіла. Для отримання монофункціональних антитіло являє собою мишаче або щуряче фрагментів Fab антитіло (наприклад, IgG) можна антитіло, яке розпізнає один або декілька епітопів розщепити папаїном або експресувати на людському NGF. В іншому варіанті здійснення рекомбінантно. Афінітет фрагмента Fab проти антитіло розпізнає один або декілька епітопів на NGF антитіла можна визначити поверхневим NGF, вибраному з групи, що складається з: резонансом плазмона (пристрій для визначення гризунів, собак, кішок, коней і корів. В іншому поверхневого резонансу плазмона (SPR) ВІАсоrе варіанті здійснення антитіло включає 3000Ô, ВІАсоге, INC, Piscaway NJ). Чіпи СМ5 модифіковану константну область, таку як можна активувати гідрохлоридом N-етил-N'-(3константна область, яка є імунологічно інертною диметиламінопропіл)карбодііміду (EDC) і N(тобто не запускає опосередкований гідроксисукцинімідом (NHS) відповідно до комплементом лізис) або не стимулює інструкцій постачальника. Людський NGF можна антитілозалежну клітинноопосередковану розвести в 10мМ ацетаті натрію при рН 4,0 і цитотоксичність (ADCC). Активність ADCC можна ін'єкувати зверху активованого чіпа в концентрації оцінити з використанням способів, розкритих в 0,005мг/мл. Використовуючи варіабельний час [патенті США №5500362]. В інших варіантах потоку по окремих каналах чіпа, можна досягнути здійснення константна область модифікована, як два діапазони щільності антигену: 100-200 описано в [Eur. J. Iiranunol. (1999) 29:2613-1624; одиниць реакції (RU) для детальних кінетичних публікації РСТ №PCT/GB99/01441 і/або в заявці на досліджень і 500-600 RU для скринінгових аналізів. патент Великобританії №9809951.8]. Чіп можна блокувати етаноламіном. Дослідження Афінітет зв'язування антитіла проти NGF з регенерації показали, що суміш елюційного NGF (таким як hNGF) може складати від буфера Pierce (продукт №21004, Pierce приблизно 0,01нМ до приблизно 1нМ, від Biotechnology IL) і 4Μ Nad (2:1) ефективно видаляє приблизно 0,05нМ до приблизно 0,25нМ, від зв'язаний Fab, одночасно зберігаючи активність приблизно 0,10нМ до приблизно 0,80нМ, від hNGF на чіпі протягом 200 ін'єкцій. Буфер HBS-EP приблизно 0,15нМ до приблизно 0,75нМ і від (0,01Μ HEPES, рН 7,4, 0,15 NaCl, 3мМ ЕДТА, приблизно 0,18нМ до приблизно 0,72нМ. В інших 0,005% поверхнево-активна речовина Р20) варіантах здійснення афінітет зв'язування використовують як робочий буфер для аналізів становить приблизно 1пкМ, приблизно 2пкМ, ВІАсоге. Серійне розведення (0,1-10´ певний KD) приблизно 5пкМ, приблизно 10пкМ, приблизно зразків очищеного Fab ін'єкують протягом 1хв. в 15пкМ, приблизно 20пкМ, приблизно 40пкМ або концентрації 100мкл/хв. і допускаються величини більш ніж приблизно 40пкМ. В одному варіанті часу дисоціації до 2год. Концентрації білків Fab здійснення афінітет зв'язування складає між визначають ELISA і/або електрофорезом SDSприблизно 2нкМ і 22пкМ. В інших варіантах PAGE з використанням Fab відомої концентрації здійснення афінітет зв'язування складає менше за (за даними визначення амінокислотним аналізом) 27 81299 28 як стандарт. Швидкості кінетичної асоціації (kon) і людського NGF, середній фахівець в даній галузі швидкості дисоціації (koff) отримують одночасно може сумістити структури людського NGF з NGF підгонкою даних до моделі зв'язування Langmuir інших видів і ідентифікувати вірогідні копії цих 1:1 [Karlsson, R. Roos, H. Fagerstam, L. Petersson, епітопів. B. (1994). Methods Enzymology 6:99-110] з В одному аспекті антитіла (наприклад, використанням програми оцінки ΒΙΑ. Величини людські, гуманізовані, мишачі, химерні), які можуть константи рівноважної дисоціації (KD) можна інгібувати NGF, можна отримати використанням розрахувати у вигляді koff/kon. Цей протокол імуногенів, які експресують повну довжину або підходить для використання при визначенні часткову послідовність NGF. В іншому аспекті афінітету зв'язування антитіла з NGF будь-якого можна використовувати імуноген, що включає виду, включаючи людський NGF, NGF інших клітину, яка надмірно експресує NGF. Інший хребетних (в деяких варіантах здійснення, ссавців) приклад імуногену, який можна використати, являє (такий як мишачий NGF, щурячий NGF, NGF собою білок NGF, який містить NGF повної приматів), а також для використання з іншими довжини або частину білка NGF. нейротропінами, такими як споріднені Антитіла проти NGF можна отримати будьнейротропіни NT3, NT4/5 і/або BDNF. яким способом, відомим в даній галузі. Шлях і В деяких варіантах здійснення антитіло зв'язує схема імунізації тварини-хазяїна загалом людський NGF і значно не зв'язує NGF від інших узгоджуються з прийнятими і звичайними видів хребетних (в деяких варіантах здійснення, методиками для стимуляції і продукції антитіл, як ссавців). В деяких варіантах здійснення антитіло далі описано в даному описі. Загальні методики зв'язує людський NGF, а також один або декілька для продукції людських і мишачих антитіл відомі NGF від інших видів хребетних (в деяких варіантах вданій галузі і описані в даному описі. здійснення, ссавців, таких як гризуни). У ще одних Передбачається, що можна маніпулювати варіантах здійснення антитіло зв'язує NGF і не будь-яким ссавцем індивідуумом, включаючи вступає в значну перехресну взаємодію з іншими людей або отримані у них клітини, що продукують нейротропінами (такими як споріднені антитіла, для того, щоб служити як основа для нейротропіни NT3, NT4/5 і/або BDNF). В деяких продукції лінії клітин гібридоми ссавців, включаючи варіантах здійснення антитіло зв'язує NGF, а людину. Звичайно тварина-хазяїн інокулюється також, щонайменше, один інший нейротропін. В внутрішньоочеревинно, внутрішньом'язово, деяких варіантах здійснення антитіло зв'язується з перорально, підшкірно, внутрішньопідошовно і/або NGF видів ссавців, таких як кінь або собака, але внутрішньошкірно деякою кількістю імуногену, значно не зв'язується з NGF від інших видів включаючи те, як описано в даному описі. ссавців. Гібридоми можна отримати з лімфоцитів і Епітопи можуть бути безперервними або іморталізованих клітин мієломи з використанням переривистими. В одному варіанті здійснення загальної методики гібридизації соматичних клітин антитіло зв'язує по суті той самий епітоп hNGF, що [Kohler, В. And Milstein, С. (1975) Nature 256:495і антитіло, вибране з групи, що складається з МАb 497] або в модифікації [Buck, D.W., et al. In Vitro, 911, МАb 912 і МАb 938, як описано в [публікації 18:377-381 (1982)]. При гібридизації можна Hongo, et al., Hybridoma 19:215-227 (2000)]. В використовувати доступні лінії мієломи, іншому варіанті здійснення антитіло зв'язує по суті включаючи, але не обмежуючись, X63-Ag8.653 і той самий епітоп hNGF, що і МАb 911. У ще лінії з Salk Institute, Cell Distribution Center, San одному варіанті здійснення антитіло зв'язує по суті Diego, Calif., USA. Загалом, методика включає той самий епітоп hNGF, що і МАb 909 [див. Hongo, злиття клітин мієломи і лімфоїдних клітин з et al., вище]. Наприклад, епітоп може включати використанням фузогену, такого як один або декілька з: К32, К34 і Е35 в межах поліетиленгліколь, або електричними засобами, варіабельної області 1 (амінокислоти 23-35) hNGF; добре відомими фахівцям в даній галузі. Після залишки F79 і Т81 в межах варіабельної області 4 злиття клітини відділяють від середовища злиття і (амінокислоти 81-88) hNGF; залишки Н84 і К88 в вирощують у селективному ростовому межах варіабельної області 4; залишок R103 між середовищі, такому як середовище гіпоксантинуваріабельною областю 5 (амінокислоти 94-98) аміноптерину-тимідину (НАТ), для видалення hNGF і С-кінцем (амінокислоти 111-118) hNGF; негібридизованих батьківських клітин. Для залишок Е11 в межах преваріабельної області 1 культивування гібридом, які секретують (амінокислоти 10-23) hNGF; Y52 між варіабельною моноклональні антитіла, можна використовувати областю 2 (амінокислоти 40-49) hNGF і будь-яке з описаних в даному описі середовищ з варіабельною областю 3 (амінокислоти 59-66) добавкою сироватки або без неї. Як іншу hNGF; залишки L112 і S113 в межах С-кінця hNGF; альтернативу методиці злиття клітин, можна залишки R59 і R69 в межах варіабельної області 3 використовувати В-клітини, іморталізовані EBV hNGF; або залишки VI8, V20 і G23 в межах (вірусом Епштейна-Барра), для продукції преваріабельної області 1 hNGF. Крім того, епітоп моноклональних антитіл проти NGF даного може включати одну або декілька з варіабельної винаходу. При бажанні, гібридоми області 1, варіабельної області 3, варіабельної розповсюджуються і субклонуються, і надосадові області 4, варіабельної області 5, N-кінцевої рідини аналізують для виявлення антиімуногенної області і/або С-кінця hNGF. У ще одному варіанті активності звичайними процедурами імуноаналізу здійснення антитіло значно знижує доступність (наприклад, радіоімуноаналізу, ферментного для розчинника залишку R103 hNGF. Зрозуміло, імуноаналізу або флюоресцентного імуноаналізу). що хоч описані вище епітопи відносяться до 29 81299 30 Гібридоми, які можна використовувати як варіабельних доменів вихідного антитіла, (2) джерело антитіл, охоплюють всі похідні, клітини проектування гуманізованого антитіла, тобто потомства батьківських гібридом, які продукують рішення, яку каркасну область антитіла моноклональні антитіла, специфічні для NGF, або використати під час процесу гуманізації; (3) дійсні їх частини. методології/методики гуманізації; і (4) трансфекція Гібридоми, які продукують такі антитіла, можна і експресія гуманізованого антитіла [див., вирощувати in vitro або in vivo з використанням наприклад, патенти США №№ 4816567, 5807715, відомих процедур. При бажанні, моноклональні 5866692, 6331415, 5530101, 5693761, 5693762, антитіла можна виділити з культурального 5585089 і 6180370]. Був описаний ряд молекул середовища або біологічних рідин звичайними «гуманізованого» антитіла, що включають процедурами очищення імуноглобуліну, такими як зв'язувальний антигенний сайт, отриманий з осадження сульфатом амонію, гельнадлюдського імуноглобуліну, включаючи химерні електрофорез, діаліз, хроматографія і антитіла, що мають області V гризунів або ультрафільтрація. Небажану активність у разі її модифіковані області V гризунів і їх асоційовані присутності можна видалити, наприклад, області (CDR), що визначають комплементарність, проведенням отримання над адсорбентами, злиті з людськими константними доменами [див., виготовленими з імуногену, прикріпленого до наприклад, Winter et al. Nature 349:293-299 (1991), твердої фази, і елююванням або вивільненням Lobuglio et al. Proc. Nat. Acad. Sci. USA 86:4220бажаних антитіл з імуногену. Імунізація тварини4224 (1989), Shaw et al. J.Immunol. 