Спосіб активації безкалусного ризогенезу у стевії в умовах in vitro

Спосіб активації безкалусного ризогенезу у стевії в умовах in vitro, що включає приготування поживного агаризованого середовища, яке містить азотнокислий калій, хлористий кальцій, сірчанокислий магній, сірчанокисле залізо у хелатній формі, борну кислоту, сірчанокислий марганець, сірчанокислий цинк, йодний калій, молібдат натрію, сірчанокислу мідь, хлористий кобальт, мезоінозит, тіамін, піридоксин, нафтилоцтову кислоту, сахарозу, висаджування експлантів, культивування мікророслин при позитивній температурі повітря, вологості повітря 70%, фотоперіодичному освітленні, який відрізняється тим, що культивування мікророслин проводять при температурі повітря 16-26° С, освітленні 2-4клк, 814-годинному фотоперіоді на агаризованому поживному середовищі, яке додатково містить азотнокислий амоній, фосфорнокислий калій однозаміщений, гліцин, аскорбінову кислоту, нікотинову кислоту, гіберелову кислоту і кінетин при такому співвідношенні компонентів, мг на 1л води: NH4NO3 1650 KNO3 1900 CaCl2 x 2Н2О 440 MgSO4 x 7H20 370 КН2РO4 170 Na2ЭDТА 37,23 FeSO4 x 7H2O 27,25 Н3ВО3 6,2 MnSO4 x 4Н2О 22,3 ZnSO4 x 7H2O 8,6 KJ 0,83 Na2MoO4 x 2H2O 0,25 CuSO4 x 5H2O 0,025 CoCl2 x 6Н2O 0,025 мезоінозит 100 гліцин 2,0 тіамін 10,0 піридоксин 1,0 нікотинова кислота 1,0 аскорбінова кислота 10-15 гіберелова кислота 2-7 нафтилоцтова кислота 0,1 кінетин 0,02 сахароза 40000. Корисна модель стосується сільського господарства і може бути використана в сільськогосподарській біотехнології, селекції, зокрема для прискореного розмноження рослин.Прискорене розмноження в умовах in vitro потребує активації коренеутворення у мікророслин. Процес коренеутворення залежить значною мірою від вмісту фітогормонів та інших регуляторів росту ауксинового типу в агаризованому середовищі.Відомі способи активації різогенезу в умовах in vitro що включають культивування: живців груші до агаризованого середовища Мурасіге-Скуга додають 1мМ (0,2мг/л) індолілмасляну кислоту (ІМК) або 10мМ нафтилоцтову кислоту (НОК), яблуні - 3мг/л ІМК, гарбуза - 38мг/л індолілоцтову кислоту (ІОК), шафрану -1мг/л 2,4-дихлорфеноксіоцтову кислоту (2,4-Д) та 0,1мг/л бензіламінопуріну (БАП) або 5мг/л ІОК та 1мг/л БАП (6-бензіламінопурін), хмілю - 1,0-2,0мг/л НОК [Ф.Л. Калинин, Г.П. Кушнир, В.В. Сарнацкая // Технология микроклонального размножения растений. К. Наукова думка, 1992. 232с]. Але ці способи не дають змоги отримати рослини з добре розвиненою кореневою системою без калусоутворення, тому що мікророслини потребують створення певних умов культивування та складу поживного агаризованого середовища.Найбільш близьким за сукупністю ознак до запропонованого корисної моделі є спосіб розмноження стевії in vitro, що включає приготування поживного агаризованого середовища, яке містить мг на 1л води: (NH4)2SО4 134 KNO3 2500 CaCl2 2Н2О 150 MgSO4 7H2O 250 NаН2РO4 Н2O 150 Na2ЕDTA 37,3 FeSO4 7H2O 27,85 Н3ВО3 3,0 MnSO4 4H2O 10,0 ZnSO4 7H2O 2,0 U БЕЗКАЛУСНОГО 1 (13) АКТИВАЦІЇ 14935 СПОСІБ (11) (54) ДО ДЕКЛАРАЦІЙНОГО ПАТЕНТУ НА КОРИСНУ МОДЕЛЬ видається під відповідальність власника патенту UA ДЕРЖАВНИЙ ДЕПАРТАМЕНТ ІНТЕЛЕКТУАЛЬНОЇ ВЛАСНОСТІ ОПИС (19) МІНІСТЕРСТВО ОСВІТИ І НАУКИ УКРАЇНИ 3 14935 4 KJ 0,25 NH4NO3 1650 KNO3 1900 Na2MoO4 2H2O 0,25 CaCl2 2Н2О 440 CuSO4 5H2O 0,025 MgSO4 7H20 370 СоСl2 6Н2O 0,025 КН2РO4 170 Мезоінозит 100 Na2ЕDТА 37,23 Тіамін 0,3 Піридоксин 0,3 FeSO4 7H2O 27,25 Нікотинамід 0,5 Н3ВО3 6,2 Нафтилоцтова кислота 0,05-0,5 MnSO4 4Н2О 22,3 Сахароза 40000, ZnSO4 7H2O 8,6 висадження експлантів, культивування CoCl2 6Н2O 0,025 мікророслин при температурі повітря 26-28 С, Мезоінозит 100 вологості повітря 70%, освітленні 3-6клк, 14 Гліцин 2,0 годинному фотоперіоді [И.И. Ильенко. Тіамін 10,0 Микроклональное размножение стевии в культуре Піридоксин 1,0 in vitro // Введение в культуру стевии-источника Нікотинова кислота 1,0 низкокалорийного заменителя сахара - К.ВНИС. Аскорбінова кислота 10-15 1990. - с.74-78].