Спосіб діагностики активності хронічного запального процесу

Изобретение относится к медицине. Известен способ диагностики активности воспалительного процесса по определению СОЭ (скорости оседания эритроцитов) (Руководство к практическим занятиям по клинической лабораторной диагностике / Под ред. проф. М.А. Базарновой, проф. В.Т. Морозовой. - К.: Вища шк., 1988. - С.21 22), включающий забор крови из пальца, смешивание ее с цитратом натрия и отстаивание в штативе в вертикальном положении. Определяют СОЭ, которую выражают в мм за час. При СОЭ выше 15мм в час у женщин и выше 10мм в час у мужчин диагностируют активный воспалительный процесс. Этот способ прост и доступен, однако он не всегда информативен, так как не чувствителен при выявлении минимальной активности хронического воспалительного процесса, особенно при вялотекущем варианте его течения. Известен способ диагностики активности воспалительного процессе (Клиническая ревматология / Под ред. Х.Л.Ф. Каррея. - М.: Медицина, 1990. - С.287), включающий забор крови из вены и выделение сыворотки или серозной жидкости, в которую затем опускают стеклянный капилляр, на 1/3 наполненный диагностической сывороткой к C-реактивному белку. Серозную жидкость или сыворотку набирают также на 1/3 длины капилляра. Конец капилляра помещают в пластилин. Учитывают реакцию через 4 - 20 часов. Выпадение преципитата в капилляре указывает на наличие C-реактивного белка. При высоте преципитата в капилляре 1см реакцию оценивают как слабо положительную (+), 2 - 3см положительную (++, +++), 4см и выше - резко положительную (++++). Однако этот способ недостаточно чувствителен при минимальной степени активности хронического воспалительного процесса, в связи с чем не может с достоверностью свидетельствовать о наличии или отсутствии воспалительной реакции в организме, а следовательно, затрудняет выбор тактики лечения. Известен способ диагностики активного воспалительного процесса с помощью нитросинететразолиевого (НСТ) теста (Маянский Д.Н., Маянский А.Н. Очерки о нейтрофиле и макрофаге. - Горький, 1989. - С.18 - 19), заключающийся в том, что цельную кровь инкубируют с НСТ солью, затем делают мазок, фиксируют его и определяют метаболическую активность нейтрофилов по количеству восстановленных гранул формазана. Учет реакции проводят морфологическим методом. При увеличении количества гранул восстановленного формазана диагностируют активный воспалительный процесс. Однако данным способом невозможно диагностировать активность хронического воспалительного процесса, так как учет результатов проводится на основании характеристики метаболической активности нейтрофилов. А ввиду то го, что в данном способе исследуемым материалом является цельная кровь, это не дает возможности определить истинное функциональное состояние нейтрофилов, которое зависит от количества и функционального состояния других форменных элементов крови и гуморальных факторов, изменяющих реактивность нейтрофилов (Информационное письмо. Применение НСТ теста для диагностики активного туберкулезного процесса в легких. - Вып.1, проблема "Иммунология и аллергология". - МЗ УССР. - К., 1986). Кроме того, учет результатов производится морфологическим методом, что накладывает субъективный отпечаток на интерпретацию полученных данных, а следовательно, затрудняет выбор адекватной терапии и удлиняет сроки лечения. Наиболее близким по предлагаемой сущности является способ диагностики активности воспалительного процесса (Jondal M., Holn G., Wigzell H. Surfase markers on human В and T lymphocytes. A large population of lymphocytes forming non-immune rossets with sheep red blood cell. - J. Exp. Med., 1973, v.136, p.207 - 215), включающий забор крови из вены больного, выделение чистой популяции лимфоцитов на градиенте фиколл-верографин, добавление