138:4534-4538 хазяїна людським NGF або фрагментом, що (1987) і Brown et al Cancer Res. 47:3577-3583 містить амінокислотну послідовність-мішень, (1987)]. Інші посилання описують CDR гризунів, кон'юговану з білком, який є імуногенним у видів, пересаджений в людську опорну каркасну область що підлягають імунізації, наприклад, гемоціанін в (FR) перед злиттям з константним доменом формі замочної щілини або блюдця, сироватковий відповідного людського антитіла [див., наприклад, альбумін, бичачий тиреоглобулін або інгібітор Riechmann et al. Nature 332:323-327 (1988), трипсину соєвих бобів з використанням Verhoeyen et al. Science 239:1534-1536 (1988) і біфункціонального або дериватизуючого засобу, Jones et al. Nature 321:522-525 (1986)]. Інше наприклад, складного малеімідобензоїлового посилання описує CDR гризунів, підтримувані ефіру сульфосукциніміду (зв'язане зв'язування рекомбінантно облицьовані каркасні області через цистеїнові залишки), N-гідроксисукциніміду гризунів [див., наприклад, європейську патентну (через лізинові залишки), глутаральдегіду, публікацію №519596]. Ці «гуманізовані» молекули янтарного ангідриду, СОСІ2 або R1N=C=NR, де R і призначені для мінімізації небажаної імунологічної R1 являють собою різні алкільні групи, може дати реакції відносно молекул антилюдських антитіл популяцію антитіл (наприклад, моноклональних гризунів, яка обмежує тривалість і ефективність антитіл). терапевтичних видів застосування цих частин у При бажанні, антитіло проти NGF людей-реципієнтів. Наприклад, константну (моноклональне або поліклональне), яке цікавить, область антитіла можна сконструювати методами можна секвенувати, і полінуклеотидну генної інженерії так, що вона буде імунологічно послідовність, що кодує поліпептид антитіла проти інертною (наприклад, не запускає лізис NGF, можна потім клонувати у вектор для комплементом [див., наприклад, PCT/GB99/01441; експресії або поширення. Послідовність, що кодує заявка на патент Великобританії № 9809951.8]). антитіло, яке представляє інтерес, може Інші способи гуманізації антитіл, які можна також підтримувати у векторі в клітині-хазяїні, і клітинивикористати, розкриті [Daugherty et al., Nucl. Acids. хазяїни можна потім розмножувати і заморозити Res. 19:2471-2476 (1991) і в патентах США №№ для майбутнього застосування. В альтернативі, 6180377, 6054297, 5997867, 5866692, 6210671, полінуклеотидну послідовність можна використати 6350861, і в публікації РСТ №01/27160. Інші для генетичного маніпулювання для «гуманізації» способи описані в заявці на патент США під антитіла або для поліпшення афінітету або інших серійним №10/745775]. характеристик антитіла. Наприклад, константну У ще одній альтернативі повністю людські область можна піддати маніпуляціям генної антитіла можна отримати використанням мишей, інженерії для того, щоб вона більше нагадувала що є в продажу, які були піддані модифікації людські константні області для уникнення імунної генною інженерією для експресії специфічних реакції, якщо антитіло використовується в білків людського імуноглобуліну. Трансгенні клінічних випробуваннях і способах лікування у тварини, які призначені для продукції більш людей. Може бути бажано піддати генетичним бажаних (наприклад, повністю людських антитіл) маніпуляціям послідовність антитіла для або більш доцільної імунної відповіді, можна також отримання більшого афінітету до NGF і більше використовувати для генерування гуманізованих ефективності при інгібуванні NGF. Для фахівця в або людських антитіл. Прикладами такої технології даній галузі буде очевидно, що можна зробити є XenomouseÔ від Abgenix, Inc. (Fremont, CA) і одне або декілька змін полінуклеотиду в антитілі HuMAb-Mouseo і ТС МошеÔ від Medarex, Inc. проти NGF і все ж зберегти його здатність (Princeton, NJ). зв'язуватися з NGF. Очевидно, що хоч наведене вище Існує 4 загальні стадії для гуманізації обговорення відноситься до гуманізованих антитіл, моноклонального антитіла. Вони являють собою: загальні обговорені принципи застосовні для (1) визначення нуклеотиду і прогнозованої отримання антитіл для використання, наприклад, у амінокислотної послідовності легкого і важкого собак, кішок, приматів, коней і корів. Крім того, 31 81299 32 очевидно, що один або декілька описаних в фага (також відомих, як «джерело всіх бібліотек») даному описі аспектів гуманізації антитіл можуть була описана [Waterhouse et al., Nucl. Acids Res. комбінуватися, наприклад, пересадка CDR, 21:2265-2266 (1993)]. Перетасовування гена мутація каркаса і мутація CDR. можна також використати для отримання В альтернативі, антитіла можна отримати людських антитіл з антитіл гризунів, де людське рекомбінантно і експресувати з використанням антитіло має афінітети і специфічність, аналогічні будь-якого способу, відомого в даній галузі. В вихідному антитілу гризунів. Відповідно до цього іншій альтернативі, антитіла можна виготовити способу, який також іменується «вдруковуванням рекомбінантно технологією відтворення фага епітопу», ген домену V важкого або легкого [див., наприклад, патенти США №№ 5565332, ланцюга антитіл гризунів, отриманих методикою 5580717, 5733743, 6265150 і Winteer et al., Annu. відтворення фага, заміняється репертуаром генів Rev. Immunol. 12:433-455 (1994)]. Альтернативно, людського домену V, створюючи химери гризунаможна використати технологію відтворення фага людини. Відбір на антигені приводить до [McCafferty et al., Nature 348:552-553 (1990)] для виділення людських, варіабельних областей, продукції людських антитіл і фрагментів антитіл in здатних відновити сайт, який зв'язує vitro з генних репертуарів варіабельного (V) функціональний антиген, тобто епітоп управляє домену імуноглобуліну від імунізованих донорів. (вдруковує) вибором партнера. Коли процес Відповідно до цієї методики, гени домену V повторюється для заміщення домену V гризунів, антитіла клонуються всередину рамки або в ген що залишається, виходить людське антитіло [див. або великого, або маленького білка покриття патентну заявку РСТ WO 9306213, опубліковану 1 ниткоподібного бактеріофага, такого як М13 або fd, квітня 1993р.]. На відміну від традиційної і виявляються у вигляді функціональних гуманізації антитіл гризунів, які не мають каркаса фрагментів антитіла на поверхні частинки фага. У або залишки CDR, що походять від гризунів. зв'язку з тим, що ниткоподібна частинка містить Очевидно, що хоч приведене вище обговорення копію однониткової ДНК генома фага, селекції, відноситься до гуманізованих антитіл, загальні засновані на функціональних властивостях обговорені принципи застосовні до отримання на антитіла, також приводять до відбору гена, що вимогу антитіл для використання, наприклад, у кодує антитіло, що проявляє ці властивості. Таким собак, кішок, приматів, коней і корів. чином, фаг імітує деякі з властивостей В-клітини. Антитіла можна виготовити рекомбінантно Відтворення фага можна виконати в різних спочатку виділенням антитіл і клітин, що форматах [огляд [див., наприклад, в публікації продукують антитіла, від тварин-хазяїнів, Johnson, Kevin S. and Chiswell, David J., Current отримуючи генну послідовність, і використовуючи Opinion in Structural Biology 3, 564-571 (1993)]. генну послідовність для рекомбінантної експресії Декілька джерел сегментів V гена можна антитіла в клітинах-хазяїнах (наприклад, клітинах використати для відтворення фага. [Clackson et al., СНО). Інший спосіб, який можна використати, Nature 352:624-628 (1991)] виділили різноманітний являє собою експресію послідовності антитіл у ряд антитіл проти оксазолону з маленької, рослин (наприклад, тютюну) або трансгенного випадкової комбінаторної бібліотеки генів V, молока. Були розкриті способи рекомбінантної отриманої з селезінок імунізованих мишей. Можна експресії антитіл у рослин або молока [див., сконструювати репертуар генів V від імунізованих наприклад, Peeters, et al. Vaccine 19:2756 (2001); людей-донорів, і антитіла до різноманітного ряду Lonberg, N. and D. Huszar IntRev.Immunol 13:65 антигенів (включаючи аутоантигени) можна (1995); і Pollock, et al, J Immunol Methods 231:147 виділити, по суті слідуючи методикам, описаним (1999)]. Способи отримання похідних антитіл, [Mark et al., J. МоI. Biol. 222:581-597 (1991) або наприклад, гуманізованих, одноланцюгових і т.д., Griffith et al., EMBO J. 12:725-734 (1993)]. При відомі в даній галузі. природній імунній відповіді гени антитіла Імунні аналізи і методики сортування нагромаджують мутації з високою швидкістю проточною цитометрією, такі як сортування клітин, (соматична гіпермутація). Деякі з введених змін активоване флюоресценцією (FACS), можна також додадуть більш високий афінітет, і В-клітини, що використати для виділення антитіл, які специфічні виявляють високо афінний поверхневий для NGF. імуноглобулін, переважно реплікуються і Антитіла можуть бути зв'язані з багатьма диференціюються під час введення подальшої різними носіями. Носії можуть бути активними дозволяючої дози антигену. Цей природний і/або інертними. Приклади добре відомих носіїв процес можна імітувати використанням методики, включають поліпропілен, полістирол, поліетилен, відомої як «перетасовування ланцюга» [Marks, et декстран, нейлон, амілази, скло, природна і al., Bio/Technol. 10:779-783 (1992)]. В цьому модифікована целюлоза, поліакриламіди, агарози способі афінітет «первинних» людських антитіл, і магнетит. Природа носія може бути або отриманих відтворенням фага, можна поліпшити розчинною, або нерозчинною для цілей винаходу. послідовним заміщенням генів області V важкого і Фахівцям в даній галузі відомі інші відповідні носії легкого ланцюга репертуарами варіантів для зв'язування антитіл або способи встановити їх (репертуарів) генів домену, що природно з використанням звичайного експериментування. зустрічаються V, отриманих у неімунізованих ДНК, що кодує моноклональні антитіла, легко донорів. Ця методика забезпечує можливість ізолюється і секвенується з використанням продукції антитіл і фрагментів антитіл з звичайних процедур (наприклад, використанням афінітетами в діапазоні пкМ-нМ. Стратегія олігонуклеотидних зондів, які здатні специфічно виготовлення дуже великих репертуарів антитіл зв'язуватися з генами, що кодують важкий і легкий 33 81299 34 ланцюги моноклональних антитіл). Клітини випадково, або специфічними генетичними гібридоми служать як переважне джерело такої конструкціями, і визначається реактивність ДНК. Після ізоляції ДНК можна вмістити у вектори експресованих фрагментів NGF з антитілом, що експресії, які потім трансфікуются в клітинипідлягає тестуванню. Генні фрагменти можуть, хазяїни, такі як клітини Е.