Спосіб визначення активності тімозина

Изобретение повышает точность определения активности тимозина. Лимфоциты выделяют из гепаринизированной крови в градиенте фиколла и верографина, отмывают средой 199, взвесь лимфоцитов доводят до концентрации 10' в 1 мл средой 199. Клеточную взвесь инкубируют 1 ч при 37 С с различными концентрациями тимозина, добавляют эритроциты мыши (2.10 клеток), центрифугируют и инкубируют 30 мин при 37 С. К осадку добавляют 0,6% раствор глутаральдегида, готовят капли на предметном стебле, £ фиксируют метанолом и окрашивают по Романовскому-Гимза. Активность тимозина определяют по числу розеткообраэующих клеток при минимальной концентрации тимозина. 1 1 293656 £ Изобретение относится к биологии, бавляют по 0,1 мл 0,6%-ного раствора медицине, медицинской промышленности глютаральдегида," осторожно ресуспени может быть использо^но для опредируют осадок и центрифугируют 5 мин деления активности тимозина - гормопри 1000 об/мин. Надосадочную жидна, выделяемого из вилочковой желе5 кость сливают, к осадку добавляют зы, широко применяемого в экспери0,1 мл дистиллированной воды, ресусментальных 'исследованиях и клинике пендируют смесь, готовят капли на для лечения больных с иммунодефиципредметном стекле. Высохшие капли тами различной этиологии. фиксируют метанолом и окрашивают по Цель изобретения - повышение точ- '0 Романовскому-Гимза. Подсчет произвоности определения активности тимо.дится при увеличении 7x90. Розеткой зина. считают образование из лимфоцита, инкубированного с минимальной дозой тимозина и трех и более присоедиП р и м е р 1. Лимфоциты выделя15 нившихся к нему эритроцитов. Подсчет ют из гепаринизированнои крови в розеток производится на 200 лимфоградиенте фиколла и верографина. Поцитов и выражается в процентах. Налученную взвесь лимфоцитов дважды пример, после инкубации лимфоцитов в отмывают средой 199 по 10 мин при среде было зарегистрировано 4% 1500 об/мин. Надосадочную жидкость 20 отбирают, осадок помещают в 1 мл Ем-РОК, а после инкубации лимфоцитов среды 199 и считают количество выдес тимозином в концентрациях 60 и ленных лимфоцитов. Взвесь лимфоци30 мкг/мл соответственно 8 и 4%, тов доводят.до конечной концентраактивность тимозина равна 60 мкг/мл, ции 10 в 1 мл средой 199. Для одночто более чем .на 30% повышает точ25 ность способа по сравнению с протого определения берут 0,1 мл указанной клеточной взвеси. Клетки инкутипом, возможность определения котобируют I ч при 37 С с различными конрого равна 125 мкг/мл. центрациями тимозина, добавляемого в пробирки в объеме 0,1 мл. КонтроФ о р м у л а и з о б р е т е н и я 30 лем служат лимфоциты, инкубируемые Способ определения активности типри 37°С в течение 1 ч с тем же объемозина, включающий выделение лимфомом питательной среды. После инкубацитов человека, инкубацию лимфоцитов ции с тимозином клетки двавды отмыс тимозином в различных концентрацивают центрифугированием при if ях и добавление эритроцитов с после1000 об/мин в течение 5 мин. К дующим определением активности тимо0,1 мл взвеси проинкубированных с тизина по числу розеткообразующих клемозином лимфоцитов (10 клеток) доток при минимальной концентрации тибавляют 0,1 мл суспензии трижды отмымозина, о т л и ч а ю щ и й с я тем, тых физиологическим раствором эритро- 40 что, с целью повышения точности споцитов мыши (2.10 клеток). Смесь соба, выделение лимфоцитов осущестклеток центрифугируют в течение вляют из периферической крови и пос5 мин при 1000 об/мин и инкубируют ле инкубации их с тимозином добавля30 мин при 37 С. Затем т осадку дос ют эритроциты мыши. Редактор В. Ковтун Заказ 381/50 Составитель И. Башкаев Техред А.Кравчук Тираж 777 ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж-35, Раушская н а б . , д . Корректор Л. Пилипенко Подписное А/5 Производственно-полиграфическое предприятие, г. Ужгород, ул. Проектная, 4