эритроцитов барана и их инкубацию. Учет нативного препарата производится в камере Горяева по количеству клеток, образующих с эритроцитами барана розетки (выражающее процентное количество T-лимфоцитов иммунокомпетентных клеток, участвующих в воспалительной реакции). Однако на основании только количественной оценки T-лимфоцитов, свидетельствующей лишь о нарушении клеточного иммунитета (его депрессии или активации в ответ на повреждающий фактор), невозможно диагностировать активность хронического воспалительного процесса, а следовательно, удлиняются сроки диагностики и усложняется выбор тактики лечения. В основу изобретения поставлена задача усовершенствования способа диагностики хронического воспалительного процесса, в котором дополнительно выделенная из цельной крови чистая популяция нейтрофилов при взаимодействии с НСТ солью, раствором соляной кислоты и димексидом позволяет ускорить диагностику активности хронического воспалительного процесса, а следовательно, выбрать адекватную тактику лечения и сократить его сроки. Поставленная задача достигается тем, что в известном способе диагностики активности хронического воспалительного процесса, включающем забор крови из вены, выделение из нее чистой популяции лимфоцитов, добавление к ней эритроцитов барана, их инкубацию и учет результатов, согласно изобретению, из цельной крови дополнительно выделяют чистую популяцию нейтрофилов, инкубируют и х с НСТ солью, затем добавляют раствор соляной кислоты и полученную смесь центрифугируют, надосадочную жидкость удаляют, а к осадку добавляют раствор димексида и вновь инкубируют, учет реакции производят по образованию розеток и восстановлению гранул формазана и при увеличении количества восстановленных гранул формазана на 20% и более, по отношению к норме, и лимфоцитов, образующи х розетки, в пределах или ниже нормы, определяют активный хронический воспалительный процесс; а при сниженном на 20% и более, по отношению к норме количестве гранул формазана и лимфоцитов, образующи х розетки, в пределах или ниже нормы, диагностируют вялотекущий хронический воспалительный процесс; причем, если количество восстановленных гранул формазана находится в пределах нормы, а количество лимфоцитов, образующи х розетки, на 20% и более ниже нормальных величин, диагностируют ремиссию хронического воспалительного процесса. Способ осуществляется следующим образом. Из локтевой вены больного берут 5мл крови, помещают в пробирку и смешивают с 0,5мл гепарина, разведенного физраствором в соотношении 1 : 14. На градиенте фиколлверографин выделяют чистую популяцию лимфоцитов и нейтрофилов. К 0,1мл полученных лимфоцитов добавляют 0,1мл эритроцитов барана и инкубируют 30 минут при t 37°C. Затем центрифугируют со скоростью 30об/мин в течение 10 минут. Учет нативного препарата производят в камере Горяева. Вычисляют количество лимфоцитов, образующих с эритроцитами барабана розетки (T-лимфоцитов). Выделенную чистую популяцию нейтрофилов разводят физраствором - до концентрации 200 250тыс. в 0,1мл и помещают в две лунки по 0,1мл полученной суспензии в каждую. В 1 - ю лунку добавляют 0,1мл 0,75% раствора НСТ соли и 0,1мл физраствора, во 2 - ю лунку - 0,2мл физраствора. Инкубируют их 30 минут при t 37°C. Затем в лунки добавляют по 0,02мл 0,025% раствора соляной кислоты и центрифугируют 5 минут со скоростью 1000об/мин. Надосадочную жидкость удаляют, а к полученному осадку добавляют 0,2мл раствора димексида, разведенного дистиллированной водой в соотношении 1 : 8. Инкубируют в термостате 1 сутки при t 37°C. Подсчет реакции производят спектрофотометрически на Eliza-процессоре по количеству восстановленных гранул формазана, характеризующи х метаболическую активность нейтрофилов. Пример 1. Больной Т., и/б №938, поступил в отделение болезней