соIі, мавп'ячі клітини наприклад, продукуватися PCR (полімеразною COS, клітини яєчників китайського хом'ячка (СНО) реакцією синтезу ланцюга), а потім або клітини мієломи, які інакше не продукують транскрибуватися і транслюватися в білок in vitro в білок імуноглобуліну для отримання синтезу присутності радіоактивних амінокислот. Потім моноклональних антитіл в рекомбїнантних визначається зв'язування антитіла з радіоактивно клітинах-хазяїнах. ДНК може також бути міченими фрагментами NGF імунопреципітацією і модифікованою, наприклад, заміщенням кодуючої гель-електрофорезом. Певні епітопи можна також послідовності на константні домени важкого і ідентифікувати використанням великих бібліотек легкого ланцюга людини замість гомологічних випадкових пептидних послідовностей, що мишачих послідовностей [Morrison et al., Proc. Nat. виявляються на поверхні частинок фага (бібліотек Acad. Sci. 81:6851 (1984)] або ковалентним фатів). Альтернативно, певну бібліотеку приєднанням до імуноглобуліну, що кодує всю або перекриваючих фрагментів пептидів можна частину кодуючої послідовності, на тестувати на зв'язування з випробовуваним неімуноглобуліновому поліпептиді. Таким чином, антитілом в простих аналізах зв'язування. У виходять «химерні» або «гібридні» антитіла, які додатковому прикладі мутагенез домену, що мають специфічність зв'язування описаного в зв'язує антиген, експерименти обміну доменів і даному описі моноклонального антитіла проти скануючий мутагенез аланіну можна виконати для NGF. ДНК, що кодує антагоністичне антитіло проти ідентифікації необхідних залишків, достатніх і/або NGF (таке як гуманізоване антагоністичне антитіло необхідних для зв'язування епітопу. Наприклад, проти людського NGF), можна використати для експерименти обміну доменів можна виконати з доставки і експресії антагоністичного антитіла використанням мутантного NGF, в якому різні проти людського NGF бажаною клітиною, як фрагменти поліпептиду NGF були заміщені описано в даному описі. Методики доставки ДНК (обмінені) послідовностями з близько далі описані в даному описі. спорідненого, але антигенно відмінного, білка Антитіла проти NGF можна характеризувати з (такого як інший член сімейства білків використанням способів, добре відомих в даній нейротропінів). Оцінкою зв'язування антитіла з галузі. Наприклад, один спосіб являє собою мутантним NGF можна оцінити значення певного ідентифікацію епітопу, з яким воно зв'язується, фрагмента NGF для зв'язування антитіла. званий «картування епітопу». Існує багато Ще одним способом, який можна використати способів, відомих в даній галузі, для картування і для характеристики антитіла проти NGF, є характеристики локалізації епітопів на білках, використання конкурентних аналізів з іншими включаючи розчинення структури кристала антитілами, які, як відомо, зв'язуються з тим самим комплексу антитіло-антиген, конкурентні аналізи, антигеном, тобто різними фрагментами на NGF, аналізи експресії генних фрагментів і аналізи на для визначення того, чи зв'язується антитіло проти основі синтетичних пептидів, як описано, NGF з тим самим епітопом, що й інші антитіла. наприклад, в [11 розділі Harlow and Lane, Using Конкурентні аналізи добре відомі фахівцям в даній Antibodies, a Laboratory Manual, Cold Spring Harbor галузі. Приклади антитіл, які можна Laboratory Press, Cold Spring Harbor, New York, використовувати в конкурентних аналізах для 1999]. У додатковому прикладі картування епітопу даного винаходу, включають Mab 911, 912, 938, як можна використовувати для визначення описано в [публікації Hongo, et al., Hybridoma послідовності, з якою зв'язується атитіло проти 19:215-227 (2000)]. NGF. Картування епітопу є в продажу з багатьох Інші антагоністи NGF джерел, наприклад, [Pepscan Systems Можна використовувати антагоністи NGF, (Edethertweg 15, 8219 РН Lelystad, The відмінні від антитіл проти NGF. У деяких варіантах Netherlands)]. Епітоп може являти собою лінійний здійснення винаходу антагоніст NGF епітоп, тобто що міститься в одному фрагменті включає,1цонайменше, одну антисмислову секвенування амінокислот, або конформаційний молекулу, здатну блокувати або зменшувати епітоп, утворений тримірною взаємодією експресію функціонального NGF, або амінокислот, які необов'язково можуть міститися в функціонального рецептора trkA і/або р75. одному фрагменті секвенування. Пептиди різної Нуклеотидні послідовності NGF, trkA і р75 відомі і довжини (наприклад, щонайменше, довжиною 4-6 легко доступні із загальнодоступних баз даних амінокислот) можна виділити, або синтезувати [див., наприклад, Borsani et al, Nuc. Acids Res. (наприклад, рекомбінантно) і використати для 1990, 18, 4020; Accession Number NM 002506; аналізів зв'язування з антитілом проти NGF. В Ullrich et al, Nature 303:821-825 (1983)]. іншому прикладі епітоп, з яким зв'язується Загальновідоме отримання молекул антитіло проти NGF, можна визначити при антисмислового олігонуклеотиду, які специфічно систематичному скринінгу використанням зв'язують мРНК NGF, trkA або р75 без перехресної перекриваючих пептидів, отриманих з взаємодії з іншими полінуклеотидами. послідовностi NGР, і визначенням зв'язування Ілюстративні сайти наділення включають, але не антитілом проти NGF. Відповідно до аналізів обмежуються, кодон ініціації, регуляторні області експреси генних фрагментів, відкрита рамка 5', кодуючу послідовність і нетрансльовану зчитування, що кодує NGF, фрагментована або область 3'. В деяких варіантах здійснення 35 81299 36 олігонуклеотиди мають довжину приблизно від 10 рецептори. В іншому варіанті здійснення сполука, до 100 нуклеотидів, мають довжину приблизно від що інгібує NGF, зв'язується з рецепторами NGF 15 до 50 нуклеотидів, мають довжину приблизно (такими як TrkA і/або р75) і інгібує біологічну від 18 до 25 нуклеотидів, або більше. активність NGF. Ілюстративні сайти наділення Олігонуклеотиди можуть включати модифікації включають ті частини TrkA і/або р75, які каркаса, такі як, наприклад, фосфортіоатні зв'язки, зв'язуються з NGF. і модифікації 2'-O цукрів, добре відомі в даній У варіанті здійснення, що включає маленьку галузі [(див., наприклад, Agrawal and Zhao (1998), молекулу, маленька молекула може мати Antisense & Nucleic) Acid Drug Development 8, 135молекулярну масу приблизно будь-якої величини 139]. Ілюстративні антисмислові молекули від 100 до 20000 дальтон, від 500 до 15000 включають антисмислові молекули NGF, описані в дальтон або від 1000 до 10000 дальтон. Бібліотеки [патентній публікації США №20010046959; див. маленьких молекул є в продажу. Маленькі також http://www,rna-tec.com/repair.htm. молекули можна вводити з використанням будьАльтернативно, експресію і/або вивільнення яких засобів, відомих в даній галузі, включаючи NGF можна зменшити з використанням інгаляцію, введення внутрішньоочеревинно, «оглушення» гена, морфоліно олігонуклеотидів, внутрішньовенно, внутрішньом'язово, підшкірно, ІРНК або рибосом, способів, які добре відомі в підоболонково, в шлуночки головного мозку, даній галузі. [Див., наприклад, Rossi, JJ. et al., eds., перорально, ентерально, парентерально, "Intracellular Ribozyme Applications: Principles and інтраназально або дермально. У деяких варіантах Protocols, "Horizon Scientific Press (Duarte, CA, здійснення, коли антагоніст NGF являє собою 1999); US 6506559; WO 02/244321; WO 01/192513; маленьку молекулу, він вводиться в кількості від WO 01/29058]. 0,1 до 300мг/кг маси пацієнта, розділеній на 1-3 В інших варіантах здійснення антагоніст NGF або більше доз. Для дорослого пацієнта з включає, щонайменше, одну сполуку, що інгібує нормальною масою тіла можна вводити дози в NGF. Використовуваний в даному описі термін діапазоні від 1мг до 5г на 1 дозу. «сполука, що інгібує NGF», відноситься до В інших варіантах здійснення антагоніст NGF сполуки, відмінної від антитіла проти NGF, яка включає, щонайменше, один структурний аналог прямо або непрямо знижує, інгібує, нейтралізує NGF. «Структурні аналоги NGF» в даному або усуває біологічну активність NGF. Сполука, що винаході відносяться до сполук, які мають інгібує NGF, повинна проявляти будь-яку одну або однакову тримірну структуру у вигляді частини декілька з наступних характеристик: (а) структури NGF і які зв'язуються з рецептором NGF зв'язування з NGF і інгібування біологічної в фізіологічних умовах in vitro або in vivo. В одному активності і/або низхідного шляху (шляхів), варіанті здійснення структурний аналог NGF опосередкованого функцією передачі сигналів зв'язується з рецептором TrkA і/або р75. NGF; (b) лікування або профілактика будь-якого Ілюстративні структурні аналоги NGF включають, аспекту болю, зокрема, в поєднанні з НСПЗЗ; (с) але не обмежуються, біциклічні пептиди, описані в блокування або зменшення активації рецепторів [публікації РСТ №WO 97/15593]; біциклічні NGF (включаючи димеризацію і/або пептиди, описані в [патенті США №6291246]; аутофосфорилювання рецепторів trkA); (d) циклічні сполуки, описані в [патенті США збільшення виведення NGF; (e) інгібування №6017878], і пептиди, отримані з NGF, описані в (зниження) синтезу, продукції або вивільнення [публікації РСТ №WO89/09225]. Відповідні NGF; (f) посилення лікування болю НСПЗЗ. структурні аналоги NGF можуть також Ілюстративні сполуки, що інгібують NGF, конструюватися і синтезуватися за допомогою включають дрібномолекулярні інгібітори NGF, молекулярного моделювання зв'язування описані в [патентній публікації США рецепторів NGF, наприклад, способом, описаним в №20010046959]; сполуки, які інгібують зв'язування [публікації РСТ №WO 98/06048]. Структурні NGF з р75, як описано в [публікації РСТ №WO аналоги NGF можуть являти собою мнономери 00/69829]; сполуки, які інгібують зв'язування NGF з або димери/олігомери в будь-якій бажаній ТrkА/р75, як описано в [публікації РСТ №WO комбінації їх або інших структур для отримання 98/17278]. Додаткові приклади сполук, що поліпшених афінітетів і біологічних ефектів. інгібують NGF, включають сполуки, описані в В інших варіантах здійснення винахід надає [публікаціях РСТ №№ WO 02/17914, WO 02/20479, антагоніст NGF, що включає, щонайменше, один в патентах США №№ 5342942, 6127401 і 6359130]. домінантно-негативний мутант рецептора TrkA Інші ілюстративні сполуки, що інгібують NGF, і/або рецептора р75. Фахівець в даній галузі може являють собою сполуки, які є конкурентними отримати домінантно-негативні мутанти, інгібіторами NGF [див. патент США №6291247]. наприклад, рецептора TrkA, так що рецептор буде Крім того, фахівець в даній галузі може отримати зв'язувати NGF, і, таким чином, діяти як «злив» інші дрібномолекулярні сполуки, що інгібують NGF. для захоплення NGF. Однак домінантно-негативні В деяких варіантах здійснення сполука, що мутанти не будуть мати нормальної біологічної інгібує NGF, зв'язує NGF. Ілюстративні сайта активності рецептора (такого як рецептор TrkA) наділення (зв'язування) включають, але не після зв'язування з NGF. Ілюстративні домінантнообмежуються, частину NGF, яка зв'язується з негативні мутанти включають, але не рецептором TrkA і/або рецептором р75, i ті обмежуються, мутанти, описані в наступних частини NGF, які прилягають до області, що посиланнях: [Li et al, Proc. Natl Acad. Sci. USA зв'язує рецептори, і які частково відповідальні за 1998, 95, 10884; Eide et al, J. Neurosci. 