Відомий спосіб має наведені Гіберелова кислота 2-7 спільні суттєві ознаки з запропонованою корисною Нафтилоцтова кислота 0,1 моделлю, а саме – якісний склад інгредієнтів Кінетин 0,02 агаризованого середовища: KNO3, CaCl2 2Н2О, Сахароза 40000 MgSO4 7H2O, Н3ВО3, MnSO4 4H2O, ZnSO4 7H2O, Запропонована корисна модель має нові суттєві ознаки, такі як використання агаризованого KJ, Na2MoO4 2H2O, CuSO4 5H2O, СоСl2 6Н2O, поживного середовища з новим кількісним мезоінозит, тіамін, піридоксин, нікотинамід, складом компонентів та додатковим внесенням нафтилоцтова кислота, сахароза та умови компонентів таких як гліцин, аскорбінова кислота, культивування мікро рослин (температура, гіберелова кислота, кінетин. Крім цього, повітря, освітлення, фотоперіод), але незважаючи культивування мікророслин проводять у нових на ці спільні ознаки, відомий спосіб не забезпечує одержання мікророслин стевії з розвинутою умовах, тобто при температурі повітря 16-26 С, кореневою системою без утворення калусу, тому освітленні - 2-4клк, 8-14 годинному фотоперіоді. Ці що мікророслини стевії потребують створення нові, відмінні від прототипу ознаки при взаємодії з певних умов та складу поживного середовища.В відомими ознаками, забезпечують нові технічні основу корисної моделі поставлена задача властивості корисної моделі - отримання рослин з вдосконалити спосіб активації безкалусного добре розвиненою кореневою системою без різогенезу у стевії в умовах in vitro шляхом утворення калусу і завдяки цьому знижують культивування мікророслин при певних умовах та кількість рослин які вибраковують внаслідок поліпшеному поживному агаризованому відриву та травмування калусу при пересадці середовищі, що дає змогу отримати рослини з рослин із агаризованого добре розвиненою кореневою системою без середовища.Впровадження запропонованої калусу.Поставлена задача вирішується тим, що у корисної моделі дає змогу протягом 14 діб відомому способі активації безкалусного отримати повноцінні рослини стевії з добре різогенезу у стевії в умовах in vitro, що включає розвиненою кореневою системою, у якої корені приготування поживного агаризованого відходять безпосередньо від стебла, а не з калусу, середовища, яке містить азотнокислий калій, що утворюється на кінці стеблини, а це сприяє хлористий кальцій, сірчанокислий магній, збільшенню кількості повноцінних неушкоджених сірчанокисле залізо у хелатній формі (Na2EDTA + рослин при пересадці їх у ґрунт та економії сировини і робочого часу.Отриманні дані свідчать, FeSO4 7H2O), борну кислоту, сірчанокислий що всі рослини які висадили на поживне марганець, сірчанокислий цинк, йодний калій, середовище за відомим способом, мали вкінці молібдат натрію, сірчанокислу мідь, хлористий культивування калус на кінці стебла розміром 0,7кобальт, мезоінозит, тіамін, піридоксин, 1,2см, від якого відходили корінці, при пересадці нафтилоцтову кислоту, сахарозу, висаджування таких рослин в твердий субстрат - перлит або експлантів, культивування мікророслин при ґрунт для дорощування кількість травмованих позитивній температурі повітря, вологості повітря рослин, де калус разом з корінням відривався або 70%, фотоперіодичному освітленні, згідно з надламувався становила - 35,5% а рослин, що корисною моделлю культивування мікророслин вижили та розвинулися до повноцінної розсади проводять при температурі повітря 16-26 С, 31,8%. А за способом що пропонується освітленні 2-4клк, 8-14 годинному фотоперіоді на калусоутворення не відбулося. Коренева система агаризованому поживному середовищі, яке розвивалася безпосередньо від стебла. При додатково містить азотнокислий амоній, пересадці рослини не були травмовані, що фосфорнокислий калій однозаміщений, гліцин, забезпечило 100% вихід повноцінної розсади при аскорбінову кислоту, нікотинову кислоту, їх пересадці в перлит або ґрунт (таблиця). гіберелову кислоту і кінетин при такому співвідношенні компонентів, мг на 1л води: 5 14935 6 Таблиця Розвиток кореневої системи стевії в умовах in vitro залежно від складу поживного агаризованого середовища та умов культивування № Варіант досліду Прототип Корисна 2 модель HIР05 1 Експлантів, шт. Рослин, що утворили калус 107 шт. 107 % 100 105 105 100 Кількість повноцінної розсади шт. % 34 31,8 105 4,1 Спосіб активації безкалусного різогенезу у стевії в умовах in vitro здійснюється таким чином.На агаризоване поживне середовище висаджують експланти стевії у кількості 10-12шт., в одну колбу. Культивують з освітленням 2-4клк, при Комп’ютерна верстка А. Крижанівський Рослин неушкоджених при пересадці в субстрат шт. % 36 35,5 100 3,2 температурі повітря 18-26 С, вологості 70% протягом 8-14 годинного фотоперіоду. Отриману розсаду пересаджують у твердий субстрат. Підписне Тираж 26 прим. Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601