миокарда УНИИ кардиологии с жалобами на боли в области сердца, сердцебиение, одышку при физической нагрузке, боли в сустава х летучего характера без припухлости и покраснения, отечность голеней, тяжесть в правом подреберье, слабость, потливость. Болеет равматизмом в течение 18 лет. Последнее ухудшение 3,5 месяца назад связывает с перенесенным простудным заболеванием. На основании жалоб, анамнеза, данных инструментальных и лабораторных обследований (СОЭ - 5мм/ч, лейкоцитов - 4,5 ´ 109/л, палочкоядерных - 4, C-реактивный белок отрицательный, - 330, - 125, сиаловая проба - 0,180, серомукоид - 0,111, Tлимфоцитов - 41%) больному был установлен предварительный диагноз: Ревматизм, неактивная фаза. Митральный порок сердца с преобладанием стеноза. СН IIАст. В связи с отсутствием данных за активность ревматизма, нами была назначена стандартная разгрузочная терапия - вазодилятаторами и мочегонными средствами. Через 10 дней самочувствие несколько улучшилось - уменьшились одышка, исчезли отеки голеней, тяжесть в правом подреберье. Однако, сохранялись боли в суставах, в области сердца, слабость, потливость. Учитывая сохранение вышеуказанных жалоб, несмотря на лечение, было проведено дополнительно исследование крови предложенным нами способом. Из локтевой вены больного берут 5мл крови, помещают в пробирку и смешивают с 0,5мл гепарина, разведенного физраствором в соотношении 1 : 14. На градиенте фиколлверографин выделяют чистую популяцию лимфоцитов и нейтрофилов. К 0,1мл лимфоцитов добавляют 0,1мл эритроцитов барана и инкубируют 30 минут при Затем центрифугируют со скоростью 30об/мин в течение 10 минут. Учет нативного препарата производят в камере Горяева. Вычисляют количество лимфоцитов, образующи х розетки (T-лимфоцитов). Выделенную чистую популяцию нейтрофилов разводят физраствором до концентрации 200 250тыс. в 0,1мл и помещают в две лунки по 0,1мл полученной суспензии в каждую. В 1 - ю лунку добавляют 0,1мл 0,75% раствора НСТ соли и 0,1мл физраствора, во 2 - ю лунку - 0,2мл физраствора. Инкубируют и х 30 минут при Затем в лунку добавляют по 0,02мл 0,025% соляной кислоты и центрифугир уют 5 минут при скорости 1000об/мин. Надосадочную жидкость удаляют, а к полученному осадку добавляют 0,2мл раствора димексида, разведенного дистиллированной водой в соотношении 1 : 8, и инкубируют 1 сутки в термостате при Учет реакции производят спектрофотометрически на Eliza-процессоре по количеству восстановленных гранул формазана. Были получены следующие результаты: количество T-лимфоцитов - 42% (снижено по отношению к норме на 27%, 58,0 ± 2,0%), количество гранул формазана - 1,3усл.ед. (ниже нормы на 54%, - 2,8 ± 0,2усл.ед). Это свидетельствовало о минимальной активности хронического воспалительного процесса, вялотекущем варианте его течения. Установлен заключительный диагноз: Ревматизм, активная фаза, I (минимальная) ст. активности. Вялотекущий кардит. Митральный порок с преобладанием стеноза. СН IIАст. Дополнительно был назначен стандартный, в таких случаях, курс противовоспалительной терапии нестероидными противовоспалительными и десенсибилизирующими средствами. Через две недели самочувствие значительно улучшилось прошли боли в суставах, в области сердца, слабость и потливость. При повторном иммунологическом исследовании количество лимфоцитов, образующих розетки, и восстановленных гранул формазана пришло в норму и составило 52% и 2,5усл.