1996,16, правильну тримірну форму частини, що зв'язує 3123; Liu et al, J. Neurosci 1997, 17, 8749; Klein et 37 81299 38 al, Cell 1990, 61, 647; Valenzuela et al, Neuron 1993, Вектори на вірусній основі для доставки 10, 963; Tsoulfas et al, Neuron 1993, 10, 975; і бажаного полінуклеотиду і експресії в бажаній Lamballe et al, EMBO J. 1993, 12, 3083], кожна з клітині добре відомі в даній галузі. Ілюстративні яких повністю включена в даний опис як вектори на вірусній основі включають, але не посилання. Домінантно-негативні мутанти можна обмежуються, рекомбінантні ретровіруси [див., вводити в білковій формі або в формі вектора наприклад, публікації РСТ №№ WO 90/07936; WO експресії, так що домінантно-негативний мутант 94/03622; WO 93/25698; WO 93/25234; WO (наприклад, мутантний рецептор TrkA) 93/11230; WO 93/10218; WO 91/02805; патенти експресований in vivo. Білок або вектор експресії США №№ 5219740, 4777127; патент можна вводити з використанням будь-якого Великобританії №2200651 і патент Іспанії засобу, відомого в даній галузі, такого як введення №0345242], вектори на основі альфа-вірусу внутрішньоочеревинно, внутрішньовенно, (наприклад, вектори на основі вірусу Синдбіс, внутрішньом'язово, підшкірно, підоболонково, в вірусу лісу Семліки (АТСС VR-67; АТСС VR-1247), шлуночки головного мозку, перорально, вірусу ріки Росе (АТСС VR-373; АТСС VR-1246) і ентерально, парентерально, інтраназально, вірусу венесуельського кінського енцефаліту дермально або шляхом інгаляції. Наприклад, (АТСС VR-923; АТСС VR-1250; АТСС VR-1249; введення вектора експресії включає локальне або АТСС VR-532), і адено-асоційованого вірусу (AAV) системне введення, включаючи ін'єкцію, [див., наприклад, публікації РСТ №№ WO пероральне введення, введення у вигляді 04/12649, WO 93/03769, WO 93/19191; WO частинок з використанням ін'єкційного пістолета 94/28938; WO 95/11984 і WO 95/00655]. Можна або катетера і місцеве введення. В інших також використати введення ДНК, зв'язаної з варіантах здійснення білок або вектор експресії убитим аденовірусом, як описано в [публікації вводиться прямо в симпатичний або сенсорний Curiel, Hum. Gene Ther. (1992) 3:147]. стовбур або ганглій. Фахівець в даній галузі Можна також використати невірусні носії знайомий з введенням векторів експресії для доставки, включаючи, але не обмежуючись, отримання експресії екзогенного білка in vivo [див., полікатіонну, конденсовану ДНК, сполучену з наприклад, патенти США №№ 6436908; 6413942; одним убитим аденовірусом [див., наприклад, 6376471]. Curiel, Hum. Gene Ther. (1992) 3:147]; ДНК, Можна також використовувати націлену сполучену з лігандом [див., наприклад, Wu, J. Biol. доставку терапевтичних композицій, що містять Chem. (1989) 264:16985]; клітини-носії доставки антисмисловий полінуклеотид, вектор експресії еукаріотичних клітин [див., наприклад, патент США або субгеномні полінуклеотиди. Опосередковані №5814482; публікації РСТ №№ WO 95/07994; WO рецепторами методики доставки ДНК описані, 96/17072; WO 95/30763; і WO 97/42338] і наприклад, в [публікаціях Findeis et al, Trends нейтралізацію нуклеїнового заряду або злиття з Biotechmol (1993) 11:202; Chiou et al. Селі клітинними мембранами. Можна також Therapeutics: Methods And Applications Of Direct використати депротеїнізовану ДНК. Ілюстративні Gene Transfer (J.A. Wolff, ed.) (1994); Wu et al, J. способи введення депротеїнізованої ДНК описані в Biol Chem. 1988) 263:621; Wu et al, J. Biol. Chem. [публікації РСТ № WO 90/11092 і в патенті США № (1994) 269:542; Zenke et ah, Proc. Natl. Acad. Sci. 5580859]. Ліпосоми, які можуть діяти як носії генної (USA) (1990) 87:3655; Wu et al., J. Biol. Chem. доставки, описані в [патенті США № 5422120; (1991) 266:338]. Терапевтичні композиції, що публікаціях РСТ №№ WO 95/13796; WO 94/23697; містять полінуклеотид, вводяться в діапазоні від WO 91/14445 і патенті Іспанії №0524968]. приблизно 100нг до приблизно 200мг (або більше) Додаткові підходи описані в [публікації Philip, Моl. ДІЖ для локального введення в протоколі генної Cell. Biol. (1994) 14:2411° і в публікації Woffendin, терапії. У деяких варіантах здійснення в ході Proc. Natl. Acad-Sci. (1994) 91:1581]. протоколу генної терапії можна також використати Також очевидно, що вектор експресії можна діапазони концентрації менше за приблизно 500нг, використати для напряму експресії будь-якого з від приблизно 500нг до приблизно 50нг, від антагоністів NGF на основі білка, описаних в приблизно 1мкг до приблизно 2мг, від приблизно даному описі (наприклад, антитіло проти NGF, 5мкг до приблизно 500мкг і від приблизно 20мкг до імуноадгезин TrkA і т.д.). Наприклад, приблизно 100мкг або більше за ДНК. полінуклеотид, що кодує антагоністичне антитіло Терапевтичні полінуклеотиди і поліпептиди даного проти NGF, можна також використовувати для винаходу можна доставити з використанням носіїв доставки і експресії антагоністичного антитіла генної доставки. Носії генної доставки можуть бути проти NGF в бажаній клітині. Очевидно, що вектор вірусного або невірусного походження [див. в експресії можна використовувати для напряму цілому Jolly, Cancer Gene Therapy (1994) 1:51; експресії антагоністичного антитіла проти NGF. Kimura, Human Gene Therapy (1994) 5:845; Вектор експресії можна вводити Connelly, Human Gene Therapy (1995) 1:185; і внутрішньоочеревинно, внутрішньовенно, Kaplitt, Nature Genetics (1994) 6:148]. Експресію внутрішньом'язово, підшкірно, підоболонково, в таких кодуючих послідовностей можна викликати з шлуночки головного мозку, перорально, використанням ендогенних промотерів і/або ентерально, парентерально, інтраназально, підсилювачів ссавців або гетерологічних дермально або шляхом інгаляції. Наприклад, промотерів і/або підсилювачів. Експресія кодуючої введення векторів експресії включає локальне або послідовності може бути або констутивною, або системне введення і місцеве введення. Як далі регульованою. обговорюється в даному описі, фахівець в даній галузі знайомий з введенням векторів експресії 39 81299 40 для отримання експресії екзогенного білка in vivo NGF з рецептором р75 і/або низхідну передачу [див., наприклад, патенти США №№ 6436908; сигналів, за допомогою чого біологічна активність 6413942 і 6376471]. У даній області відомі інші NGF знижується і/або блокується. фрагменти рецептора TrkA, які здатні блокувати В іншому варіанті здійснення антагоніст NGF NGF (від часткової до повної блокади) і/або включає, щонайменше, один інгібітор кінази, біологічну активність NGF. здатний інгібувати низхідну передачу сигналів В іншому варіанті здійснення антагоніст NGF кінази, пов'язаних з активністю рецепторів TrkA включає, щонайменше, один імуноадгезин TrkA. і/або р75. Ілюстративні інгібітори кінази являють Використовувані в даному описі імуноадгезини собою К252а або К252b, які відомі в даній галузі і TrkA відносяться до розчинних химерних молекул, описані в [публікаціях Knusel et ah, J. Neurochem. що включають позаклітинний домен рецептора 59:715-722 (1992); Knusel et al, J. Nenrochemistry TrkA (або його частину), і послідовності 57:955-962 (1991); Koizumi et al, J Neuroscience імуноглобуліну, яка зберігає специфічність 8:715-721 (1988); Hirata et al, Chemical Abstracts зв'язування (в деяких варіантах здійснення, по суті 111:728, XP00204135, див. резюме і 12th Collective зберігає специфічність зв'язування) рецептора Chemical Substance Index, p.34237, з 3 (5-7), 55-60, TrkA і здатна зв'язуватися з NGF. Імуноадгезин 66-69), p.34238, c.1 (41-44), c.2 (25-27, 32-33), TrkA здатний блокувати (знизити і/або подавити) p.3423, c.3 (48-50, 52-53); патент США №6306849]. біологічну активність NGF, як описано в даному Очікується, що кліницист при пошуку зможе описі. ідентифікувати ряд інших категорій антагоністів Імуноадгезини TrkA відомі в даній галузі, і було NGF. виявлено, що вони блокують (знижують або Ідентифікація антагоністів NGF пригнічують) зв'язування NGF з рецептором TrkA Антитіла проти NGF та інші антагоністи NGF [див., наприклад, патент США №6153189]. В можна ідентифікувати або охарактеризувати з одному варіанті здійснення імуноадгезин TrkA використанням способів, відомих в даній галузі, за включає злиття амінокислотної послідовності допомогою чого виявляється і/або вимірюється рецептора TrkA, здатної зв'язувати NGF (або зниження, полегшення або нейтралізація амінокислотну послідовність, яка по суті зберігає біологічної активності NGF. Наприклад, аналіз специфічність зв'язування рецептора TrkA) і активації рецепторів кінази (KIRA), описаний в послідовність імуноглобуліну (або амінокислоту, [патентах США №№ 5766863 і 5891650], можна яка по суті зберігає специфічність зв'язування використовувати для ідентифікації засобів проти рецептора TrkA). У деяких варіантах здійснення NGF. Цей аналіз типу ELISA підходить для рецептор TrkA являє собою послідовність якісного або кількісного вимірювання активації людського рецептора TrkA, і злиття відбувається з кінази вимірюванням аутофосфорилювання послідовністю константного домену домену кінази тирозинкінази білка рецептора (що імуноглобуліну. В інших варіантах здійснення далі іменується "rРТК"), наприклад, рецептора послідовність константного домену імуноглобуліну TrkA, а також для ідентифікації і характеристики являє собою послідовність константного домену потенційних антагоністів вибраного rРТК, важкого ланцюга імуноглобуліну. В інших наприклад, TrkA. Перша стадія аналізу включає варіантах здійснення асоціація двох злиттів фосфорилювання домену кінази рецептора кінази, рецептора TrkA важкого ланцюга імуноглобуліну наприклад, рецептора TrkA, причому рецептор (наприклад, через ковалентний сполучення присутній в клітинній мембрані еукаріотичної дисульфід ним зв'язком (зв'язками)) приводить до клітини. Рецептор може являти собою ендогенний структури, подібної гомодимерному рецептор або нуклеїнову кислоту, що кодує імуноглобуліну. Легкий ланцюг імуноглобуліну рецептор, або конструкт рецептора може бути може, крім того, бути асоційований з однією або трансформований в клітину. Звичайно перша обома химерами імуноглобуліну рецептора TrkA в тверда фаза (наприклад, ямка першої аналітичної зв'язаний дисульфідом димер для отримання планшети) покривається по суті однорідною гомотримерної або гомотетрамерної структури. популяцією таких клітин (звичайно лінії клітин Приклади відповідних імуноадгезинів TrkA ссавців) так, що клітини прилипають до твердої включають імуноадгезини, описані в [патенті США фази. Часто клітини є прикріпленими до субстрату, №6153189]. і, за допомогою цього, вони природно В іншому варіанті здійснення антагоніст NGF прикріплюються до першої твердої фази. Якщо включає, щонайменше, одне антитіло проти TrkA, використовується «конструкт рецептора», він здатне блокувати, пригнічувати, змінювати і/або звичайно включає злиття рецептора кінази і знижувати фізичну взаємодію NGF з рецептором сигнальний поліпептид. Сигнальний поліпептид TrkA і/або низхідну передачу сигналів, за розпізнається засобом захоплення, часто допомогою чого біологічна активність NGF антитілом захоплення, в частині ELISA аналізу. знижується і/або блокується. Антитіла проти TrkA Речовина, що аналізується, така як перспективне відомі в даній галузі. Ілюстративні антитіла проти антитіло проти NGF або інший антагоніст NGF, TrkA включають антитіла, описані в [публікаціях потім додається разом з NGF в ямку, що має РСТ №№ WO 97/21732, WO 00/73344, WO прикріплені клітини, так що рецептор 02/15924 і патентній публікації США тирозинкінази (наприклад, рецептор TrkA) зазнає №20010046959]. В іншому варіанті здійснення впливу (або контактує) з NGF і речовиною, що антагоніст NGF включає, щонайменше, одне аналізується. Цей аналіз забезпечує можливість антитіло проти р75, здатне блокувати, ідентифікації антитіл (або іншого антагоніста пригнічувати і/або знижувати фізичну взаємодію NGF), які інгібують активацію TrkA його лігандом 41 81299 42 NGF. Після контакту з NGF і речовиною, що продукції або вивільнення NGF; (g) посилення аналізується, прикріплені клітини солюбілізуються лікування болю НСПЗЗ. У деяких варіантах з використанням буфера лізису (який містить в здійснення антагоніст NGF ідентифікується собі солюбілізуючий детергент) і обережного інкубацією перспективного засобу з NGF і перемішування, вивільняючи за допомогою цього моніторингом зв'язування і супутнього зменшення клітинний лізат, який може бути підданий або нейтралізації біологічної активності NGF. безпосередньо частині ELISA аналізу без Аналіз зв'язування можна виконати очищеним необхідності концентрації або освітлення поліпептидом (поліпептидами) NGF або клітинами, клітинного лізату. які природно експресують або трансфіковані для Отриманий таким чином клітинний лізат потім експресії поліпептиду (поліпептидів) NGF. В готовий бути підданим стадії ELISA аналізу. Як одному варіанті здійснення аналіз зв'язування перший етап стадії ELISA, другу тверду фазу являє собою аналіз конкурентного зв'язування, де (звичайно ямку титрувальної планшети ELISA) оцінюється здатність перспективного антитіла покривають засобом захоплення (часто антитілом конкурувати з відомим антагоністом NGF за захоплення), який специфічно зв'язується з зв'язування NGF. Аналіз можна виконувати в рецептором тирозинкінази або, у разі конструкта різних форматах, включаючи формат ELISA. В рецептора, з сигнальним поліпептидом. Покриття інших варіантах здійснення антагоніст NGF другої твердої фази проводиться так, що засіб ідентифікується інкубацією перспективного засобу захоплення прикріплюється до другої твердої з NGF і моніторингом супутнього інгібування фази. Засіб захоплення являє собою в цілому димеризації і/або аутофосфорилювання моноклональне антитіло, але, як описано в рецептора TrkA. прикладах в даному описі, можуть також Після первинної ідентифікації активність використовуватися поліклональні антитіла. перспективного антагоніста проти NGF можна далі Отриманий клітинний лізат потім зазнає впливу підтвердити і уточнити біологічними аналізами, які, або контактує з прикріплювальним засобом як відомо, тестують націлені види біологічної захоплення так, що рецептор або конструкт активності. Альтернативно, біологічні аналізи рецептора прикріплюється до (або захоплюється можна використати для прямого скринінгу у) другу тверду фазу. Потім проводиться етап кандидатів. Наприклад, NGF сприяє ряду промивання з тим, щоб видалити незв'язаний морфологічно розпізнаваних змін в клітинах, що клітинний лізат, залишаючи захоплений рецептор реагують. Вони включають, але не обмежуються, або конструкт рецептора. Прикріплений або сприяння диференціюванню клітин PC 12 і захоплений рецептор або конструкт рецептора посилення росту нейритів з цих клітин [Urfer et al., потім зазнає впливу або контактує з антитілом Biochem. 36:4775-4781 (1997); Tsoulfas et al., проти фосфотирозину, яке ідентифікує Neuron 10:975-990 (1993)], сприяння розростанню фосфорильовані залишки тирозину в рецепторі нейритів з експлантатів, реагуючих сенсорних і тирозинкінази. В одному варіанті здійснення симпатичних гангліїв, [Levi-Montalcini, R. And антитіло проти фосфотирозину зв'язано пов'язане Angeletti, P. Nerve growth factor. Physiol. Rev. 48, (прямо або непрямо) з ферментом, який каталізує 534-569, 1968] і сприяння виживанню нейронів, зміну кольору нерадіоактивного колірного залежних від NGF, таких як нейрони реактиву. Відповідно, фосфорилювання рецептора ембріонального дорсального кореневого ганглію, можна виміряти подальшою зміною кольору трійчастого ганглію або симпатичного ганглію реагенту. Фермент може бути безпосередньо [наприклад, Chun & Patterson, Dev. Biol. 75:705зв'язаний з антитілом проти фосфотирозину, або 711, (1977); Buchman & Davies, Development кон'югуча молекула (наприклад, біотин) може бути 118:989-1001, (1993)]. Таким чином, аналіз на кон'югована з антитілом проти фоcфотирозину, і інгібування біологічної активності NGF тягне за фермент може бути в подальшому зв'язаний з собою культивування клітин, що реагують на NGF, антитілом проти фосфотирозину за допомогою з NGF плюс речовина, що аналізується, така як кон'югуючої молекули. Нарешті, вимірюють перспективне антитіло проти NGF і перспективний зв'язування антитіла проти фосфотирозину із антагоніст NGF. Після відповідного часу треба захопленим рецептором або конструктом аналізувати реакцію клітин (диференціювання рецептора, наприклад, зміною кольору у клітин, розростання нейритів або виживання кольорового реагенту. клітин). Антагоністи NGF можна також ідентифікувати Визначення здатності антагоніста інкубацією перспективного засобу з NGF і перспективного NGF блокувати або моніторингом будь-якої однієї або декількох з нейтралізувати біологічну активність NGF можна наступних характеристик: (а) зв'язування з NGF і також провести моніторингом здатності інгібування біологічної активності NGF і/або перспективного засобу інгібувати опосередковане низхідного шляху (шляхів), опосередкованого NGF виживання в біологічному аналізі виживання функцією передачі сигналів NGF; (b) блокування ембріональних щурячих дорсальних кореневих або зменшення активації рецепторів NGF; (с) гангліїв, як описано в [публікації Kongo, et al., збільшення виведення NGF; (d) інгібування Hybridoma 19:215-227 (2000)]. Спосіб ідентифікації активації рецепторів NGF (включаючи модуляторів активності NGF описаний в димеризацію і/або аутофосфорилювання TrkA); (e) [PCT/US2004/01609]. лікування, полегшення або профілактика будьКомпозиції якого аспекту болю, зокрема, в поєднанні з Композиції винаходу включають ефективну НСПЗЗ; (f) 50 інгібування (зниження) синтезу, кількість антагоніста NGF (такого як антитіло проти 43 81299 44 NGF) і НСПЗЗ, як описано в різних варіантах Wilkins, Ed. Κ. Ε. Hoover], в формі ліофілізованих здійснення, описаних в даному описі. У деяких композицій або водних розчинів. Прийнятні носії, варіантах здійснення композиції, крім того, містять ексципієнти або стабілізатори є нетоксичними для фармацевтично прийнятний ексципієнт. У деяких реципієнтів у використовуваних дозуваннях і варіантах здійснення композиція призначена для концентраціях і можуть включати буфери, такі як застосування в будь-якому з способів, описаних в фосфат, цитрат і інші органічні кислоти; даному описі (таких як способи лікування антиоксиданти, включаючи аскорбінову кислоту і післяопераційного болю). Приклади таких метіонін; консерванти (такі як хлорид композицій, а також те, як їх складати, також октадецилдиметилбензиламонію; хлорид описані в попередньому розділі і нижче. Антагоніст гексаметонію; хлорид бензалконію, хлорид NGF і НСПЗЗ можуть бути присутніми в одній бензетонію; фенол, бутиловий або бензиловий композиції або бути присутніми у вигляді окремих спирт; алкілпарабени, такі як метил або композицій. Відповідно, в деяких варіантах пропілпарабен; катехол; резорцинол; здійснення антагоніст NGF і НСПЗЗ присутні в циклогексанол; 3-пентанол і м-крезол); одній і тій самій композиції. В інших варіантах поліпептиди низької молекулярної маси (менше за здійснення антагоніст NGF і НСПЗЗ присутні в приблизно 10 залишків), білки, такі як окремих композиціях. сироватковий альбумін, желатин, або В іншому аспекті винахід надає синергічну імуноглобуліни; гідрофільні полімери, такі як композицію антагоніста NGF і НСПЗЗ. полівінілпіролідон;амінокислоти, такі як гліцин, У деяких варіантах здійснення винахід надає глутамін, аспарагін, гістидин, аргінін або лізин; фармацевтичні композиції, що включають моносахариди, дисахариди та інші вуглеводні, антагоніст NGF, для застосування при лікуванні включаючи глюкозу, манозу або декстрани; болю (такого як післяопераційний біль), причому хелатоутворювальні агенти, такі як ЕДТА; цукор, вказане застосування включає одночасне і/або такий як сахароза, маніт, трегалоза або сорбіт; послідовне введення НСПЗЗ. У деяких варіантах протиіони, що створюють сіль, такі як натрій; здійснення винахід надає фармацевтичні комплекси металів (наприклад, комплекси Znкомпозиції, що включають НСПЗЗ для лікування білок); і/або неіонні поверхнево-активні речовини, болю, причому вказане застосування включає такі як TWEENÔ, PLUROiftCSÔ або одночасне і/або послідовне введення антагоніста поліетиленгліколь (PEG). Фармацевтично NGF. У деяких варіантах здійснення винахід надає прийнятні ексципієнти, крім того, описані в даному фармацевтичні композиції, що включають описі. антагоніст NGF і НСПЗЗ для окремого, Композиції, описані в даному описі, можуть одночасного і/або послідовного застосування для містити додаткові сполуки, які, як відомо, можна лікування болю. У деяких варіантах здійснення використовувати для лікування болю. Антагоніст антагоніст NGF являє собою антитіло проти NGF NGF і НСПЗЗ і їх композиції можна також (таке як антитіло Е3, як описано в даному описі). В застосовувати в поєднанні з іншими засобами, які інших варіантах здійснення НСПЗЗ являє собою служать для посилення і/або доповнення ібупрофен. У ще одних варіантах здійснення ефективності засобів. антагоніст NGF являє собою антитіло проти NGF, і В інших варіантах здійснення даний винахід НСПЗЗ являє собою ібупрофен. надає композиції (описані в даному описі) для Зрозуміло, що композиція може включати застосування в будь-якому з способів, описаних в більше одного антагоніста NGF. Наприклад, даному описі, або в контексті застосування як композиція може включати більше одного члена лікарський засіб, і/або використання для класу антагоністів NGF (наприклад, суміш антитіл виготовлення лікарського засобу. проти NGF, які розпізнають різні епітопи NGF), a Набори також члени різних класів антагоністів NGF Винахід також надає набори для застосування (наприклад, антитіла проти NGF і сполуки, що в даних способах. Набори