ед. соответственно. Нормализация количества T-лимфоцитов и гранул восстановленного формазана на фоне проведенного лечения одновременно с улучшением состояния больной подтвердили правильность диагноза, установленного с помощью предложенного нами способа. Пример 2. Больная Д., и/б №1657, 5 октября поступила в отделение болезней миокарда УНИИ кардиологии с жалобами на першение в горле, боли в области сердца, слабость, потливость, боли в сустава х при перемене погоды. С детства часто болеет ангинами. Последнее ухудшение 3 недели назад вызвано переохлаждением. С 16 по 30 сентября лечилась амбулаторно аспирином, местно фурацилином, с некоторым улучшением. В связи с сохранением вышеуказанных жалоб, несмотря на проведенное лечение, повторно обратилась к врачу. На основании жалоб, анамнеза, осмотра, результатов инструментальных и лабораторных (СОЗ - 14мм/час, лейкоцитов - 6,8 ´ 109/л, палочкоядерных - 5, 500, - 313, сиаловая проба - 0,195, серомукоид - 0,160, реактивный белок - отрицательный, T-лимфоцитов - 48%) был установлен предварительный диагноз: Хронический декомпенсированный тонзиллит вне обострения. НЦД по смешанному типу. В связи с отсутствием данных за активность воспалительного процесса и проведением лечения в амбулаторных условиях нами была назначена общеукрепляющая, седативная и физиотерапия. Однако состояние больной через 10 дней пребывания в отделении существенно не улучшилось. Поэтому для уточнения активности хронического тонзиллита был использован предложенный нами способ. Полученные результаты - снижение количества лимфоцитов, образующих розетки, на 12% по отношению к норме и повышение количества гранул восстановленного формазана на 136% по отношению к норме (51% и 6,6усл.ед. соответственно) свидетельствовали об обострении хронического тонзиллита. Заключительный диагноз: Хронический декомпенсированный тонзиллит, обострение. НЦД по смешанному типу. Дополнительно была назначена стандартная в таких случая х антибактериальная (с определением микрофлоры и чувствительности к антибиотикам) и десенсибилизирующая терапия, местное лечение раствором Люголя, физиолечение. Через 10 дней у больной прошли вышеуказанные жалобы, самочувствие значительно улучшилось. При повторном иммунологическом обследовании отмечена нормализация количества T-лимфоцитов и гранул диформазана (57% и 3,2усл.ед. соответственно). Пример 3. Больной Б., и/б №67, 15 марта поступил в отделение болезней миокарда УНИИ кардиологии с жалобами на сухой кашель преимущественно в утренние часы, боли в левой половине грудной клетки, одышку при физической нагрузке, слабость, потливость. Считает себя больным в течении 6 лет, когда появился кашель, иногда со светлой мокротой, усиливающийся после переохлаждения. Курит 15 лет. За 1 месяц до поступления перенес ОРЗ с субфебрильной температурой, после чего кашель усилился. С 20 февраля по 4 марта амбулаторно лечился бисептолом, эритромицином. Кашель практически исчез, но продолжают беспокоить боли в левой половине грудной клетки, в связи с чем и обратился к врачу. На основании жалоб, анамнеза, данных инструментальных и лабораторных (СОЭ 10мм/час, лейкоцитов - 4,3 ´ 109/л, палочкоядерных - 4, - 330, - 250, сиаловая проба 0,145, серомукоид - 0,080, C-реактивный белок отрицательный, T-лимфоцитов 41%) обследований больному был установлен предварительный диагноз: Хронический бронхит, стадия ремиссии. ДН Iст. НЦД по кардиальному типу. Для уточнения активности хронического бронхита было проведено исследование предложенным нами способом. Количество лимфоцитов, образующи х розетки, было снижено на 29% по отношению к норме и составило 41%, количество восстановленных гранул формазана от нормы не отличалось - 3,4 усл.ед. На основании полученных данных был установлен окончательный диагноз, который совпал с предварительным. Поэтому нами была назначена общеукрепляющая терапия, дыхательная гимнастика и лечение седативними препаратами. После курса лечения состояние больного нормализовалось. По сравнению с прототипом предложенный нами способ позволяет диагностировать активность хронического воспалительного процесса, а следовательно, выбрать адекватную терапию и сократить сроки лечения.