винаходу включають інгібує NGF). Інші ілюстративні композиції один або декілька контейнерів, що включають включають більше одного антитіла проти NGF, які антагоніст NGF (такий як антитіло проти NGF), розпізнають один і той самий епітоп (епітопи), різні НСПЗЗ і в деяких варіантах здійснення, крім того, види антитіл проти NGF, які зв'язуються з різними включають інструкції по застосуванню відповідно епітопами NGF, або різні сполуки, що інгібують до будь-якого з способів, описаних в даному описі. NGF. В інших варіантах здійснення композиція У деяких варіантах здійснення набір включає включає один або декілька антагоністів NGF, антитіло проти NGF (таке як антитіло Е3, описане вибраних з групи, що складається з антагоніста, в даному описі). В інших варіантах здійснення який зв'язує (фізично взаємодіє з) NGF набір включає антитіло проти NGF, що включає (наприклад, антитіло), антагоніст, який зв'язується один або декілька CDR антитіла Е3 (наприклад, 1, з рецептором NGF (таким як рецептор TrkА або 2, 3, 4, 5 або, в деяких варіантах здійснення, всі 6 рецептор р75), і антагоніст, який знижує (гальмує CDR з Е3). Набір може, крім того, включати опис і/або блокує) низхідну передачу сигналів відбору індивідуума, що підлягає лікуванню, на рецептора NGF. основі ідентифікації того, чи є у індивідуума біль Композиція, що застосовується в даному або чи є у індивідуума ризик болю. В деяких винаході, може, крім того, включати варіантах здійснення винахід надає набори для фармацевтично прийнятні носії, ексципієнти або застосування з будь-яким із способів, описаних в стабілізатори [Remington: The Science and Practice даному описі, причому вказаний набір включає of Pharmacy 20th Ed. (2000) Lippincott Williams and антагоніст NGF. У ще одних варіантах здійснення 45 81299 46 набір включає антитіло проти NGF. У ще одних полегшення і/або профілактики болю (включаючи варіантах здійснення набір включає гуманізоване післяопераційний біль). Інструкції можуть бути антитіло проти NGF (таке як антитіло E3, описане надані для здійснення будь-якого з способів, в даному описі). У ще одних варіантах здійснення описаних в даному описі. інструкції включають опис введення антагоніста Набори даного винаходу знаходяться у NGF в поєднанні з НСПЗЗ для лікування, відповідній упаковці. Відповідна упаковка включає, профілактики і/або полегшення будь-якого болю але не обмежується, флакончики, пляшки, банки, (такого як післяопераційний біль, біль, пов'язаний гнучку упаковку (наприклад, запаяні мішечки Mylar з опіком, ревматоїдним артритом або або пластикові мішечки) і їм подібні. Передбачені остеоартритом). також упаковки для використання в комбінації зі У деяких варіантах здійснення набір включає спеціальним пристроєм, таким як інгалятор, антагоніст NGF (такий як антитіло проти NGF), пристрій для інтраназального введення НСПЗЗ і інструкції по введенню антагоніста NGF i (наприклад, розпилювач) або інфузійний пристрій, НСПЗЗ одночасно і/або послідовно для такий як мінінасос. Набір може мати стерильний ефективного лікування болю. В іншому варіанті канал доступу (наприклад, контейнер може являти здійснення набір включає антагоніст NGF (такий як собою мішечок або флакончик з розчином для антитіло проти NGF) і інструкції по введенню внутрішньовенного введення, що має пробку, що антагоніста NGF (такого як антитіло проти NGF) і проколюється голкою для підшкірних ін'єкцій). НСПЗЗ в поєднанні один з одним для ефективного Контейнер може також мати стерильний канал лікування болю. В інших варіантах здійснення доступу (наприклад, контейнер може являти набір включає антагоніст NGF (такий як антитіло собою мішечок або флакончик з розчином для проти NGF), і НСПЗЗ (такий як ібупрофен) і внутрішньовенного введення, що має пробку, що інструкції по введенню антагоніста NGF і НСПЗЗ в проколюється голкою для підшкірних ін'єкцій). поєднанні один з одним для ефективного Щонайменше, один активний засіб в композиції лікування болю. Відповідно, будь-які способи, являє собою антагоніст NGF, такий як антитіло описані в даному описі, можуть бути відображені в проти NGF. Контейнер може, крім того, включати інструкціях. другий фармацевтично активний засіб. У деяких варіантах здійснення набір включає Набори можуть необов'язково надавати антитіло проти NGF. В інших варіантах здійснення додаткові компоненти, такі як буфери і антитіло проти NGF являє собою антитіло, що інтерпретаційна інформація. Звичайно набір включає варіабельну область важкого ланцюга, включає контейнер і етикетку або вкладиш показану в таблиці 1, і варіабельну область (вкладиші) упаковки на контейнері або зв'язані з легкого ланцюга, показану в таблиці 2. В ще одних ним. варіантах здійснення антитіло проти NGF являє У деяких варіантах здійснення винахід надає собою антитіло E3, як описане в даному описі. виготовлені вироби, що включають вміст описаних Антагоніст NGF (такий як антитіло проти NGF) вище наборів. В деяких варіантах здійснення і НСПЗЗ можуть бути присутніми в окремих набори включають антагоніст NGF (такий як контейнерах або в одному контейнері. Зрозуміло, антитіло проти NGF) і/або НСПЗЗ з інформацією, що набір може включати одну окрему композицію що вказує застосування для лікування болю (в або дві або більше композицій, причому одна поєднанні один з одним). композиція включає антагоніст NGF і одна Введення антагоніста NGF і НСПЗЗ і оцінка композиція включає НСПЗЗ. лікування Набори даного винаходу знаходяться у Антагоніст NGF і НСПЗЗ можна вводити відповідній упаковці. Відповідна упаковка включає, індивідууму будь-яким прийнятним шляхом. але не обмежується, флакончики, пляшки, банки, Наприклад, їх можна вводити разом або окремо, гнучку упаковку (наприклад, запаяні мішечки Mylar перорально, внтурішньовенно, сублінгвально, або пластикові мішечки) і їм подібні. Набори підшкірно, внутрішньоартеріально, можуть необов'язково містити додаткові внтурішньом'язово, інтраназально, ректально, компоненти, такі як буфери і інтерпретаційна інтраторакально, внутрішньоочеревинно, в інформація. шлуночки головного мозку, трансдермально або Інструкції, що відносяться до застосування шляхом інгаляції. їх можна вводити перорально, антагоніста NGF, загалом включають інформацію наприклад, в формі таблеток, пастилок, капсул, по дозуванню, схемі введення і шляху введення еліксирів, суспензій, сиропів, вафель, жувальної для передбачуваного лікування. Контейнери гумки, льодяників на паличці, супозиторіїв або їм можуть являти собою стандартні дози, насипні подібних, отриманих процедурами, визнаними в упаковки (наприклад, багатодозові упаковки) або даній галузі. Для фахівця в даній галузі буде субстандартні дози. Інструкції, що поставляються очевидно, що описані в даному описі приклади не в наборах винаходу, являють собою звичайно призначені бути такими, що обмежують, але лише письмові інструкції на етикетці або вкладиші ілюструють методики, що є. упаковки (наприклад, лист паперу, включений в Відповідно, в деяких варіантах здійснення набір), але також прийнятні інструкції, що антагоніст NGF, такий як антитіло проти NGF, зчитуються машиною (наприклад, інструкції на вводиться індивідууму відповідно до відомих магнітному або оптичному диску зберігання способів, таких як внутрішньовенне введення, інформації). наприклад, у вигляді болюсу або безперервним Етикетка або вкладиш упаковки вказує, що вливанням протягом періоду часу, композиція застосовується для лікування, внутрішньом'язовим, внутрішньоочеревинним, в 47 81299 48 спинний мозок, підшкірним, використовуваний антагоніст (антагоністи) NGF) внутрішньосуглобовим, внутрішньосиновіальним, може варіюватися з часом. підоболонковим, пероральним, інгаляційним або Антитіла проти NGF можна вводити з місцевим шляхами. Наявні в продажу розпилювачі використанням будь-якого відповідного способу, для рідких композицій, включаючи струменеві включаючи ін'єкцію (наприклад, розпилювачі і ультразвукові розпилювачі, можна внутрішньоочеревинно, внутрішньовенно, використовувати для введення. Рідкі композиції підшкірно, внутрішньом'язово і т.д.). Антитіла можуть розпилюватися безпосередньо, а проти NGF можна вводити інгаляцією, як описано ліофілізований порошок може розпилюватися в даному описі. Загалом, для введення антитіл після розчинення. Альтернативно, антагоніст NGF проти NGF початкове можливе дозування може (такий як антитіло проти NGF) може бути введений складати приблизно 0,2мг/кг або приблизно 2мг/кг. у вигляді аерозолю з використанням У деяких варіантах здійснення звичайне добове фторкарбонової композиції і інгалятора відміряної дозування може знаходитися в діапазоні дози, або інгаляційно у вигляді ліофілізованого і приблизно від 3мкг/кг до 30мкг/кг, до 300мкг/кг, до меленої порошка. 3мг/кг, до 30мг/кг, до 100мг/кг або більше, в Методики сайт-специфічної або націленої залежності від згаданих вище чинників. Для локальної доставки можна також використовувати повторних введень протягом декількох днів або для введення. Приклади методик сайтбільше, в залежності від стану, лікування специфічної або націленої локальної доставки продовжується доти, поки не станеться бажане включають різні імплантовані депоновані джерела пригнічення симптомів захворювання або доти, антагоніста NGF і/або НСПЗЗ, або катетери поки не будуть досягнуті терапевтичні рівні, локальної доставки, такі як інфузійні катетери, достатні для зменшення болю. Ілюстративна катетер, що імплантується, або голковий катетер, схема введення включає введення початкової синтетичні трансплантати, адвентиційнв обгортки, дози приблизно 2мг/кг з подальшою щотижневою шунти або інші пристрої, що імплантуються, сайтпідтримуючою дозою приблизно 1мг/кг антитіла специфічні носії, пряму ін'єкцію, використання проти NGF або з подальшою підтримуючою дозою методики або пристрою анальгезії, керованої приблизно 1мг/кг кожен другий тиждень. Однак пацієнтом (РСА), і/або пряме нанесення [див., можна використовуватїГ інші схеми введення, в наприклад, публікацію РСТ №WO 00/53211 і залежності від типу фармакокінетичного розпаду, патент США №5981568]. якого бажає досягнути лікар. Інші схеми введення Для введення можна застосовувати різні включають схему до 1 разу в день, від 1 до 4 разів композиції засобів (антагоністів NGF), таких як на тиждень, або менш часто. В деяких варіантах антитіла проти NGF, або їх фрагменти. У деяких здійснення сполуки вводяться приблизно варіантах здійснення засоби, такі як антитіла однократно на тиждень, приблизно від 1 до 4 разів проти NGF, або їх фрагменти, можна вводити без на місяць. Дозування антитіл проти NGF описане в добавок. У деяких варіантах здійснення засоби, даному описі. Хід лікування легко контролюється що включають антитіло проти NGF, можуть бути в звичайними методиками і аналізами. різних композиціях, включаючи композиції, що В деяких варіантах здійснення, коли він не включають фармацевтично прийнятний являє собою антитіло, антагоніст NGF відповідно ексципієнт. Фармацевтично прийнятні ексципієнти до винаходу можна вводити в кількості від 0,1 до відомі в даній галузі і являють собою відносно 300мг/кг маси тіла пацієнта, розділеній на 1-3 дози інертні речовини, які сприяють введенню або як розкрито в даному описі. У деяких дорослих фармакологічно активної речовини. Наприклад, пацієнтів з нормальною масою тіла можна вводити ексципієнт може додати форму або консистенцію дози в діапазоні приблизно від 0,3 до 5,00мг/кг. або діяти як розріджувач. Відповідні ексципієнти Конкретна схема дозування, тобто доза, час включають, але не обмежуються, засоби, що введення і повторення, будуть залежати від стабілізують, змочувальні і емульгуючі засоби, солі конкретного індивідуума і медичного анамнезу для зміни осмолярности, інкапсулючі засоби, цього індивідуума, а також від властивостей буфери і підсилювачі проникності шкіри. окремих засобів (таких як період напіввиведення Ексципієнти, а також композиції для засобу та інші міркування, добре відомі в даній парентеральної і непарентеральної доставки галузі). лікарських засобів викладені в [керівництві НСПЗЗ можна вводити на рівні дозування до Remington, et al., The Science and Practice of звичайних рівнів дозування для таких Pharmacy 20th Ed. Mack Publishing (2000)]. анальгетиків. У деяких варіантах здійснення В деяких варіантах здійснення ці засоби НСПЗЗ вводиться на зниженому рівні. Відповідні (антагоністи NGF) складені в композиції для рівні дозування будуть залежати від введення ін'єкцією (наприклад, знеболювального ефекту вибраного НСПЗЗ, але внутрішньоочеревинно, внутрішньовенно, звичайно прийнятні рівні складають приблизно від підшкірно, внутрішньом'язово і т.д.). Відповідно, ці 0,001 до 25мг/кг/день, приблизно від 0,005 до засоби можна комбінувати з фармацевтично 10мг/кг/день, або приблизно від 0,05 до прийнятними носіями, такими як сольовий розчин, 1мг/кг/день, або менше. Сполуку можна вводити розчин Рінгера, розчин декстрози і їм подібні. по схемі до 6 разів на день (або більше), 1-4 рази Конкретна схема дозування, тобто доза, час на день, або її можна вводити менш часто. В введення і повторення, будуть залежати від деяких варіантах здійснення НСПЗЗ вводиться конкретного індивідуума і медичного анамнезу безперервно або дуже часто (наприклад, як при цього індивідуума. Схема введення (включаючи РСА). 49 81299 50 При введенні в комбінації або у вигляді однієї, терапевтичною або профілактичною, і від інших або у вигляді окремої композиції (композицій), чинників, відомих досвідченим практикам. антагоніст фактора росту нервів і НСПЗЗ присутні Введення антагоніста NGF може бути по суті в співвідношенні, яке узгоджується з проявом безперервним протягом заздалегідь вибраного бажаного ефекту. В деяких варіантах здійснення періоду часу, або воно може виготовлятися у співвідношення по масі між антагоністом фактора вигляді серії доз, що вводяться через проміжок росту нервів і НСПЗЗ становитиме приблизно 1 до часу, наприклад, або до, під час або після 1. В деяких варіантах здійснення це розвитку болю; до і після; під час і після; до і під співвідношення може складати між приблизно час; або до, під час і після розвитку болю. 0,001 до приблизно 1 і приблизно 1000 до Наприклад, введення може здійснюватися до, під приблизно 1, приблизно 0,01 до приблизно 1 і 100 час і/або після поранення, порізу, травми, операції до приблизно 1, або приблизно 0,1 до приблизно 1 і будь-якого іншого явища, яке, ймовірно, викличе і приблизно 10 до приблизно 1. Передбачені інші розвиток болю. співвідношення. Потрібно розуміти, що кількість В деяких варіантах здійснення можуть бути антагоніста фактора росту нервів і НСПЗЗ, присутніми більше одного антагоніста NGF, такого необхідна для застосування при лікуванні аїю як антитіло. Антагоністи можуть бути однаковими профілактиці болю, буде варіюватися не тільки в або відрізнятися один від одного. Можуть бути залежності від конкретних вибраних сполук або присутніми, щонайменше, 1, щонайменше, 2, композицій, але також від шляху введення, щонайменше, 3, щонайменше, 4, щонайменше, 5 природи стану, що піддається лікуванню, і віку і або більше різних антагоністів NGF. Загалом, ці стану пацієнта, курсу або стадії лікування, і в антагоністи NGF мають додаткову активність, яка кінцевому результаті, воно буде визначатися за не чинить їх несприятливого ефекту один на розсудом лікуючого лікаря. Наприклад, відповідне одного. Антагоністи NGF можна також дозування антагоніста NGF (такого як антитіло застосовувати в поєднанні з іншими засобами, які проти NGF) буде залежати від використовуваного служать для посилення і/або доповнення антагоніста (антагоністів) NGF (або їх композицій), ефективності засобів. типу і тяжкості болю, який передбачається В деяких варіантах здійснення можуть бути лікувати, від того, чи вводиться засіб в присутнім більше одного НСПЗЗ. НСПЗЗ можуть профілактичних або терапевтичних цілях, бути однаковими або відрізнятися один від одного. попередньої терапії, клінічного анамнезу пацієнта і Можуть бути присутніми, щонайменше, 1, реакції на засіб і за розсудом лікуючого лікаря. щонайменше, 2, щонайменше, 3, щонайменше, 4, Звичайно клініцист буде вводити антагоніст NGF щонайменше, 5 або більше різних НСПЗЗ. В (такий як антитіло проти NGF) доти, поки не буде цілому, ці НСПЗЗ мають додаткову активність, яка досягнуте дозування, яке отримує бажаний не чинить їх несприятливого ефекту один на результат. одного. НСПЗЗ можна також застосовувати в Емпіричні міркування, такі як період поєднанні з іншими засобами, які служать для напіввиведення, загалом будуть впливати на посилення і/або доповнення ефективності засобу визначення дозування. Наприклад, антитіла, які (засобів). сумісні з імунною системою людини, такі як Терапевтичні композиції антагоніста NGF гуманізовані антитіла або повністю людські (такого як антитіло) і НСПЗЗ, що застосовуються антитіла, можна застосовувати для подовження відповідно до даного винаходу, готують для періоду напіввиведення антитіла і для зберігання змішуванням антитіла, що має бажаний профілактики атаки антитіла імунною системою ступінь чистоти, з необов'язковими хазяїна. Частоту введення можна визначити і фармацевтично прийнятними носіями, підібрати протягом курсу лікування, і вона загалом, ексципієнтами або стабілізаторами [Remington, et але необов'язково, заснована на лікуванні і/або al., The Science and Practice of Pharmacy 20th Ed. пригніченні, і/або полегшенні, і/або затримці Mack Publishing (2000)] в формі ліофілізованих виникнення болю. Альтернативно, можуть бути композицій або водних розчинів. Прийнятні носії, доцільні композиції антагоніста NGF і/або НСПЗЗ ексципієнти або стабілізатори нетоксичні для тривалого безперервного вивільнення. В даній реципієнтів у використовуваних дозуванні і галузі відомі різні композиції і пристрої для концентраціях і можуть включати буфери, такі як досягнення тривалого вивільнення. фосфат, цитрат та інші органічні кислоти; солі, такі В одному варіанті здійснення дозування для як хлорид натрію, антиоксиданти, включаючи антагоніста NGF можна визначити емпірично у аскорбінову кислоту і метіонін; консерванти (такі як індивідуумів, яким було зроблене одне або хлорид октадецилдиметилбензиламонію; хлорид декілька введень засобу, який інгібує активність гексаметонію; хлорид бензалконію, хлорид NGF, для лікування болю. Індивідуумам вводять бензетонію; фенол, бутиловий або бензиловий зростаюче дозування засобу, який інгібує NGF, спирт; алкілпарабени, такі як метил- або наприклад, антитіла проти NGF, в поєднанні з пропілпарабен; катехол; резорцинол; НСПЗЗ. Для оцінки ефективності лікування можна циклогексанол; 3-пентанол і м-крезол); стежити за показником болю. поліпептиди низької молекулярної маси (менше Введення антагоніста NGF і/або НСПЗЗ у приблизно 10 залишків), білки, такі як відповідності зі способом даного винаходу може сироватковий альбумін, желатин, або бути безперервним або переривистим, в імуноглобуліни; гідрофільні полімери, такі як залежності, наприклад, від фізіологічного стану полівінілпіролідон; амінокислоти, такі як гліцин, реципієнта. Від того, чи є мета введення глутамін, аспарагін, гістидин, аргінін або лізин; 51 81299 52 моносахариди, дисахариди та інші вуглеводні, або флакончик, що має пробку, що проколюється включаючи глюкозу, манозу або декстран; голкою для підшкірних ін'єкцій. хелатоутворювальні агенти, такі як ЕДТА; цукор, Композиції відповідно до даного винаходу такий як сахароза, маніт, трегалоза або сорбіт; можуть бути представлені у вигляді стандартних протиіони, що утворюють сіль, такі як натрій; лікарських форм, таких як таблетки, пілюлі, комплекси металів (наприклад, комплекси Znкапсули, порошки, гранули, розчини або суспензії білок); і/або не іонні поверхнево-активні речовини, або супозиторії, для перорального, парентерального або ректального введення, або такі як TWEENÔ, PLURONICSÔ або введення інгаляцією або інсуфляцією. поліетиленгліколь (PEG). Для отримання твердих композицій, таких як Ліпосоми, що містять антагоніст NGF (такий як таблетки, основний активний інгредієнт змішують з антитіло) отримують способами, відомими в даній фармацевтичним носієм, наприклад, звичайними галузі, такими як описано в [публікаціях Epstein, et таблетуючими інгредієнтами, таким як al, Ргос. Natl. Acad. Sci. USA 82:3688 (1985); кукурудзяний крохмаль, лактоза, сахароза, сорбіт, Hwang, et al, Proc. Natl Acad. Sci. USA 77:4030 тальк, стеаринова кислота, стеарат магнію, (1980); і патентах США №№ 4485045 і 4544545]. дикальційфосфат або смоли, та іншими Ліпосоми із збільшеним часом циркуляції розкриті фармацевтичними розріджувачами, наприклад, в [патенті США №5013556]. Особливо корисні водою, для утворення твердої заздалегідь ліпосоми можна генерувати способом складеної композиції, що містить однорідну суміш випарювання в оберненій фазі ліпідною сполуки даного винаходу або її нетоксичну композицією, що включає фосфатидилхолін, фармацевтично прийнятну сіль. При назві цих холестерин і дериватизований PEG фармацевтичних композицій «однорідними» фосфатидилетаноламін (PEG-РЕ). Ліпосоми мається на увазі, що активний інгредієнт піддають екструзії через фільтри з певним рівномірно диспергирований по всій композиції розміром пор для отримання ліпосом з бажаним так, що композицію можна легко поділити на діаметром. однаково ефективні стандартні лікарські форми, Активні інгредієнти можуть також укладатися в такі як таблетки, пілюлі і капсули. Цю тверду мікрокапсули, отримані, наприклад, методиками заздалегідь складену композицію потім поділяють коацервації або міжповерхневої полімеризації, на стандартні лікарські форми описаного вище наприклад, відповідно гідроксиметилцелюлозні типу, що містять від приблизно 0,01мг до або желатинові мікрокапсули і приблизно 0,1мг до приблизно 500мг активного полі(метилметацилатні) мікрокапсули, в колоїдних інгредієнта даного винаходу. Таблетки або пілюлі системах доставки лікарських засобів (наприклад, нової композиції можна покрити або ліпосомах, альбумінових мікросферах, компаундувати іншим чином для надання мікроемульсіях, наночастинках і нанокапсулах) лікарської форми, що має перевагу пролонгованої або в макроемульсіях. Такі методики розкриті в дії. Наприклад, таблетка або пілюля може [керівництві Remington, et al., The Science and включати компонент внутрішнього дозування і Practice of Pharmacy 20th Ed. Mack Publishing зовнішнього дозування, причому останній (2000)]. представлений в формі оболонки навколо Можна отримати засоби пролонгованого першого. Ці два компоненти можуть відділятися вивільнення. Відповідні приклади засобів ентеросолюбільним шаром, який служить для пролонгованого вивільнення включають протидії руйнуванню в шлунку і забезпечує напівпроникні матриці твердих гідрофобних можливість внутрішньому компоненту пройти полімерів, що містять антитіло, причому матриці інтактним в 12-палу кишку або відстрочити представлені у вигляді виробів, що мають певну вивільнення. Для таких ентеросолюбільних шарів форму, наприклад, плівки або мікрокапсули. або покриттів можна використати різноманітні Приклади матриць пролонгованого вивільнення матеріали, причому такі матеріали включають ряд включають поліефіри, гідрогелі (наприклад, полі(2полімерних кислот і сумішей полімерних кислот з гідроксіетилметакрилат) або полівініловий спирт)), такими матеріалами, як шелак, цетиловий спирт і полілактиди [патент США №3773919], ацетат целюлози. співполімери L-глутамінової кислоти і 7-етил-LРідкі форми, в яких композиції даного глутамату, етиленвінілацетат, що не винаходу можуть бути включені для перорального розкладається, співполімери молочної кислотивведення або ін'єкцією, включають водні розчини, гліколевої кислоти, що розкладаються, такі як відповідним чином ароматизовані сиропи, водні LUPRON DEPOTÔ (мікросфери, які вводяться або масляні суспензії і ароматизовані емульсії з ін'кцією, що складаються з співполімера молочної харчовими оліями, такими як олія сім'я бавовни, кислоти-гліколевої кислоти і ацетату лейпроліду), кунжутна олія, кокосова олія або арахісова олія, а ацетатізобутират сахарози і полі-D-(-)-3також еліксири і аналогічні фармацевтичні носії. гідроксимасляна кислота. Відповідні диспергуючі або суспендуючі засоби Композиції, що підлягають застосуванню для для водних суспензій включають синтетичні і введення in vivo, повинні бути стерильними. Це природні смоли, такі як трагакант, акація, альгінат, легко здійснюється, наприклад, фільтрацією через декстран, карбоксиметилцелюлоза натрію, мембрани стерилізуючої фільтрації. Терапевтичні метилцелюлоза, полівінілпіролідон або желатин. композиції антагоніста NGF (такого як антитіло Активні інгредієнти можуть також бути включені в проти NGF) загалом вміщуються в контейнер, що продукти контрольованого вивільнення, що мають має канал стерильного доступу, наприклад, високу в'язкість, такі як ацетатізобутират сахарози мішечок з розчином для внутрішньовенних ін'єкцій 53 81299 54 перорально або інтраназально) з пристроїв, які або інші. Ці композиції можна використати або для доставляють композицію відповідним чином. перорального введення, або для ін'єкцій. Ін'єкція Ефективність лікування можна оцінити може привести до утворення локального депо способами, добре відомими в даній галузі. засобу, який вивільняється локально протягом Наступні приклади представлені для періоду від 1 дня до 3 місяців. ілюстрації, а не обмеження винаходу. Композиції для введення ін'єкцією включають Приклади композиції, що містять антагоніст NGF і НСПЗЗ як Приклад 1 активні інгредієнти в поєднанні з поверхневоЛікування моноклональним антитілом проти активним агентом (або змочувальним агентом, або NGF в поєднанні з НСПЗЗ з приводу поверхнево-активною речовиною) або в формі післяопераціного болю емульсії (у вигляді емульсії води в маслі або Заявники використовували модель болю, яка масла у воді). імітує післяопераційний біль, для оцінки Відповідні поверхнево-активні агенти ефективності антитіла проти NGF в поєднанні з включають, зокрема, неіонні агенти, така як НСПЗЗ, ібупрофеном. Для кожного експеримента поліоксіетиленсорбітани (наприклад, TweenÔ 20, 16 самців дорослих щурів Sprague Dawley з масою 40, 60, 80 або 85) та інші сорбітани (наприклад, тіла від 200 до 220г (Harlan; Indianapolis, IN) SpanÔ 20, 40, 60, 80 або 85). Композиції з утримували в нормальних світлових умовах поверхнево-активним агентом можуть містити від протягом, щонайменше, 1 тижня перед 0,05 до 5% поверхнево-активного агента, або від використанням при доступі без обмежень до їжі і 0,1 до 2,5%. Слід розуміти, що при необхідності води. Після 2-годинного періоду акліматизації в можна додавати інші інгредієнти, наприклад, маніт камерах тестування в день операції щурів ділили або інші фармацевтично прийнятні носії. на дві групи: одна отримувала антитіло за 15 Відповідні емульсії можна отримати з годин перед операцією, інша в це час отримувала використанням жирових емульсій, що є в продажу, носій (5% декстрозу/0,45% сольовий розчин по таких як IntralipidÔ, LiposynÔ, InfonutrolÔ, Фармакопеї США). Антитіло 911 проти антагоніста LipofundinÔ і LipiphysanÔ. Активний інгредієнт NGF [див. Hongo, et al., Hybridoma 19:215-227 може бути або розчинений в заздалегідь змішаній (2000)] вводили в дозі 1мг/кг маси тіла. Ібупрофен емульсійній композиції, або, альтернативно, він вводили в різних концентраціях в діапазоні від 10, може бути розчинений в олії (наприклад, олії 30, 100 до 300мг/кг (підшкірно) через 24 години соєвих бобів, олії сафлора, олії сім'я бавовни, після операції всім тваринам. кунжутній олії, кукурудзяній олії або мигдалевій Операція була заснована на процедурі, олії) і емульсії, утвореній після змішування з описаній [Brennan, et al., Pain 64:493-501 (1996)]. фосфоліпідом (наприклад, яєчними Тварин анестезували 2% ізофлюраном і фосфоліпідами, фосфоліпідами соєвих бобів або повітряною сумішшю, яку підтримували під час лецитином соєвих бобів) і водою. Потрібно операції, через носову воронку. Підошовну розуміти, що можна додати інші інгредієнти, поверхню правої задньої лапи готували тампоном наприклад, гліцерин або глюкозу, для доведення з повідоном-йодом, проводили центральний тонічності емульсії. Відповідні емульсії звичайно поздовжній розріз довжиною 1см через шкіру і повинні містити до 20% олії, наприклад, від 5 до фасцію, починаючи в 0,5см від краю п'ятки і 20%. Жирова емульсія може включати капельки продовжуючи до пальців стопи. Вимірювання жиру від 0,1 до 1,0мкм, зокрема, від 0,1 до 0,5мкм, проводили лінійкою при стопі, що утримується в і мати рН в діапазоні від 5,5 до 8,0. зігненому положенні. Підошовний м'яз підіймали з В деяких варіантах здійснення композиції використанням пінцета із зігненими браншами, і в являють собою композиції, отримані змішуванням ньому проводили поздовжній розріз. М'яз антагоніста фактора росту нервів з IntralipidÔ або розрізали на повну глибину, між місцем його його компонентів (олії соєвих бобів, яєчних відходження і ділянкою прикріплення. Кровотечу фосфоліпідів, гліцерину і води). зупиняли під час всієї операції тиском, що чинився Композиції для інгаляції або інсуфляції за допомогою марлевого тампона. Рану закривали включають розчини і суспензії в фармацевтично двома матрацними швами (чорна одноволоконна прийнятних, водних або органічних розчинниках, нитка "Ethicon" 5-0). Ці шовні нитки зав'язували або їх суміші і порошки. Рідкі або тверді композиції вузлами 5-6 разів при першому вузлі, затягнутому можуть містити відповідні фармацевтично нещільно. Ділянку рани протирали розчином прийнятні ексципієнти, як викладено вище. бацитрацину. Тваринам давали можливість Композиції вводять пероральним або відновитися і знаходитися в спокої в чистих клітках інтраназальним респіраторним шляхом для протягом 22 годин перед тим як починалося локального або системного ефекту. Композиції в поведінкове тестування. переважно стерильних фармацевтично Для кожного експерименту тварин ділили на прийнятних розчинниках можуть розпилюватися дві групи (контрольну і що отримувала лікування використанням газів. Розпилені розчини можуть антитілом). Антитіло проти NGF вводили за 15 вдихатися безпосередньо з розпилювального годин перед операцією. Біль в спокої оцінювали пристрою, або розпилювальний пристрій може через 22 години після операції в обох групах бути прикріплений до лицьової маски, тенту або («вихідний стан» в наступних графіках). Через 20 апарату періодичної штучної вентиляції легень під годин після операції всіх тварин потім лікували позитивним тиском. Композиції у вигляді розчину, ібупрофеном в дозі 10, 30, 100 або 300мг/кг суспензії або порошка можна вводити (включаючи 55 81299 56 Зменшення бальної оцінки болю спостерігалося (підшкірно). Біль в спокої оцінювали, починаючи для середньої величини при лікуванні і 911 в дозі через 1 годину після лікування ібупрофеном. 1мг/кг, і диклофенаком в дозі 5мг/кг, в порівнянні з Біль в спокої оцінювали в різний час після лікуванням одним диклофенаком в дозі 5мг/кг. операції з використанням кумулятивної бальної Хоч представлений вище винахід був оцінки болю. Щурів вміщували на пластикову сітку описаний з певними деталями як ілюстрація і (решітку: 8мм2) в прозорій пластиковій клітці і приклад з метою ясності розуміння, описи і давали можливість акліматизуватися протягом 15приклади не повинні розглядатися як такі, що 20 хвилин. Поведінку оцінювали по шкалі від 0 до обмежують діапазон винаходу. 2. Бальну оцінку 0 давали, якщо тварина спиралася на розрізану лапу, за даними оцінки, якщо зазначалося, що лапа блідніла або упиралася в решітку. Бальну оцінку 1 давали, якщо тварина щадила лапу при шкірі, що лише торкалась решітки без збліднення або поглиблень шкіри. Бальну оцінку 2 давали, якщо лапа утримувалася, повністю не торкаючись решітки. Кожну тварину спостерігали протягом 1 хвилини через кожні 5 хвилин протягом 30 хвилин. Суму з 6 балів (всього 0-12), отриману протягом 1/2 години використовували для оцінки болю в розрізаній стопі. Результати цих експериментів показані в таблиці 1 і на Фіг.1. Таблиця 1 Кумулятивна бальна оцінка болю у тварин після лікування антитілом проти антагоніста NGF в дозі 1мг/кг і ібупрофеном в дозі 0, 10мг/кг, 30мг/кг, 100мг/кг або 300мг/кг через 1 день після операції. Дані показані у вигляді середньої величини (±стандартне відхилення). Дані аналізували з використанням однофакторного дисперсійного аналізу, а потім окремі пари аналізували з використанням корекції Bonferroni для множинних порівнянь з використанням програмного забезпечення Prizm Маb911 Контроль Вихідний рівень 5,4(0,8) 8,2(0,72) р